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人教版 (2019)选择性必修3二 微生物的选择培养和计数优秀第2课时同步练习题
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这是一份人教版 (2019)选择性必修3二 微生物的选择培养和计数优秀第2课时同步练习题，文件包含12《微生物的选择培养和计数第2课时》原卷版分层练习docx、12《微生物的选择培养和计数第2课时》解析版分层练习docx等2份试卷配套教学资源，其中试卷共30页， 欢迎下载使用。
1．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原因是（ ）
A．菌落中的细菌数目是固定的
B．平板上的一个菌落就是一个细菌
C．通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同
D．平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
【答案】D
【分析】稀释涂布平板法:将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】用稀释涂布平板法进行微生物计数时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌，D正确，ABC错误。
2．由于石油等不可再生资源供应日趋紧张，开发各种再生纤维素纤维成为获取新型纺织原料的主要渠道，而纤维素分解菌在转化可再生纤维素方面具有巨大的应用价值。下列相关叙述错误的是（ ）
A．富集纤维素分解菌时，应用固体培养基培养
B．分离纤维素分解菌时，培养基中应加入适量的刚果红
C．可用平板划线法对纤维素分解菌进行纯化培养
D．培养纤维素分解菌时，接种后的培养基需倒置
【答案】A
【分析】1、筛选纤维素分解菌应用以纤维素为唯一碳源的择选培养基。
2、刚果红可以与纤维素形成红色复合物，纤维素分解菌产生的纤维素酶可以水解纤维素而使菌落周围出现透明圈，所以可以用刚果红染液鉴别纤维素分解菌。
【详解】A、在分离出纤维素分解菌之前，需对微生物进行富集培养，此时应用液体培养基，利于培养液与微生物充分接触，加速微生物繁殖，A错误；
B、在分离纤维素分解菌时，培养基以纤维素作为唯一碳源，且应加入刚果红染液，B正确；
C、对纤维素分解菌进行纯化培养时，可采用平板划线法或稀释涂布平板法， C正确；
D、接种后，为防止皿盖上凝结的水珠滴落在培养基上造成培养基污染，应将培养基进行倒置培养，D正确。
故选A。
3．如图为分离和纯化分解甲醛的细菌的实验过程，其中LB培养基能使菌种成倍扩增，以下说法正确的是（ ）
A．需要对活性污泥作灭菌处理
B．②中LB培养基只能以甲醛为唯一碳源
C．目的菌种异化作用类型为厌氧型
D．经⑤处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培养
【答案】D
【分析】据图分析：在分离和纯化分解甲醛的细菌的过程中，通过①过程制取各种菌的悬浊液，②过程用完全培养基培养后，可以获得大量微生物，从而增加目的菌的菌群数量；③中的培养基中的碳源只含有甲醛，只有可以分解甲醛的细菌能够存活，通过③过程可以筛选出能分解甲醛的微生物；④过程可以获得单个菌落，获得单个菌落过程中常用的接种方法是平板划线法或者稀释涂布平板法，为避免水滴污染培养基，在恒温培养箱中培养时，培养皿须倒置；经过⑤过程后，取样测定甲醛浓度，选出甲醛浓度最低的培养瓶，再分离、培养菌株。
【详解】A、该实验是从活性污泥中分离和纯化能分解甲醛的细菌，故不需要对活性污泥作灭菌处理，A错误；
B、②过程用完全培养基培养后，可以获得大量微生物，从而增加目的菌的菌群数量，故②中LB培养基不是以甲醛为唯一碳源；③过程可以筛选出能分解甲醛的微生物，需要以甲醛为唯一碳源的培养基，B错误；
C、图示分解甲醛的细菌是在培养皿中进行的，故目的菌种异化作用类型属于需氧型细菌，C错误；
D、经⑤处理后，瓶中甲醛浓度降低，甲醛浓度最低的一组中分解甲醛的细菌纯度最高，可进一步纯化培养，D正确。
4．某生物学兴趣小组尝试对土壤中分解尿素的细菌进行分离并计数，相关叙述正确的是（ ）
A．制备选择培养基时，需加入尿素、琼脂、葡萄糖、硝酸盐等物质
B．用稀释涂布平板法统计结果，活菌的实际数目往往比统计的菌落数低
C．脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH降低，加入酚红指示剂后变红
D．每毫升菌液中微生物细胞的数量=某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数
【答案】D
【分析】1、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。稀释涂布平板法进行计数时，应选择30-300的菌落数进行计数。
2、间接计数法（活菌计数法） 的原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
3、如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择以尿素为唯一氮源的培养基；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，PH增高，使指示剂变红色
【详解】A、分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中要有尿素、琼脂、葡萄糖，尿素给分解尿素的细菌提供氮源，不能加硝酸盐，否则无法起到选择出尿素分解菌的作用，A错误；
B、用稀释涂布平板法统计结果时，有的活菌在培养过程中会死亡，而有的菌落是由多个活菌共同形成的，故活菌的实际数目往往比统计的菌落数高，B错误；
C、脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH升高，加入酚红指示剂后变红，C错误；
D、根据活菌计数法的计数公式可知，每毫升菌液中微生物细胞的数量=某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数，D正确。
【点睛】本题考查了微生物的分离和培养的有关知识。考生要识记和掌握利用培养基对土壤中分解尿素的细菌进行选择和鉴定的方法和原理，利用分析与综合的科学思维，结合所学的知识准确答题。
5．在“果醋制作过程”中，获得较多的醋酸杆菌菌种的最简便方法是（ ）
A．不必人为加入菌种，在葡萄等水果表面本身就存在大量醋酸杆菌
B．从变酸的葡萄酒表面获得菌膜，再培养、分离
C．从泡菜坛盖边沿的水槽中的表面获得菌膜，再培养、分离
D．从土壤中分离提取
【答案】B
【分析】参与果醋制作的菌种是醋酸杆菌，醋酸杆菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足的时候才能进行旺盛的生理活动。变酸的酒的表面观察的菌膜就是醋酸杆菌在液面上大量繁殖而形成的，因此从变酸的葡萄酒表面获得菌膜，再培养、分离可以获得较多的醋酸杆菌菌种。
【详解】A、在葡萄等水果表面存在大量的酵母菌，不是醋酸杆菌，A错误；
B、变酸的葡萄酒表面的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的，可以用此菌膜培养、分离获得醋酸菌，B正确；
C、泡菜坛盖边沿的水槽中的表面获得菌膜是酵母菌形成的，C错误；
D、土壤中有多种微生物，不容易分离出醋酸菌，D错误；
6．稀释涂布平板法不仅是分离和纯化微生物的重要方法，也是测定微生物数量的重要方法。用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在统计数据时应（ ）
A．随机抽取某个稀释度的培养基，统计菌落数
B．将不同稀释度的3个培养基上的菌落数求和
C．将相同稀释度的全部培养基上的菌落进行计数
D．随机抽取相同稀释度的3个培养基统计菌落数后求平均值
【答案】D
【分析】检测土壤中细菌总数，可以看出采用的计数方法是稀释涂布平板法进行计数。用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求取平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数。
【详解】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数。
7．某同学利用选择培养基成功分离出了土壤中的自生固氮菌，得到了如图所示的实验结果，以下说法正确的是（ ）
A．该实验使用了划线法接种
B．该实验使用了液体培养基
C．该实验使用了无碳培养基
D．该实验使用了无氮培养基
【答案】D
