高中生物高考专题12 微生物的培养和应用（原卷版）

这是一份高中生物高考专题12 微生物的培养和应用（原卷版），共18页。
2020届高考生物难点及易错题精讲精练
专题12 微生物的培养和应用
【难点精讲】
一、微生物的实验室培养和无菌技术
例题：(2018·全国Ⅱ，37)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：
(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具___________(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_____________________________________________________________________________。
(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_______________________。在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。
(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。
(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是____________________。


【难点突破】
无菌技术
(1)含义：在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。
(2)常用方法

大肠杆菌的纯化培养
(1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
→→→→→
(2)纯化大肠杆菌的方法
①平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
②稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
(3)菌种的保存方法
①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

变式训练：（2018·河北衡水中学七调）下列表格是某公司研发的一种培养大肠杆菌的培养基配方，请结合所学知识，回答下列相关问题。
成分
含量
蛋白胨
10.0 g
乳糖
5.0 g
蔗糖
5.0 g
K2HPO4
2.0 g
显色剂（伊红美蓝）
0.2 g
琼脂
12.0 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL

（1）根据用途划分，该培养基属于　　　　培养基，若要分离能分解尿素的细菌，需对培养基做出的最关键的调整是　　　　　　，若还需鉴定分解尿素的细菌.需做出的调整是　　　　　　。
（2）从培养基的成分上看，大肠杆菌的同化类型为　　　　　　。该培养基能否用于分离筛选出大肠杆菌？为什么？_______________________________。
（3）在实验室培养微生物时，获得纯净培养物的关键是　　　　　　　　，紫外线可对空气进行灭菌的原因是_____________________________________________________。
（4）某同学尝试纯化大肠杆菌，其中一个平板的菌落分布如上图，推测该同学接种时可能的操作失误是__________________________________________。

二、 目标微生物的筛选与鉴定

例题：（2017·全国卷Ⅰ，37）某些土壤细菌可将尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。回答下列问题：
（1）有些细菌能分解尿素，有些细菌则不能，原因是前者能产生　　　　　　　　。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳源，原因是________________________________，但可用葡萄糖作为碳源，进入细菌体内的葡萄糖的主要作用是______________（答出两点即可）。
（2）为了筛选可分解尿素的细菌，在配制培养基时，应选择　　　　（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素＋NH4NO3”）作为氮源，不选择其他两组的原因是
________________________________________________________________。
（3）用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有
_________________________________________________（答出两点即可）。


【难点突破】
分离微生物的原理与措施
（1）原理：自然环境中的微生物是混杂在一起的，因此分离获得纯培养物应首先采用的方法是将单个的微生物与其他微生物分离，再给该微生物提供合适的营养和条件，使其生长成为可见的群体。
（2）常用措施
①接种过程中尽量使微生物分散开来，如平板划线法、稀释涂布平板法。
②运用选择培养基的作用特点，在培养基中添加某种特定的物质，抑制不需要的微生物的生长，促进所需微生物的生长。


选择培养基四种常见制备方法或实例


变式训练：(2018·山东、湖北部分重点中学高考冲刺模拟)从土壤中分离尿素分解菌和纤维素分解菌，具有下列类似的操作过程：

(1)在过程④的选择培养基是________培养基(填“固体”或“液体”)，过程⑧的选择培养基是________培养基(填“固体”或“液体”)。④的具体操作是________________；⑧的具体操作是________________________________________________________________________。
(2)在过程③样品梯度稀释后，一般只将稀释度为104～106倍的菌液分别接种到3个平板培养基上。接种的常用方法为____________________________。
(3)过程⑩采用______________________的鉴别方法较简单。周围出现透明圈但不能100%确定为纤维素分解菌的菌落，原因是_________________________________________。

【真题回顾】
一、单选题
1．（2019·北京高考真题）筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈（如图），实验结果见下表。

菌种
菌落直径：C（mm）
透明圈直径：H（mm）
H/C
细菌Ⅰ
5.1
11.2
2.2
细菌Ⅱ
8.1
13.0
1.6
有关本实验的叙述，错误的是
A．培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质
B．筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布
C．以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外
D．H/C值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异

