2024届高考生物一轮复习大题专练【配套新教材】（17）基因工程

这是一份2024届高考生物一轮复习大题专练【配套新教材】（17）基因工程，共15页。试卷主要包含了新型冠状病毒等内容，欢迎下载使用。
1.法尼醇X受体（FXR）是一种胆汁酸受体，研究表明，FXR在调节肝脏再生和肝纤维化等方面发挥关键作用。斑马鱼具有与人类高度相似的基因组，其胚胎和幼鱼身体透明，在毒理学和药理学研究方面有其独特优势。研究人员构建了动物模型，用于相关药物筛选。请回答下列问题：
（1）已知XhⅠ酶识别的序列具有回文对称的特点（即一条链从左向右读和另一条链从右向左读的序列是相同的），若一段核苷酸序列为“5'-ATCTCGAGCGGG-3”，则对该段核苷酸序列进行剪切的XhⅠ酶识别的核苷酸序列（6个核苷酸）为_____。
（2）如图为FXR基因的两种引物序列，要将XhⅠ酶和BamHⅠ酶的识别序列添加到FXR基因两端，加入限制酶识别序列的位置应在图中的_____（填序号）处。进行PCR扩增时，经过_____轮循环后，可得到基因两端均有限制酶酶切位点的目的基因片段。
上游引物：5'-①TGCAGCATCATGCTTGTGGAAG②-3'
下游引物：5'-③TCATCGTGTGAACCACAATGCT④-3'
（3）将重组质粒导入用_____处理过的大肠杆菌体内，扩大培养后，提取质粒。再将提取到的重组质粒利用_____法注入斑马鱼内，可得到转基因动物。
（4）重组质粒含有氨苄青霉素抗性基因和增强型绿色荧光蛋白基因。在斑马鱼培养过程中，应以_____作为标记基因筛选出肝脏中FXR基因特异性表达的个体，原因是_____。
2.2020年4月20日，习近平总书记在陕西省商洛市柞水县小岭镇金米村考察，了解该村发展木耳产业情况，夸奖当地村民把小木耳办成了大产业。有科学家对金米村的3种木耳进行了基因测序，发现这些木耳中都含有能产生抗肿瘤产物的基因——抗癌基因。若从木耳中获得这些基因，并转移到某植物中，培育成含抗癌基因的植物新品种，就能达到治病的目的。请回答下列问题：
（1）要获得木耳的抗癌基因，需要用到_____酶。提取的目的基因需要与载体连接构建基因表达载体后才能注入受体细胞，构建基因表达载体的目的是_____。
（2）体外大量复制目的基因时要用到_____技术，该技术_____（填“需要”或“不需要”）额外加入ATP。
（3）也可以从木耳中提取抗癌基因的mRNA，并以此获得目的基因，这种方法叫_____法。若要在分子水平上检测目的基因是否在受体细胞中表达，可以利用_____法。
（4）若利用该技术培育出了含抗癌基因的植物新品种，则通过传统的杂交技术_____（填“能”或“不能”）使该性状稳定遗传给子代，原因是_____。
（5）为实现快速大量生产该抗癌产物，可以通过_____技术大量繁殖该植物而获取。
3.用DNA重组技术可以赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人类需要的生物产品。在此过程中需要使用多种工具酶，其中4种限制性内切核酸酶的切割位点如图所示。
回答下列问题：
（1）常用的DNA连接酶有E.cli DNA连接酶和T4DNA连接酶。图中_____酶切割后的DNA片段可以用E.cli DNA连接酶连接。图中_____酶切割后的DNA片段可以用T4DNA连接酶连接。
（2）DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是_____。
（3）DNA重组技术中所用的质粒载体其有一些特征。如质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能_____；质粒DNA分子上有_____便于外源DNA插入；质粒DNA分子上有标记基因（如某种抗生素抗性基因），利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞，方法是_____。
（4）表达载体含有启动子，启动子是指_____。
