沪科版 (2019)选修3第一章 发酵工程利用微生物进行规模化生产第三节 测定微生物的数量一、间接计数法习题

【优质】一、间接计数法-1作业练习

一．单项选择

1．关于测定土壤中细菌的数量，正确叙述是（    ）

A．一般选用 103～107 倍的稀释液分别涂布

B．测定放线菌的数量，一般选用 103．104 和 105 倍稀释

C．测定真菌的数量，一般选用 104．105 和 106 倍稀释

D．当第一次测量某种细菌的数量，可以将 101～107 倍的稀释液分别涂布在平板上培养

2．微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。下列无菌操作错误的是（    ）

A．接种时培养皿盖只打开一条缝隙

B．菌种和培养基使用前均需灭菌处理

C．接种前．后都要过火灼烧斜面菌种试管口

D．高压蒸汽灭菌既能杀死微生物的营养体，也能杀死芽孢等休眠体

3．如图所示为实验室使用某种接种方法在培养基上培养某种微生物的结果。下列相关说法正确的是（    ）

A．该图最可能是用稀释涂布平板法进行接种的

B．在操作时，为防止杂菌污染，需进行严格的消毒和灭菌

C．该种微生物有可能是新冠病毒COVID-19

D．该培养基上的菌落分布不均匀，代表纯化失败

4． 《齐民要术》记载：“作盐水，令极咸，于盐水中洗菜。若先用淡水洗者，菹烂。洗菜盐水，澄取清者，泻者瓮中，令没菜把即止，不复调和”。下列关于制作泡菜相关的说法，错误的是

A. 咸盐水洗菜具有消毒作用          B. 盐水令没菜把营造无氧环境

C. 盐水浓度高亚硝酸盐含量增加      D. 一般腌制10d后食用泡菜最好

5．下列有关微生物培养的叙述，正确的是（　　）

A．接种环灼烧灭菌之后，应立即伸入菌液否则杂菌会污染接种环

B．稀释涂布平板法和平板划线法都可以很好地统计待测菌液中的活菌数目

C．培养不同微生物的培养基时都必须要将pH调至中性或微碱性

D．溶化牛肉膏时，应将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯

6．下列有关说法，正确的是（    ）

A. 对于频繁使用的菌种，可采用甘油管藏法保藏

B. 对于需要长期保存的菌种，可以采用﹣4℃低温保藏的方法

C. 加热熔化琼脂时不要搅拌，以免水分过多蒸发导致糊底

D. 溶化牛肉膏时，称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯

7． 下列关于发酵工程及其应用的说法，正确的是（　　）

A. 黑曲霉可以用于酱油．柠檬酸．凝乳酶的工业生产

B. 接种是发酵工程的中心环节

C. 用于发酵工程的菌种，可以从自然界中筛选，也可以通过基因工程育种或单倍体育种获得

D. 可以通过蒸馏．萃取等方法对单细胞蛋白进行分离．提纯

8．以下哪种方式可以用来分离培养由实验人员设计的特定环境中生长的微生物，尽管我们并不知道哪种微生物可以在这种特定的环境下生长？（    ）

A．平板培养 B．富集培养

C．稀释涂布 D．单细胞显微分离

9．如果发酵工程生产的产品是菌体，菌体分离采用的方法是（    ）

A．蒸馏 B．过滤 C．萃取 D．离子交换

10．耐辐射球菌对射线具有超强耐受力，其P基因突变株受射线照射后生存率显著降低。研究者利用P基因成功转化不耐辐射的酵母菌，经射线照射后检测发现，与非转基因酵母菌相比，转基因酵母菌三种抗氧化酶含量显著增加。相关叙述不合理的是（    ）

A．采用划线法将酵母菌接种到液体培养基中培养

B．酵母菌的接种．培养等操作需保证无杂菌污染

C．耐辐射球菌对射线的耐受力与P基因密切相关

D．P基因通过增强细胞抗氧化能力使细胞具有耐受力

11． 通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌的生长；在培养基中加入10%的酚可以抑制细菌和霉菌的生长。利用上述方法能从混杂的微生物群体中分别分离出(  )

