第1章 发酵工程（测试卷）-2022-2023学年高二生物单元复习（人教版2019选择性必修3）

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第1章 发酵工程单元测试卷一、选择题：本题共20个小题，每小题3分，共60分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的葡萄酒的制作离不开酵母菌。下列说法错误的是（   ）A.无氧条件下酵母菌能存活但不能大量繁殖B.自然发酵制作葡萄酒时起主要作用的菌是野生型酵母菌C.葡萄酒的颜色是葡萄皮中的色素进入发酵液形成的D.制作过程中随着发酵的进行发酵液中糖含量增加答案：D解析：本题主要考查利用微生物发酵来生产特定的产物以及微生物在其他方面的应用、细胞呼吸和运用发酵加工食品的基本方法选项分析：D 项，随着发酵不断进行葡萄糖不断被消耗，因此发酵液中含糖量是减少的，故 D 项说法错误。A 项，在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，但不能大量繁殖，而在有氧条件下酵母菌可以有氧呼吸大量繁殖，故 A 项说法正确。B 项，在葡萄酒的自然发酵过程中，起主要作用的是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌，故 B 说法项正确。C 项，在发酵过程中，随着酒精度数的提高，红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈现深红色，因此葡萄酒的颜色是葡萄皮中的色素进入发酵液形成的，故 C 项说法正确。2.解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色。下列说法错误的是(     )A.甲菌属于解脂菌B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源 C.将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力答案：B解析：本题主要考查培养基对微生物的选择利用选项分析：B 项，甲、乙两种菌不能直接吸收脂肪，故 B 项说法错误。A 项，甲菌菌落周围呈现深蓝色说明脂肪被解脂菌分泌的脂肪酶分解成脂肪酸，故 A 项说法正确。C 项，将两种菌分别接种在同一平板的不同区域，观察染色情况进行对比，故 C 项说法正确。D 项，可以根据着色的深浅来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，故 D 项说法正确。注意本题要选择的是说法错误的选项，故本题正确答案为 B 3.利用菠萝蜜制作果醋的大致流程为：先在灭菌的果肉匀浆中接种酵母菌，发酵6天后，再接入活化的醋酸杆菌，发酵5天。下列有关叙述错误的是（   )A.乙醇既是醋酸发酵的底物，又可以抑制杂菌繁殖B.酵母菌和醋酸杆菌均以有丝分裂的方式进行增殖C.酵母菌和醋酸杆菌发酵过程中控制通气的情况不同D.接入醋酸杆菌后，应适当升高发酵温度答案：B解析：1、果酒制作的菌种是酵母菌，来源于葡萄皮上野生型酵母菌或者菌种保藏中心，条件是无氧、适宜温度是18~25°℃, pH 值呈酸性。2、参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型，果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。最适温度为30~35°℃。A 、当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，同时乙醇还可以抑制杂菌繁殖， A 正确； B 、酵母菌一般以出芽的方式繁殖，醋酸杆菌以二分裂的方式进行增殖， B 错误；C 、酵母菌发酵过程中先通气使其大量繁殖，再密闭发酵产乙醇；醋酸杆菌为好氧菌，需持续通入无菌氧气， C 正确； D 、酵母菌适宜温度是18~25°℃，醋酸杆菌最适温度为30~35°℃, D 正确。4.