2．（2019·江苏省高考真题）下列关于产纤维素酶菌分离及运用的叙述，不合理的是
A．筛选培养基中应含有大量的葡萄糖或蔗糖提供生长营养
B．可从富含腐殖质的林下土壤中筛选产纤维素酶菌
C．在分离平板上长出的菌落需进一步确定其产纤维素酶的能力
D．用产纤维素酶菌发酵处理农作物秸秆可提高其饲用价值

3．（2019·江苏省高考真题）下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是
A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌
B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧
C．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染
D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基
二、综合题
4．（2019·全国高考真题）已知一种有机物X（仅含有C、H两种元素）不易降解，会造成环境污染。某小组用三种培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌（目标菌）。
Ⅰ号培养基：在牛肉膏蛋白胨培养基中加入X（5g/L）。
Ⅱ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量），X（15g/L）。
Ⅲ号培养基：氯化钠（5g/L），硝酸铵（3g/L），其他无机盐（适量）。X（45g/L）。
回答下列问题。
（1）在Ⅰ号培养基中，为微生物提供氮源的是___________。Ⅱ、Ⅲ号培养基为微生物提供碳源的有机物是_________。
（2）若将土壤悬浮液种在Ⅱ号液体培养基中，培养一段时间后，不能降解X的细菌比例会_________，其原因是_________。
（3）Ⅱ号培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养目标菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是______________。
（4）假设从Ⅲ号培养基中得到了能高效降解X的细菌，且该菌能将X代谢为丙酮酸，则在有氧条件下，丙酮酸可为该菌的生长提供_________和_________。

5．（2018·全国高考真题）将马铃薯去皮切块，加水煮沸一定时间，过滤得到马铃薯浸出液。在马铃薯浸出液中加入一定量蔗糖和琼脂，用水定容后灭菌，得到M培养基。
回答下列问题：
（1）M培养基若用于真菌的筛选，则培养基中应加入链霉素以抑制___________的生长，加入了链霉素的培养基属于___________培养基。
（2）M培养基中的马铃薯浸出液为微生物生长提供了多种营养物质，营养物质类型除氮源外还有___________（答出两点即可）。氮源进入细菌后，可参与合成的生物大分子有___________（答出两点即可）。
（3）若在M培养基中用淀粉取代蔗糖，接种土壤滤液并培养，平板上长出菌落后可通过加入显色剂筛选出能产生淀粉酶的微生物，加入的显色剂是___________，该方法能筛选出产生淀粉酶微生物的原理___________。
（4）甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定某一土壤样品中微生物的数量，在同一稀释倍数下得到以下结果：
甲同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是110、140和149，取平均值133。
乙同学涂布了3个平板，统计的菌落数分别是27、169和176，取平均值124。
有人认为这两位同学的结果中，乙同学的结果可信度低，其原因是：_____________________。

6．（2018·全国高考真题）回答下列与酵母菌有关的问题：
（1）分离培养酵母菌通常使用____________（填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”）培养基，该培养基应采用________灭菌法灭菌。若将酵母菌划线接种在平板上，培养一段时间后会观察到菌落，菌落的含义是_______________。
（2）酵母菌液体培养时，若通入氧气，可促进______________（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）；若进行厌氧培养，可促进_________（填“菌体快速增殖”、“乙醇产生”或“乳酸产生”）。
（3）制作面包时，为使面包松软通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松软的原因是______________________。

7．（2019·全国高考真题）回答下列与细菌培养相关的问题。
（1）在细菌培养时，培养基中能同时提供碳源、氮源的成分是_____________（填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”）。通常，制备培养基时要根据所培养细菌的不同来调节培养基的pH，其原因是________。硝化细菌在没有碳源的培养基上______（填“能够”或“不能”）生长，原因是____________。
（2）用平板培养细菌时一般需要将平板____________（填“倒置”或“正置”）。
（3）单个细菌在平板上会形成菌落，研究人员通常可根据菌落的形状、大小、颜色等特征来初步区分不同种的微生物，原因是____________。
（4）有些使用后的培养基在丢弃前需要经过____________处理，这种处理可以杀死丢弃物中所有的微生物。