①大肠杆菌 ②霉菌 ③放线菌 ④固氮细胞

A. ④②③B. ①②③ C. ①③④D. 只有③④

12．下列关于微生物培养基种类划分的叙述，错误的是（    ）

A．培养基按其物理性质可以分为液体培养基．固体培养基和半固体培养基

B．培养基按其化学成分可以分为天然培养基．合成培养基和半合成培养基

C．培养基按其功能用途可以分为鉴别培养基和选择培养基

D．培养基按其营养构成可以分为含水培养基和无水培养基

13．用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是（　　）

A．未接种的选择培养基 B．未接种的LB培养基

C．接种土壤稀释液的LB培养基 D．接种土壤稀释液的选择培养基

14．不同的微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是（　　）

A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素                 

B．碳源物质也为该微生物提供能量

C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质

D．水是该微生物的营养要素之一

15．下列有关微生物培养的叙述，正确的是（　　）

A．纯化培养时，对培养皿皿盖做标记，培养皿应倒置放在恒温培养箱内的摇床上培养

B．涂布接种时，需将涂布器沾酒精后在酒精灯外焰上引燃，冷却后再使用

C．培养基采用高压蒸汽灭菌，高压灭菌加热结束后，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

D．可用平板划线操作对微生物进行分离和计数

16．下列关于发酵工程的说法，错误的是（    ）

A．发酵工程产品主要是指微生物的代谢物．酶和菌体本身

B．可以通过人工诱变选育新菌株

C．培养基，发酵设备和菌种必须经过严格的灭菌

D．环境条件的变化既影响菌种的生长繁殖又影响菌体代谢物的形成

17．伤寒是由伤寒杆菌引起的急性传染病，伤寒杆菌侵入人体后很快被巨噬细胞吞噬，并进一步在其中大量繁殖，症状包括高烧．腹痛．严重腹泻．头痛．身体出现玫瑰色斑等，大部分人可以自行痊愈。下列叙述正确的是（    ）

A．伤寒杆菌进入细胞，快速利用宿主细胞的核糖体合成大量蛋白质

B．高温可破坏病原体蛋白质的空间结构，所以煮沸处理餐具可杀死所有病原体

C．伤寒杆菌被吞噬进入细胞，说明细胞膜有控制物质进出细胞的功能

D．适当增加机体内参与免疫的细胞数量与活性，可提高对病原体的抵御能力

18．下列针对微生物纯培养的说法，错误的是（　　）

A. 倒平板操作中，等待平板冷却凝固后，要将平板倒置

B. 用于培养微生物的培养基中一定含有氮源和碳源

C. 若皿盖和皿底之间溅上培养基，这个培养基不可再用

D. 微生物纯培养形成的菌落只出现在固体培养基表面或内部

参考答案与试题解析

1．【答案】B

【解析】

在土壤中，细菌的数量比真菌的多，所以为了确保稀释后能形成菌落数在30-300之间的培养皿，在进行分离与计数时，就需要按照不同的稀释度分别进行涂布，测定细菌一般选择104．105．106倍稀释，测定放线菌一般选择103．104．105倍稀释，测定真菌一般选择102．103．104倍稀释，而首次做实验时，可将范围放宽点，将103～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养。

解答：

A．测定细菌一般选择104．105．106倍稀释液分别涂布到平板上培养，A错误；

B．放线菌属于细菌测定的数量，103．104．105倍的稀释液进行平板培养，B正确；

C．测定真菌的数量，一般选用102．103．104倍稀释，C错误；

D．当第一次测量某种细菌的数量，可将范围放宽点，将103～107倍的稀释液分别涂布到平板上培养，D错误。

故选B。

2．【答案】B

【解析】

无菌技术的主要内容：①对实验操作的空间．操作者的衣着和手，进行清洁和消毒；②将用于微生物培养的器皿．接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