【分析】自生固氮菌可以利用空气中氮气为氮源，所以培养基中不需要添加氮源，自生固氮菌就能生长，而在没有氮源的培养基上其它不能固氮的微生物不能生长，所以该培养基可用于筛选自生固氮菌。
【详解】A、稀释涂布平板法是将菌液稀释成不同浓度进行涂布，而平板划线法是挑取单个菌落在平板上划线，据此可判断该实验中将土壤浸出液接种到培养基的方法为稀释涂布平板法，A错误；
B、图示中是将土壤浸出液接种到无氮培养基上选择自生固氮菌的过程，该培养基属于固体培养基，B错误；
C、自生固氮微生物属于异养微生物，没有碳源不能生长，所以为了保证自生固氮菌的生长培养基中应添加碳源，C错误；
D、由于自生固氮菌可以利用空气中氮气为氮源，而其它不能固氮的微生物不能利用氮气做氮源，所以在无氮的培养基上可以筛选出自生固氮菌，故图示中使用了无氮培养基，D正确。
8．高浓度的铵盐对池塘养殖的对虾有一定的毒害作用，硝化细菌是一种好氧菌，可有效净化水体中铵盐，降低对虾的死亡率。科研人员拟从当地对虾养殖池塘中筛选出对铵盐降解率高且稳定的硝化细菌菌株，操作流程如下图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．从对虾死亡率低的养殖池塘中取样，能提高筛选的成功率
B．纯化菌种时，若按图中所示的接种方法接种，接种环需要灼烧5次
C．在锥形瓶中培养硝化细菌时需要振荡培养，目的是增加硝化细菌与营养物质、溶解氧的充分接触
D．可选择铵盐浓度减小得最多的一组候选菌进行后续培养
【答案】B
【分析】1、微生物常见的接种的方法：
(1)平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生 长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
(2)稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、振荡培养：提供充足氧气、并使细菌与营养物质充分接触，扩大培养。
【详解】A、本题想要筛选出对铵盐降解率高且稳定的硝化细菌菌株，那么从对虾死亡率低的养殖池塘中取样，能提高筛选的成功率，A正确；
B、纯化菌种时，采用图示方法接种时，每次划线前后都要灼烧接种环，共有5个划线区域，因此接种环需要灼烧6次，B错误；
C、已知硝化细菌是好氧性细菌，则扩大培养时需要振荡的目的是增加硝化细菌与营养物质、溶解氧的充分接触，C正确；
D、对铵盐降解率越高，培养基中铵盐浓度减小得越多，所以可选择铵盐浓度减小得最多的一组候选菌进行后续培养，D正确。
9．甲、乙、丙是三种微生物，下表I、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在I中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是（ ）
A．甲、乙、丙都是异养微生物
B．甲、乙都是自养微生物、丙是异养微生物
C．甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物
D．甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物
【答案】D
【分析】据表分析：Ⅰ培养基的特点是缺氮，能在这样的培养基上存活的只能是固氮微生物；Ⅱ培养基的特点是没有有机碳源，是培养自养微生物的培养基；Ⅲ培养基是适宜异养微生物生长的培养基。根据表格分析，甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能，而Ⅰ培养基缺氮，说明甲能够自身固氮，属于固氮微生物；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，而甲和乙都不能，Ⅱ培养基中没有有机碳源，说明丙能够合成有机物，属于自养微生物；而丙不能在Ⅰ培养基中生长，说明不能固氮；又不能在Ⅱ培养基中生长，说明不能合成有机物，只能在Ⅲ培养基中生长，说明丙属于异养微生物。
【详解】根据表格分析，甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能，而Ⅰ培养基缺氮，说明甲能够自身固氮，属于固氮微生物；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，而甲和乙都不能，Ⅱ培养基中没有有机碳源，说明丙能够合成有机物，属于自养微生物；而丙不能在Ⅰ培养基中生长，说明不能固氮；又不能在Ⅱ培养基中生长，说明不能合成有机物，只能在Ⅲ培养基中生长，说明丙属于异养微生物，D正确。
10．利用农作物秸秆等纤维质原料生产的乙醇，经加工可制成燃料乙醇，从而减少了对石油资源的依赖，下图为生产燃料乙醇的简要流程，据图分析错误的一项是（ ）
A．要得到微生物A，最好选择富含纤维素的土壤采集土样
B．图中②过程常用的微生物B是酵母菌
C．微生物A和微生物B可利用的碳源相同
D．可用纤维素酶制剂代替微生物A起作用
【答案】C
【分析】土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。
【详解】A、据图分析可知，微生物A可以产生纤维素酶，所以要得到微生物A，最好选择富含纤维素的土壤采集土样，A正确；
B、酒精发酵产生乙醇常用的菌种（微生物B）是酵母菌，B正确；
C、微生物A和微生物B可利用的碳源分别是纤维素和葡萄糖，C错误；
D、生物A之所以能利用纤维质原料是因为其含有纤维素酶，故可用纤维素酶制剂代替微生物A起作用，D正确。
11．将大肠杆菌接种到适宜的细菌培养基上，加盖后，以不同的方式处理，并放置在不同的温度环境中，培养24小时后，观察所得结果列表如下。
根据上述实验结果所作出的下列判断中，错误的是（ ）A．编号A和F比较可知，有大肠杆菌的培养基表面会变浑浊
B．根据编号B和C的观察结果，可知抗生素Y比抗生素X的杀菌能力强
C．将编号E和A的结果比较可知，0℃的环境不适合大肠杆菌生长
D．若揭开编号F的盖子，24小时后可观察到培养基表面会出现浑浊
【答案】B
【分析】分析表格：表中表示将大肠杆菌接种到适宜的细菌培养基上，加盖后，以不同的方式处理，并放置在不同的温度环境中，培养24小时后，观察所得的结果。比较A和F可知有大肠杆菌培养基的表面会变浑浊；比较B和C可知抗生素X比抗生素Y的杀菌能力强；比较E和A可知0℃不适合大肠杆菌生长。
【详解】A、根据对照原则，A、F的区别在于是否接种了大肠杆菌，比较A、F的观察结果，有大肠杆菌培养基的表面会变浑浊，A正确；
B、含有抗生素的纸片覆盖在大肠杆菌的培养基上，可根据培养基表面的浑浊程度判定此种抗生素对大肠杆菌的杀菌能力，即抗生素X比抗生素Y的杀菌能力强，B错误；
C、E、A形成对照，其自变量是温度，可知0℃不适合大肠杆菌生长，C正确；
D、F暴露在空气中后，会自然接种菌种，形成菌落，使培养基表面出现浑浊，D正确。
12．丙草胺（C15H22ClNO2）是一种广泛应用的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。某研究小组从某地土壤中分离获得能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其计数(如下图所示），以期为修复污染土壤提供微生物资源。下列有关叙述错误的是（ ）
A．将培养基调至酸性时，有利于降解菌的生长繁殖
B．利用该方法计数结果往往比显微镜直接计数法偏小
C．以丙草胺为唯一氮源培养基进行培养可提高降解菌的浓度
D．5 号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为 1．7×109个
【答案】A
【分析】1、微生物常见的接种的方法：
（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
【详解】A、培养细菌时，应该将培养基的pH调至中性或弱碱性，A错误；
B、该计数方法为稀释涂布平板法，由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故计数结果比显微镜直接计数法偏小，B正确；
C、若以丙草胺作为唯一氮源，则只有具有降解能力的降解菌能够存活，故可以提高降解菌的浓度，C正确；
D、根据5号试管的数据可知，每克土壤中菌株数为（168+175+167）÷3÷0.1×106=1.7×109个，D正确。
13．酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图I所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基，下列说法错误的是（ ）
A．葡萄酒发酵过程中，缺氧酸性环境、酵母菌产生的次生代谢产物酒精等可抑制杂菌的繁殖
B．用稀释涂布平板法计算出葡萄酒过滤液的活菌数为6.8×109个/L，此数值可能低于实际的活菌数