三、实验题
8．（2019·全国高考真题）物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。W在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解W的细菌（目标菌）。回答下列问题。
（1）要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是_________。
（2）在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落（如图所示）。如果要得到目标菌，应该选择________菌落进一步纯化，选择的依据是________。

（3）土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即_______。
（4）该小组将人工合成的一段DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶（酶E）。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W的固体培养基上，A处滴加含有酶E的缓冲液，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加_________，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透明圈，说明___________；若A、B处形成的透明圈直径大小相近，说明___________。

9．（2018·全国高考真题）在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。回答下列问题：
（1）在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具________（填“可以”或“不可以”）放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。
（2）牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是________。
（3）密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能________，在照射前，适量喷洒_________，可强化消毒效果。
（4）水厂供应的自来水通常是经过________（填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”）消毒的。
（5）某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是__________________________。
10．（2018·江苏省高考真题）酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废中醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流程，请回答下列问题:

（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的_________，及时对培养基进行分装，并进行_________灭菌。
（2）取步骤②中不同梯度的稀释液加入标记好的无菌培养皿中，在步骤③中将温度约_________（在25℃、50℃或80℃中选择）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。
（3）挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④进行划线。下列叙述合理的有_________。（多选）
a.为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b.划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c.挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母细胞中甲醇的含量
d.可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株
（4）分离培养酵母菌通常使用_________（填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“麦芽汁琼脂”）培养基，步骤⑤中，为使酵母数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和_________供应。为监测酵母的活细胞密度，将发酵液稀释1 000倍后，经等体积台盼蓝染液染色，用25×16型（1mm×lmm×O.1mm）血细胞计数板计数5个中格中的细胞数，理论上_________色细胞的个数应不少于_________，才能达到每毫升3×109个活细胞的预期密度。




【新题精练】
一、单选题
1．（2020·山东省济南外国语学校高三其他）用纸片扩散法测定某病原菌对各种抗生素敏感性的实验，是在某病原菌均匀分布的平板上，铺设含有不同种抗生素的纸片后进行培养。图示为培养的结果，其中抑菌圈是在纸片周围出现的透明区域。下列分析正确的是

A．在图示固体培养基上可用平板划线法或涂布法接种病原菌
B．未出现抑菌圈可能是病原菌与抗生素接触后发生抗性变异
C．形成的抑菌圈较小的原因可能是微生物对药物较敏感
D．不同抗生素在平板上的扩散速度不同会对实验结果造成影响

2．（2020·山东省高三二模）尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用。下列有关土壤中尿素分解菌的分离和培养的叙述，正确的是（ ）
A．培养基中加入尿素作为唯一碳源，该培养基是鉴别培养基
B．测定土壤中分解尿素的细菌数量和测定土壤中其他细菌的数量可采用相同的稀释度
C．细菌合成的脲酶能将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高
D．利用稀释涂布平板法可以直接完成土壤中分解尿素的细菌的分离计数和纯化鉴定

3．（2020·江苏省高三一模）下图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤。有关叙述正确的是（ ）

A．步骤①操作时，倒好平板后应立即将其倒置，防止冷凝水落在培养基上造成污染
B．步骤②接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管中蘸取菌液
C．步骤③沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后可根据出现的单个菌落计数
D．步骤④将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后所得到的都是X细菌菌落

4．（2020·江苏省高三其他）穿刺接种是用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。下列叙述错误的是（ ）

A．与平板划线法所用的培养基相比，穿刺接种所需的培养基添加的琼脂较少
B．穿刺接种可用于样品中活菌数量统计
C．穿刺接种可用于保藏厌氧菌种或研究微生物的运动
D．穿刺接种可用于鉴定微生物的呼吸作用类型

二、综合题
（2020·上海高三二模）人类历史发展至今，已经历过数次微生物传染病的爆发流行，远者如1347～1353年间席卷欧洲的黑死病（鼠疫），近者如2020新年伊始由新型冠状病毒SARS-CoV2引发的COVID-19。