下列关于制作泡菜的叙述,错误的是(　　)A.添加陈泡菜水可明显缩短泡菜制作时间B.泡菜盐水浓度过高会导致泡菜咸而不酸C.制作泡菜过程中有机物的种类将减少D.传统泡菜制作利用的是天然乳酸菌发酵答案：C解析：添加陈泡菜水可增加乳酸菌的含量,从而明显缩短泡菜制作时间,A正确;泡菜盐水浓度过高会抑制乳酸菌的繁殖,从而导致泡菜咸而不酸,B正确;制作泡菜的过程中由于乳酸菌的分解作用,使有机物的总量减少,而在乳酸菌发酵过程中会产生很多中间产物,从而使有机物的种类会增加,C错误;传统泡菜制作利用的是天然乳酸菌发酵,D正确5.某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（ ）A．培养基pH需偏碱性 B．泡菜汁需多次稀释后才能划线接种C．需在无氧条件下培养 D．分离得到的微生物均为乳酸菌答案：C解析：泡菜是利用附生在蔬菜表面的植物乳杆菌、短乳杆菌和明串珠菌等发酵制成的。这些微生物一般为厌氧、兼性厌氧或微好氧菌。它们的发酵产物不仅有乳酸，还会有醇、酯等，因而使泡菜具有特殊的风味。【详解】A、因为乳酸菌经过无氧呼吸产生乳酸，故其生活的环境是酸性，培养基pH需偏酸性，A错误；B、平板划线接种时不需要稀释，B错误；C、乳酸菌是厌氧型微生物，所以需在无氧条件下培养，C正确；D、参与泡菜发酵的微生物有乳杆菌、短乳杆菌和明串珠菌等，所以分离得到的微生物除了乳酸菌，还会有其他耐高盐的微生物，D错误6.为避免航天器在执行载人航天任务时出现微生物污染风险，需要对航天器及洁净的组装车间进行环境微生物检测。下列叙述错误的是（    ）A．航天器上存在适应营养物质匮乏等环境的极端微生物B．细菌形成菌膜粘附于航天器设备表面产生生物腐蚀C．在组装车间地面和设备表面采集环境微生物样品D．采用平板划线法等分离培养微生物，观察菌落特征答案：D解析：微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【详解】A、嗜极微生物适应极端环境的特性使它们有在空间暴露环境或地外星球环境中存活的可能，因此航天器上存在适应营养物质匮乏等环境的极端微生物，A正确；B、细菌形成菌膜粘附于航天器设备表面产生生物腐蚀，会腐蚀舱内材料以及设备线路、元器件，B正确；C、对航天器及洁净的组装车间进行环境微生物检测，需要在组装车间地面和设备表面采集环境微生物样品，C正确；D、航天器及洁净的组装车间环境微生物很少，分离培养微生物，观察菌落特征，不需要采用平板划线法，D错误7.航天员叶光富和王亚平在天宫课堂上展示了培养的心肌细胞跳动的视频。下列相关叙述正确的是（    ）A．培养心肌细胞的器具和试剂都要先进行高压蒸汽灭菌B．培养心肌细胞的时候既需要氧气也需要二氧化碳C．心肌细胞在培养容器中通过有丝分裂不断增殖D．心肌细胞在神经细胞发出的神经冲动的支配下跳动答案：B解析：动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。【详解】A、培养心肌细胞的器具要先进行高压蒸汽灭菌，但是试剂并不都需要灭菌，如动物血清不能进行高压蒸汽灭菌，否则会使其中的成分失活，A错误；B、培养心肌细胞的时候既需要氧气（有助于进行有氧呼吸）也需要二氧化碳（有助于维持培养液的pH），B正确；C、在体外培养条件下，细胞会因接触抑制、细胞密度过大、代谢废物积累、营养物质消耗而停止分裂，C错误；D、心肌细胞节律性收缩，受植物性神经的支配，是不随意的，在神经细胞释放的神经递质的支配下跳动，D错误8.下列是某同学分离高产脲酶菌的实验设计，不合理的是（    ）A．选择农田或公园土壤作为样品分离目的菌株B．在选择培养基中需添加尿素作为唯一氮源C．适当稀释样品是为了在平板上形成单菌落D．可分解酚红指示剂使其褪色的菌株是产脲酶菌答案：D解析：为了筛选可分解尿素的细菌，配置的培养基应选择尿素作为唯一氮源，含脲酶的微生物在该培养基上能生长，其它微生物在该培养基上因缺乏氮源而不能生长，可用于分离含脲酶的微生物。