4.新型冠状病毒（+RNA病毒）的刺突蛋白S通过与人体某些细胞表面的ACE2受体结合而进入细胞，是宿主中抗体的重要作用位点。图1是科研人员利用新型冠状病毒的+RNA获得S蛋白基因和S蛋白受体结合域RBD基因，并将二者作为抗原基因序列研制新型冠状病毒双抗原疫苗的部分技术路线。已知PCR1与PCR2要分别进行，然后将产物混合，使用引物1和引物4进行PCR3，最终获得大量S—RBD融合基因（1300bp）。回答下列问题：
（1）PCR3过程中，需要使用_______酶，该酶的作用是_______。
（2）为使S—RBD融合基因在工程菌中表达时先合成S蛋白，在重组pX质粒中，引物4对应的区段要连接在靠近_______（填“启动子”或“终止子”）的部位，原因是_______。
（3）为初步检测过程B是否构建成功，对重组pX系列质粒及其酶切产物进行凝胶电泳检测，结果如图2。据图可知，酶切时用到的限制酶是_______，重组质粒pX2和pX5构建成功的依据是_______。
（4）在筛选工程菌时，可先后用两种抗生素进行影印培养实验（将首次培养的菌落用灭菌绒布影印到新培养基上培养），在第二次培养时存活的菌株是否含有目的基因？______（填“是”或“否”）。鉴定pX质粒是否导入工程菌时还可以采用的方法是______。
5.α1-抗胰蛋白酶缺乏症是一种单基因遗传病，患者成年后会出现肺气肿及其他疾病，严重者甚至死亡，患者可采用注射α1-抗胰蛋白酶来缓解症状。科研团队决定结合如图所示流程，运用蛋白质工程设计制造出全新的α1-抗胰蛋白酶，同时结合基因工程和胚胎工程进行扩大生产。
请回答下列问题：
（1）①~③过程属于蛋白质工程，仅从③过程看，由氨基酸序列获得的核酸序列_____（填“是”或“不是”）唯一的，原因是_____。
（2）基因工程的核心是构建基因表达载体，基因表达载体上除目的基因外，还必须有启动子、_____（填两种）等。可用_____技术将基因表达载体导入受精卵中。
（3）欲通过乳腺生物反应器生产预期α1-抗胰蛋白酶，则构建基因表达载体时所用的启动子应为_____，且在⑧过程之前，要除去含_____（填“X”或“Y”）染色体的精子。
6.科研人员利用基因工程和细胞工程培育出了转基因抗虫棉。图1和图2是基因工程中用到的含目的基因（抗虫基因）的DNA和质粒及相关限制酶的酶切位点等。表中列举了4种限制酶的识别序列和酶切位点。回答下列问题。
（1）同尾酶指的是切割不同的DNA片段，但产生相同的黏性末端的一类限制性内切酶。表中属于同尾酶的是____。
（2）将图1和图2中的DNA拼接成重组质粒时，若选择同一种酶切割含目的基因的DNA和质粒，则这种酶应该是____；为了防止目的基因和质粒的自身环化，应各用两种酶切割含目的基因的DNA和质粒（充分酶解），选择的限制酶可以分别是Sau3AⅠ____、和、HindⅢ和____。
（3）基因工程的四步程序是目的基因的获取、构建基因表达载体、____和目的基因的检测与鉴定。其中构建基因表达载体时，所用载体除了质粒以外，还有____（答出2点即可）。
（4）图2中，启动子的作用是____。
（5）假设培育该转基因抗虫棉时，用到了两种限制酶切割质粒。标记基因可用于检测目的基因是否导入，由图2可知，应选含有____的培养基初步筛选含有重组质粒的细胞。
7.蛋白酶抑制剂基因转化是作物抗虫育种的新途径。某研究团队将胰蛋白酶抑制剂（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制剂（StPinlA）的基因单独或共同转化棉花，获得了转基因植株。
回答下列问题：
（1）蛋白酶抑制剂的抗虫机制是________。
（2）________是实施基因工程的核心。
（3）利用农杆菌转化法时，必须将目的基因插入到质粒的________上，此方法的不足之处是________。
（4）为检测目的基因在受体细胞基因组中的整合及其转录和翻译，可采用的检测技术有________（写出两点即可）。