5．图1所示为鼠疫的传播过程。由图可知，鼠疫的传播途径是 。
A．空气传播 B．接触传播
C．媒介物传播 D．病媒传播
6．鼠疫杆菌的研究中常用到龙胆紫血液琼脂培养基，其配方如表所示：
成分
蛋白胨
牛肉粉
氯化钠
龙胆紫
琼脂
浓度（g/L)
10．0
3．0
5．0
0．01
15．0

注：（1）调节pH至70-7．2使用；（2）灭菌冷却后每1000mL培养基应加入lmL脱纤维兔血。
脱纤维兔血可刺激鼠疫杆菌的生长，而龙胆紫则抑制其他杂菌的生长。关于该培养基的说法，正确的是 。
A．此为液体培养基 B．此为通用培养基
C．调节pH应在灭菌前进行 D．灭菌的条件应设定为100℃，30min
7．在18～22℃条件下鼠疫噬菌体只裂解鼠疫杆菌而不裂解其他菌。某实验室拟用鼠疫噬菌体裂解试验对其分离到的疑似鼠疫杆菌菌株进行鉴定，所得结果如图2所示并由此确定该菌株为鼠疫杆菌。据此推测，鼠疫噬菌体裂解试验的步骤为：
（1）在酒精灯火焰附近使用___________（选填“平板划线法”或“涂布平板法”）接种待鉴定的菌株；
（2）在图2所示平板上___________（选填“A点”或“B点”）位置滴加含鼠疫噬菌体的溶液；
（3）将平板___________（选填“倒置”或“直立”）放置，置于20℃条件下培养24h。
（说明：“倒置”指平板与水平面平行，接种面朝下；“直立”指平板与水平面垂直）
[COVID-19和SARS-CoV2]
2020年3月4日，国家卫健委发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》在原有确诊标准（病毒核酸检测）上新增了血淸SARS-CoV2特异性IgM和IgG抗体作为病原学诊断标准。
8．关于IgM和IgG，下列说法正确的是 。
A．二者均存在于内环境中
B．浆细胞和记忆B细胞均可分泌
C．高尔基体是二者的合成场所
D．二者参与的特异性免疫称细胞免疫
9．如图所示为SARS-CoV2感染后发展示意图，下列说法正确的是 。

A．COVID-19易感人群的血清中检测不到SARS-CoV2特异性IgM和IgG
B．患者感染SARS-CoV2后体内产生IgM和IgG属于先天免疫
C．隐性感染者体内也会产生SARS-COV2特异性IgM和IgG
D．IgG抗体的产生晚于IgM抗体，但在体内的持续存在时间长于IgM抗体
E.IgG抗体阳性可提示近期感染，而IgM抗体阳性可提示感染时间较长的既往感染

10．（2020·湖北省高三二模）随着人们生活质量的提高，餐饮含油脂废水的排放量大量增加，合理处置油脂废水也成为新的课题。已知芽孢杆菌中有多种分解油脂产酸的菌种，科研人员欲采用下列流程筛选出能高效分解油脂的微生物。
菌种取样→分离培养→菌株的筛选→形态特征观察和生理生化反应鉴定回答下列问题：
（1）选取饭店附近排污渠的含油脂废水作为样本，采样约10g，立即装于试管内，此试管使用前需要经过________处理。
（2）样品分离培养前，一般需要将菌液进行________处理，然后吸取0．2ml菌液涂布到营养琼脂培养基平板上，置于37℃恒温培养箱内培养24h，记录菌落总数。将分离出的菌株按照菌落________等表观特征初步分类。
（3）上述步骤筛选出的菌株分别接种到含“花生油”的琼脂培养基平板上，37℃恒温培养箱中培养24h，筛选出油脂降解菌，培养基中“花生油”为菌种繁殖提供________。在该培养基还需要加入中性红染料（中性红为脂溶性染料，遇酸为红色，遇碱为黄色），挑选菌株要挑选显________降解圈的菌株，并且选颜色较________（填“深或浅”）的为宜。
（4）实际操作中，由于油脂易聚集成液滴，常在培养基中加入2-3滴乳化剂使油脂分散均匀，鉴定效果更好，试分析原因________________。

