2023年高考真题和模拟题生物分项汇编（全国通用）专题17 发酵工程（原卷版）

这是一份2023年高考真题和模拟题生物分项汇编（全国通用）专题17 发酵工程（原卷版），共12页。试卷主要包含了单选题，多选题，选择题组，综合题等内容，欢迎下载使用。

专题17 发酵工程

一、单选题
1．（2023·山东·高考真题）平板接种常用在微生物培养中。下列说法正确的是（    ）
A．不含氮源的平板不能用于微生物培养
B．平板涂布时涂布器使用前必须进行消毒
C．接种后未长出菌落的培养基可以直接丢弃
D．利用以尿素为唯一氮源的平板能分离出合成脲酶的微生物
2．（2023·山东·高考真题）以下是以泡菜坛为容器制作泡菜时的4个处理：①沸盐水冷却后再倒入坛中；②盐水需要浸没全部菜料；③盖好坛盖后，向坛盖边沿的水槽中注满水；④检测泡菜中亚硝酸盐的含量。下列说法正确的是（    ）
A．①主要是为了防止菜料表面的醋酸杆菌被杀死
B．②的主要目的是用盐水杀死菜料表面的杂菌
C．③是为了使气体只能从泡菜坛排出而不能进入
D．④可检测到完整发酵过程中亚硝酸盐含量逐渐降低
3．（2023·广东·统考高考真题）研究者拟从堆肥中取样并筛选能高效降解羽毛、蹄角等废弃物中角蛋白的嗜热菌。根据堆肥温度变化曲线（如图）和选择培养基筛选原理来判断，下列最可能筛选到目标菌的条件组合是（    ）

A．a点时取样、尿素氮源培养基
B．b点时取样、角蛋白氮源培养基
C．b点时取样、蛋白胨氮源培养基
D．c点时取样、角蛋白氮源培养基
4．（2023·浙江·统考高考真题）某同学想从泡菜汁中筛选耐高盐乳酸菌，进行了如下实验：取泡菜汁样品，划线接种于一定NaCl浓度梯度的培养基，经培养得到了单菌落。下列叙述正确的是（    ）
A．培养基pH需偏碱性
B．泡菜汁需多次稀释后才能划线接种
C．需在无氧条件下培养
D．分离得到的微生物均为乳酸菌
二、多选题
5．（2023·山东·高考真题）果酒的家庭制作与啤酒的工业化生产相比，共同点有（    ）
A．都利用了酵母菌无氧呼吸产生酒精的原理
B．都需要一定的有氧环境供发酵菌种繁殖
C．发酵前都需要对原料进行灭菌
D．发酵结束后都必须进行消毒以延长保存期
三、选择题组
（2023·浙江·统考高考真题）阅读下列材料，完成下面小题。
小曲白酒清香纯正，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成。小曲中所含的微生物主要有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等细菌。酿酒的原理主要是酵母菌在无氧条件下利用葡萄糖发酵产生酒精。传统酿造工艺流程如图所示。

6．小曲白酒的酿造过程中，酵母菌进行了有氧呼吸和无氧呼吸。关于酵母菌的呼吸作用，下列叙述正确的是（　　）
A．有氧呼吸产生的[H]与O2结合，无氧呼吸产生的[H]不与O2结合
B．有氧呼吸在线粒体中进行，无氧呼吸在细胞质基质中进行
C．有氧呼吸有热能的释放，无氧呼吸没有热能的释放
D．有氧呼吸需要酶催化，无氧呼吸不需要酶催化
7．关于小曲白酒的酿造过程，下列叙述错误的是（　　）
A．糖化主要是利用霉菌将淀粉水解为葡萄糖
B．发酵液样品的蒸馏产物有无酒精，可用酸性重铬酸钾溶液检测
C．若酿造过程中酒变酸，则发酵坛密封不严
D．蒸熟并摊晾的原料加入糟醅，立即密封可高效进行酒精发酵
四、综合题
8．（2023·北京·统考高考真题）自然界中不同微生物之间存在着复杂的相互作用。有些细菌具有溶菌特性，能够破坏其他细菌的结构使细胞内容物释出。科学家试图从某湖泊水样中分离出有溶菌特性的细菌。
(1)用于分离细菌的固体培养基包含水、葡萄糖、蛋白胨和琼脂等成分，其中蛋白胨主要为细菌提供___________和维生素等。
(2)A菌通常被用做溶菌对象。研究者将含有一定浓度A菌的少量培养基倾倒在固体培养平板上，凝固形成薄层。培养一段时间后，薄层变浑浊（如图），表明______________________。

