2023届高考生物二轮复习教材回归课后习题强化和拓展选择性必修三作业含答案

这是一份2023届高考生物二轮复习教材回归课后习题强化和拓展选择性必修三作业含答案，共16页。试卷主要包含了单项选择题，不定项选择题，非选择题等内容，欢迎下载使用。
一、单项选择题(共10小题)
1．某同学用质量百分比为5%的食盐水制作泡菜时，在不同时间测定了泡菜中亚硝酸盐的含量，结果如下图。下列叙述正确的是( )
A．据图分析泡菜食用的最佳时间是第3天，因为此时亚硝酸盐含量最低
B．若改用质量百分比为20%的食盐水，得到的实验结果与图中结果相同
C．实验过程中乳酸菌的数量增长规律与亚硝酸盐含量的变化完全一致
D．若泡菜咸而不酸，可能是食盐浓度过高，抑制了乳酸菌的繁殖
【答案】D
【解析】泡菜食用的最佳时间是第13天，因为此时亚硝酸盐含量低，泡菜经过发酵产生了乳酸，第3天亚硝酸盐含量虽低，但乳酸产生的量不够，泡菜风味不佳，A错误；食盐的含量、腌制方法、时间长短、温度高低等都会影响亚硝酸盐含量的变化，B错误；实验过程中乳酸菌数量先增加后保持一段时间相对稳定，最后减少，与亚硝酸盐含量的变化不完全一致，C错误；泡菜咸而不酸，可能是食盐浓度过高，抑制了乳酸菌的繁殖，D正确。
2．微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。下列相关表述正确是( )
A．培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利
B．有的微生物能寄生在多种细菌内，使细菌裂解，这种方法属于生物消毒法
C．微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物
D．在培养细菌时，一般将pH调至酸性
【答案】B
【解析】培养基中的营养物质浓度过高会导致微生物出现失水过多，甚至出现死亡的现象，对生长不利，A错误；有的微生物能寄生在多种细菌内，使细菌裂解，这种方法能够利用微生物抑制细菌生长，甚至死亡，属于生物消毒法，B正确；微生物的纯培养物指的是没有被杂菌污染的微生物，而不是不含有代谢废物的微生物培养物，C错误；培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，D错误。
3．某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为210 r/min、230 r/min、250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。下列说法错误的是( )
A．摇床转速不同意味着培养液中氧气含量不同
B．从图中数据可以看出培养液氧气含量越高，酵母菌种群密度越大
C．培养到第8 h，三个锥形瓶中的酵母菌数量均达到了环境容纳量
D．从葡萄皮上分离野生酵母菌可以用平板划线法获得
【答案】C
【解析】用摇床震荡培养的目的是增大培养液与菌种的接触面积，同时增加培养液中的溶氧量，摇床转速不同意味着培养液中氧气含量不同，A正确；从图中可看出，随着摇床转速越高，培养液中O2含量越高，酵母菌繁殖的速度和总量越高，B正确；培养到第8 h，210 r/min组的酵母菌数量还在继续上升，说明第8 h时并未达到其环境容纳量，C错误；分离野生酵母菌可以用平板划线法或稀释涂布平板法，D正确。
4．下图是利用甲、乙两种植物的各自优势，通过植物细胞工程技术培育高产、耐盐的杂种植株的实验流程图。下列相关叙述错误的是( )
A．进行a处理时需用纤维素酶和果胶酶
B．形成b的过程体现了细胞膜的流动性和植物细胞的全能性
C．从b到c的过程中，为了防止污染可在培养基中加入一定量的抗生素
D．进行d选择时要将植株种在高盐环境中
【答案】B
【解析】a表示酶解法去除细胞壁，用纤维素酶和果胶酶，A正确；b表示诱导原生质体融合，形成细胞壁得到杂种细胞，该过程体现了细胞膜的流动性，没有体现植物细胞的全能性，B错误；从b到c的过程为植物组织培养过程，为了防止污染可在培养基中加入一定量的抗生素，C正确；d选择时，要将植株种在高盐环境中，筛选获得的耐盐植株，D正确。
5．干细胞的培养成功是动物细胞培养领域重大的成就之一，干细胞有着广泛的应用前景。下列关于干细胞有关叙述正确的是( )
A．干细胞存在于早期胚胎、脊髓和脐带血等多种组织和器官中
B．不同类型的干细胞，它们的分裂和分化潜能是基本相同的
C．可以用成纤维细胞、B细胞、T细胞等细胞来制备iPS细胞
