高中生物人教版 (2019)选择性必修3第3节 基因工程的应用示范课课件ppt

这是一份高中生物人教版 (2019)选择性必修3第3节 基因工程的应用示范课课件ppt，共13页。PPT课件主要包含了实验原理，热变性，调节温度，自动调控温度，DNA半保留复制，可解离的基团，带电分子，与它所带电荷相反，琼脂糖凝胶电泳，凝胶的浓度等内容，欢迎下载使用。

1.利用PCR在体外进行DNA片段扩增的原理
①PCR利用了DNA的______原理，通过_________来控制DNA双链的解聚与结合，PCR仪实质上就是一台能够_____________的仪器，一次PCR一般要经历___次循环；
②PCR扩增DNA片段还利用了______________的原理；
2.DNA片段电泳鉴定的原理
①DNA分子具有_____________，在一定的___下，这些基团可以带上正电荷或负电荷，在_____的作用下，这些________会向着________________的电极移动，这个过程就是_____；
②PCR的产物一般通过_______________来鉴定；
③在凝胶中DNA分子的迁移速率与___________、______________和_____等有关
④凝胶中的DNA分子通过_____，可以在波长为______的______下被检测出来。
1、DNA片段的扩增：
2、DNA片段的电泳鉴定：
4种脱氧核苷酸等量混合液、2种引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、扩增缓冲液、无菌水。电泳缓冲液、凝胶载样缓冲液、琼脂糖和核酸染料等。
（1）用微量移液器按照配方或PCR试剂盒的说明书，在微量离心管中依次加入各组分。
（2）待所有的组分都加入后，盖严离心管的盖子。将微量离心管放在离心机上，离心约10s，使反应液集中在管的底部。
（3）参照下表参数，设置好PCR仪的循环程序。将装有反应液的微量离心管放入PCR仪中，设置程序进行反应。
预变性使DNA充分变性以利引物和模板更好结合
（4）用电泳缓冲液配制琼脂糖溶液，常配制质量分数为0.8%～1.2%的琼脂糖溶液，在沸水浴或微波炉熔化，稍冷却加入适量核酸染料混匀。
（5）将温热的琼脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合适大小的梳子，以形成加样孔。待凝胶溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝胶放入电泳槽内。
（6）将电泳缓冲液加入电泳槽中，电泳缓冲液没过凝胶1mm为宜。
（7）将扩增得到的PCR产物与凝胶载样缓冲液（内含指示剂）混合，再用微量移液器将混合液缓慢注入凝胶的加样孔内。留一个加样孔加入指示分子大小的标准参照物。
接通电源，根据电泳槽阴阳极间的距离来设定电压(1～5V/cm)。待指示剂前沿移近凝胶边时停止。
（8）取出凝胶置于紫外灯下观察和照相。
①为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头和蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌处理。②该实验所需材料可以直接从公司购买，缓冲液和酶应分装成小份，并在-20℃储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。③在向微量离心管中添加反应组分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。④在进行操作时，一定要戴好一次性手套。
若扩增不成功，可能的原因有：漏加了PCR的反应成分，各反应成分的用量不当，PCR程序设置不当等。
（2）你进行电泳鉴定的结果是几条条带？若不止一条条带，请分析产生这个结果的可能原因。
若扩增结果不止一条条带，可能的原因有：引物设计不合理，它们与非目的序列有同源性或容易形成二聚体；退火温度过低；DNA聚合酶的质量不好等。
（1）你是否成功扩增出DNA片段？判断的依据是什么？
可以在紫外灯下直接观察到DNA条带的分布及粗细程度来评价扩增的结果。进行电泳鉴定的结果应该是一条条带，该片段大小约为750bp。
探究实践：DNA片段的扩增及电泳鉴定 P84-85