(3)为分离出具有溶菌作用的细菌，需要合适的菌落密度，因此应将含菌量较高的湖泊水样___________后，依次分别涂布于不同的浑浊薄层上。培养一段时间后，能溶解A菌的菌落周围会出现___________。采用这种方法，研究者分离、培养并鉴定出P菌。
(4)为探究P菌溶解破坏A菌的方式，请提出一个假设，该假设能用以下材料和设备加以验证（主要实验材料和设备：P菌、A菌、培养基、圆形滤纸小片、离心机和细菌培养箱）___________。
9．（2023·全国·统考高考真题）某研究小组设计了一个利用作物秸秆生产燃料乙醇的小型实验。其主要步骤是：先将粉碎的作物秸秆堆放在底部有小孔的托盘中，喷水浸润、接种菌T，培养一段时间后，再用清水淋洗秸秆堆（清水淋洗时菌T不会流失），在装有淋洗液的瓶中接种酵母菌，进行乙醇发酵（酒精发酵）。实验流程如图所示。

回答下列问题。
(1)在粉碎的秸秆中接种菌T，培养一段时间后发现菌T能够将秸秆中的纤维素大量分解，其原因是_______。
(2)采用液体培养基培养酵母菌，可以用淋洗液为原料制备培养基，培养基中还需要加入氮源等营养成分，氮源的主要作用是_______（答出1点即可）。通常，可采用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。在使用该方法时，为了达到良好的灭菌效果，需要注意的事项有_______（答出2点即可）。
(3)将酵母菌接种到灭菌后的培养基中，拧紧瓶盖，置于适宜温度下培养、发酵。拧紧瓶盖的主要目的是_______。但是在酵母菌发酵过程中，还需适时拧松瓶盖，原因是_______。发酵液中的乙醇可用_______溶液检测。
(4)本实验收集的淋洗液中的_______可以作为酵母菌生产乙醇的原料。与以粮食为原料发酵生产乙醇相比，本实验中乙醇生产方式的优点是_______。
10．（2023·湖南·统考高考真题）某些植物根际促生菌具有生物固氮、分解淀粉和抑制病原菌等作用。回答下列问题：
(1)若从植物根际土壤中筛选分解淀粉的固氮细菌，培养基的主要营养物质包括水和____ 。
(2)现从植物根际土壤中筛选出一株解淀粉芽孢杆菌H，其产生的抗菌肽抑菌效果见表。据表推测该抗菌肽对_________________的抑制效果较好，若要确定其有抑菌效果的最低浓度，需在__________μg·mL-1浓度区间进一步实验。
测试菌
抗菌肽浓度/（µg•mL-1）
55.20
27.60
13.80
6.90
3.45
1.73
0.86
金黄色葡萄球菌
-
-
-
-
-
+
+
枯草芽孢杆菌
-
-
-
-
-
+
+
禾谷镰孢菌
-
+
+
+
+
+
+
假丝酵母
-
+
+
+
+
+
+
注：“+”表示长菌，“-”表示未长菌。
(3)研究人员利用解淀粉芽孢杆菌H的淀粉酶编码基因M构建高效表达质粒载体，转入大肠杆菌成功构建基因工程菌A。在利用A菌株发酵生产淀粉酶M过程中，传代多次后，生产条件未变，但某子代菌株不再产生淀粉酶M。分析可能的原因是______（答出两点即可）。
(4)研究人员通过肺上皮干细胞诱导生成肺类器官，可自组装或与成熟细胞组装成肺类装配体，如图所示。肺类装配体培养需要满足适宜的营养、温度、渗透压、pH以及_____（答出两点）等基本条件。肺类装配体形成过程中是否运用了动物细胞融合技术___（填“是”或“否”）。