（5）确认抗虫基因在受体细胞中稳定表达后，还需进一步做抗虫的________以鉴定其抗性程度。如图为三种不同遗传操作产生的转基因棉花抗虫实验结果，据结果分析________（填“NaPI”或“StPinlA”或“NaPI+StPinlA”）转基因棉花的抗虫效果最佳，其原因是________。
（6）基因突变可产生新的等位基因，在自然选择的作用下，昆虫种群的蓝因频率会发生________。导致昆虫朝着一定的方向不断进化。提此推测，被蛋白酶抑制剂转基因作物长期选择后，某些昆虫具有了抗蛋白酶抑制剂的能力，其分子机制可能是________（写出两点即可）。
8.甜玉米与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化较慢，含可溶性糖量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更富有生产应用价值，科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白的转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示。回答下列问题：
（1）组成强启动子的基本单位是_______,它驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用_______酶组合，将DNA片段和Ti质粒切开后构建重组表达载体。
（2）外植体经_______形成的玉米愈伤组织放入农杆菌液浸泡后进行植物组织培养，培养基中需加入_______进行筛选,最终获得多个玉米株系a1、a2、a3、a4,通过对a1、a2、a3、a4,四株甜玉米株系的P蛋白质表达量进行测定结果如图2,_____（填“能”或“不能”）说明a4株系未导入重组质粒，原因是_____。
（3）真核基因的编码区含有内含子和外显子，图3为淀粉酶合成基因片段,其转录后形成的前体RNA需通过剪接（切去内含子对应序列，连接外显子对应序列）和加工后方能用于翻译。
科研人员通过降低调控淀粉酶合成基因的表达实现提高甜玉米中可溶性糖的含量，吗啉反义寡核苷是RNA剪接抑制剂，注入植物细胞内会使基因表达受阻。为验证吗啉反义寡核苷能阻止前体RNA上内含子1的对应序列被剪切，科研人员将吗啉反义寡核苷酸导人玉米的受精卵作为实验组，设计相关实验，请完成下列表格：
（4）某次实验结果电泳发现实验组和对照组都没有任何条带，从PCR操作过程的角度解释可能的原因有_____（至少答出两点）。
答案以及解析
1.答案：（1）—CTCGAG—
（2）①③；3
（3）Ca2+（CaCl2）；显微注射受精卵
（4）增强型绿色荧光蛋白基因；斑马鱼胚胎和幼鱼身体透明，可直接观察肝脏的荧光
解析：（1）“5'-ATCTCGAGCGGG-3'”的互补链核苷酸序列为“3'-TAGAGCTCGCCC-5'”，XhⅠ酶识别的序列具有回文对称的特点，则对题述核苷酸序列进行剪切的XhⅠ酶识别的序列是—CTCGAG—。
（2）根据子链的延伸方向为5'→3'可知，限制酶识别序列应加在引物的5′端，即限制酶识别序列的位置应在①③处。进行PCR扩增时，第一轮循环得到两个DNA分子，两个DNA分子均由一条DNA母链和一条一端带有酶切位点的子链组成；第二轮循环得到四个DNA分子，其中有两个DNA分子和上述第一轮的产物的情况相同，另外两个DNA分子的两条链都是母链一端有酶切位点，子链两端均有酶切位点；第三轮循环得到八个DNA分子，其中有两个DNA分子是母链和子链两端均有酶切位点。即经过3轮循环，可得到基因两端均有酶切位点的目的基因片段。
（3）Ca2+处理过的大肠杆菌能吸收周围环境中DNA分子，重组质粒容易进入这些大肠杆菌。利用显微注射将重组质粒注入动物受精卵，才能得到转基因动物。
（4）筛选出肝脏中有FXR基因特异性表达的斑马鱼个体，即筛选出目的基因导入成功的斑马鱼。斑马鱼胚胎和幼鱼身体透明，较容易观察到肝脏是否发出绿色荧光，且抗生素一般无法杀死动物，故应以增强型绿色荧光蛋白基因作为标记基因。