解答：

A．接种时用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于锥形瓶瓶口的缝隙即可，A正确；

B．培养基在使用前需灭菌处理，但是菌种不能灭菌处理，否则菌种也会死亡，B错误；

C．接种前后，均要将斜面菌种试管口通过火焰，防止杂菌污染，C正确；

D．高压蒸汽灭菌法不仅能杀死微生物的营养体，也能杀死芽孢等休眠体，D正确。

故选B。

3．【答案】B

【解析】

图示表示的是用平板划线法接种后微生物的生长情况，其中需要用到的工具有培养皿．接种环．酒精灯等，整个过程需要严格进行无菌操作。

解答：

A．题图中菌落分布不均匀，部分菌落过于密集，最可能是用平板划线法进行接种的，A错误；

B．在操作时，为防止杂菌污染，需进行严格的消毒和灭菌，B正确；

C．病毒不能在培养基上生存繁殖，故该种微生物不可能是新冠病毒COVID-19，C错误；

D．平板划线法，随划线次数的增加，菌落密度逐渐减小，因此菌落分布不均匀，不属于纯化失败，D错误。

故选B。

4．【答案】 C

【解析】温度过高．食盐用量过低．腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加，C错误。

5．【答案】D

【解析】

6．【答案】D

【解析】A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法，在固体斜面培养基上菌落长成后，放入冰箱低温保藏，A错误；

B．对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏法保存，在低温-20℃下保存，B错误；

C．在熔化琼脂时，需要控制火力并不断搅拌，以免发生焦糊，C错误；

D．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量的水，加热溶化牛肉膏，D正确。

故选D

7．【答案】A

【解析】A．黑曲霉广泛分布于世界各地的粮食．植物性产品和土壤中，是重要的发酵工业菌种，黑曲霉可以用于酱油．柠檬酸．凝乳酶的工业生产，A正确；

B．发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节，B错误；

C．发酵工程的优良性状的菌种可以从自然界中筛选出来，也可以通过诱变育种和基因工程育种获得，C错误；

D．单细胞蛋白是微生物菌体，可采用沉淀．过滤等方法分离，而代谢产物则采用蒸馏．萃取．离子交换等方法，D错误。

故选A。

8．【答案】B

【解析】

富集培养是指利用不同微生物间生命活动特点的不同，人为地提供一些特定的环境条件，使特定种（类）微生物旺盛生长，使其在数量上占优势，更利于分离出该特定微生物，并引向纯培养。

解答：

A．平板培养要知道该微生物生长特定的环境，配制的培养基要满足该微生物对营养物质的需求，A错误；

B．由分析可知，在不知道哪种微生物可以在某种特定的环境下生长的情况下，用富集培养可以分离培养这种特定环境中生长的微生物，B正确；

C．稀释涂布要知道该微生物生长特定的环境，配制的培养基要满足该微生物对营养物质的需求，C错误；

D．采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞进行培养以获得纯培养，需要提前知道该微生物生长特定的环境，配制满足其生长繁殖的培养基，D错误。

故选B。

9．【答案】B

【解析】

发酵工程生产的产品有两类：一类是代谢产物，另一类是菌体本身，产品不同，分离提纯的方法一般不同。如果产品是菌体，可采用过滤,沉淀等方法将菌体从培养液中分离出来；如果产品是代谢产物，可用萃取．蒸馏．离子交换等方法进行提取。

解答：

根据分析可知，如果产品是菌体，可采用过滤，沉淀等方法，故选B。

10．【答案】A

【解析】

微生物接种常用的两种方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过足够稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后，可形成单菌落。

题意分析，耐辐射球菌对射线具有超强耐受力，其P基因突变株受射线照射后生存率显著降低，显然P基因的表达产物能增强球菌对射线的耐受力，然后研究者用P基因成功转化不耐辐射的酵母菌，经射线照射后检测发现，与非转基因酵母菌相比，转基因酵母菌三种抗氧化酶含量显著增加，从而更进一步证明P基因与球菌对射线的超强耐受力有关，且对射线的耐受力是通过抗氧化酶来实现的。