【详解】A、农田或公园土壤中含有较多的含脲酶的微生物，A正确；B、为了筛选可分解尿素的细菌，配置的培养基应选择尿素作为唯一氮源，含脲酶的微生物在该培养基上能生长，B正确；C、当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，C正确；D、在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高，酚红指示剂将变红，因此在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，能对分离的菌种做进一步鉴定，D错误9．灭菌、消毒、无菌操作是生物学实验中常见的操作。下列叙述正确的是（　　）A．动、植物细胞DNA的提取必须在无菌条件下进行B．微生物、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染C．为防止蛋白质变性，不能用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌D．可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌答案：D解析：使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程称为灭菌，常用的方法有灼烧灭菌、干热灭菌和湿热灭菌。消毒是指用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体体表或内部的一部分微生物的过程。【详解】A、动、植物细胞DNA的提取不需要在无菌条件下进行，A错误；B、动物细胞培养基中需添加一定量的抗生素以防止污染，保证无菌环境，而微生物的培养不能加入抗生素，B错误；C、一般用湿热灭菌法对牛肉膏蛋白胨培养基进行灭菌，以防止杂菌污染，C错误；D、可用湿热灭菌法对实验中所使用的微量离心管、细胞培养瓶等进行灭菌，以防止杂菌污染，D正确10．β-苯乙醇是赋予白酒特征风味的物质。从某酒厂采集并筛选到一株产β-苯乙醇的酵母菌应用于白酒生产。下列叙述不正确的是（    ）A．所用培养基及接种工具分别采用湿热灭菌和灼烧灭菌B．通过配制培养基、灭菌、分离和培养能获得该酵母菌C．还需进行发酵实验检测该酵母菌产β-苯乙醇的能力D．该酵母菌的应用有利于白酒新产品的开发答案：B解析：选择培养基是根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率。【详解】A、培养基一般选择高压蒸汽灭菌，接种工具一般用灼烧灭菌，A正确；B、分离纯化酵母菌，操作如下：配制培养基→灭菌→接种→培养→挑选菌落，B错误；C、为了筛选的到目的菌，应该进行发酵实验检测该酵母菌产β-苯乙醇的能力，C正确；D、筛选到一株产β-苯乙醇的酵母菌可应用于白酒新产品的开发，D正确11．在制作发酵食品的学生实践中，控制发酵条件至关重要。下列相关叙述正确的有（    ）A．泡菜发酵后期，尽管乳酸菌占优势，但仍有产气菌繁殖，需开盖放气B．制作果酒的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的2/3，制作泡菜的盐水要淹没全部菜料C．葡萄果皮上有酵母菌和醋酸菌，制作好葡萄酒后，可直接通入无菌空气制作葡萄醋D．果酒与果醋发酵时温度宜控制在18-25℃，泡菜发酵时温度宜控制在30-35℃答案：B解析：参与果酒制作的微生物是酵母菌，其新陈代谢类型为异养兼性厌氧型。参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。【详解】A、乳酸菌属于厌氧菌，开盖放气会影响乳酸菌发酵，因此不能开盖放气，A错误；B、制作果酒的葡萄汁不宜超过发酵瓶体积的2/3，是为了发酵初期让酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，同时为了防止发酵过程中发酵液溢出，制作泡菜的盐水要淹没全部菜料，以保证乳酸菌进行无氧呼吸，B正确；C、醋酸菌为需氧菌，且发酵温度高于果酒的发酵温度，因此制作好葡萄酒后，除通入无菌空气，还需要适当提高发酵装置的温度，C错误；D、果酒与果醋发酵时温度宜控制在18-25℃，果醋发酵时温度宜控制在30-35℃，泡菜的制作温度低于30-35℃，D错误12.