C．对培养基进行灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法，菌种接种过程中的试管口、瓶口等需灼烧灭菌
D．由图Ⅱ可知，丙瓶培养基浑浊的原因是培养基灭菌不彻底，丁组酵母菌产酒精能力比乙强
【答案】D
【分析】果酒制作过程中的相关实验操作：材料的选择和处理→灭菌→榨汁→发酵。利用葡萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的环境下发酵产酒精。若对菌液计数，需选取菌落数处于30~300的培养皿计数。平均菌落数除以涂布体积乘上稀释倍数求的是每毫升发酵液的微生物数量，还应该再乘10算每升发酵液的微生物数。
【详解】A、利用葡萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的环境下发酵产酒精。次生代谢不是生物生长所必需的，产生的酒精不是酵母菌生长所必需的物质，所以是次生代谢物。大多数杂菌在缺氧、有酒精的环境下无法繁殖，A正确；
B、若对菌液计数，需选取菌落数处于30~300的培养皿计数。平均菌落数除以涂布体积乘上稀释倍数求的是每毫升发酵液的微生物数量，还应该再乘10算每升发酵液的微生物数，故先求平均菌落数为（62+68+74）÷3=68，除以涂布体积0.1mL后等于680个/mL，稀释倍数为1×104，再乘103，最后为6.8×109个/L，计数过程中两个或两个以上细胞连在一起，平板上生长出一个菌落，所以数目偏小，B正确；
C、培养基灭菌采用高压蒸汽灭菌，玻璃器皿、接种用具可采用干热灭菌，接种时的玻璃瓶口等都需在酒精灯火焰处进行灼烧灭菌，C正确；
D、乙、丙、丁挑取不同的菌落培养，丙瓶与乙、丁瓶相同条件培养，但培养液没有酒精产生，且瓶内活菌数量不低，推测丙瓶是通气培养；甲接种无菌水，瓶中无菌，说明培养基灭菌彻底，无菌操作正常，丁组的活菌数比乙组少，但是产生的酒精和乙组一样多，所以丁组产生酒精能力比乙强，D错误。
14．苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品。下列相关叙述错误的是（ ）
A．图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源
B．如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法
C．若图中④为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源
D．使用平板划线法可以在⑥上获得单菌落
【答案】C
【分析】1、从土壤中筛选目的微生物的流程一般为：土壤取样→样品的稀释→涂布培养→挑选能生长的菌落→鉴定。
2、微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、由题干信息分析可知，该实验的目的是从土壤中筛选获得只能降解利用苯酚的细菌菌株，故图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为唯一碳源，以增加目的菌的浓度，A正确；
B、如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法，B正确；
C、④与⑤培养基的主要区别是④的培养基不加入苯酚作碳源，⑤的培养基加入苯酚作碳源，这样才能形成对照，C错误；
D、平板划线法和稀释涂布平板法都可能在培养基上形成单个菌落，D正确。
二、综合题
15．测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。流程如图所示，滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝的培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目。据图回答问题：
(1)过滤待测水样用到的滤杯、滤膜和滤瓶首先需要进行消毒灭菌处理，保证实验不受其它微生物干扰。与过滤有关的操作都要在___________________旁进行。
(2)将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的_______________操作。从物理状态角度分析，EMB培养基属于_______________培养基，制备培养基时需要采用_______________法灭菌。
(3)某生物兴趣小组的某同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10ml待测水样加入到90ml无菌水中，稀释后的100ml菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为124，黑色菌落数平均为31，则推测1升待测水样中的大肠杆菌数目为___________________个。
(4)该同学进一步思考，利用滤膜法也可能用于测定待测水样中其他微生物的数目。他取了两份水样，一份待测水样来自变酸的果酒，从中检测到两种微生物，它们在结构上的主要区别是___________________。另一份来自某公园的观赏湖，若要通过测量蓝细菌的数目来研究水华，培养基配方中则必需添加___________________（水、无机盐、碳源、氮源）。
【答案】(1)酒精灯火焰
(2) 接种 固体 高压蒸汽灭菌
(3)3100
(4) 有无核膜为界限的（成形的）细胞核 水、无机盐、氮源
【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。
（1）与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行，这是因为酒精灯火焰旁存在无菌区域，能够减少杂菌污染。
（2）将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的接种操作。从物理性质角度分析，EMB培养基能够让微生物在培养基上形成菌落，属于固体培养基。培养基通常采用高压蒸汽灭菌法灭菌。
（3）某同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10mL待测水样加入到90mL无菌水中，即稀释了10倍，稀释后的100ml菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为124，黑色菌落数平均为31，黑色菌落为大肠杆菌，则推测1升待测水样中的大肠杆菌数目为31÷100×10×1000=3100个。
（4）变酸的果酒里含有酵母菌和醋酸杆菌，酵母菌属于真核生物中的真菌，醋酸杆菌属于原核生物，它们在结构上的主要区别是有无核膜为界限的（成形的）细胞核。若要通过测量蓝细菌的数目来研究水华，结合蓝细菌是自养型微生物，能够利用光合作用合成自身所需的有机物，碳源来自空气中的二氧化碳，故培养基配方中则必需添加水、无机盐、氮源。
16．在我国，乐果是一种广泛使用的有机磷农药，对乐果污染的土壤进行微生物修复一直是科学家研究的热点。现要从土壤中筛选能有效降解乐果的微生物，回答下列问题：
(1)用于筛选的样品应来自________________的土壤。
(2)微生物驯化是指在培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，得到对此种物质耐受或者能降解此种物质的微生物的过程。该实验中，所用驯化培养基含有蛋白胨10．0g、氯化钠1．0g、磷酸二氢钾1．0g、水1L、葡萄糖1．0g，其中的蛋白胨可提供____________等营养要素，氯化钠和磷酸二氢钾除提供无机盐外，在培养基中还分别具有____________的作用，驯化时，培养液逐步加大浓度的物质为________________________。
(3)将驯化后的微生物进行平板划线纯种分离时，不需要进行一定倍数的梯度稀释，原因是____________________________________从分离得到的单一菌落中挑取菌种，接种于牛肉膏斜面培养基中适宜温度下培养48小时后，可在____________℃冰箱中临时保藏。
(4)从不同斜面培养基中取菌株进行活化后制成菌悬液，接种于以乐果原液为碳源的培养液中，适宜温度振荡培养24小时后，通过测定培养瓶中____________，可筛选出分解乐果能力较强的微生物。
(5)若要探究某菌株对乐果的降解能力与乐果浓度的关系，实验的设计思路为____________________________________________________。
【答案】(1)常年施用乐果
(2) 碳源、氮源（和维生素） 调节渗透压、充当缓冲物质 乐果
(3) 通过在平板上连续划线，可将聚集的菌种逐步稀释分散，分离获得单菌落 4
(4)乐果的剩余量
(5)在不同浓度的乐果溶液中，接种相同量的该菌株，一定时间后测定乐果的剩余量（并计算乐果的降解率）