(5)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是一种耐药菌，严重危害人类健康。科研人员拟用MRSA感染肺类装配体建立感染模型，来探究解淀粉芽孢杆菌H抗菌肽是否对MRSA引起的肺炎有治疗潜力。以下实验材料中必备的是______。
①金黄色葡萄球菌感染的肺类装配体   ②MRSA感染的肺类装配体   ③解淀粉芽孢杆菌H抗菌肽   ④生理盐水   ⑤青霉素（抗金黄色葡萄球菌的药物）   ⑥万古霉素（抗MRSA的药物）
11．（2023·全国·统考高考真题）为了研究蛋白质的结构与功能，常需要从生物材料中分离纯化蛋白质。某同学用凝胶色谱法从某种生物材料中分离纯化得到了甲、乙、丙3种蛋白质，并对纯化得到的3种蛋白质进行SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳，结果如图所示（“+”“-”分别代表电泳槽的阳极和阴极）。已知甲的相对分子质量是乙的2倍，且甲、乙均由一条肽链组成。回答下列问题。

(1)图中甲、乙、丙在进行SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳时，迁移的方向是_____（填“从上向下”或“从下向上”）。
(2)图中丙在凝胶电泳时出现2个条带，其原因是_____。
(3)凝胶色谱法可以根据蛋白质_____的差异来分离蛋白质。据图判断，甲、乙、丙3种蛋白质中最先从凝胶色谱柱中洗脱出来的蛋白质是_____，最后从凝胶色谱柱中洗脱出来的蛋白质是_____。
(4)假设甲、乙、丙为3种酶，为了减少保存过程中酶活性的损失，应在_____（答出1点即可）条件下保存。


一、单选题
1．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）下列关于生物技术应用叙述正确的是（    ）
A．酶的固定化应用中，物理吸附法对酶活性的影响比化学结合法小
B．泡菜制作发酵中期，亚硝酸盐含量随着乳酸菌的大量繁殖而显著增加
C．果酒制作过程中发酵液pH不变，果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低
D．固体培养基配置需依次经过计算、称量、溶化、倒平板、灭菌等步骤
2．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）芳香油的提取方法主要分为三种：蒸馏法、萃取法和压榨法。以下关于提取方法的叙述中，错误的是（    ）
A．水蒸气蒸馏法适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油
B．压榨法适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料中的芳香油的提取
C．萃取剂的沸点一般较高，通常要高于萃取物的沸点
D．提取玫瑰精油和橘皮精油的实验流程中共有的操作是过滤
3．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）我国制作泡菜历史悠久。《中馈录》中记载：“泡盐菜法，定要覆水坛。此坛有一外沿如暖帽式，四周内可盛水；坛口覆一盖， 浸于水中，…… 则所泡之菜不得坏矣。泡菜之水， 用花椒和盐煮沸，加烧酒少许。……。如有霉花， 加烧酒少许。坛沿外水须隔日一换，勿令其干。”下列说法正确的是（    ）
A．“泡菜之水，用花椒和盐煮沸”的目的是彻底灭菌
B．“霉花”主要由酵母菌繁殖形成，酵母菌往往来自蔬菜
C．“坛沿外水须隔日一换，勿令其干”以保证坛内适宜湿度
D．对泡菜汁中的乳酸菌计数，可用稀释涂布平板法和平板划线法
4．（2023·河北·河北巨鹿中学校联考三模）泡菜酸脆爽口，是人们喜爱的佐餐佳品。下列有关制作泡菜的叙述正确的是（    ）
A．泡菜“咸而不酸”可能是加盐过多，抑制了乳酸菌发酵过程
B．乳酸菌是厌氧细菌，因此泡菜坛需要装满以保证无氧环境
C．腌制泡菜时，可以通过加入抗生素来抑制杂菌的生长
D．泡菜制作过程中“冒泡”是因为乳酸菌发酵产生了CO2
5．（2023·广东肇庆·校考模拟预测）桑葚酒是以桑葚子为主要原料，用浸泡原酒和发酵原酒酿制而成的一种低度果酒。下列关于桑葚酒的传统制作工艺的叙述，错误的是（　　）
A．用桑葚酒制作桑葚醋，需要改变氧气条件
B．酿好的桑葚酒需要密封储存
C．将桑葚子打碎成浆有利于发酵的进行
D．将桑葚子冲洗干净，并进行高压蒸汽灭菌
6．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）下列有关固定化酶和固定化细胞的叙述，正确的是（    ）
A．反应底物和产物的浓度对固定化酶的催化作用没有影响
B．刚熔化的海藻酸钠溶液应迅速与已活化的酵母菌混合
C．海藻酸钠凝胶珠用蒸馏水冲洗的目的是洗去CaCl2
D．固定化酶能反复使用，但固定化细胞不能
7．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）下列有关固定化酶和固定化细胞的叙述，正确的是（　　）
A．固定化酶的活性受温度、pH、表面活性剂和重金属离子等影响
B．固定化酶可以反复使用，反应产物对固定化酶的活性无影响
C．固定化酶和固定化细胞，发挥作用的酶都在细胞外起作用
D．固定化细胞含有多种酶，可以催化各种反应底物的一系列反应
8．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）以下关于血红蛋白提取和分离的过程及原理叙述正确的是（    ）
A．红细胞洗涤过程中要加入5倍体积的蒸馏水，重复洗涤3次
B．将血红蛋白溶液放在质量分数为0.9%的NaCl溶液中透析12小时
C．粗分离时透析的目的是去除相对分子质量较大的杂质
D．蛋白质通过凝胶柱时，相对分子质量较大的移动速度快
9．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）下列关于物质提取、纯化原理的叙述，不正确的是（    ）
A．凝胶色谱法分离果胶酶的原理是蛋白质分子的相对分子质量不同，在色谱柱中的移动速度不同
B．使用透析法可以去除样品中相对分子质量较大的杂质
C．电泳法是利用样品中各种分子带电性质的差异以及样品分子大小、形状的不同，使带电分子产生的迁移速度不同而实现样品中各种分子的分离
D．离心法分离蛋白质的依据是密度不同的物质离心时沉降速度不同
10．（2023·山东济宁·统考三模）黄酒是世界上最古老的酒类之一，传统淋饭法生产绍兴黄酒的工艺如图所示。加酒药的10～12h为前发酵，随后进行6d左右的主发酵，然后将醪液分装到坛中进行30d左右的后发酵。下列叙述错误的是（    ）