关于培养基的配制,说法错误的是(　　)A.在配制培养乳酸杆菌的培养基时,需加入维生素B.微生物的适应性强,配制培养基时可以不考虑pHC.虽然各种培养基的具体配方不同,但一般都含有碳源、氮源、水和无机盐D.配制培养基时要注意各种营养物质的浓度和比例答案：C解析：固体培养基中去除凝固剂(如琼脂)即可制成液体培基,C错误13.“每天喝一点，健康多一点”是某品牌枸杞果酒提出的消费理念。下图为生产该枸杞果酒的传统工艺流程，以下有关分析错误的是(　)选料→？→粉碎→灭菌→接种→发酵→？→果酒A．流程中两处“？”依次表示冲洗和过滤B．制作枸杞果酒时，温度应该控制在18～30 ℃C．在酒精发酵旺盛时，若因前期灭菌不合格导致容器中存有醋酸菌，则醋酸菌可将果汁中的糖分解为醋酸D．可在酸性条件下用重铬酸钾溶液来检验是否有酒精产生答案：C解析：流程中两处“？”依次表示冲洗和过滤，A正确；制作枸杞果酒时，温度应该控制在18～30 ℃，B正确；在酒精发酵旺盛时，若因前期灭菌不合格导致容器中存有醋酸菌，醋酸菌也不能将果汁中的糖分解为醋酸，原因是果酒发酵是缺氧条件，而醋酸菌是好氧菌，且温度也不适宜，C错误；可在酸性条件下用重铬酸钾溶液来检验是否有酒精产生，D正确。故选C。14.如图为纯化大肠杆菌的一个操作环节，下列相关叙述中，正确的是(　　)A. 图示接种的方法是平板划线法，也可在液体培养基中进行B．图中每个划线区域均可形成单个菌落C．除第一次划线外，以后的每一次划线的起点均是上一次划线的末端D．该接种方法适用于细菌的计数答案：C解析：该操作步骤的接种方法是平板划线法，在固体培养基中进行，A错误；图中并非每个划线区域均可形成单个菌落，菌液经过连续划线，菌液中的菌体越来越少，最后容易形成单菌落，B错误；除第一次划线外，以后的每一次划线的起点均是上一次划线的末端，C正确；该接种方法不适用于细菌的计数，稀释涂布平板法适用于细菌的计数，D错误。故选C。15.海洋中塑料污染日趋严重，科学家现已分离到高效降解普通塑料的微生物，并且发现了能大量产生“可降解的塑料”的微生物，以上成果有望持续解决海洋塑料污染问题。下列说法错误的是(　　)A．寻找高效降解塑料的微生物，应该到塑料长期污染严重的海域收集样品B．样品中分解塑料的微生物数量过少，需要对采集的微生物进行富集培养C．在筛选分解塑料的微生物时应使用只加入塑料颗粒、琼脂、NaCl和水的培养基D．利用微生物产生的“可降解的塑料”来代替普通塑料，可有望缓解塑料污染答案：C解析：寻找高效降解塑料的微生物，应该到塑料长期污染严重的海域收集样品，A正确； 样品中分解塑料的微生物数量过少，需要对采集的微生物进行富集培养，增大目的菌的浓度，B正确； 塑料颗粒中含有碳源，不含有有机氮源，故在筛选分解塑料的微生物时应使用加入塑料颗粒、琼脂、NaCl、水、氮源的培养基，C错误；利用微生物产生的“可降解的塑料”来代替普通塑料，可有望缓解塑料污染，D正确。16.某兴趣小组试图从土壤中分离分解尿素的细菌，流程图如图所示，关于该过程的说法错误的是(　　)A．该实验配制的培养基中不含牛肉膏和蛋白胨B．图中菌液稀释10倍时所加的无菌水的量都为9 mLC．实验的合理顺序为“计算→称量→溶解→灭菌→倒平板→接种土壤样本→菌落计数”D．三个培养皿中分别形成了54个、46个、50个菌落，则1 g土壤样本中约有分解尿素的细菌5×107个答案：C解析：分离分解尿素的细菌时应该用以尿素为唯一氮源的培养基，而牛肉膏和蛋白胨中含有氮源，因此该实验配制的培养基中不含牛肉膏和蛋白胨，A正确；图中菌液稀释10倍时所加的无菌水的量都为9 mL，B正确；培养基配制的基本过程：计算、称量、溶化、调pH、灭菌、倒平板，因此实验的合理顺序为“计算→称量→溶解→调pH→灭菌→倒平板→接种土壤样本→菌落计数”，C错误；三个培养皿中分别形成了54个、46个、50个菌落，则1 g土壤样本中约有分解尿素的细菌数目为×106(稀释的倍数)＝5×107个，D正确。17.关于细菌分离、培养的叙述中，正确的是(　　)A．不同种类细菌的生长均需要相同碳源B．