11．（2020·辽宁省高三其他）大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一类细菌，含有2000种以上的蛋白质；大肠杆菌的数量是检测自来水是否受粪便污染的最直接的指标。回答下列问题：
（1）利用凝胶色谱法分离提取到的部分大肠杆菌蛋白质时，等样品完全进入凝胶层后，加入pH为7.0、浓度为20mmol/L的___________ 到适当高度进行洗脱，结果甲蛋白质先洗脱出来，乙蛋白质后洗脱出来，则相对分子质量较大的是_____蛋白质。
（2）通过滤膜法可以测定自来水中大肠杆菌的数目：一定体积的自来水样过滤后，将滤膜放在伊红-美蓝培养基（主要成分包括：蛋白胨、NaCl、琼脂、乳糖、伊红和美蓝水溶液）上培养，大肠杆菌的代谢产物能与伊红-美蓝反应，使菌落呈黑色。根据培养基上菌落的数目，计算出大肠杆菌的数量。
①伊红-美蓝培养基属于____（填“选择”或“鉴别”）培养基，蛋白胨的作用有 _________。
②在微生物培养过程中，常用的灭菌方法有灼烧灭菌、________和高压蒸汽灭菌。配制伊红-美蓝培养基时，乳糖需要单独在压力为70kPa，温度为115℃灭菌20min，原因是__________。接种前通常需要检测固体培养基是否灭菌合格，检测方法是___________。
③滤膜法是根据培养基上菌落的数目来推测样品中的活菌数，其原理是_______________。

12．（2020·江苏省江浦高级中学高三二模）土壤中含有能将难溶性磷酸盐转变成植物可以吸收利用的可溶性磷的优良解磷菌株Q。下图1表示制备固体培养基过程中的某操作，图2是科研人员从土壤中分离出菌株Q的部分过程示意图。

请回答下列问题：
（1）图1所示操作称为__________________，待平板冷凝后__________，以防止__________________。
（2）图2所示接种方法是_______________________。在3个平板上分别接入0．1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上菌落数分别是38、42、40，则1 g土壤中的活菌数约为__________________个。
（3）图是某同学利用不同于图2方法分离菌株Q的示意图。下列对其操作及结果的叙述错误的有_______。

a．操作前用无水乙醇对双手进行消毒处理
b．划线时沾有菌种的接种环不能插入培养基中
c．只有在⑤区域中才能得到所需菌落
d．整个过程需要对接种环进行6次灼烧
（4）固体培养基中难溶性磷酸盐在菌株Q的作用下溶解，会在菌落周围形成透明圈（如下图所示），透明圈直径（D）与菌落直径（d）的比值（D/d）代表微生物溶解难溶磷酸盐的能力大小。下表是初步筛选出的三种优良解磷菌株。
菌株
透明圈直径(D)
菌落直径(d)
M—3—01
18．8
12．3
B3—5—6
20．7
8．0
T—4—01
9．1
6．5


根据实验结果分析，溶解难溶性磷酸盐能力最强的菌株是______________。该菌种分离纯化后，常用______________________法进行长期保存。

13．（2020·四川省高三三模）大肠杆菌是动物肠道中的正常寄居菌。少数种类的大肠杆菌在一定条件下会使人患病，如肠道出血性大肠杆菌可使人腹泻和便血，严重时危及生命。出血性大肠杆菌在添加血液的平板培养基上生长时，红细胞被细菌破坏而褪色，导致菌落周围形成透明圈。下图表示从污染的食物中分离和提纯该细菌的操作流程。请回答问题：

（1）细菌从肉汤培养基获得的营养成分有______________。
（2）据操作流程可知，将细菌接种在血平板上的方法是______________，接种完毕后要灼烧接种工具的目的是为了______________。
（3）研究细菌的致病性，先要获得纯度较高的细菌蛋白，凝胶色谱法是分离蛋白质的常用方法，在装填凝胶柱时不得有气泡产生，因为______________ ；若肠道出血性大肠杆菌的A蛋白质比B蛋白质后洗脱出来，则______________的相对分子质量较大。
（4）纯化后的细菌蛋白可以用_________测定分子量大小，在此过程中加入的SDS掩盖了不同蛋白质间的电荷差异，使得______________完全取决于分子的大小。