D．科学家普遍认为胚胎干细胞的应用前景优于iPS细胞
【答案】C
【解析】干细胞可存在于早期胚胎(胚胎干细胞)、脐带血和骨髓(成体干细胞)等多种组织、器官中，A错误；不同类型的干细胞，它们的分化潜能是有差别的，如胚胎干细胞的分化潜能大于多能干细胞，B错误；小鼠成纤维细胞转变成iPS细胞与植物组织培养的脱分化过程类似，T细胞、B细胞等也能被诱导为iPS细胞，C正确；iPS细胞是人类诱导某些已分化的体细胞，成为诱导多能干细胞，科学家普遍认为iPS的应用前景优于取自胚胎的胚胎干细胞，D错误。
6．下列有关哺乳动物早期胚胎发育的叙述中，错误的是( )
A．胚胎干细胞是一类未分化的细胞，可以从早期胚胎中分离获得
B．桑葚胚的细胞一般都具有全能性，囊胚的细胞逐渐分化
C．在桑葚胚阶段，胚胎的内部开始出现含有液体的腔
D．受精卵早期卵裂时，胚胎中细胞数目不断增加，但胚胎的总体积并不增加
【答案】C
【解析】胚胎干细胞未分化，可从早期胚胎中获取，A正确；桑葚胚的细胞一般都具有全能性，囊胚的细胞分为为内细胞团和滋养层，所以开始出现分化，B正确；在囊胚阶段，胚胎的内部开始出现含有液体的腔，C错误；早期卵裂时，胚胎细胞数目不断增加，但总体积基本不变，D正确。
7．研究人员将一种海鱼的抗冻蛋白基因afp整合到土壤农杆菌的Ti质粒上，然后用它侵染番茄细胞，获得了抗冻的番茄品种。下列相关表述正确的是( )
A．afp基因是培育抗冻番茄用到的目的基因
B．构建含有afp基因的Ti质粒需要限制酶、DNA连接酶和核酸酶
C．只要检测出番茄细胞中含有afp基因，就代表抗冻番茄培育成功
D．抗冻蛋白基因afp导入番茄细胞前，一般先用Ca2＋处理
【答案】A
【解析】实验目的是获得抗冻的番茄品种，因此抗冻蛋白基因afp属于目的基因，A正确；构建含有afp基因的Ti质粒需要限制酶、DNA连接酶，不需要核酸酶，B错误；只有番茄具有抗冻性才能代表抗冻番茄培育成功，含有的afp基因若不表达，也不会获得抗冻番茄，C错误；抗冻蛋白基因afp导入农杆菌前，一般先用Ca2＋处理，导入植物细胞常用农杆菌转化法，D错误。
8．将大肠杆菌的质粒连接上人生长激素的基因后，重新置入大肠杆菌的细胞内，通过发酵就能大量生产人生长激素。下列叙述正确的是( )
A．大肠杆菌可发生基因突变、基因重组和染色体变异
B．大肠杆菌获得的能产生人生长激素的变异可以遗传
C．大肠杆菌质粒标记基因中腺嘌呤与尿嘧啶含量相等
D．生长激素基因在转录时需要解旋酶和RNA连接酶
【答案】B
【解析】大肠杆菌属于原核生物，无染色体，可发生基因突变，但不能发生基因重组和染色体变异，A错误；通过基因工程技术可以将人的生长激素导入大肠杆菌中，并且能稳定的遗传，B正确；大肠杆菌质粒的本质是DNA，其标记基因中不含尿嘧啶，C错误；生长激素基因在转录时需要RNA聚合酶，不需要解旋酶，D错误。
9．T4溶菌酶在温度较高时容易失去活性，科学家对影响T4溶菌酶耐热性的相关基因进行改造，使该酶的第3位异亮氨酸变为半胱氨酸，与第97位的半胱氨酸之间形成了一个二硫键，该酶的耐热性得到了提高。下列有关叙述正确的是( )
A．不能利用抗原—抗体杂交的方法对该酶进行检测
B．引起T4溶菌酶空间结构改变的根本原因是二硫键的形成
C．该实例利用了基因定点突变技术，对相关基因进行了改造
D．该实例属于蛋白质工程的范畴，也可直接改造蛋白质
【答案】C
【解析】T4溶菌酶本质为蛋白质，可利用抗原—抗体特异性结合的特点对该酶进行检测，A错误；引起T4溶菌酶空间结构改变的根本原因是对T4溶菌酶耐热性的相关基因进行了改造，B错误；该实例利用了基因定点突变技术，对相关基因的特定位点的碱基进行了替换，使该酶的第3位异亮氨酸变为半胱氨酸，C正确；该实例属于蛋白质工程的范畴，蛋白质工程直接改造的是基因，而不是直接改造蛋白质，D错误。
10．我国科学家经过多年的反复试验，可以在10 s之内对卵母细胞进行去核操作，在15 s之内将体细胞注入去核的卵母细胞里。为了调节相关基因的表达，提高胚胎的发育率和妊娠率，研究人员将组蛋白去甲基化酶(Kdm4d)的mRNA注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂(TSA)进行处理，成功培育出了克隆猴，流程如下图所示，相关叙述不正确的是( )
A．用灭活的仙台病毒短暂处理的作用是诱导细胞融合
B．重构胚组蛋白的甲基化水平高有利于提高胚胎发育率
C．重构胚组蛋白的乙酰化水平高有利于提高胚胎发育率