常用液体培养基分离获得细菌单菌落C．用含尿素的培养基可选择分离出能分解利用尿素的细菌D．含有机磷农药的培养基可分离出降解有机磷农药的细菌答案：D解析：不同种类细菌的生长需要不同碳源，A错误；常用固体或半固体培养基分离获得细菌单菌落，B错误；用只含尿素作为氮源的培养基可选择分离出能分解利用尿素的细菌，C错误；含有机磷农药的培养基可分离出降解有机磷农药的细菌，D正确。18.微生物培养最基本的要求是无菌操作，下列对培养基、培养皿、接种环、双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法的正确顺序依次是(　)①化学消毒　②高压蒸汽灭菌　③干热灭菌　④紫外线灭菌　⑤灼烧灭菌　⑥巴氏消毒法A．②③⑤①④⑥  B．③②⑤④①⑥C．②②⑤④①⑥  D．③③⑤①④⑥答案：A解析：灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外一切微生物的细胞、芽孢和孢子的过程。高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。干热灭菌适用于需要保持干燥的空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌。微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。煮沸灭菌通常不能彻底杀灭一些微生物的孢子和芽孢，一般适用于餐具或不耐高温的食品等的消毒，巴氏消毒法适合对牛奶消毒。所以题中所给的项目所采用的灭菌和消毒方法依次是②③⑤①④⑥。故选A。19.中国的许多传统美食制作过程蕴含了生物发酵技术。下列叙述正确的是（) A.泡菜制作过程中，酵母菌将葡萄糖分解成乳酸 B.馒头制作过程中，酵母菌进行呼吸作用产生 CO 2 C.米酒制作过程中，将容器密封可以促进酵母菌生长 D.酸奶制作过程中，后期低温处理可产生大量乳酸杆菌答案：B解析： A 、泡菜制作过程中，主要是乳酸菌将葡萄糖分解形成乳酸， A 错误； B 、做馒头或面包时，经常要用到酵母菌，酵母菌可以分解面粉中的葡萄糖，产生二氧化碳和酒精，二氧化碳是气体，遇热膨胀而形成小孔，使得馒头或面包喧软多孔， B 正确； C 、酵母菌在有氧条件下可以大量繁殖，在密封也就是无氧条件下产生酒精， C 错误； D 、酸奶制作过程中，后期低温处理时大部分乳酸杆菌已死亡，不会大量繁殖， D 错误。20.纤维素分解菌是一种新型饲料添加剂，能够提高粗纤维饲料的转化率，为养殖业提供更多的饲料来源。研究人员从反刍动物粪便中分离筛选纤维素分解菌，步骤如下：关于上述实验的分析正确的是（    ）A．可采用干热灭菌法对培养基A、B进行灭菌B．培养基B中应加入纤维素作为唯一氮源C．通过③④可实现将聚集的微生物分散成单个细胞D．丙中透明圈越小说明细菌分解纤维素能力越强答案：C【分析】土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。【详解】A、对培养基进行灭菌的方法是高压蒸汽灭菌，A错误；B、纤维素的元素组成是C、H、O，培养基B中应加入纤维素作为唯一碳源，不能作为氮源，B错误；C、步骤③对培养液进行梯度稀释的目的是 将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，步骤④将稀释样液接种得到培养基进行培养，通过③④可实现将聚集的微生物分散成单个细胞，C正确；D、根据培养基丙中菌落周围形成的透明圈的大小来判断细菌分解纤维素的能力，透明圈越大，细菌分解纤维素的能力就越强，D错误二、填空题（本大题共4小题，共40分）21.（12分，每空1分）番茄灰霉病菌严重影响番茄生产，枯草芽孢杆菌可以产生对多种病原菌具有抑制作用的蛋白质。为探究枯草芽孢杆菌能否用于番茄灰霉病的生物防治，研究者设计了相关实验。回答下列问题：(1)检测枯草芽孢杆菌对番茄灰霉病菌的抑制作用时，取适量________菌液涂布于固体培养基上，将无菌滤纸片（直径5mm）在________菌液中浸泡后覆盖于固体培养基中心，数秒后取出滤纸片，培养皿倒置培养后测量________大小以判定抑菌效果。