生物选修3一、动物细胞培养经历原代培养和传代培养练习

【基础】一、动物细胞培养经历原代培养和传代培养-1课时练习

一．单项选择

1．下图是科研人员将药物与单克隆抗体连接形成的抗体—药物偶联物(ADC)的示意图，它由抗体．接头和药物三部分组成，能实现对肿瘤细胞的选择性杀伤。相关叙述正确的是（    ）

A．细胞膜的选择透过性是抗体制备过程中细胞融合的基础

B．ADC能识别肿瘤细胞利用了药物特异性杀伤靶细胞的原理

C．肿瘤细胞被ADC选择性杀伤而导致的死亡属于细胞坏死

D．用放射性同位素标记的单克隆抗体可对肿瘤进行靶向治疗

2．单克隆抗体可抑制病毒对宿主细胞的侵染。下列关于单抗制备的叙述错误的是（    ）

A．为提高单抗制备成功率，往往需要多次给实验动物注射同一种抗原

B．给实验动物注射抗原后，相应抗体检测呈阳性说明发生了体液免疫

C．单抗的制备过程中需用到DNA分子杂交技术和抗原—抗体杂交技术

D．动物体内存在很多种浆细胞，每种浆细胞只能产生一种抗体

3．下列关于动物细胞融合技术与植物体细胞杂交技术的比较，叙述错误的是（　　）

A．都可以用电激融合法或 PEG 融合法诱导融合

B．融合前都需要用纤维素酶和果胶酶处理细胞

C．两者的原理都涉及细胞膜的结构特点-流动性

D．前者主要是为了获得细胞产品，后者主要是为了获得杂种植株

4．诱导山羊乳腺细胞核与去核卵细胞融合，融合细胞可被诱导成为完整个体。后有科学研究发现，向已分化的细胞中转入4种转录因子基因，能使其细胞重新成为具有分裂分化能力的诱导多能干细胞（iPSCs）。进一步分析iPSCs，发现其染色体上甲基化位置和程度发生改变（甲基化是指组成染色体的物质与甲基结合）。下列说法错误的是（　　）

A．卵细胞细胞质和4种转录因子可能诱导了细胞基因表达情况改变

B．细胞分化过程不改变细胞的基因组成，但染色体甲基化情况不同

C．以上过程所得的融合细胞和iPSCs有无限增殖与分裂的能力

D．以上研究可为等待器官移植的患者解决器官来源和免疫排斥的问题

5．1975年鼠源性单克隆抗体的问世，标志着现代免疫学时代的到来。相关叙述错误的是（    ）

A．鼠源性单克隆抗体的获得是以杂交瘤技术为基础的

B．鼠源性单克隆抗体可用于检测某些肿瘤．病原体．激素等

C．鼠源性单克隆抗体进入人体后不会被免疫系统识别并清除

D．转基因技术开辟了生产全人源化单克隆抗体的新途径

6．下图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述，正确的是  （    ）

A. ①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞
B. ②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成
C. ③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性
D. ④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群

7．下列有关植物组织培养的叙述，正确的是

A.  将草莓的根尖伸长区细胞进行植物组织培养可获得脱毒苗
B.  二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到能稳定遗传的可育植株
C.  用人工种皮将胚状体．愈伤组织等包装起来可制成人工种子
D.  植物耐盐突变体可通过在NaCl浓度高于正常培养基的培养基上培养筛选而获得

8．机体发生炎症反应时，血浆中CD14水平会升高。利用小鼠制备抗CD14单克隆抗体，能够用于CD14的检测。下列相关叙述正确的是（    ）

A．反复将CD14注射到小鼠体内，产生的血清抗体为单克隆抗体

B．灭活的病毒是唯一能诱导骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合的因素

C．利用杂交瘤技术获得的杂交瘤细胞都可以产生抗CD14抗体

D．杂交瘤细胞体外培养过程中需要提供CO2以维持培养液中pH

9．对如图的分析，不正确的是（　　）
？？？？？？？

A. 若图表示基因工程的操作流程图，则C表示重组质粒，D是受体细胞
B. 若图表示单克隆抗体的制备，则A是经过免疫的B淋巴细胞，B是骨髓瘤细胞
C. 若图表示动物体细胞核移植过程，用胚胎分割技术可获得多个性别不同的克隆动物
D. 若图表示植物体细胞杂交过程，则从C到D需用的技术是植物组织培养