【分析】各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。牛肉膏在培养基中的作用是为微生物生长提供碳源、氮源、生长因子等。
【详解】（1）本题是要从土壤中筛选能有效降解乐果的微生物，因此在乐果污染的土壤中该微生物数量较多，所以用于筛选的样品应来自常年施用乐果的土壤中。
（2）蛋白胨是含C和N的有机物，可为微生物生长提供碳源、氮源（和维生素）。氯化钠和磷酸二氢钾除提供无机盐外，在培养基中还分别具有调节渗透压、充当缓冲物质的作用，驯化时，培养液逐步加大浓度的物质为乐果，目的是筛选能有效降解乐果的微生物。
（3）平板划线法是通过在平板上连续划线，可将聚集的菌种逐步稀释分散，分离获得单菌落，因此不需要梯度稀释。临时保藏需要将挑取的菌种接种于牛肉膏斜面培养基中适宜温度下培养48小时后，并在4℃冰箱中临时保藏。
（4）单位时间内剩余的乐果量越少，说明筛选出的微生物分解乐果的能力越强，因此通过测定培养瓶中乐果的剩余量，可筛选出分解乐果能力较强的微生物。
（5）若要探究某菌株对乐果的降解能力与乐果浓度的关系，则自变量为乐果的浓度，因变量为乐果的剩余量，其余无关变量应相同且适宜，因此实验设计的思路为：在不同浓度的乐果溶液中，接种相同量的该菌株，一定时间后测定乐果的剩余量（并计算乐果的降解率）。
17．每家每天都会产生一定数量的厨余垃圾，这类垃圾富含有机物，极易腐烂变质。某厂家对研制的微生物处理机进行宣传时称几小时能降解10公斤烂菜叶、腥臭的烂鱼虾等。研发微生物处理机的过程中，研究人员需从厨余垃圾中分离纯化出高效分解垃圾的微生物。回答下列问题：
(1)分离纯化分解菌的过程中需用到固体培养基和液体培养基，对配制的培养基常采用_________法灭菌；检测培养基灭菌是否彻底，可采用的方法是__________。
(2)分离分解菌时，需先将厨余垃圾样品提取液进行梯度稀释，原因是_______；测定培养液中分解菌的数量时，需做三个重复试验，目的是________。
(3)若整个分离过程中没有受到杂菌污染，但培养基上出现了多种特征的菌落，这说明_______。统计平板上的菌落数时，一般在固定的时间选取菌落数目稳定时的记录作为统计结果，这样做的目的是_______。
(4)长期保存高效分解菌菌种时，可采用_________法。
【答案】(1) 高压蒸汽灭菌 将未接种的培养基置于适宜条件下培养一段时间，观察是否有菌落产生
(2) 菌液中细菌浓度较大，直接涂布培养很难分离获得单菌落 减小实验误差
(3) 多种微生物都能分解厨余垃圾（或分解菌不止一种） 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落
(4)甘油管藏
【分析】1、菌种的保存：①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏法；②对于需要长时间保存的菌种，可以采用甘油管藏法。
2、灭菌方法：①灼烧灭菌适用于接种工具；②干热灭菌适用于玻璃器皿、金属用具；③高压蒸汽灭菌使用于培养基及容器。
(1)灭菌方法包括灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌，其中对培养基及容器需用高压蒸汽灭菌。要判断培养基灭菌是否彻底，可采用的方法是将灭菌后的培养基培养一段时间后观察是否出现菌落，若出现，说明灭菌不彻底。
(2)分离分解菌时若不进行稀释，菌液中细菌浓度会较大，难以获得单菌落。则在测定培养液中分解菌的数量时，需至少做三个重复实验，起相互对照的作用，其目的是排除偶然因素产生的误差对实验结果的影响。
(3)若在整个分离过程中无杂菌污染，培养基上出现多种菌落特征，则最可能的原因是分解菌的种类较多，形成不同的菌落，而多种微生物都能分解厨余垃圾。每隔段时间统计一次，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样做的目的是防止因培养时间不足而导致菌落遗漏。
(4)甘油管藏法适用于长期保存的菌种。利用液体培养基在零下20℃条件下将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存。
18．自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自身固氨菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图。请回答：
(1)步骤①土样应取自当地____________（填“表层”或“深层”）土壤；步骤②需充分振荡20min，主要目的是____________。
(2)步骤③将土壤悬浮液稀释了____________倍，步骤④所用的接种工具是____________。
(3)下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的____________培养基，并加入琼脂后进行高压蒸汽灭菌、倒平板。纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是_______。
Ashby培养基：甘露醇（C6H14O6）10g，KH2PO40．2g，MgSO4·7H2O0．2g，NaCl0．2g，K2SO40．3g，CaCO35g，蒸馏水1000mL。
LB培养基：蛋白胨1g，酵母提取物5g，NaCl5g，蒸馏水1000mL，pH7．0-7．2
(4)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12为进一步鉴定其固氮，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30d后测定土壤微生物有机氮含量，结果如下图。
CK：对照处理组
N：尿素处理组（每盆土壤中50mL有全营养液：成份为在1000mL无氮植物营养液中加入0．12g尿素）
CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇50mL接种自身固氮菌的无氮植物营养液）
①对照组（CK）的处理为____________。
②实验结果表明：施用尿素处理和接种固氮菌CM12处理均能显著增加土壤微生物有机氮含量。与尿素处理组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加了约____________%。
③自生固氨菌较共生固氮菌（如根瘤菌）的应用范围更广，原因是____________。
【答案】(1) 表层 使土壤中的微生物充分释放到无菌水中
(2) 1000 涂布器
(3) Ashby培养基 检测培养过程中培养基是否被杂菌污染
(4) 每盆土壤浇50mL无氮植物营养液 83．3 自生固氮菌能在土壤中独立固氮，不受宿主的限制
【分析】1、微生物常见的接种的方法
（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质；在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物种和氧气的要求。
（1）土壤中含有丰富微生物，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大、种类最多。在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长，故步骤①土样应取自当地表层土壤；步骤②需充分振荡20min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中。
（2）由图观察可知，步骤③中的稀释梯度分别为10、100、1000倍，实验中取样进行培养的是稀释倍数为1000的试管，实验采用的是稀释涂布平板法，所以步骤④中所用的接种工具是涂布器。
（3）由题干信息分析可知，科研人员的目的是分离土壤中自生固氮菌，故为了模拟类似的生长环境，培养基中需要添加多种无机盐来模拟土壤环境，同时不能有含氮物质，因此步骤④应选择其中的Ashby培养基；纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是检测培养过程中培养基是否被杂菌污染。
（4）①对照组的目的是排除无关变量对实验的影响，故对照组（CK）的处理为每盆土壤浇50mL无氮植物营养液。
②由柱状图可知，空白对照组中土壤微生物有机氨含量为10，故尿素处理组的土壤微生物有机氨含量为12-10=2，而CM12处理组土壤微生物有机氮含量为22-10=12，故与尿素处理组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加值大概为（1-（2÷12））×100%=83.3%。
③自生固氮菌较共生固氮菌（如根瘤菌）的应用范围更广，原因是自生固氮菌能在土壤中独立固氮，不受宿主的限制。