D．加快显微操作去核的速度有利于提高重构胚胎发育率
【答案】B
【解析】灭活的仙台病毒具有促融的作用，因此，这里用灭活的仙台病毒短暂处理的作用是诱导细胞融合，A正确；根据研究人员将组蛋白去甲基化酶(Kdm4d)的mRNA注入了重构胚信息，可推测重构胚组蛋白的甲基化水平高对提高胚胎发育率有抑制作用，B错误；用组蛋白脱乙酰酶抑制剂(TSA)进行处理重构胚，说明组蛋白的乙酰化水平高有利于提高胚胎发育率，C正确；加快显微操作去核的速度有利于卵母细胞保持较高的生物活性，因而可提高重构胚胎发育率，D正确。
二、不定项选择题(共4小题)
11．以传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。下列相关表述正确的是( )
A．发酵工程与传统发酵技术最大的区别是前者可以利用微生物来进行发酵
B．发酵工程的产品就是微生物的代谢产物，包括初生代谢产物和次生代谢产物
C．在发酵工程的发酵环节中，发酵条件不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢途径
D．通过发酵工程，可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白
【答案】C
【解析】发酵工程与传统发酵技术都需要利用微生物来进行发酵，A错误；发酵工程的产品主要包括微生物的代谢产物、酶及菌体本身，B错误；在发酵工程的发酵环节中，发酵条件不仅影响微生物的生长繁殖，也会通过影响酶的活性影响微生物的代谢，C正确；单细胞蛋白是指利用发酵工程获得的大量的微生物菌体，D错误。
12．运用植物细胞工程技术可以培育单倍体植株和进行细胞产物的工厂化生产。下列相关表述不正确的是( )
A．利用花药培养得到单倍体植株不需要用到植物组织培养技术
B．与常规育种相比，单倍体育种能明显缩短获得显性纯合二倍体的育种年限
C．细胞产物的工厂化生产可提高单个细胞次生代谢物的含量
D．培育单倍体植株和进行细胞产物的工厂化生产的过程均可体现植物细胞的全能性
【答案】ACD
【解析】利用花药培养得到单倍体植株需要用到植物组织培养技术，A错误；单倍体育种获得的都是纯合的二倍体，因此与常规育种相比，单倍体育种能明显缩短育种年限，B正确；取愈伤组织进行细胞产物的工厂化生产时，无法提高单个细胞的次生代谢物的含量，但可以通过培养得到更多的细胞从而提高次生代谢物的总量，C错误；进行细胞产物的工厂化生产的过程不能体现植物细胞的全能性，D错误。
13．科学家以SARSCV2(新冠病毒)的核衣壳蛋白为抗原，制备出了单克隆抗体。下列相关叙述，不正确的是( )
A．利用该单克隆抗体可以诊断是否感染SARSCV2
B．体外培养单个B淋巴细胞可以获得大量针对SARSCV2的单克隆抗体
C．将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞
D．将纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，从小鼠血清中分离出的抗体为单克隆抗体
【答案】BCD
【解析】单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特点，因此利用该单克隆抗体与新冠病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断是否感染SARSCV2，A正确；单个B淋巴细胞有产生抗体的能力，但没有无限增殖的本领，因此在体外培养单个B淋巴细胞不可能获得大量针对SARSCV2的单克隆抗体，B错误；将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导融合后的细胞不都是杂交瘤细胞，还有B淋巴细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞等，C错误；用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，从小鼠血清中分离出的抗体是多抗并非单克隆抗体，D错误。
14．2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。其培育过程可选用下图技术路线。据图分析下列叙述正确的是( )
A．三亲婴儿的遗传物质全部来自母亲和父亲的细胞核