(2)枯草芽孢杆菌为好氧微生物，液体培养时应采用________（填“静置”或“摇床震荡”）培养。培养过程中抽样检测活菌数量时，应采用________（填“稀释涂布平板法”或“显微镜直接计数法”），其原因是__________________（2分）(3)电泳分离蛋白质混合样品的原理是_____________________________（2分）利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定枯草芽孢杆菌的抗菌蛋白分子量时，SDS的作用是___________________________________（2分）(4)枯草芽孢杆菌长期保藏时，常以其________作为保藏对象答案：(1)     番茄灰霉病菌     枯草芽孢杆菌     抑菌圈(2)     摇床震荡     稀释涂布平板法     用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落都来自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽孢杆菌也计算在内（2分）(3)     利用待分离样品中各种分子带电性质的差异及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离（2分）     SDS带有大量的负电荷，且能使蛋白质变性成为肽链，使蛋白质的迁移速率只与蛋白质的相对分子质量有关，而与所带电荷性质无关（2分）(4)菌液解析：（1）分析题意，要检测枯草芽孢杆菌对番茄灰霉病菌的抑制作用，先把适量的番茄灰霉病菌菌液涂布于固体培养基上，将无菌滤纸片在枯草芽孢杆菌菌液中浸泡后覆盖于固体培养基中心，若对番茄灰霉病菌有抑制作用，被覆盖的位置的番茄灰霉病菌就会被杀死，培养皿倒置培养后会出现抑菌圈，测量抑菌圈大小以判定抑菌效果强弱。（2）枯草芽孢杆菌为好氧微生物，采用摇床震荡培养可增大培养液的溶氧量，有利于枯草芽孢杆菌的生长繁殖。培养过程中要抽样检测活菌数量，应该采用稀释涂布平板法，用稀释涂布平板法在培养基上看到的每一个菌落都来自一个活细胞，而显微镜直接计数法会将死亡的枯草芽孢杆菌也计算在内。（3）电泳分离蛋白质混合样品的原理是：利用待分离样品中各种分子带电性质的差异及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。SDS带有大量的负电荷，且能使蛋白质变性成为肽链，使蛋白质的迁移速率只与蛋白质的相对分子质量有关，而与所带电荷性质无关。（4）长期保藏枯草芽孢杆菌，应该将培养的菌液转移到灭菌好的甘油瓶中，与甘油充分混合，放在-20℃的冷冻箱中保存22.（7分，每空1分）回答与产淀粉酶的枯草杆菌育种有关的问题：(1）为快速分离产淀粉酶的枯草杆菌，可将土样用_________________制成悬液，再将含有悬液的三角瓶置于80℃的________________中保温一段时间，其目的是___________________________(2）为提高筛选效率，可将菌种的__________________过程与菌种的产酶性能测定一起进行：将上述悬液稀释后涂布于淀粉为唯一碳源的固体培养基上培养，采用_______________________显色方法，根据透明圈与菌落直径比值的大小，可粗略估计出菌株是否产酶及产酶性能。(3）为了获得高产淀粉酶的枯草杆菌，可利用现有菌种，通过____________后再筛选获得，或利用____________、原生质体融合等技术获得答案：(1）无菌水     水浴          杀死不耐热微生物(2）分离    KI -I2(3）人工诱变       转基因      解析：4．解析：第（1）问，产生淀粉酶的枯草杆菌的最适温度为50-75°℃，要快速分离枯草杆菌，先将土样加入无菌水制成枯草杆菌悬液，再将含有悬液的三角瓶置于80℃的水浴中保温一段时间，杀死不耐热的微生物。第（2）问，将菌种的分离过程与菌种的产酶性能测定同时进行可以提高筛选效率。