【点睛】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记相关知识，意在考查考生理解所学知识并能从题目所给的图形中获取有效信息的能力。粉状硫10g
K2HPO4 4g
FeSO4 0．5g
蔗糖10g
（NH4）2SO4 0．4g
H2O 100ml
MgSO4 9．25g
CaCl2 0．5g
Ⅰ
+
+
+
+
-
+
+
+
Ⅱ
+
+
+
-
+
+
+
+
Ⅲ
+
+
+
+
+
+
+
+
编号
处理方法
温度
结果
A
接种大肠杆菌
40℃
全表面呈浑浊
B
接种大肠杆菌并覆盖一吸有抗生素X的圆纸片
40℃
纸片周围呈现一片清晰区，其余表面呈浑浊
C
接种大肠杆菌并覆盖一吸有抗生素Y的圆纸片
40℃
全表面呈浑浊
D
接种大肠杆菌，表面全被醋覆盖
40℃
全表面清晰
E
接种大肠杆菌
0℃
全表面清晰
F
未接菌种
40℃
全表面清晰
1．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数，原因是（ ）
A．菌落中的细菌数目是固定的
B．平板上的一个菌落就是一个细菌
C．通过此方法统计的菌落数与活菌的实际数目相同
D．平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌
【答案】D
【分析】稀释涂布平板法:将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】用稀释涂布平板法进行微生物计数时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品大约含有多少活菌，D正确，ABC错误。
2．由于石油等不可再生资源供应日趋紧张，开发各种再生纤维素纤维成为获取新型纺织原料的主要渠道，而纤维素分解菌在转化可再生纤维素方面具有巨大的应用价值。下列相关叙述错误的是（ ）
A．富集纤维素分解菌时，应用固体培养基培养
B．分离纤维素分解菌时，培养基中应加入适量的刚果红
C．可用平板划线法对纤维素分解菌进行纯化培养
D．培养纤维素分解菌时，接种后的培养基需倒置
【答案】A
【分析】1、筛选纤维素分解菌应用以纤维素为唯一碳源的择选培养基。
2、刚果红可以与纤维素形成红色复合物，纤维素分解菌产生的纤维素酶可以水解纤维素而使菌落周围出现透明圈，所以可以用刚果红染液鉴别纤维素分解菌。
【详解】A、在分离出纤维素分解菌之前，需对微生物进行富集培养，此时应用液体培养基，利于培养液与微生物充分接触，加速微生物繁殖，A错误；
B、在分离纤维素分解菌时，培养基以纤维素作为唯一碳源，且应加入刚果红染液，B正确；
C、对纤维素分解菌进行纯化培养时，可采用平板划线法或稀释涂布平板法， C正确；
D、接种后，为防止皿盖上凝结的水珠滴落在培养基上造成培养基污染，应将培养基进行倒置培养，D正确。
故选A。
3．如图为分离和纯化分解甲醛的细菌的实验过程，其中LB培养基能使菌种成倍扩增，以下说法正确的是（ ）
A．需要对活性污泥作灭菌处理
B．②中LB培养基只能以甲醛为唯一碳源
C．目的菌种异化作用类型为厌氧型
D．经⑤处理后，应选择瓶中甲醛浓度最低的一组进一步纯化培养
【答案】D
【分析】据图分析：在分离和纯化分解甲醛的细菌的过程中，通过①过程制取各种菌的悬浊液，②过程用完全培养基培养后，可以获得大量微生物，从而增加目的菌的菌群数量；③中的培养基中的碳源只含有甲醛，只有可以分解甲醛的细菌能够存活，通过③过程可以筛选出能分解甲醛的微生物；④过程可以获得单个菌落，获得单个菌落过程中常用的接种方法是平板划线法或者稀释涂布平板法，为避免水滴污染培养基，在恒温培养箱中培养时，培养皿须倒置；经过⑤过程后，取样测定甲醛浓度，选出甲醛浓度最低的培养瓶，再分离、培养菌株。
【详解】A、该实验是从活性污泥中分离和纯化能分解甲醛的细菌，故不需要对活性污泥作灭菌处理，A错误；
B、②过程用完全培养基培养后，可以获得大量微生物，从而增加目的菌的菌群数量，故②中LB培养基不是以甲醛为唯一碳源；③过程可以筛选出能分解甲醛的微生物，需要以甲醛为唯一碳源的培养基，B错误；
C、图示分解甲醛的细菌是在培养皿中进行的，故目的菌种异化作用类型属于需氧型细菌，C错误；
D、经⑤处理后，瓶中甲醛浓度降低，甲醛浓度最低的一组中分解甲醛的细菌纯度最高，可进一步纯化培养，D正确。
4．某生物学兴趣小组尝试对土壤中分解尿素的细菌进行分离并计数，相关叙述正确的是（ ）
A．制备选择培养基时，需加入尿素、琼脂、葡萄糖、硝酸盐等物质
B．用稀释涂布平板法统计结果，活菌的实际数目往往比统计的菌落数低
C．脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH降低，加入酚红指示剂后变红
D．每毫升菌液中微生物细胞的数量=某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数
【答案】D
【分析】1、稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。稀释涂布平板法进行计数时，应选择30-300的菌落数进行计数。
2、间接计数法（活菌计数法） 的原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌．通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
3、如果要分离土壤中能分解尿素的细菌，应选择以尿素为唯一氮源的培养基；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，PH增高，使指示剂变红色
【详解】A、分离土壤中分解尿素的细菌，培养基中要有尿素、琼脂、葡萄糖，尿素给分解尿素的细菌提供氮源，不能加硝酸盐，否则无法起到选择出尿素分解菌的作用，A错误；
B、用稀释涂布平板法统计结果时，有的活菌在培养过程中会死亡，而有的菌落是由多个活菌共同形成的，故活菌的实际数目往往比统计的菌落数高，B错误；
C、脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH升高，加入酚红指示剂后变红，C错误；
D、根据活菌计数法的计数公式可知，每毫升菌液中微生物细胞的数量=某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数，D正确。
【点睛】本题考查了微生物的分离和培养的有关知识。考生要识记和掌握利用培养基对土壤中分解尿素的细菌进行选择和鉴定的方法和原理，利用分析与综合的科学思维，结合所学的知识准确答题。
5．在“果醋制作过程”中，获得较多的醋酸杆菌菌种的最简便方法是（ ）
A．不必人为加入菌种，在葡萄等水果表面本身就存在大量醋酸杆菌
B．从变酸的葡萄酒表面获得菌膜，再培养、分离
C．从泡菜坛盖边沿的水槽中的表面获得菌膜，再培养、分离
D．从土壤中分离提取
【答案】B
【分析】参与果醋制作的菌种是醋酸杆菌，醋酸杆菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足的时候才能进行旺盛的生理活动。变酸的酒的表面观察的菌膜就是醋酸杆菌在液面上大量繁殖而形成的，因此从变酸的葡萄酒表面获得菌膜，再培养、分离可以获得较多的醋酸杆菌菌种。
【详解】A、在葡萄等水果表面存在大量的酵母菌，不是醋酸杆菌，A错误；
B、变酸的葡萄酒表面的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的，可以用此菌膜培养、分离获得醋酸菌，B正确；
C、泡菜坛盖边沿的水槽中的表面获得菌膜是酵母菌形成的，C错误；
D、土壤中有多种微生物，不容易分离出醋酸菌，D错误；
6．稀释涂布平板法不仅是分离和纯化微生物的重要方法，也是测定微生物数量的重要方法。用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在统计数据时应（ ）
A．随机抽取某个稀释度的培养基，统计菌落数
B．将不同稀释度的3个培养基上的菌落数求和
C．将相同稀释度的全部培养基上的菌落进行计数
D．随机抽取相同稀释度的3个培养基统计菌落数后求平均值
【答案】D
【分析】检测土壤中细菌总数，可以看出采用的计数方法是稀释涂布平板法进行计数。用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，选择菌落数在30～300的进行记数，求取平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数。
【详解】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数。
7．某同学利用选择培养基成功分离出了土壤中的自生固氮菌，得到了如图所示的实验结果，以下说法正确的是（ ）
A．该实验使用了划线法接种
B．该实验使用了液体培养基
C．该实验使用了无碳培养基
D．该实验使用了无氮培养基
【答案】D