B．该技术可避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代
C．捐献者携带的红绿色盲基因不能遗传给三亲婴儿
D．三亲婴儿的培育还需要早期胚胎培养和胚胎移植等技术
【答案】BCD
【解析】“三亲婴儿”的细胞核基因一半来自母亲，一半来自父亲，线粒体基因来自卵母细胞捐献者，A错误；母亲为“三亲婴儿”提供的是卵母细胞的细胞核，后代的线粒体基因来自捐献者的卵母细胞，故该技术可避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代，B正确；捐献者携带的红绿色盲基因位于其细胞核内，而捐献者给“三亲婴儿”提供的是卵母细胞的细胞质，故捐献者携带的红绿色盲基因不能遗传给“三亲婴儿”，C正确；由图分析可知，“三亲婴儿”的培育还需要早期胚胎培养和胚胎移植等技术，D正确。
三、非选择题(共6小题)
15．反刍动物，如牛和山羊，具有特殊的器官——瘤胃。在瘤胃中生活着多种微生物，其中许多微生物能以尿素作唯一氮源。某小组计划按图示操作流程从牛瘤胃中分离出该类微生物，并统计每毫升样品中究竟含有多少个这样的细菌。据下图回答下列有关问题：
(1)在该图示操作流程中步骤3是______________，步骤6的接种方法是____________________________。
(2)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源的物质是________，提供氮源的物质是____________。
(3)反刍动物瘤胃内栖息的微生物能分解尿素是因为它们能合成____________。
(4)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的胃部样液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为190、17、325、173和180。则每毫升样品中含有细菌数量为________×108个。与血细胞计数法相比，此计数方法测得的细菌数较________(填“多”或“少”)，原因是__________________________________________________________________________________。
【答案】(1)倒平板 稀释涂布平板法
(2)葡萄糖 尿素
(3)脲酶
(4)1.81 少 与血细胞计数法相比，此计数方法测得的细菌数只有活菌形成的菌落，且可能两个或多个细胞连在一起，在平板上只观察到一个菌落，所以结果会偏较少
【解析】(1)据图分析可知，图示操作流程中步骤3是倒平板，因为既要分离菌落也要计数，所以6是用稀释涂布平板法接种。
(2)根据图示培养基配方可知，葡萄糖是碳源、尿素是氮源，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养细菌后，如果pH升高，指示剂将变红，可以初步鉴定该种细菌能分解尿素。
(3)反刍动物瘤胃内栖息的微生物能分解尿素是因为它们能合成脲酶。
(4)根据题意可知，低于30个、高于300个的菌落数的平板计数时应该舍弃，则每毫升样品中含有细菌数量为(190＋173＋180)÷3÷0.1×105＝1.81×108个。与血细胞计数法相比，此计数方法测得的细菌数只有活菌形成的菌落，且可能两个或多个细胞形成一个菌落，所以结果会偏较少。
16．某化工厂的污水池中，含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答问题：
(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选________，这种培养基属于________培养基。
(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的________，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是__________________。
(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量________的培养液，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量________。