2.答案：（1）限制性内切核酸；使目的基因在受体细胞中稳定存在，使目的基因能够表达和发挥作用，并且遗传给下一代
（2）PCR；不需要
（3）逆转录；抗原—抗体；杂交
（4）不能；受体细胞中只含有一个该基因，由于减数分裂时重组质粒的移动是随机的，所以子代未必能获得该基因
（5）植物组织培养
解析：（1）要获得该木耳的抗癌基因，需要用到限制性内切核酸酶将其从DNA上切割下来。由于目的基因没有复制原点，无表达所需的启动子，所以单独的目的基因不能在受体细胞中复制和转录，故提取的目的基因需要与载体连接后才能注入受体细胞，以保证目的基因在受体细胞中稳定存在，使目的基因能够表达和发挥作用，并且遗传给下一代。
（2）体外大量复制目的基因时要用到PCR技术，该技术中所需要的4种脱氧核苷三磷酸即dATP、dTTP、dGTP、dCTP，它们分别由4种脱氧核苷酸在消耗ATP的基础上活化形成的，所以它们能提供PCR反应需要的能量，故在PCR过程中，不需要额外加入ATP。（3）以抗癌基因的mRNA为模板合成目的基因的方法为逆转录法。可以用抗原—抗体杂交法，在分子水平上检测目的基因是否在受体细胞中表达。
（4）由于受体细胞中可能只含有一个该基因，在减数分裂时重组质粒的移动是随机的，所以子代未必能获得该基因，即通过传统的杂交技术不能使该性状稳遗传给子代。
（5）为实现快速大量生产该抗癌产物，可以通过植物组织培养技术大量繁殖该植物而获取。
3.答案：（1）EcRⅠ、PstⅠ；EcRⅠ、SmaⅠ、PstⅠ、EcRⅤ
（2）磷酸二酯键
（3）复制；限制酶的切割位点；用含抗生素的培养基进行培养
（4）RNA聚合酶识别、结合和驱动转录的一段DNA序列
解析：（1）由图可以直接看出，EcRⅠ、SmaⅠ、PstⅠ、EcR V切割后分别形成黏性末端、平末端、黏性末端和平末端；E.cli DNA连接酶可用于连接黏性末端，T4DNA连接酶可用于连接黏性末端和平末端。
（2）DNA连接酶催化形成磷酸二酯键。
（3）复制原点是在基因组上复制起始的一段序列，可以保证质粒在宿主细胞中复制。质粒上有限制酶的切割位点，可被限制酶切开并使目的基因插入其中。采用在含有特定抗生素的选择培养基上进行选择培养的方法可将含质粒载体的细胞筛选出来。
（4）启动子是RNA聚合酶识别、结合和驱动转录的一段DNA序列。
4.答案：（1）耐高温的DNA聚合；将单个的脱氧核苷酸连接到引物的3'端
（2）启动子；原核细胞中基因表达时可以边转录边翻译，引物4对应的区段靠近启动子时先转录出S蛋白的mRNA序列
（3）HindⅢ、NdeⅠ、EcRⅠ；重组质粒pX2和pX5经酶切后均可形成750bp和550bp的片段，750bp与550bp之和为S—RBD融合基因的长度1300bp
（4）否；观察菌落是否具有荧光，有荧光的则含有pX质粒
解析：（1）PCR过程中，需要用到的酶是耐高温的DNA聚合酶，该酶的作用是将单个的脱氧核苷酸连接到引物的3′端。
（2）启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能够驱动基因的转录，原核细胞中基因表达时可以边转录边翻译，引物4对应的区段靠近启动子时先转录出S蛋白的mRNA序列，故在重组pX质粒中，引物4对应的区段要连接在靠近启动子的部位。
（3）据图1可知，目的基因应插入启动子和终止子之间，可选择的限制酶有HindⅢ、NdeⅠ。分析图2可知，重组质粒pX2的长度为6100bp，重组质粒pX2经酶切并电泳后形成了3种长度的条带，大小分别为4800bp、750bp、550bp，其中750bp+550bp=1 300bp，与S—RBD融合基因的长度相同，重组质粒pX5的长度为5800bp，重组质粒pX5经酶切并电泳后形成了3种长度的条带，大小分别为4500bp、750bp、550bp，其中750bp+550bp=1300bp，与S-RBD融合基因长度相同。可见酶切时还用到了限制酶EcRⅠ。综上可知，酶切时用到的限制酶有HindⅢ、NdeⅠ、EcRⅠ。重组质粒pX2和pX5构建成功的依据是重组质粒pX2和pX5经酶切后均可形成长度为750bp和550bp的片段，750bp与550bp之和为S—RBD融合基因的长度1300bp。