【分析】自生固氮菌可以利用空气中氮气为氮源，所以培养基中不需要添加氮源，自生固氮菌就能生长，而在没有氮源的培养基上其它不能固氮的微生物不能生长，所以该培养基可用于筛选自生固氮菌。
【详解】A、稀释涂布平板法是将菌液稀释成不同浓度进行涂布，而平板划线法是挑取单个菌落在平板上划线，据此可判断该实验中将土壤浸出液接种到培养基的方法为稀释涂布平板法，A错误；
B、图示中是将土壤浸出液接种到无氮培养基上选择自生固氮菌的过程，该培养基属于固体培养基，B错误；
C、自生固氮微生物属于异养微生物，没有碳源不能生长，所以为了保证自生固氮菌的生长培养基中应添加碳源，C错误；
D、由于自生固氮菌可以利用空气中氮气为氮源，而其它不能固氮的微生物不能利用氮气做氮源，所以在无氮的培养基上可以筛选出自生固氮菌，故图示中使用了无氮培养基，D正确。
8．高浓度的铵盐对池塘养殖的对虾有一定的毒害作用，硝化细菌是一种好氧菌，可有效净化水体中铵盐，降低对虾的死亡率。科研人员拟从当地对虾养殖池塘中筛选出对铵盐降解率高且稳定的硝化细菌菌株，操作流程如下图所示。下列叙述错误的是（ ）
A．从对虾死亡率低的养殖池塘中取样，能提高筛选的成功率
B．纯化菌种时，若按图中所示的接种方法接种，接种环需要灼烧5次
C．在锥形瓶中培养硝化细菌时需要振荡培养，目的是增加硝化细菌与营养物质、溶解氧的充分接触
D．可选择铵盐浓度减小得最多的一组候选菌进行后续培养
【答案】B
【分析】1、微生物常见的接种的方法：
(1)平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生 长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
(2)稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、振荡培养：提供充足氧气、并使细菌与营养物质充分接触，扩大培养。
【详解】A、本题想要筛选出对铵盐降解率高且稳定的硝化细菌菌株，那么从对虾死亡率低的养殖池塘中取样，能提高筛选的成功率，A正确；
B、纯化菌种时，采用图示方法接种时，每次划线前后都要灼烧接种环，共有5个划线区域，因此接种环需要灼烧6次，B错误；
C、已知硝化细菌是好氧性细菌，则扩大培养时需要振荡的目的是增加硝化细菌与营养物质、溶解氧的充分接触，C正确；
D、对铵盐降解率越高，培养基中铵盐浓度减小得越多，所以可选择铵盐浓度减小得最多的一组候选菌进行后续培养，D正确。
9．甲、乙、丙是三种微生物，下表I、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在I中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是（ ）
A．甲、乙、丙都是异养微生物
B．甲、乙都是自养微生物、丙是异养微生物
C．甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物
D．甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物
【答案】D
【分析】据表分析：Ⅰ培养基的特点是缺氮，能在这样的培养基上存活的只能是固氮微生物；Ⅱ培养基的特点是没有有机碳源，是培养自养微生物的培养基；Ⅲ培养基是适宜异养微生物生长的培养基。根据表格分析，甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能，而Ⅰ培养基缺氮，说明甲能够自身固氮，属于固氮微生物；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，而甲和乙都不能，Ⅱ培养基中没有有机碳源，说明丙能够合成有机物，属于自养微生物；而丙不能在Ⅰ培养基中生长，说明不能固氮；又不能在Ⅱ培养基中生长，说明不能合成有机物，只能在Ⅲ培养基中生长，说明丙属于异养微生物。
【详解】根据表格分析，甲能在Ⅰ中正常生长繁殖，而乙和丙都不能，而Ⅰ培养基缺氮，说明甲能够自身固氮，属于固氮微生物；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，而甲和乙都不能，Ⅱ培养基中没有有机碳源，说明丙能够合成有机物，属于自养微生物；而丙不能在Ⅰ培养基中生长，说明不能固氮；又不能在Ⅱ培养基中生长，说明不能合成有机物，只能在Ⅲ培养基中生长，说明丙属于异养微生物，D正确。
10．利用农作物秸秆等纤维质原料生产的乙醇，经加工可制成燃料乙醇，从而减少了对石油资源的依赖，下图为生产燃料乙醇的简要流程，据图分析错误的一项是（ ）
A．要得到微生物A，最好选择富含纤维素的土壤采集土样
B．图中②过程常用的微生物B是酵母菌
C．微生物A和微生物B可利用的碳源相同
D．可用纤维素酶制剂代替微生物A起作用
【答案】C
【分析】土壤中存在着大量纤维素分解酶，包括真菌、细菌和放线菌等，它们可以产生纤维素酶。纤维素酶是一种复合酶，可以把纤维素分解为纤维二糖，进一步分解为葡萄糖使微生物加以利用，故在用纤维素作为唯一碳源的培养基中，纤维素分解菌能够很好地生长，其他微生物则不能生长。
【详解】A、据图分析可知，微生物A可以产生纤维素酶，所以要得到微生物A，最好选择富含纤维素的土壤采集土样，A正确；
B、酒精发酵产生乙醇常用的菌种（微生物B）是酵母菌，B正确；
C、微生物A和微生物B可利用的碳源分别是纤维素和葡萄糖，C错误；
D、生物A之所以能利用纤维质原料是因为其含有纤维素酶，故可用纤维素酶制剂代替微生物A起作用，D正确。
11．将大肠杆菌接种到适宜的细菌培养基上，加盖后，以不同的方式处理，并放置在不同的温度环境中，培养24小时后，观察所得结果列表如下。
根据上述实验结果所作出的下列判断中，错误的是（ ）A．编号A和F比较可知，有大肠杆菌的培养基表面会变浑浊
B．根据编号B和C的观察结果，可知抗生素Y比抗生素X的杀菌能力强
C．将编号E和A的结果比较可知，0℃的环境不适合大肠杆菌生长
D．若揭开编号F的盖子，24小时后可观察到培养基表面会出现浑浊
【答案】B
【分析】分析表格：表中表示将大肠杆菌接种到适宜的细菌培养基上，加盖后，以不同的方式处理，并放置在不同的温度环境中，培养24小时后，观察所得的结果。比较A和F可知有大肠杆菌培养基的表面会变浑浊；比较B和C可知抗生素X比抗生素Y的杀菌能力强；比较E和A可知0℃不适合大肠杆菌生长。
【详解】A、根据对照原则，A、F的区别在于是否接种了大肠杆菌，比较A、F的观察结果，有大肠杆菌培养基的表面会变浑浊，A正确；
B、含有抗生素的纸片覆盖在大肠杆菌的培养基上，可根据培养基表面的浑浊程度判定此种抗生素对大肠杆菌的杀菌能力，即抗生素X比抗生素Y的杀菌能力强，B错误；
C、E、A形成对照，其自变量是温度，可知0℃不适合大肠杆菌生长，C正确；
D、F暴露在空气中后，会自然接种菌种，形成菌落，使培养基表面出现浑浊，D正确。
12．丙草胺（C15H22ClNO2）是一种广泛应用的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。某研究小组从某地土壤中分离获得能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其计数(如下图所示），以期为修复污染土壤提供微生物资源。下列有关叙述错误的是（ ）
A．将培养基调至酸性时，有利于降解菌的生长繁殖
B．利用该方法计数结果往往比显微镜直接计数法偏小
C．以丙草胺为唯一氮源培养基进行培养可提高降解菌的浓度
D．5 号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为 1．7×109个
【答案】A
【分析】1、微生物常见的接种的方法：
（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。
【详解】A、培养细菌时，应该将培养基的pH调至中性或弱碱性，A错误；
B、该计数方法为稀释涂布平板法，由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故计数结果比显微镜直接计数法偏小，B正确；
C、若以丙草胺作为唯一氮源，则只有具有降解能力的降解菌能够存活，故可以提高降解菌的浓度，C正确；
D、根据5号试管的数据可知，每克土壤中菌株数为（168+175+167）÷3÷0.1×106=1.7×109个，D正确。
13．酵母菌的品质影响葡萄酒的产量和质量，研究人员为分离出产酒精能力强的酵母菌菌株，进行了如图I所示实验，甲、乙、丙、丁锥形瓶内分别加入100mL完全培养基，下列说法错误的是（ ）
A．葡萄酒发酵过程中，缺氧酸性环境、酵母菌产生的次生代谢产物酒精等可抑制杂菌的繁殖
B．用稀释涂布平板法计算出葡萄酒过滤液的活菌数为6.8×109个/L，此数值可能低于实际的活菌数