10．实践表明，普通的单克隆抗体易被人体的免疫系统识别为异源蛋白而被清除。为解决这一问题，科研工作者对人源性单克隆抗体进行了研究，具体的操作过程如下：先用人的抗体基因取代小鼠的抗体基因，获得转基因小鼠；然后从接受抗原刺激的转基因小鼠体内获取B淋巴细胞，使这些B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，经过筛选之后获得杂交瘤细胞用于单克隆抗体的制备。以下叙述错误的是（    ）

A．获取转基因小鼠时，常用显微注射法将目的基因导入小鼠受精卵

B．B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合时，可以利用灭活的病毒进行诱导

C．对融合后获得的杂交瘤细胞进行培养即可获得大量的单克隆抗体

D．人源性单克隆抗体具有特异性强．灵敏度高．抗原性低等特点

11．下图表示高等动物的个体发育过程，下列说法中正确的是

A. 图中①过程表示胚胎发育，②表示胚后发育
B. 受精卵到囊胚的过程中，每个细胞的体积不断增大
C. 通常在囊胚期时细胞开始出现分化
D. 囊胚期开始出现三胚层的分化

12．为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。下列叙述错误的是（    ）

A．筛选2含多次筛选，基本原理与筛选1相同

B．为了诱导小鼠甲产生特异性的B淋巴细胞，可以对其注射病毒A

C．利用灭活的病毒或聚乙二醇等作介导，融合B淋巴细胞和骨髓瘤细胞

D．为了克隆阳性杂交瘤细胞，可将其注射到小鼠腹腔内增殖并获得大量单克隆抗体

13．下列关于转基因生物安全性的叙述，正确的是（    ）

A．转基因作物被动物食用后，目的基因会转入动物体细胞中

B．转基因技术的应用解决了人类史上很多难题，是有利无害的

C．现在很多转基因食品包装都有警示标志，就是提示潜在的安全性

D．转基因食品比传统食品营养更丰富，因此在不久之后转基因食品会替代传统食品

14．新型冠状病毒可通过表面的刺突蛋白（S蛋白）与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2 受体结合，侵人人体，引起肺炎。单克隆抗体可阻断病毒融合的粘附或人侵，故抗体药物的研发已成为治疗HAT筛选新冠肺炎的研究热点之一。图为筛选．制备抗S蛋白单克隆抗体的示意图。下列相关叙述，不正确的是（    ）