解答：

A．采用划线法只能将酵母菌接种到固体体培养基中培养，A错误；

B．获得纯净培养物的关键是无菌技术，酵母菌的接种．培养等操作过程也不例外，需保证无杂菌污染，B正确；

C．题意显示，耐辐射球菌对射线具有超强耐受力，其P基因突变株受射线照射后生存率显著降低据此可推测，耐辐射球菌对射线的耐受力与P基因密切相关，C正确；

D．成功导入P基因的酵母菌三种抗氧化酶含量显著增加，显然P基因通过增强细胞抗氧化能力使细胞具有耐受力，D正确。

故选A。

11．【答案】A

【解析】解答本题的关键是掌握选择培养基的作用，识记不同的选择培养基的作用与原理不同，因而可以选择出不同的微生物。故选A。

12．【答案】D

【解析】

微生物培养基一般都含有水．碳源．氮源．无机盐，此外还要满足微生物生长对pH．特殊营养物质以及氧气的要求。

解答：

A．按其物理性质的不同，可将培养基可分为液体培养基．固体培养基和半固体培养基，A正确；

B．按培养基的化学成分不同，可以分为天然培养基，合成培养基和半合成培养基，B正确；

C．按其功能用途可将培养基分为鉴别培养基和选择培养基，C正确；

D．水是微生物必需的营养要素之一，培养基中必须含有水，D错误。

故选D。

13．【答案】C

【解析】

对照实验是指除所控因素外其它条件与被对照实验完全对等的实验。判断选择培养基是否起到了选择作用，则接种了的选择培养基是实验组，而接种了的LB培养基（普通培养基）属于对照组。

解答：

将菌液稀释相同的倍数，在LB培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此LB培养基是对照组。对照组遵循的原则是单一变量，所以需要与选择培养基一样接种．培养，因此选项中接种土壤稀释液的LB培养基属于对照组，接种土壤稀释液的选择培养基属于实验组，C正确，ABD错误。

故选C。

14．【答案】B

【解析】

培养基的组成成分包括碳源．氮源，水．无机盐，有的还有生长因子，以CO2为唯一碳源的培养基培养自养微生物，培养基中还必须提供氮源．水．无机盐。

解答：

A．由分析可知，培养基中还必须提供氮源，氮源物质为微生物提供必要的氮素，A正确；

B．该碳源是二氧化碳，属于无机物，不能作为微生物的能源物质，B错误；

C．由分析可知，培养基中还必须提供无机盐，无机盐是微生物不可缺少的营养物质，C正确；

D．一切生物离不开水，水是微生物的营养要素之一，D正确。

故选B。

15．【答案】B

【解析】

微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

解答：

A．纯化培养时，培养皿应倒置放在恒温培养箱内静止培养，不需要放在摇床上培养，以免杂菌污染，A错误；

B．涂布接种时，需将涂布器沾酒精后在酒精灯外焰上引燃，冷却后再使用，以免高温将部分微生物杀死，B正确；

C．高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，C错误；

D．稀释涂布平板法和平板划线法都能对微生物进行分离纯化，但只有稀释涂布平板法可用于计数，D错误。

故选B。

16．【答案】C

【解析】

17．【答案】D

【解析】

消毒和灭菌：

免疫系统的功能：免疫系统具有防卫．监控和清除的功能。

解答：

A．伤寒杆菌属于原核细胞，有核糖体，可以利用自身核糖体合成蛋白质，A错误；

B．高温属于消毒，不能杀死所有的病原体，例如其芽孢和孢子，B错误；

C．伤寒杆菌被吞噬进入细胞，体现了生物免疫系统的功能和膜的流动性，不能体现细胞膜有控制物质进出细胞的功能，C错误；

D．适当增加机体内参与免疫的细胞数量与活性，可以提高人体免疫力，提高对病原体的抵御能力，D正确。

故选D。

18．【答案】B

【解析】A．到平板时，为了避免污染，等待平板冷却凝固后，要将平板倒置，A正确；

B．用于培养自养生物的培养基不需要加入碳源，B错误；

C．若皿盖和皿底之间溅上培养基，容易造成污染，不可再用，C正确；

D．微生物纯培养时，会在固体培养基的表面或内部形成菌落，在液体培养基中不会形成菌落，D正确。

故选B。