用稀释涂布平板法可以分离枯草杆菌，在培养基中添加淀粉作为唯一碳源，并且在培养基中添加 KI - I ,，能合成淀粉酶的枯草杆菌因为能利用淀粉而存活，同时淀粉由于被分解在菌落周围会出现透明圈，比较透明圈与菌落直径比值的大小，比值大的说明该菌株产酶性能较高。第（3）问，要获得高产淀粉酶的枯草杆菌，可利用诱变育种，由于变异的不定向性，人工诱变后还需要再筛选才能获得高产淀粉酶的枯草杆菌。也可以利用转基因、原生质体融合等技术，从其他生物那里获得与高产淀粉酶有关的基因，进而获得相应的高产性状。第（4）问，野生的农杆菌没有抗性基因，用于转化植物细胞的农杆菌一般在其 T - DNA 中插入一种抗生素抗性基因。抗生素的作用是抑制细菌生长，农杆菌属于细菌，在其侵染植物过程中，可以用另一种抗生素抑制农杆菌的生长，从而达到在后续实验中消除转化植物细胞中农杆菌的作用。具有 T - DNA 中抗性基因的细胞能在含有相应抗生素的培养基上存活。当培养基中抗生素浓度过低时，很多没有抗性的细胞也存活下来，因此出现假阳性，故在转基因前要对受体进行抗生素的敏感性检测。第（5）问，转基因植株要经过植物组织培育，要提高培育转基因植株的成功率，应该选再生能力和遗传稳定性较强的受体，这种受体全能性较高，能保持生物的性状。对培养的受体细胞遗传稳定性的早期检测，可通过观察细胞核形态是否改变进行判断，也可以直接在光学显微镜下观察分裂期染色体的形态特征和数量，分析染色体组型是否改变。第（6）问，植物转基因受体全能性表达程度高低除了与受体基因型、培养环境、继代次数有关外，还与培养时间长短和受体的取材有关，受精卵是没分化的细胞，分裂和分化能力都很强，故受体为受精卵时全能性表达能力最高。23.(12分，每空2分）研究深海独特的生态环境对于开发海洋资源具有重要意义。近期在"科学号"考察船对中国南海科考中，中国科学家采集了某海域1146米深海冷泉附近沉积物样品，分离、鉴定得到新的微生物菌株并进一步研究了其生物学特性。   回答下列问题：(1）研究者先制备富集培养基，然后采用______________________法灭菌，冷却后再接入沉积物样品，28℃厌氧培养一段时间后，获得了含拟杆菌的混合培养物，为了获得纯种培养，除了稀释涂布平板法，还可采用_____________________法。据图分析，拟杆菌新菌株在以_____________________为碳源时生长状况最好(2）研究发现，将采集的样品置于各种培养基中培养，仍有很多微生物不能被分离筛选出来，推测其原因可能是___________________________（答一点即可）(3）藻类细胞解体后的难降解多糖物质，通常会聚集形成碎屑沉降到深海底部。从生态系统组成成分的角度考虑，拟杆菌对深海生态系统碳循环的作用可能是__________________________________(4）深海冷泉环境特殊，推测此环境下生存的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，除具有酶的一般共性外，其特性可能还有___________________________答案：(1）高压蒸汽灭菌       平板划线       纤维素(2）某些微生物只有利用深海冷泉中的特有物质才能生存（或需要在深海冷泉的特定环境中才能存活）(3）拟杆菌作为分解者，将沉降到深海底部的难降解多糖物质分解为无机物，归还到无机环境中，有利于碳循环的顺利进行(4）耐低温解析：(1）培养基通常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。可以采用稀释涂布平板法或平板划线法，将单个微生物分散在固体培养基上，经过培养得到单菌落，从而获得纯净培养物。分析图可知，在以纤维素为碳源的培养基中，细胞数量最多，可推知拟杆菌新菌株在以纤维素为碳源时生长状况最好。(2）深海冷泉中可能存在某些微生物，只有利用冷泉中的特有物质才能生存（或需要在深海冷泉的特定环境中才能存活），故将采集的样品置于各种培养基中培养，仍可能有很多微生物不能被分离筛选出来。