A．研制抗S蛋白单克隆抗体，需先注射刺突蛋白免疫小鼠以激活小鼠的免疫细胞抗体

B．杂交细胞经抗体检验后即可用于单克隆抗体的生产

C．单克隆抗体可以制成诊断盒，用于疾病的诊断

D．单克隆抗体的制备采用了动物细胞融合技术和动物细胞培养技术

15．下列有关动物细胞培养的叙述错误的是（   ）

A. 培养的动物细胞大多取自动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织

B. 原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞

C. 细胞株由于遗传物质发生了改变,一般能够传到40~50代

D. 培养条件下可以无限分裂的细胞叫细胞系

16． 下图是单克隆抗体制备流程的简明示意图。下列有关叙述，正确的是

A. ①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应T淋巴细胞

B. ②中使用胰蛋白酶有利于杂交瘤细胞的形成

C. ③同时具有脾脏细胞和鼠骨髓瘤细胞的特性

D. ④是经筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群

17．下图为双抗体夹心法是医学上常用的定量检测抗原的方法，利用细胞工程技术制备的单克隆抗体能增强该过程的有效性，下列相关叙述正确的是

A．将相关抗原注射到小鼠体内，可从小鼠脾脏中获得所需的单克隆抗体

B．固相抗体和酶标抗体均能与抗原结合，这是由于两者结构相同

C．加入酶标抗体的目的是通过测定酶反应产物量来判断待测抗原量

D．该方法与只使用单克隆抗体相比，能增加识别抗原的种类

18．为了解决杂交瘤细胞在传代培养中出现来自B细胞染色体丢失的问题，研究者在单克隆抗体的制备过程中增加了一个步骤，如下图所示。除了抗原刺激之外，用EBV（一种病毒颗粒）感染动物B细胞，使其染色体核型更稳定。这样的细胞能够在HAT培养基中存活，但对乌本苷（Oua）敏感。下列相关分析错误的是（    ）

A．杂交瘤细胞具有持续产生抗EBV抗体的能力

B．杂交瘤细胞染色体丢失可能导致抗体产生能力下降

C．图中B细胞取自于抗原刺激后动物的脾脏等

D．骨髓瘤细胞应该无法在HAT选择培养基中存活

参考答案与试题解析

1．【答案】D

【解析】

2．【答案】C

【解析】

在单克隆抗体的制备过程中使用的细胞工程技术有动物细胞融合和动物细胞培养；向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞，将鼠的骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合，用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞；在单克隆抗体的制备过程中，在选择培养基中有两次筛选，第一次筛选的目的是选择出杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞；单克隆抗体的特点是特异性强．灵敏度高，并可大量制备。

解答：

A．为提高单抗制备成功率，往往需要多次给实验动物注射同一种抗原，有更多的受刺激的B细胞，A正确；

B．抗体是体液免疫中浆细胞产生的，给实验动物注射抗原后，相应抗体检测呈阳性，说明发生了体液免疫，B正确；

C．基因工程中需用到DNA分子杂交技术和抗原—抗体杂交技术，单抗的制备中没有用到，C错误；

D．每种成熟的B细胞表面只有一种抗原受体，只能识别一种抗原，一种效应B细胞只能产生一种抗体，D正确。

故选C。

3．【答案】B

【解析】

动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较：

解答：

A．动物细胞融合技术与植物体细胞杂交技术中，诱导细胞融合时都可以利用电激融合法或PEG融合法，A正确；B．动物细胞外没有细胞壁，融合前不需要用用纤维素酶和果胶酶处理细胞，B错误；

C．动物细胞融合利用了动物细胞膜的流动性，植物体细胞杂交利用了植物细胞膜的流动性和植物细胞的全能性，C正确；

D．动物细胞融合技术主要是为了获得细胞产品，植物体细胞杂交技术主要是为了获得杂种植株，D正确。

故选B。

4．【答案】C

【解析】

基因表达包括转录和翻译两个过程，其中转录过程需要RNA聚合酶的启动。

细胞分化是指细胞在生长过程中细胞的形态．结构和功能发生变化的过程，细胞分化形成了不同的组织，如动物的肌肉组织．上皮组织．神经组织和结缔组织，植物的保护组织．营养组织．分生组织和输导组织。

解答：

A．通过题干信息可知，卵细胞细胞质和4种转录因子，能使其细胞重新成为具有分裂分化能力的诱导多能干细胞（iPSCs），故可能诱导细胞基因表达情况改变，A正确；

B．题干信息可知，进一步分析iPSCs，发现其染色体上甲基化位置和程度发生改变（甲基化是指组成染色体的物质与甲基结合），故细胞分化过程不改变细胞的基因组成，但染色体甲基化情况不同，B正确；

C．题干可知山羊乳腺细胞核与去核卵细胞融合，故融合细胞和iPSCs不具有无限增殖的能力，C错误；

D．通过题干信息分析可知，以上研究可为等待器官移植的患者解决器官来源和免疫排斥的问题，D正确。

故选C。

5．【答案】C

【解析】

单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取效应B细胞，将效应B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体；诱导动物细胞融合的方法有：物理法（离心．振动）．化学法（聚乙二醇）．生物法（灭活的病毒）。