（4）在筛选工程菌时，由于含目的基因的菌株对第二次培养时使用的抗生素无抗性，故在第二次培养时存活的菌株不含目的基因。鉴定pX质粒是否导入工程菌时还可以采用的方法是：观察菌落是否具有荧光，有荧光的则含有pX质粒。
5.答案：（1）不是；密码子具有简并性（或一种氨基酸可对应多种密码子）
（2）终止子、标记基因；显微注射
（3）乳腺蛋白基因的启动子；Y
解析：（1）本题考查蛋白质工程、基因工程以及胚胎工程的相关知识。因为密码子具有简并性，所以由氨基酸序列得到的mRNA上的碱基序列不是唯一的，再逆转录得到的基因片段也不是唯一的。
（2）构建的基因表达载体一般有启动子、终止子、标记基因（如抗生素抗性基因）、目的基因等。将目的基因导入受体细胞可以用农杆菌转化法（导入植物细胞）、氯化钙法（导入微生物细胞）、显微注射法（导入动物细胞），所以可用显微注射技术将基因表达载体导入受精卵中。
（3）利用乳腺生物反应器生产药物时，需要让自的基因在乳腺细胞中表达，因此启动子应该用乳腺蛋白基因的启动子，而且需要雌性动物才可以表达乳腺蛋白基因，所以受精之前需要去除含Y染色体的精子，使受精卵的性染色体组成为XX，得到雌性动物。
6.答案：（1）BamHⅠ、BclⅠ和Sau3AⅠ
（2）HindⅢ；HindⅢ；BamHⅠ
（3）将目的基因导入受体细胞；λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等
（4）作为NA聚合酶识别和结合位点，驱动转录的进行
（5）X抗生素
解析：（1）根据同尾酶的定义可知，BamHⅠ、BclⅠ和Sau3AⅠ属于同尾酶，产生的黏性末端相同，均为CATC。
（2）图1中目的基因的两端都有HindⅢ的识别位点，图2中质粒的启动子和终止子内也有HindⅢ的识别位点，所以可以用HindⅢ切割含目的基因（抗虫基因）的DNA和质粒；为了防止目的基因和质粒的自身环化及反向链接，应该选用两种酶切割目的基因和质粒，由于限制酶Sa3AⅠ和BamHⅠ酶切以后产生相同的黏性末端，故可选择HindⅢ和Sau3AⅠ切割含目的基因（抗虫基因）的DNA；在处理质粒时，应选择在启动子和终止子之间的两种酶进行切割，且不能同时破坏两种标记基因，故可选择HindⅢ和BamHⅠ进行切割。
（3）基因工程的四步程序是目的基因的获取、构建基因表达载体、将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定。其中构建基因表达载体时，所用载体除了质粒以外，还有入噬菌体的衍生物、动植物病毒等。
（4）启动子的作用是作为RNA聚合酶识别和结合位点，驱动转录的进行，启动子位于基因的上游，是一段具有特定核苷酸序列的DNA片段。
（5）由于选择HindⅢ和BamHⅠ对质粒进行切割，破坏了Y抗生素抗性基因，故应选含有X抗生素的培养基初步筛选含有重组质粒的细胞
7.（1）答案：蛋白酶抑制剂可与害虫消化道中的蛋白酶结合形成复合物，阻断或降低蛋白酶活性，使昆虫不能正常消化食物中的蛋白质
解析：蛋白酶抑制剂可与害虫消化道中的蛋白酶结合形成复合物，从而阻断或降低蛋白酶的活性，使昆虫不能正常消化食物中的蛋白质。
（2）答案：基因表达载体的构建（或表达载体的构建）
解析：基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建。
（3）答案：T-DNA；农杆菌转化法适用于双子叶植物和裸子植物，不适用于大多数单子叶植物
解析：农杆菌转化法的原理：农杆菌Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据这一特点，将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以将目的基因导入植物细胞。该方法的不足之处是农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力。