(3）拟杆菌为异养生物，作为该生态系统的分解者，能将沉降到深海底部的难降解多糖物质分解为无机物，归还到无机环境中，有利于碳循环的顺利进行。(4）深海冷泉温度较低，故生活在其中的拟杆菌所分泌的各种多糖降解酶，应具有耐低温的特性，才能高效降解多糖，保证拟杆菌的正常生命活动所需。24.（9分，每空1分）磷是植物生长的重要元素，施入土中的大都数与Ca2+等离子结合形成难溶性磷酸盐。科研人员从贡柑果园土中选出可以难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程见下图，请回答(1)步骤①从当地土壤表层取样：步骤②需充分震荡20min，主要目的是_________步骤③将土壤悬浮液稀释了_____倍。(2)步骤④中的培养基的成分是：葡萄糖、（NH4）2SO4、NaCl、MgSO4·7H2O、KCl、FeSO4·7H2O、MnSO4、Ca3（PO4）2、琼脂粉等。其中碳源的是___________。步骤④用涂布器涂布后，待菌液被__________后，将平板倒置。(3)步骤④中待菌落长好后挑出溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较_________的菌落。继续进行步骤⑤的目的是____________(4)初步筛选出一株解磷菌株W3，为研究不同接种量对菌株W3解磷能力的影响。研究人员将不同量的W3接种到特定的培养基中，并在28℃、200r·min-1摇床培养7d后取上清液。测定溶液中可溶性磷含量。得到如图所示曲线。①结果表明接种量为_____时解磷效果最好，解磷能力越强pH越__________。②接种量过大解磷能力反而下降的原因可能是__________。答案：(1) 使土壤中的微生物充分释放到水中     1000(2) 葡萄糖     培养基吸收(3) 大     获得单个菌落(4)3mg/L     小     降磷菌接种量过大，导致降磷菌种群密度过大，种内斗争加剧，不利于降磷菌的繁殖，降解磷能力下降解析:1、微生物常见的接种的方法：(1）平板划线法：将已经溶化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养，划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。(2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。2、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白陈和牛肉膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质；在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对 pH ．特殊营养物种和氧气。(1)用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，用火焰灼烧对接种环进行灭菌，通过紫外线对空气进行灭（除）菌，用酒精引燃对涂布器进行灭菌，故选 ACD 。(2)步骤①从当地土壤表层取样：步骤②需充分震荡20min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到水中，由图观察可知，步骤③中的稀释梯度分别为10、100、1000倍，实验中取样进行培养的是稀释倍数为1000。(3)在该培养基碳源是葡萄糖，步骤①用涂布器涂布后，待菌液被培养基吸收后，将平板倒置。(4)步骤①中待菌落长好后挑出溶磷圈直径（ D ）与菌落直径（ d ）比值较大的菌落。继续进行步骤⑤的目的是将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面，可以分离得到单菌落。结果表明接种量为3mg/ L 时解磷效果最好，解磷能力越强 pH 越小。接种量过大解磷能力反而下降的原因可能是：降磷菌接种量过大，导致降磷菌种群密度过大，种内斗争加剧，不利于降磷菌的繁殖，降解磷能力下降。