解答：

A．鼠源性单克隆抗体的获得是以杂交瘤技术为基础的，是将来源于免疫接种过的小鼠的B 细胞与骨髓瘤细胞融合，继而筛选出既能无限增殖又能分泌抗体的鼠杂交融合细胞，进而进行筛选．抗体制备和抗体纯化，A正确；

B．鼠源性单克隆抗体可用于检测某些肿瘤．病原体．激素等，B正确；

C．鼠源性单克隆抗体进入人体后可能会被免疫系统识别并清除，C错误；

D．转基因技术开辟了生产全人源化单克隆抗体的新途径，D正确。

故选C。

6．【答案】D

【解析】A.①是从已免疫的小鼠脾脏中获得的效应B淋巴细胞，A错误；
B.胰蛋白酶的作用是将组织细胞分散开来，杂交瘤细胞的形成需用灭活的病毒，B错误；
C.③是效应B细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞，同时具有效应B细胞和骨髓瘤细胞的特性，C错误；
D.④是第二次筛选，目的是筛选培养获得的能分泌特异性抗体的细胞群，D正确。
故选D。

7．【答案】D

【解析】A.将草莓的根尖脱毒苗分生区的细胞进行植物组织培养可以得到脱毒苗，故A错误；

B.二倍体植株的花粉经脱分化与再分化后得到的是单倍体植株，这些单倍体植株高度不育，不能稳定遗传，故B错误；

C.人工种子是通过植物组织培养得到的胚状体．不定芽．顶芽和腋芽等为材料，通过人工薄膜包装得到的种子，故C错误；

D.只有耐盐的细胞，才能在添加适量NaCl的培养基存活，所以可通过在NaCl浓度高于正常培养基的培养基上培养筛选而获得耐盐的突变体，故D正确。

故选D。

8．【答案】D

【解析】

9．【答案】C

【解析】解：A．图中若表示基因工程的操作流程图，则C表示重组质粒，D是受体细胞，C→D过程是将目的基因导入受体细胞，A正确；
B．图表示单克隆抗体的制备，则A是经过免疫的B淋巴细胞，B是骨髓瘤细胞，B正确；
C．胚胎分割移植得到的是基因相同．性别也相同的克隆动物，C错误；
D．若图表示植物体细胞杂交过程，则从AB到C指植物体细胞杂交，C到D指杂种细胞到杂种植株，该过程需用植物组织培养技术来完成，D正确．
故选：C．

10．【答案】C

【解析】

单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

解答：

A．在动物转基因技术中，常采用显微注射法将目的基因导入动物的受精卵，A正确；

B．常用灭活病毒诱导动物细胞融合，其原理是病毒表面的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，B正确；

C．用特定的选择培养基培养之后，筛选得到的杂交瘤细胞需经过克隆化培养和抗体检测，多次筛选才能获得分泌单一抗体的杂交瘤细胞，C错误；

D．经过转基因技术改造小鼠之后，获得的抗体是由人的抗体基因编码的，所以称为人源性单克隆抗体，能够有效解决鼠源性单克隆抗体被人体识别为异源蛋白的问题，即具有特异性强．灵敏度高．抗原性低等特点，D正确。