A．酒药中只含有酵母菌一种微生物
B．前发酵过程中缸内含氧量降低而酵母菌数量增加
C．主发酵阶段开耙降低温度可以防止温度过高影响发酵
D．通过煎酒杀死微生物并破坏残存酶的活力可提高黄酒的稳定性
11．（2023·湖北武汉·武汉市新洲区第一中学校考模拟预测）为探究不同糖源（蜂蜜、黄冰糖）对蓝莓酒发酵产物的影响，某研究小组研发出如下的蓝莓酒发酵工艺，其中“主发酵”时酵母菌会繁殖、大部分糖的分解和代谢物会生成，“后发酵”是在低温、密闭的环境下蓝莓酒会成熟。下列叙述正确的是（    ）

A．菌种甲在产生CO2的同时会产生酒精
B．切片后需对发酵液进行消毒然后再分组
C．倒罐均需保留空间以促进菌种有氧呼吸
D．主发酵要控制无氧，后发酵要控制有氧
12．（2023·广东深圳·红岭中学校考模拟预测）青霉素是常用的抗生素，是青霉菌发酵的产物。目前已实现青霉素的工业化生产，关于该生产过程，下列说法错误的是（    ）
A．青霉素具有杀菌作用，因此发酵罐不需严格灭菌
B．选育出的高产菌株经扩大培养后才可接种到发酵罐中
C．发酵过程中要严格控制温度、pH、溶解氧、罐压、营养物质
D．发酵结束后可采用过滤、沉淀等方法将菌体分离和干燥
13．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）下列说法不正确的是（    ）
A．果胶酶包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等
B．可用单位体积的果泥在单位时间内的出汁量作为果胶酶活性的检测指标
C．探究果胶酶的最适温度时，需将底物和酶分别在同等温度下处理后再混合
D．影响果胶酶活性的因素有pH、温度、酶的抑制剂以及酶和底物的浓度
14．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，以防止杂菌污染，请分析下列操作，错误的是（    ）
①煮沸消毒可以杀死微生物的细胞和部分芽孢
②接种操作要在酒精灯火焰附近进行
③培养基要进行高压蒸汽灭菌
④加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌
⑤紫外线消毒可以对接种室、超净工作台和操作人员进行消毒，以杀死物体表面或者空气中的微生物
⑥在接种过程中，试管口、瓶口等易被污染的部位，也可以通过火焰灼烧来灭菌
A．①② B．⑤⑥ C．③⑤ D．④⑤
二、综合题
15．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）乳链菌肽是由乳酸乳球菌分泌的一种由34个氨基酸组成的小肽，对许多革兰氏阳性菌，尤其是对引起食品腐败的细菌具有强烈的抑制作用，是一种高效无毒的天然食品防腐剂。研究人员从新鲜牛奶中获得多株产乳链菌肽的菌株，进行了如下实验：
(1)筛选菌株：将含有杀菌物质的滤纸片放到滴有细菌培养液的固体培养基上，经过培养，杀菌物质杀死细菌后会在滤纸片周围形成抑菌圈。将革兰氏阳性菌涂布于平板上，将灭菌的大小相同的滤纸片均匀地摆放在培养基表面，在其上分别滴加等量备选菌株培养液的上清液，对比观察______，选取抑制作用最强的菌株。
(2)纯化菌株：

A过程配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，在提供无机盐的同时，维持______。D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是______。E过程需将纯化的菌株用______（用具）接种于______培养基中，在适宜温度下培养，长成菌落后放入____℃保存。
(3)为了解乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式是抑制细菌生长、溶菌性杀死细菌（细胞破裂）还是非溶菌性杀死细菌，科研人员活将乳链菌肽加入革兰氏阳性菌菌液中，随着发酵时间的延长，检测革兰氏阳性菌的活菌数、除去菌体的上清液中核酸含量，实验结果如下图所示。

