沈阳市辽中区第二高级中学2022-2023学年高二下学期4月月考生物试卷(含答案)

这是一份沈阳市辽中区第二高级中学2022-2023学年高二下学期4月月考生物试卷(含答案)，共15页。试卷主要包含了单选题，多选题，实验探究题，读图填空题等内容，欢迎下载使用。

一、单选题
1．发酵工程的内容包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵和产品的分离、提纯等方面。下列关于发酵工程的认识不科学的是( )
A.发酵工程具有条件温和、产物单一、污染小等特点
B.发酵工程的产品包括微生物的代谢产物、酶和菌体本身
C.通常所指的发酵条件包括温度控制、溶解控制、pH控制
D.发酵工程与传统发酵技术最大的区别是前者可以用微生物进行发酵
2．下列关于传统发酵技术应用的叙述，正确的是( )
A.家庭制作果酒、果醋和泡菜通常都不是纯种发酵
B.利用乳酸菌制作酸奶过程中，先通气培养，后密封发酵
C.酯酸菌是兼性厌氧微生物，是原核生物
D.果醋制作过程中发酵液pH逐渐降低，果酒制作过程中情况相反
3．在分离、纯化细菌的实验中，划线接种（甲）、培养结果（乙）如下图，a、b、c、d是划线的四个区域。下列叙述错误的是( )
A.每次划线前后都要对接种环灼烧灭菌
B. 连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落
C. 甲图中的a区域为划线的起始区域
D. 蘸取菌液和划线要在酒精灯火焰旁进行
4．不同的微生物对营养物质的需求各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是( )
A.氮源物质为该微生物提供必要的氮素
B.碳源物质也是该微生物的能源物质
C.无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D.水是该微生物的营养要素之一
5．最常用的接种微生物的方法是平板划线法和稀释涂布平板法，下列关于二者的比较正确的( )
A. ③④B. ②④C. ①④D. ②③
6．辣椒素作为一种生物被广泛用于食品保健、医药工业等领域,辣椒素的获得途径如下图所示。下列有关叙述不正确的是( )
A.图中①和②分别表示辣椒组织培养中细胞的脱分化和再分化过程
B.对培养基进行灭菌时，应采用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌
C.培养基中生长素与细胞分裂素用量的比值高时,有利于芽的分化
D.提取细胞中的辣椒素时可以先使用纤维索酶和果胶酶破坏细胞壁
7．野生红豆杉是一种濒危植物，其产生的次生代谢物紫杉醇具有高抗癌活性，现在已被广泛用于乳腺癌等癌症的治疗。传统生产紫杉醇的方法是从红豆杉的树皮和树叶中提取，现在可以利用植物细胞工程在反应器中培养红豆杉愈伤组织以大量生产紫杉醇，同时还可以通过组织培养获得红豆杉植株。下列叙述正确的是( )
A. 紫杉醇是红豆杉生长和生存所必需的代谢物
B. 利用愈伤组织细胞获得紫杉醇的过程所用培养基为固体培养基
C. 获得愈伤组织的过程为脱分化，该过程与细胞中基因的选择性表达有关
D. 利用植物细胞工程获得紫杉醇和红豆杉植株的过程均体现了植物细胞的全能性
8．动物细胞培养是动物细胞工程的基础。下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是( )
A.动物细胞的培养只需要无菌的环境
B.培养动物细胞一般使用固体培养基
C.多数动物细胞适宜在酸性的环境中生存
D.通入一定量CO2的主要作用是维持培养液的pH
9．植物体细胞杂交与动物细胞工程中所用技术与原理不相符的是( )
A.纤维素酶、果胶酶处理和胰蛋白酶处理——酶的专一性
B.植物组织培养和动物细胞培养——细胞的全能性
C.原生质体融合和动物细胞融合——生物膜的流动性
D.紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养——细胞分裂
10．下列对动物体细胞核移植技术的叙述，错误的是( )
A. 动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植
B. 细胞核遗传物质来自提供细胞核的体细胞
C. 细胞质遗传物质来自去核的卵母细胞
D. 细胞核移植是体细胞克隆的关键步骤
11．下列有关哺乳动物精子、卵子的发生及受精作用的叙述，错误的是( )
A.卵子发生时，MI和MII过程是不连续的，但细胞质均等分配
B.卵子形成的过程需在卵巢和输卵管内完成
C.成熟的精子并不具有受精能力，必须经获能处理后才具备受精能力
D.精子和卵子结合的过程中，卵子完成减数第二次分裂
12．杜泊羊以其生长速度快、肉质好等优点，深受广大消费者的欢迎。科研工作者为满足市场需求，通过胚胎工程相关技术快速、大量繁殖杜泊羊。下列相关叙述正确的是( )
A.对受体杜泊羊进行超数排卵处理可获得较多的卵母细胞
B.采集到的卵母细胞需在获能培养液中进行获能培养
C.人工授精后，以观察到两个极体或雌、雄原核作为受精的标志
D.收集到的胚胎进行胚胎分割后获得的二分胚的基因型不同
13．假设世界上最后一头野驴刚死亡，以下使它“复生”的方案中可行的是( )
A.将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育出新个体
B.将野驴的体细胞取出，利用组织培养培育出新个体
C.将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育出新个体
D.将野驴的体细胞核移植到家驴的去核卵母细胞中，经孕育培育出新个体
14．下列关于动、植物细胞培养的比较的叙述，错误的是( )
A.两者培养基的成分有所不同，但都能得到优良个体
B.为了得到单细胞悬液，两者所用的材料和方法有所不同
C.在两者培养的过程中，往培养基中加入的酶不同
D.为获得杂交细胞，两者使用的诱导方法有所不同
15．科学家采用体细胞杂交技术得到了“番茄—马铃薯”杂种植株，但该植株并没有地上结番茄、地下长马铃薯。下列有关叙述错误的是( )
