高中生物人教版 (2019)选择性必修3一 微生物的基本培养技术集体备课ppt课件

这是一份高中生物人教版 (2019)选择性必修3一 微生物的基本培养技术集体备课ppt课件，共36页。PPT课件主要包含了从社会中来，微生物，一培养基的配制，培养基的类型，选择培养基，二无菌技术，主要包括消毒和灭菌，无菌的范围，常用的消毒方法，常用的灭菌方法等内容，欢迎下载使用。
向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。
一般家庭自制酸奶可能会导致肠胃不适，主要原因是有杂菌混入。
那么怎么才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？
这需要应用无菌技术和微生物的培养技术
微生物的基本培养技术（一）
微生物类群：难以用肉眼观察的微小生物的统称。
微生物生长繁殖产生的菌落
防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。
实验室培养微生物条件：
1）提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件
2）确保其它微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。
（ ①提供微生物繁殖所需各种营养， ②异养微生物的能源）
有无 凝固剂琼脂
合成培养基、天然培养基、半合成培养基
液体培养基：扩大培养、工业生产
固体培养基：纯化（分离）、鉴定、 活菌计数、保藏菌种
2.鉴别培养基：用于鉴别不同类型的微生物
①加入青霉素的培养基：分离酵母菌、霉菌等真菌
②不加氮源的无氮培养基：分离固氮菌
③不加含碳有机物的无碳培养基：分离自养型微生物
①加入伊红美蓝的培养基：鉴别大肠杆菌
②加入刚果红的培养基：鉴别纤维素分解菌
1.选择培养基：将某种类微生物从混杂的微生物群体中分离出来。
怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?
小结：培养基的类型及用途
观察微生物的运动、分类鉴定
微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种
含化学成分不明确的天然物质
在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长
培养、分离出特定微生物
在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物
碳源、氮源、水、无机盐
无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-
有机碳源：牛肉膏、蛋白胨等
无机氮源：NH4＋、NO3-
有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素等
注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源
Ca、K 、Mg为大量元素
Zn、Cu、Mn、C、M等微量元素
还需满足微生物对 pH、特殊营养物质、氧气的需求
细菌（pH调至中性或微碱性）
维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等
（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）
乳酸菌（要添加维生素）
是指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染。
是指使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。
实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒
培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌
实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触
接种室、接种箱或超净工作台可用紫外线照射30min
100℃煮沸5-6 min
62-65℃下煮30 min或80-90℃处理30s-1min
用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；氯气消毒水源等
利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌。高压蒸汽灭菌效果最好，100 kPa、121℃下维持15-30 min，常用于培养基、无菌水等的灭菌。
原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性优点：操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。对象：培养基等
注：使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污染环境。
160-170℃下加热2-3h。常用于玻璃器皿和金属器具。
原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等对象：耐高温，需保持干燥的物品，适用于 玻璃器皿 (如试管、培养皿、吸管、注射器) 金属器具 (如针头、 镊子、剪刀等)的灭菌
常用于接种环、接种针、试管口等的灭菌。
效果：最彻底原理：使微生物燃烧对象：接种工具如接种环、接种针，以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位
较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）
强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）
100 ℃煮沸5～6 min
62～65 ℃煮30 min或80-90 ℃煮30s-1 min
擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源
紫外线照射30 min
接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等
直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧
耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等
物品放入干热灭菌箱,160～170 ℃加热2～3h
培养基、培养皿等,生产和实验室常用
高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ℃,15～30 min
接种室、接种箱，超净工作台
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。
芽孢壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。
细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的无性生殖细胞。能直接发育成新个体。
某同学将5个手指尖在贴有“洗手前”标签的培养基上轻轻按一下；然后用肥皂将该手洗干净，再将5个指尖在贴有“洗手后”标签的同种培养基上轻轻按一下；将这两个培养皿放入37℃恒温培养箱中培养 24h 后，发现贴有“洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。
用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒；实验操作应在超净工作台并在酒精灯火焰附近进行
(1)这个实验中哪些材料用具需要进行灭菌处理？培养皿、培养基(2)从实验结果来看，洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？
基本成分：碳源、氮源、水、无机盐
特殊需求：维生素（如乳酸杆菌）、碱基等
由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。
分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。
采用平板划线法和稀释涂布平板法将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。
称取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml，加热煮沸至马铃薯软烂，用纱布过滤。向滤液中加入20g葡萄糖、15-20g琼脂，用蒸馏水定容至1000ml.
将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入高压蒸汽灭菌锅中，在压力为100kPa、温度为121℃的条件下，灭菌15-30min.将5-8套培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱内，在160-170℃灭菌2h.
待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板。
灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。
倒平板注意事项：①温度：50℃左右②操作：在酒精灯火焰附近③冷凝后平板倒置
1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。
2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
最好不要用这个平板培养微生物。 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
将所倒平板放入37℃的恒温箱中培养12h～24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。
4.怎么确定所倒平板未被杂菌污染？
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。
(2)“平板划线”实验操作
1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。
2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞
3、将试管口通过火焰
.4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液
5、将试管通过火焰，并塞上棉塞
6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基
7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连
8、将平板倒置放入培养箱中培养。
划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）
1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；2）存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
①接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次.②划线首尾不能相接③每次划线前接种环进行灭菌④划线后,培养皿倒置培养
（1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者
杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞
杀死接种环上原有微生物
完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入28℃左右的恒温培养箱中培养24-28h.
1、未接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？
2、在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的颜色、形状、大小是否一致，如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析可能是哪些原因引起的吗？
3、你是如何记录实验结果的？请与其他同学交流、互评。
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