(4)转为固体培养时，常采用____________的方法接种，获得单菌落后继续筛选。
(5)若研究“目的菌”的生长规律，将单个菌落进行液体培养，可采用____________________________________________的方法进行计数，以时间为横坐标，以________________________为纵坐标，绘制生长曲线。
(6)实验结束后，使用过的培养基应该进行____________处理后，才能倒掉。
【答案】(1)目的菌(或能高效降解化合物A的细菌) 选择
(2)化合物A 异养需氧型
(3)减少 增加
(4)平板划线(或稀释涂布平板)
(5)定期取样并通过显微镜直接计数 细菌数目的对数
(6)灭菌
【解析】(1)由题意可知，本实验是分离出降解的有机化合物A的菌种，所以培养基中加入化合物A的目的是筛选降解的有机化合物A的菌种，这种培养基属于选择培养基。
(2)有机化合物A为目的菌提供了生长所需的氮和碳源，实验需要振荡培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是异养需氧型。
(3)由于“目的菌”有降解的有机化合物A的作用，所以培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量减少的培养基，接入新的培养液中连续培养，使“目的菌”的数量进一步增加。
(4)转为固体培养时，常采用平板划线法或稀释涂布平板法进行接种，分离获得单菌落。
(5)若研究“目的菌”的群体生长规律，将单个菌落进行液体培养，可采用定期取样并通过显微镜直接计数的方法进行计数，以时间为横坐标，以细菌数目的对数为纵坐标，绘制生长曲线。
(6)实验结束后要对使用过的器具、培养基进行灭菌处理，其目的是防止杂菌释放到环境中造成环境污染。
17．细胞工程的发展是一代又一代科学家经过长时间探索的结果，其中我国科学家发挥了重要作用。下图表示细胞工程操作中的某些过程，请回答下列问题。
(1)如果A、B分别是白菜和甘蓝的原生质体。它们是用____________________处理白菜和甘蓝的体细胞而获得。用________试剂诱导A与B融合成细胞C，细胞C再生出细胞壁后需要通过__________技术才能得到杂种植株“白菜—甘蓝”。
(2)如果该图表示抗新冠病毒的单克隆抗体制备过程中的一个环节，A细胞是小鼠的骨髓瘤细胞，获得B细胞的过程是________________________________________________________________，通过该技术获得的单克隆抗体具有________________________________的特点。
(3)如果该图表示“试管动物”技术的体外受精过程，A表示精子，B表示卵子，受精之前需要把B细胞培养至________________________。将C发育至囊胚阶段，对其进行胚胎分割，需将____________均等分割，否则将影响分割后胚胎的恢复和进一步发育，如需做性别鉴定，还需从________细胞取样做DNA分析。
【答案】(1)纤维素酶和果胶酶 聚乙二醇(PEG)或高Ca2＋—高pH 植物组织培养
(2)先用灭活的新冠病毒对小鼠进行免疫，一段时间后从该小鼠的脾脏中得到B淋巴细胞 纯度高，特异性强，灵敏度高
(3)减数第二次分裂中期(MⅡ期) 内细胞团 滋养层
【解析】(1)如果A、B分别是白菜和甘蓝的原生质体。它们是用纤维素酶和果胶酶处理白菜和甘蓝的体细胞而获得。用聚乙二醇(PEG)或高Ca2＋—高pH试剂诱导A与B融合成杂种细胞C，细胞C再生出细胞壁后需要通过植物组织培养技术才能得到杂种植株“白菜—甘蓝”。
(2)如果该图表示抗新冠病毒的单克隆抗体制备过程中的一个环节，A细胞是小鼠的骨髓瘤细胞，B为已免疫的B淋巴细胞，获得B细胞的过程是：先用灭活的新冠病毒对小鼠进行免疫，一段时间后从该小鼠的脾脏中得到B淋巴细胞，通过该技术获得的单克隆抗体具有纯度高，特异性强，灵敏度高的特点。
(3)如果该图表示“试管动物”技术的体外受精过程，A表示精子，B表示卵子，受精之前需要把B细胞培养至减数第二次分裂中期(MⅡ期)。将C发育至囊胚阶段，对其进行胚胎分割，需将内细胞团均等分割，否则将影响分割后胚胎的恢复和进一步发育，如需做性别鉴定，还需从滋养层细胞取样做DNA分析。
18．研究发现人溶菌酶(hLZ)由130个氨基酸组成，是天然抗生素替代品。科学家培育出转人溶菌酶基因山羊以大规模生产人溶菌酶(从乳汁中提取)，过程如下图所示。其中编号①～⑨表示过程；质粒S中的标记基因Leu控制合成亮氨酸，标记基因GFP控制合成绿色荧光蛋白；四种限制酶的识别序列及切割位点见下表。