对革兰氏阳性菌活菌的计数方法为______。以上实验表明乳链菌肽对革兰氏阳性菌的作用方式为_______________，理由是：______________________。
16．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）泡菜是一种独特且具有悠久历史的发酵蔬菜制品，回答下列问题：
(1)泡菜发酵的原理是_____________________。
(2)泡菜制作中，需注意控制食盐用量以及______，否则容易造成_______而导致亚硝酸盐增加，影响泡菜品质。
(3)泡菜发酵过程中，乳酸菌的呼吸作用本来无气体产生，但是在实际腌制过程中，从外观上可以看到泡菜瓶中有间歇性的气泡冲出，坛盖有响声，其有气泡原因可能是______。
(4)泡菜发酵过程，为确定最佳取食时间，需检测亚硝酸盐含量。回答下列问题：
补充检测步骤：①配置溶液；②____________；③制备样品处理液；④_______。
检测亚硝酸盐含量的原理是：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与____________发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成_______色染料。
17．（2023·四川成都·石室中学校考模拟预测）生物兴趣小组试图探究牛和山羊的瘤胃中的微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能降解尿素的细菌（目的菌）。培养基成分如表所示，实验步骤如图所示。请分析回答问题：
KH2PO4
1.4g
Na2HPO4
2.1g
MgSO47H2O
0.2g
葡萄糖
10g
尿素
1g
琼脂
15g
溶解后蒸馏水定容到1000mL

(1)本实验所使用的培养基按功能来分应为_________培养基。在饲料中添加尿素后，奶牛小肠总蛋白质增加60%-85%，其原因是___________________________。
(2)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_________________________。
(3)实验是否需要振荡培养来提高溶氧量：______（填“是”或“否”），原因是______________。转为固体培养时，常采用___________法接种，获得单菌落后继续筛选。
(4)若在稀释倍数为105的三个培养基中，菌落数分别是156、174、183，则每克内容物中尿素分解菌的数目为_______个。
(5)分离分解尿素的细菌实验时，甲同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。甲同学实验结果差异的原因可能有__________（填序号）。
①取样不同           ②培养基污染         ③操作失误       ④没有设置对照
(6)如果想要进一步鉴定筛选出来的细菌是尿素分解菌，还应该怎么做？ _____________________。
(7)为进一步确定取自瘤胃中液体的适当稀释倍数，将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24-48h，观察并统计具有红色环带的菌落数，结果见表，其中合理的稀释倍数为___________。
稀释倍数
103
104
105
106
107
菌落数
>500
367
248
36
18
18．（2023·四川·校联考模拟预测）胡萝卜素是人们膳食的重要营养物质，它对预防心血管疾病、增强免疫系统具有一定的作用。从土壤中筛选分离出高产胡萝卜素的三孢布拉霉菌的流程如下图所示，回答下列问题：