故选C。

11．【答案】C

【解析】A.胚胎发育是指从受精卵到幼体的发育过程，胚后发育是指从幼体发育成性成熟的个体，A错误；

B.受精卵早期的细胞分裂叫卵裂，胚胎总体积基本不变，因此每个细胞的体积不断减小，B错误；

C.胚胎发育过程中早期胚胎具有全能性，还没分化，囊胚期开始出现细胞分化，C正确；

D.原肠胚时期出现内中外三个胚层的分化，D错误。

故选C。

12．【答案】A

【解析】

13．【答案】C

【解析】A．动物取食转基因作物后，要经过消化吸收才能进入体内，此时基因也会被水解，因此目的基因不可能直接进入动物细胞，A错误；

B．转基因技术的应用解决了人类史上很多难题，但既有有利的一面，也有不利的一面，B错误；

C．现在很多转基因食品包装都有警示标志，就是提示潜在的安全性，让消费者谨慎选择，C正确；

D．转基因食品和传统食品各有优缺点，不久后转基因食品不会完全替代传统食品，D错误。

故选C。

14．【答案】B

【解析】

15．【答案】C

【解析】动物细胞培养过程：取动物胚胎或幼龄动物组织动--剪碎组织--用胰蛋白酶处理分散成单个细胞--制成细胞悬液--转入培养液中（原代培养）--放入二氧化碳培养箱培养--贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液--转入培养液（传代培养）--放入二氧化碳培养箱培养（95%空气和5%的CO2）．培养基的营养物质：糖．氨基酸．促生长因子．无机盐．微量元素等，还需加入血清．血浆等天然物质。细胞株：原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞能存活传到40～50代，这部分细胞称为细胞株。细胞系：细胞株传到50左右不能再继续传代，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制的传代下去，这部分细胞称为细胞系。

动物胚胎或幼龄动物组织细胞分裂能力旺盛，所以用于培养的细胞多取自动物胚胎或幼龄动物，A正确；原代培养细胞传至10代左右就不容易传下去，细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，B正确；原代培养细胞中少数细胞能存活传到40～50代，这部分细胞称为细胞株，其遗传物质没有发生改变，C错误；细胞株传到50左右不能再继续传代，部分细胞遗传物质改变，具有癌变细胞的特点，可以在培养条件下无限制的传代下去形成细胞系，D正确。

16．【答案】D

【解析】杂交瘤技术的目的是制备对抗原有特异性的单克隆抗体，所以融合一方必须是经过抗原刺激产生的效应B淋巴细胞（浆细胞），通常选用被免疫动物的脾细胞，脾淋巴细胞的主要特征是具有抗体分泌功能，所以①是效应B淋巴细胞, A错误；使用细胞融合剂造成细胞膜一定程度的损伤，使细胞易于相互粘连而融合在一起。最佳的融合效果应是最低程度的细胞损伤而又产生最高频率的融合。聚乙二醇是目前最常用的细胞融合剂，所以②中使用的不是胰蛋白酶，胰蛋白酶在动物细胞培养时能酶解外面的蛋白,使细胞疏松排散，不用于细胞融合, B错误；细胞融合是一个随机的物理过程，在小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞混合细胞悬液中，经融合后细胞将以多种形式出现。如融合的脾细胞和瘤细胞．融合的脾细胞和脾细胞．融合的瘤细胞和瘤细胞．未融合的脾细胞．未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交才具有持续增殖的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。所以③不一定同时具有脾脏细胞和骨髓瘤细胞的特性，经过选择培养基筛选得到的④才是经筛选得到的能分泌特异性抗体的细胞群, C错误,D正确。

17．【答案】C

【解析】

18．【答案】A

【解析】

题图分析：图示为单克隆抗体制备过程，除了抗原刺激之外，还用EBV（一种病毒颗粒）感染动物B淋巴细胞，使其染色体核型更稳定，不易发生变异，该细胞株能够在HAT培养基中存活。

解答：

A．本实验中EBV的作用是使B细胞染色体核型更稳定，而不是刺激B细胞分化成浆细胞产生抗体，所以该杂交瘤细胞不能产生抗EBV的抗体，A错误；

B．杂交瘤细胞染色体丢失可能导致细胞发生变异，从而导致抗体产生能力下降，B正确；

C．B细胞分布在脾脏和淋巴结等免疫器官中，所以在单克隆抗体制备过程中，B细胞取自于抗原刺激后动物的淋巴结或脾脏等，C正确；

D．据图可知，骨髓瘤细胞在HAT选择培养基中死亡，D正确。

故选A。