C．对培养基进行灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法，菌种接种过程中的试管口、瓶口等需灼烧灭菌
D．由图Ⅱ可知，丙瓶培养基浑浊的原因是培养基灭菌不彻底，丁组酵母菌产酒精能力比乙强
【答案】D
【分析】果酒制作过程中的相关实验操作：材料的选择和处理→灭菌→榨汁→发酵。利用葡萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的环境下发酵产酒精。若对菌液计数，需选取菌落数处于30~300的培养皿计数。平均菌落数除以涂布体积乘上稀释倍数求的是每毫升发酵液的微生物数量，还应该再乘10算每升发酵液的微生物数。
【详解】A、利用葡萄皮表面野生型酵母菌在缺氧的环境下发酵产酒精。次生代谢不是生物生长所必需的，产生的酒精不是酵母菌生长所必需的物质，所以是次生代谢物。大多数杂菌在缺氧、有酒精的环境下无法繁殖，A正确；
B、若对菌液计数，需选取菌落数处于30~300的培养皿计数。平均菌落数除以涂布体积乘上稀释倍数求的是每毫升发酵液的微生物数量，还应该再乘10算每升发酵液的微生物数，故先求平均菌落数为（62+68+74）÷3=68，除以涂布体积0.1mL后等于680个/mL，稀释倍数为1×104，再乘103，最后为6.8×109个/L，计数过程中两个或两个以上细胞连在一起，平板上生长出一个菌落，所以数目偏小，B正确；
C、培养基灭菌采用高压蒸汽灭菌，玻璃器皿、接种用具可采用干热灭菌，接种时的玻璃瓶口等都需在酒精灯火焰处进行灼烧灭菌，C正确；
D、乙、丙、丁挑取不同的菌落培养，丙瓶与乙、丁瓶相同条件培养，但培养液没有酒精产生，且瓶内活菌数量不低，推测丙瓶是通气培养；甲接种无菌水，瓶中无菌，说明培养基灭菌彻底，无菌操作正常，丁组的活菌数比乙组少，但是产生的酒精和乙组一样多，所以丁组产生酒精能力比乙强，D错误。
14．苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品。下列相关叙述错误的是（ ）
A．图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源
B．如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法
C．若图中④为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源
D．使用平板划线法可以在⑥上获得单菌落
【答案】C
【分析】1、从土壤中筛选目的微生物的流程一般为：土壤取样→样品的稀释→涂布培养→挑选能生长的菌落→鉴定。
2、微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、由题干信息分析可知，该实验的目的是从土壤中筛选获得只能降解利用苯酚的细菌菌株，故图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为唯一碳源，以增加目的菌的浓度，A正确；
B、如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法，B正确；
C、④与⑤培养基的主要区别是④的培养基不加入苯酚作碳源，⑤的培养基加入苯酚作碳源，这样才能形成对照，C错误；
D、平板划线法和稀释涂布平板法都可能在培养基上形成单个菌落，D正确。
二、综合题
15．测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。流程如图所示，滤膜法的大致流程：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝的培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目。据图回答问题：
(1)过滤待测水样用到的滤杯、滤膜和滤瓶首先需要进行消毒灭菌处理，保证实验不受其它微生物干扰。与过滤有关的操作都要在___________________旁进行。
(2)将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的_______________操作。从物理状态角度分析，EMB培养基属于_______________培养基，制备培养基时需要采用_______________法灭菌。
(3)某生物兴趣小组的某同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10ml待测水样加入到90ml无菌水中，稀释后的100ml菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为124，黑色菌落数平均为31，则推测1升待测水样中的大肠杆菌数目为___________________个。
(4)该同学进一步思考，利用滤膜法也可能用于测定待测水样中其他微生物的数目。他取了两份水样，一份待测水样来自变酸的果酒，从中检测到两种微生物，它们在结构上的主要区别是___________________。另一份来自某公园的观赏湖，若要通过测量蓝细菌的数目来研究水华，培养基配方中则必需添加___________________（水、无机盐、碳源、氮源）。
【答案】(1)酒精灯火焰
(2) 接种 固体 高压蒸汽灭菌
(3)3100
(4) 有无核膜为界限的（成形的）细胞核 水、无机盐、氮源
【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。
（1）与过滤有关的操作都要在酒精灯火焰旁进行，这是因为酒精灯火焰旁存在无菌区域，能够减少杂菌污染。
（2）将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的接种操作。从物理性质角度分析，EMB培养基能够让微生物在培养基上形成菌落，属于固体培养基。培养基通常采用高压蒸汽灭菌法灭菌。
（3）某同学尝试按照上述方法进行测定，无菌操作下将10mL待测水样加入到90mL无菌水中，即稀释了10倍，稀释后的100ml菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为124，黑色菌落数平均为31，黑色菌落为大肠杆菌，则推测1升待测水样中的大肠杆菌数目为31÷100×10×1000=3100个。
（4）变酸的果酒里含有酵母菌和醋酸杆菌，酵母菌属于真核生物中的真菌，醋酸杆菌属于原核生物，它们在结构上的主要区别是有无核膜为界限的（成形的）细胞核。若要通过测量蓝细菌的数目来研究水华，结合蓝细菌是自养型微生物，能够利用光合作用合成自身所需的有机物，碳源来自空气中的二氧化碳，故培养基配方中则必需添加水、无机盐、氮源。
16．在我国，乐果是一种广泛使用的有机磷农药，对乐果污染的土壤进行微生物修复一直是科学家研究的热点。现要从土壤中筛选能有效降解乐果的微生物，回答下列问题：
(1)用于筛选的样品应来自________________的土壤。
(2)微生物驯化是指在培养过程中，逐步加入某种物质，让其逐渐适应，得到对此种物质耐受或者能降解此种物质的微生物的过程。该实验中，所用驯化培养基含有蛋白胨10．0g、氯化钠1．0g、磷酸二氢钾1．0g、水1L、葡萄糖1．0g，其中的蛋白胨可提供____________等营养要素，氯化钠和磷酸二氢钾除提供无机盐外，在培养基中还分别具有____________的作用，驯化时，培养液逐步加大浓度的物质为________________________。
(3)将驯化后的微生物进行平板划线纯种分离时，不需要进行一定倍数的梯度稀释，原因是____________________________________从分离得到的单一菌落中挑取菌种，接种于牛肉膏斜面培养基中适宜温度下培养48小时后，可在____________℃冰箱中临时保藏。
(4)从不同斜面培养基中取菌株进行活化后制成菌悬液，接种于以乐果原液为碳源的培养液中，适宜温度振荡培养24小时后，通过测定培养瓶中____________，可筛选出分解乐果能力较强的微生物。
(5)若要探究某菌株对乐果的降解能力与乐果浓度的关系，实验的设计思路为____________________________________________________。
【答案】(1)常年施用乐果
(2) 碳源、氮源（和维生素） 调节渗透压、充当缓冲物质 乐果
(3) 通过在平板上连续划线，可将聚集的菌种逐步稀释分散，分离获得单菌落 4
(4)乐果的剩余量
(5)在不同浓度的乐果溶液中，接种相同量的该菌株，一定时间后测定乐果的剩余量（并计算乐果的降解率）
【分析】各种培养基一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。牛肉膏在培养基中的作用是为微生物生长提供碳源、氮源、生长因子等。
【详解】（1）本题是要从土壤中筛选能有效降解乐果的微生物，因此在乐果污染的土壤中该微生物数量较多，所以用于筛选的样品应来自常年施用乐果的土壤中。