(1)过程④的接种方法是__________，该实验涂布了3个平板，统计的菌落数分别是199、198、203，则1g土壤中三孢布拉霉菌数约为___________个。
(2)三孢布拉霉菌在产生胡萝卜素的同时也会产生[H]，[H]可将无色的TTC（2，3，5—三苯基氯化四氮唑）还原为红色复合物，且菌体内[H]含量越高，还原能力越强。戊培养基从用途上分属于__________培养基，在戊中挑取___________（填字母）菌落进行扩大培养，可获得大量高产胡萝卜素的三孢布拉霉菌，挑选的理由是__________。
(3)胡萝卜素除了利用微生物的发酵生产外，还可以从植物中提取，从胡萝卜中提取胡萝卜素的常用方法是__________，用于提取胡萝卜素的有机溶剂应具有__________等性质。
19．（2023·四川绵阳·四川省绵阳南山中学校考模拟预测）山西老陈醋含有多种营养成分，具有调节血脂、保护肝脏等功效。其生产工艺经3000多年的传承和发展，具有了传统手工技艺与现代科学相结合的特点，被认定为国家非物质文化遗产。工艺流程如下图。

回答下列问题：
(1)拌大曲前高粱___________（填“需要”或“不需要”）冷却，原因是___________。
(2)酒精发酵阶段起主要作用的微生物是____________，在发酵过程中需先通气后密封，操作目的是__________。
(3)若由酒精发酵转变为醋酸发酵时，需要改变的环境条件是__________。
(4)研究人员研究了山西老陈醋对急性醉酒小鼠的防醉和护肝作用（肝细胞受损后转氨酶活性升高），结果如表所示。
分组检测指标
甲组不做处理
乙组用酒灌胃（13ml/kg）
丙组食醋灌胃，30min后用酒灌胃（13ml/kg）
降解酒精的某种酶含量（μg·ml-1）
4.22
1.65
6.08
转氨酶活性（U·g-1）
15.07
19.93
12.83
据表分析，山西老陈醋可通过__________，加快酒精代谢，起到一定的解酒作用。山西老陈醋也具有护肝作用，判断依据是__________。
20．（2023·陕西商洛·镇安中学校考模拟预测）近年来，石油工业飞速发展，石油污染引起的湿地生态破坏日益严重。研究发现，植物根际微生物对石油的降解起到重要作用。下图为从某植物根际土壤中筛选出高效石油降解菌的部分流程示意图，请据图回答下列问题：

(1)微生物的培养包括_____、接种、分离和培养等步骤。对培养基进行高压蒸汽灭菌时，发现灭菌锅内压力达到100kPa而温度未达到121℃，为同时达到设定的温度和压力要求，此时应该_____（填操作过程）。
(2)步骤I为石油降解菌的富集培养。称取1g土壤样品加入预先装有100mL以石油为唯一碳源的培养基的三角瓶中，在15℃、160r/min的恒温振荡摇床中培养6d。在相同的培养条件下连续培养四个周期。摇床培养的目的是_____（写出2点）。在操作Ⅱ、Ⅲ中，采用的接种方法分别是_____。
(3)研究人员通常根据菌落的_____、隆起程度和颜色等特征来初步区分不同种的微生物。统计菌落的种类和数量时，要每隔24h观察统计一次，直到_____。目前，已知有200多种微生物能降解石油，但多数微生物的降解速率都很低，请写出鉴定不同菌株降解石油能力大小的方法：_____。长期保存石油降解菌，可以采用_____的方法，放在_____℃的冷冻箱中保存。