(1)根据题中信息分析，图中物质A至少含有________个碱基(不考虑终止密码子)。
(2)物质B是用限制酶________________切割的结果。
(3)下列能成功筛选出含重组质粒T的成纤维细胞的说法是________。
A．培养基中加入亮氨酸，培养一段时间后观察，细胞显示出绿色荧光
B．培养基中加入亮氨酸，培养一段时间后观察，细胞不显示出绿色荧光
C．培养基中不加亮氨酸，培养一段时间后观察，细胞不显示出绿色荧光
D．培养基中不加亮氨酸，培养一段时间后观察，细胞显示出绿色荧光
(4)培育过程中证实“动物体细胞核具有全能性”的是______________(填编号)。
(5)若已知利用酶的分离提纯技术可从乳汁获得人溶菌酶，请使用“酶的分离提纯”和“抑菌实验”等技术设计实验，证明人溶菌酶转基因羊培育成功且产生的人溶菌酶具有活性。请阐述你的实验设计思路：________________________________________________________________________
________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
【答案】(1)780
(2)BamHⅠ、HindⅢ
(3)C
(4)⑤⑥⑦⑧⑨
(5)①从所培育的羊的乳汁中分离提纯人溶菌酶，若得到人溶菌酶，说明人溶菌酶转基因羊培育成功；②取人溶菌酶制成溶液，设置无菌水对照组，进行抑菌实验。若人溶菌酶溶液组具有抑菌效果而无菌水组无抑菌效果，说明产生的人溶菌酶具有活性
【解析】(1)不考虑非编码序列，DNA(或基因)中碱基数∶mRNA上碱基数∶氨基酸个数＝6∶3∶1，故不考虑终止密码子，图中物质A(基因)至少含有130×6＝780个碱基。
(2)据图分析，用限制酶切割物质B形成的黏性末端GATCC…与BamHⅠ的识别序列一致，黏性末端AGCTT…与HindⅢ的识别序列一致，故物质B是用限制酶BamHⅠ、HindⅢ切割的结果。
(3)据第2问的分析可知，用限制酶BamHⅠ、HindⅢ切割质粒S和目的基因，形成的重组质粒T是(Leu＋XbaⅠ＋B)，标记基因Leu控制合成亮氨酸。故培养基中不加亮氨酸，培养一段时间后观察，细胞不显示出绿色荧光的成纤维细胞是含有重组质粒T的细胞，ABD错误，C正确。
(4)将山羊胎儿的成纤维细胞的细胞核移植到去核的卵母细胞中⑤⑥⑦，得到重组细胞，将重组细胞诱导培养形成早期胚胎⑧，再进行胚胎移植到母羊的子宫中孕育⑨，培育出转基因羊，这是动物克隆技术，体现了动物体细胞核具有全能性。
(5)要证明人溶菌酶转基因羊培育成功，需要用酶的分离提纯技术从所培育的羊的乳汁中分离提纯人溶菌酶，若得到人溶菌酶，说明人溶菌酶转基因羊培育成功；要证明产生的人溶菌酶具有活性，需要取人溶菌酶制成溶液，设置无菌水对照组，进行抑菌实验(将等量的病菌加入两组溶液中，观察病菌的生长繁殖情况)。若人溶菌酶溶液组具有抑菌效果而无菌水组无抑菌效果，说明产生的人溶菌酶具有活性。
19．定点诱变技术是近年来生物工程研究中发展迅速的一个领域。通过定点诱变可以在体外改造目的DNA分子，进而研究基因的表达以及蛋白质的结构与功能之间的关系。经典的大引物PCR定点诱变技术成为基于PCR的定点诱变技术中应用最普遍的方法，操作过程如图甲。研究者欲改造某基因并将其导入大肠杆菌的质粒中保存，该质粒含有氨苄青霉素抗性基因、LacZ基因及一些酶切位点，结构如图乙。回答下列问题：
(1)利用大引物PCR进行定点诱变需要进行两轮PCR(PCR1和PCR2)，在PCR1中，至少需要________个循环才能产生相应的大引物模板。在PCR2中，要获得带有诱变点的改良基因，引物应选用大引物两条链中的________(填“①”或“②”)。
(2)为实现质粒和改良基因的高效连接，选用限制酶XmaⅠ而不选用限制酶SmaⅠ的原因是__________________________________________________。为将改良基因构建在质粒上，还需要____________________________等酶。