（2）蛋白胨是含C和N的有机物，可为微生物生长提供碳源、氮源（和维生素）。氯化钠和磷酸二氢钾除提供无机盐外，在培养基中还分别具有调节渗透压、充当缓冲物质的作用，驯化时，培养液逐步加大浓度的物质为乐果，目的是筛选能有效降解乐果的微生物。
（3）平板划线法是通过在平板上连续划线，可将聚集的菌种逐步稀释分散，分离获得单菌落，因此不需要梯度稀释。临时保藏需要将挑取的菌种接种于牛肉膏斜面培养基中适宜温度下培养48小时后，并在4℃冰箱中临时保藏。
（4）单位时间内剩余的乐果量越少，说明筛选出的微生物分解乐果的能力越强，因此通过测定培养瓶中乐果的剩余量，可筛选出分解乐果能力较强的微生物。
（5）若要探究某菌株对乐果的降解能力与乐果浓度的关系，则自变量为乐果的浓度，因变量为乐果的剩余量，其余无关变量应相同且适宜，因此实验设计的思路为：在不同浓度的乐果溶液中，接种相同量的该菌株，一定时间后测定乐果的剩余量（并计算乐果的降解率）。
17．每家每天都会产生一定数量的厨余垃圾，这类垃圾富含有机物，极易腐烂变质。某厂家对研制的微生物处理机进行宣传时称几小时能降解10公斤烂菜叶、腥臭的烂鱼虾等。研发微生物处理机的过程中，研究人员需从厨余垃圾中分离纯化出高效分解垃圾的微生物。回答下列问题：
(1)分离纯化分解菌的过程中需用到固体培养基和液体培养基，对配制的培养基常采用_________法灭菌；检测培养基灭菌是否彻底，可采用的方法是__________。
(2)分离分解菌时，需先将厨余垃圾样品提取液进行梯度稀释，原因是_______；测定培养液中分解菌的数量时，需做三个重复试验，目的是________。
(3)若整个分离过程中没有受到杂菌污染，但培养基上出现了多种特征的菌落，这说明_______。统计平板上的菌落数时，一般在固定的时间选取菌落数目稳定时的记录作为统计结果，这样做的目的是_______。
(4)长期保存高效分解菌菌种时，可采用_________法。
【答案】(1) 高压蒸汽灭菌 将未接种的培养基置于适宜条件下培养一段时间，观察是否有菌落产生
(2) 菌液中细菌浓度较大，直接涂布培养很难分离获得单菌落 减小实验误差
(3) 多种微生物都能分解厨余垃圾（或分解菌不止一种） 防止因培养时间不足而导致遗漏菌落
(4)甘油管藏
【分析】1、菌种的保存：①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏法；②对于需要长时间保存的菌种，可以采用甘油管藏法。
2、灭菌方法：①灼烧灭菌适用于接种工具；②干热灭菌适用于玻璃器皿、金属用具；③高压蒸汽灭菌使用于培养基及容器。
(1)灭菌方法包括灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌，其中对培养基及容器需用高压蒸汽灭菌。要判断培养基灭菌是否彻底，可采用的方法是将灭菌后的培养基培养一段时间后观察是否出现菌落，若出现，说明灭菌不彻底。
(2)分离分解菌时若不进行稀释，菌液中细菌浓度会较大，难以获得单菌落。则在测定培养液中分解菌的数量时，需至少做三个重复实验，起相互对照的作用，其目的是排除偶然因素产生的误差对实验结果的影响。
(3)若在整个分离过程中无杂菌污染，培养基上出现多种菌落特征，则最可能的原因是分解菌的种类较多，形成不同的菌落，而多种微生物都能分解厨余垃圾。每隔段时间统计一次，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样做的目的是防止因培养时间不足而导致菌落遗漏。
(4)甘油管藏法适用于长期保存的菌种。利用液体培养基在零下20℃条件下将培养的菌液与等体积灭菌后的甘油混合均匀后于冷冻箱内保存。
18．自生固氮菌是土壤中能独立固定空气中N2的细菌，将玉米种子用自身固氨菌拌种后播种，可显著提高产量并降低化肥的使用量。科研人员进行了土壤中自生固氮菌的分离和固氮能力测定的研究，部分实验流程如下图。请回答：
(1)步骤①土样应取自当地____________（填“表层”或“深层”）土壤；步骤②需充分振荡20min，主要目的是____________。
(2)步骤③将土壤悬浮液稀释了____________倍，步骤④所用的接种工具是____________。
(3)下表为两种培养基的配方，步骤④应选其中的____________培养基，并加入琼脂后进行高压蒸汽灭菌、倒平板。纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是_______。
Ashby培养基：甘露醇（C6H14O6）10g，KH2PO40．2g，MgSO4·7H2O0．2g，NaCl0．2g，K2SO40．3g，CaCO35g，蒸馏水1000mL。
LB培养基：蛋白胨1g，酵母提取物5g，NaCl5g，蒸馏水1000mL，pH7．0-7．2
(4)将纯化的固氮菌置于完全培养液中扩大培养48小时，经离心后收集下层细胞并转移至特定培养基中进行固氮能力的测定，筛选出固氮能力最强的菌种CM12为进一步鉴定其固氮，科研人员选用发芽一致的玉米种子进行3组盆栽实验，30d后测定土壤微生物有机氮含量，结果如下图。
CK：对照处理组
N：尿素处理组（每盆土壤中50mL有全营养液：成份为在1000mL无氮植物营养液中加入0．12g尿素）
CM12：自生固氮菌CM12处理组（每盆土壤浇50mL接种自身固氮菌的无氮植物营养液）
①对照组（CK）的处理为____________。
②实验结果表明：施用尿素处理和接种固氮菌CM12处理均能显著增加土壤微生物有机氮含量。与尿素处理组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加了约____________%。
③自生固氨菌较共生固氮菌（如根瘤菌）的应用范围更广，原因是____________。
【答案】(1) 表层 使土壤中的微生物充分释放到无菌水中
(2) 1000 涂布器
(3) Ashby培养基 检测培养过程中培养基是否被杂菌污染
(4) 每盆土壤浇50mL无氮植物营养液 83．3 自生固氮菌能在土壤中独立固氮，不受宿主的限制
【分析】1、微生物常见的接种的方法
（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质；在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物种和氧气的要求。
（1）土壤中含有丰富微生物，同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大、种类最多。在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长，故步骤①土样应取自当地表层土壤；步骤②需充分振荡20min，主要目的是使土壤中的微生物充分释放到无菌水中。
（2）由图观察可知，步骤③中的稀释梯度分别为10、100、1000倍，实验中取样进行培养的是稀释倍数为1000的试管，实验采用的是稀释涂布平板法，所以步骤④中所用的接种工具是涂布器。
（3）由题干信息分析可知，科研人员的目的是分离土壤中自生固氮菌，故为了模拟类似的生长环境，培养基中需要添加多种无机盐来模拟土壤环境，同时不能有含氮物质，因此步骤④应选择其中的Ashby培养基；纯化培养时，需同时进行未接种培养基的培养，目的是检测培养过程中培养基是否被杂菌污染。
（4）①对照组的目的是排除无关变量对实验的影响，故对照组（CK）的处理为每盆土壤浇50mL无氮植物营养液。
②由柱状图可知，空白对照组中土壤微生物有机氨含量为10，故尿素处理组的土壤微生物有机氨含量为12-10=2，而CM12处理组土壤微生物有机氮含量为22-10=12，故与尿素处理组相比，CM12处理组土壤微生物有机氮含量增加值大概为（1-（2÷12））×100%=83.3%。
③自生固氮菌较共生固氮菌（如根瘤菌）的应用范围更广，原因是自生固氮菌能在土壤中独立固氮，不受宿主的限制。
【点睛】本题考查微生物的分离和培养，要求考生识记相关知识，意在考查考生理解所学知识并能从题目所给的图形中获取有效信息的能力。粉状硫10g
K2HPO4 4g
FeSO4 0．5g
蔗糖10g
（NH4）2SO4 0．4g
H2O 100ml
MgSO4 9．25g
CaCl2 0．5g
Ⅰ
+
+
+
+
-
+
+
+
Ⅱ
+
+
+
-
+
+
+
+
Ⅲ
+
+
+
+
+
+
+
+
编号
处理方法
温度
结果
A
接种大肠杆菌
40℃
全表面呈浑浊
B
接种大肠杆菌并覆盖一吸有抗生素X的圆纸片
40℃
纸片周围呈现一片清晰区，其余表面呈浑浊
C
接种大肠杆菌并覆盖一吸有抗生素Y的圆纸片
40℃
全表面呈浑浊
D
接种大肠杆菌，表面全被醋覆盖
40℃
全表面清晰
E
接种大肠杆菌
0℃
全表面清晰
F
未接菌种
40℃
全表面清晰
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