14．（2020·江苏省高三其他）镇江香醋是我国传统固态酿造食醋的典型代表，具有醇香浓厚、回味悠长的特点。由于发酵过程的半开放模式，来源于酿造原料、生产过程和操作器械的大量微生物会进入发酵液中，与酿醋功能微生物构成竞争性生长。科研人员研究酿醋主要功能微生物的发酵上清液对杂菌生长的抑制效果，并初步研究了抑菌活性物质的种类和特性，下面为部分研究结果。请分析回答：

（1）镇江香醋酿制的主要功能微生物除乳酸杆菌外，还有________等，整个实验过程中所需培养皿、接种用具均需________处理。
（2）科研人员先将10 mL含2%琼脂的肉汤培养基倾注平板，待凝固后将无菌牛津杯(一种不锈钢管)嵌于培养基中。接着将冷却至50℃，含0．75%琼脂糖的肉汤培养基与大肠杆菌混合后倾注于牛津杯中，以制备含菌培养皿。待培养基冷却后取出牛津杯，每孔注入150 μL待测样品，置于37℃下过夜培养，测定抑菌圈大小，得到如上图1所示结果。
①上述制备含大肠杆菌的培养皿所采用的接种方法是________________(选填稀释涂布平板法或平板划线法)。
②每孔分别注入的是灭菌的超纯水和发酵2天、4天、10天、20天后提取的发酵上清液，得到了图1中0～4的抑菌圈，说明______________________________________。
（3）研究结果发现，发酵微生物上清液如果加热处理，抑菌圈会减小，由此可见，该上清液含有________(选填热敏感/耐热的或热敏感和耐热的)的抑菌活性物质。
（4）实验过程中，如使用不同的蛋白酶处理发酵微生物上清液，得到如上图2所示结果，由此可以推测，部分抑菌物质的化学本质是________，另一部分具有抑菌效果的化学物质主要是________。
（5） 结合上述研究结果，试分析酿醋主要微生物的生长和代谢对环境微生物的这种抑制作用的意义是______________________________________。

15．（2020·江苏省高三其他）水产或家畜养殖污水中含有大量的类固醇，而这类化合物会对人体造成危害，且不易被降解，而丛毛单胞菌是日前用于降解这类有机污染物常用的需氧型菌种。由于抗生素的滥用，污水中含有大量的抗生素残余，这些抗生素会强烈地抑制丛毛单胞菌的作用，从而降低污水处理的效果。结合所学知识，回答下列问题：
（1）从自然界中分离出能够降解类固醇化合物的丛毛单胞菌时，一般会从鱼塘废水或附近土壤进行取样，其原因是___________________________________________________________。
（2）筛选丛毛单胞菌时，通常以________________为唯一碳源的选择培养基进行筛选。制备这一培养基的一般步骤包括计算、称量，溶化、______________、倒平板。
（3）研究人员从含抗生素的污水中分离出了3个抗生素耐药型丛毛单胞菌菌株（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）为了测试其在高浓度抗生素条件下的增殖能力，他们进行了如下实验：
①将等量的三种菌株，分别接种到添加了高浓度抗生素和一定量类固醇物质的细菌液体培养基中，测量计算初始培养液中种群密度的相对值，之后不断通入无菌空气，在适宜的条件下进行培养；
②接种培养开始后100小时内，每20小时取样一次，每次每种菌株重复3次计数，常利用_______________法接种进行活菌数的测定，从初始到实验结束，实验过程中需测定计数的样品次数为____________。在测定菌群密度相对值的同时，每次取样还要测定菌液中固醇类物质的浓度。
③下面的曲线图是根据实验过程中所获得的数据绘制而成。

a．与菌株Ⅱ、Ⅲ相比，实验进行到60小时左右时，造成菌株I种群密度下降的原因有______________（填序号）。
①种内斗争加剧 ②营养物质积累
③营养物质消耗 ④代谢废物消耗
b．从污水处理的角度分析及研究数据来看，菌株____________更适合作为污水中类固醇污染物的处理，理由是___________________________________________________________________________。