(3)在构建改良基因表达载体时，有的质粒含有改良基因，有的质粒为空白质粒，将含上述元件的溶液加入大肠杆菌菌液中，适宜温度下培养一段时间后，再将菌液涂布在含__________________的平板上。一段时间后，在培养基上出现白色和蓝色两种菌落，其中白色菌落含有重组质粒，判断的依据是________________________________________________________________________。
【答案】(1)2 ②
(2)SmaⅠ的酶切末端为平末端，无法与改良基因上的黏性末端连接 BglⅡ、DNA连接酶
(3)氨苄青霉素和β半乳糖苷 构建改良基因重组质粒时破坏了LacZ基因，含该质粒的大肠杆菌不能分解β半乳糖苷产生蓝色物质，菌落为白色
【解析】(1)由图可知，大引物的两条链均带有突变位点，进行第一轮循环，得到一个不含突变位点的DNA，一个有一条链含有突变位点的DNA，进行第二轮循环，即可得到三个不含突变位点的DNA和一个两条链均含突变位点的DNA，即大引物；从大引物和目的基因的结合位点分析，要获得带有诱变点的改良基因，引物应选用大引物两条链中的②链。
(2)限制酶XmaⅠ较限制酶SmaⅠ切出的黏性末端切合程度更高，使质粒和改良基因的连接更有效；由酶切位点分析，除使用XmaⅠ外，还需使用BglⅡ切除相应黏性末端与改良基因CTAG一侧进行配对。
(3)因LacZ基因编码的酶能分解β半乳糖苷，产生蓝色物质，所以应加入氨苄青霉素和β半乳糖苷进行检测质粒上是否含有改良基因；白色菌落含有重组质粒，原因是重组质粒的LacZ基因在重组过程中被切断，不能编码相应的酶分解β半乳糖苷。
20．科学家将小鼠多能干细胞的4种基因Oct3/4、Sx2、cMyc和Klf4，同时导入已分化的小鼠成纤维细胞中，结果后者被诱导成为多能干细胞，称为诱导多能干细胞(iPS cell)，此类细胞能分裂并产生皮肤细胞、神经细胞以及可以搏动的心肌细胞等。请分析回答下列问题：
(1)人体干细胞可以分为__________________________两大类。
(2)④过程表示细胞发生了分化，原因是D、E和F细胞中的________________(填2种化合物名称)种类不完全相同。请用箭头和文字简要表明该过程中遗传信息的流动途径：________________________________________________。
(3)动物细胞培养过程中需通入CO2，其作用是____________________________________________________________。
(4)艾弗里在证明DNA是遗传物质的实验中，通过分别向不同实验组加入各类酶来确认“转化因子”的化学本质，利用了自变量控制的____________原理。参考此方法，如果要了解Oct3/4、Sx2、cMyc和Klf4基因在诱导iPS细胞时，每个基因作用的相对大小，该如何进行实验？请你给出实验设计的思路：________________________________________________________________________________________________________________________________。
【答案】(1)胚胎干细胞、成体干细胞
(2)mRNA、蛋白质 DNAeq \(――→,\s\up7(转录))mRNAeq \(――→,\s\up7(翻译))蛋白质
(3)维持培养液的酸碱度
(4)减法 依次去掉1个基因，将其他3个基因转入小鼠成纤维细胞中，通过与转入4个基因的小鼠成纤维细胞的诱导情况进行比较，来推测缺失的基因对诱导iPS细胞的影响，进而判断每个基因作用的相对大小
【解析】(1)按照发育状态，干细胞可以分为成体干细胞和胚胎干细胞。
(2)④表示细胞分化过程，分化是由于基因的选择性表达，导致转录出的mRNA和翻译出的蛋白质不完全相同。分化过程中遗传信息由DNA经转录流向mRNA，再经翻译流向蛋白质。
(3)在动物细胞培养过程中培养液中必须通入O2和CO2，通入CO2的目的是维持培养液的pH。
(4)艾弗里通过加入酶水解某类特定的物质，属于减法原理。若用减法原理验证Oct3/4、Sx2、cMyc和Klf4基因在诱导iPS细胞时，每个基因作用的相对大小，在导入基因时，依次去掉某个特定的基因，只导入其他3个基因到小鼠成纤维细胞中，通过与转入4个基因的小鼠成纤维细胞的诱导情况进行比较，来推测缺失的基因对诱导iPS细胞的影响，进而判断每个基因作用的相对大小。
限制酶
BamHⅠ
Bgl Ⅱ
Hind Ⅲ
XbaⅠ
识别序
列和切
割位点
G↓GATCC
A↓GATCT
A↓AGCTT
T↓CTAGA