（4）答案：DNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原—抗体杂交技术
解析：检测目的基因在受体细胞基因组中的整合及其转录和翻译，即在分子水平上检测转基因生物的DNA上是否插入目的基因、目的基因是否转录出相应的mRNA、目的基因是否翻译成相应的蛋白质，可分别采用DNA分子杂交技术、分子杂交技术、抗原—抗体杂交技术等。
（5）答案：接种实验；NaPI+StPinlA；与对照组相比，NaPI+StPinlA组虫体质量最小，且每株棉铃数最多
解析：除了分子检测外，有时还需要进行个体生物学水平的鉴定。例如，一个抗虫的目的基因导入植物细胞后，是否赋予了植物抗虫特性，需要做抗虫的接种实验，以确定是否具有抗性以及抗性的程度。
据以上分析可知，NaPI+StPinlA转基因棉花的抗虫效果最佳。
（6）答案：定向改变；昆虫发生基因突变后，产生了抗蛋白酶抑制剂的基因，在蛋白酶抑制剂的选择下，抗性基因频率逐渐提高，从而增强了其抗蛋白酶抑制剂的能力；蛋白酶抑制剂基因发生突变后不能编码出蛋白酶抑制剂
解析：基因突变可产生新的等位基因，在自然选择的作用下，昆虫种群的基因频率会发生定向改变，导致昆虫朝着一定的方向不断进化。被蛋白酶抑制剂转基因作物长期选择后，某些昆虫具有了抗蛋白酶抑制剂的能力，其分子机制可能是昆虫发生基因突变后，产生了抗蛋白酶抑制剂的基因，在蛋白酶抑制剂的选择下，抗性基因频率逐渐提高，从而增强了其抗蛋白酶抑制剂的能力；蛋白酶抑制剂基因发生突变后不能编码出蛋白酶抑制剂。
8.答案：（1）脱氧核苷酸；BamHⅠ和SacⅠ
（2）脱分化；潮霉素；不能；a4株系玉米中可能导入的目的基因未表达（转录或翻译）
（3）①逆转录；②引物2和引物4；③吗啉反义寡核苷能阻止前体RNA上内含子1的对应序列被剪切
（4）退火温度太高、引物自连或互连
解析：（1）启动子是一段有特殊序列结构的DNA片段，据此可推知，组成强启动子的基本单位是脱氧核苷酸。为使P基因在玉米植株中超量表达，需确保强启动子和P关总基因不被破坏，由图1可知，应优先选用BamHⅠ和SacⅠ酶组合，将DNA片段和Ti质粒切开后构建重组表达载体。
（2）外植体经脱分化形成愈伤组织，由图1可知，潮霉素抗性基因位于Ti质粒的T-DNA上，随T-DNA整合到玉米细胞的染色体上，属于基因工程中的标记基因，因此培养基中需加入潮霉素进行筛选。图2显示，a4株系玉米的P蛋白相对表达量与野生型玉米的相同，可能是由于a4株系玉米中导入的目的基因没有表达，所以图2的测定结果不能说明a4株系未导入重组质粒。
（3）为验证吗啉反义寡核苷能阻止前体RNA上内含子1的对应序列被剪切，可以从受精卵发育后3天的实验组和对照组胚胎细胞中提取总RNA，逆转录形成cDNA。若吗啉关反义寡核苷能阻止前体RNA上内含子1的对应序列被剪切，则实验组RNA前体上内含子1的对应序列不能被剪切下去，对照组RNA前体上内含子1的对应序列能被剪切下去。使用图3中引物2和引物4进行PCR扩增并对扩增后的产物用电泳技术进行鉴定，其结果为实验组有目的条带，对照组无目的条带。
（4）PCR是通过调节温度来控制DNA双链的解旋与结合的。在PCR操作过程中，如果退火温度太高、引物自连或互连，均会导致电泳后的实验组和对照组没有任何条带出现。
限制酶
识别序列及酶位切点
BamHⅠ
5'-G↓GATCC-3'
BelⅠ
5'-T↓GATCA-3'
Sau3AⅠ
5'-↓GATC-3'
HindⅢ
5-A↓AGCTT-3'
操作流程
操作方法或操作要点
获取cDNA
从受精卵发育后3天的实验组和对照组胚胎细胞中提取总RNA，①____形成cDNA
扩增cDNA
以获得的cDNA为模板进行PCR时需加入②______
产物鉴定
用琼脂糖凝胶电泳技术鉴定PCR扩增后获得的产物
分析结果得出结论
实验组有目的条带，对照组无目的条带，说明③______