A.体细胞杂交之前用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理分散成单个细胞
B.番茄和马铃薯的原生质体可采用聚乙二醇融合法得到杂种细胞
C.杂种细胞需经过诱导形成愈伤组织后再发育成完整的杂种植株
D.“番茄—马铃薯”杂种植株没达预期目标与基因无法有序表达有关
16．如图表示纯培养X细菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是( )
A.步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置
B.步骤②将接种环在火焰上灼烧后迅速蘸取菌液进行平板划线
C.步骤③通过连续划线使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落
D.步骤④培养箱培养后可用来对X细菌进行计数
二、多选题
17．传统发酵食品的制作需要各种各样的微生物。下列相关叙述正确的是( )
A.腌制泡菜利用了乳酸菌的乳酸发酵
B.制作腐乳利用了微生物产生的蛋白酶
C.制作果酒利用了酵母菌在无氧条件下产生酒精
D.制作果醋利用了醋酸菌在无氧条件下产生乙酸
18．与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。下列有关说法正确的是( )
A.发酵工程与传统发酵技术最大的区别就是前者可以利用微生物来进行发酵
B.发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身
C.在发酵工程的发酵环节中，发酵条件变化不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢途径
D.通过发酵工程可以从微生物细胞中提取单细胞蛋白
19．下列有关动物细胞工程操作的叙述，错误的是( )
A.动物细胞培养是动物细胞工程的基础，在进行细胞培养时，培养基中除了加入细胞所需的各种营养物质外，还需要加入凝固剂
B.动物细胞融合与植物体细胞杂交都能形成杂种个体
C.干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等，有着自我更新能力及分化潜能
D.iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，可以避免免疫排斥反应
20．下列关于动物细胞培养液的叙述，正确的是( )
A.为了防止培养过程中出现细菌污染，可以在培养液中添加抗生素
B.动物细胞培养液与植物组织培养的培养基相同
C.CO2的主要作用是维持培养液的pH
D.培养液应该定期更换，以防止代谢物积累对细胞自身造成危害
三、实验探究题
21．请回答与微生物培养与计数的相关问题：
（1）牛肉膏蛋白酶培养基是常用的细菌基础培养基，某小组同学打算配制固态培养，在配制时需添加__________作凝固剂。培养基中含有的蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了__________和__________。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是__________和__________。
（2）下列材料或用具中，需要灭菌的是__________；需要消毒的是__________。（填序号）
①培养皿
②玻璃棒、试管、锥形瓶
③实验者的双手
（3）日常生活中经常用到__________消毒法，在100℃煮沸5~6min，可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。巴氏消毒法可以杀死牛奶中的绝大多数微生物，并且__________。
（4）在将筛选到的微生物进行分离纯化时，采用了两种不同的接种方法，培养一段时间后得到如图所示的菌落。
平板A所采用的接种方法是__________，平板B所采用的接种工具是__________。A、B两个平板所采用的接种方法适合用来计数的是__________（填“A”或“B”）
（5）根据下图所示，4号试管的土壤样品稀释了__________倍，根据图示的三个平板上的菌落结果，可以估算1克土壤中的细菌数为__________个。
22．图为某生物兴趣小组设计的果酒发酵实验装置，请据图分析回答相关问题
（1）用此装置制作葡萄酒，在酒精发酵的过程中，需对气阀______进行关闭。若继续用此装置制作葡萄醋，需改变的条件是：①_______②_______。
（2）实验表明，醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌的死亡，请写出当缺少糖源时醋酸菌产生醋酸的反应简式：____________________________________。
（3）将豆腐块放在自然条件下发酵时，多种微生物参与了发酵，其中起主要作用的是__________。传统发酵以混合菌种的______________及____________为主，通常是家庭式或作坊式的。
四、读图填空题
23．我国科学、有序推进新冠疫苗接种工作，其中科兴及北京生物两款灭活疫苗均使用Ver细胞进行病毒扩增培养（下图）。Ver细胞为非洲绿猴肾细胞的传代细胞系，回答以下问题。
（1）Ver细胞的培养应在培养箱中进行，箱内的气体环境条件为__________。
（2）培养Ver细胞时，需要用__________的方法，或者用__________酶将从非洲绿猴肾分散成单个细胞。当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，通常会停止分裂增殖，叫做__________。经上述处理后的初次培养称为__________。
（3）Ver细胞的传代培养过程中需要使用__________使细胞分散，并在合成培养基中加入__________等天然成分。
（4）某科研团队想利用Ver细胞系制备新冠病毒的单克隆抗体用于诊断试剂，该抗体能准确识别__________差异，与之发生特异性结合，并可__________，因此被广泛用作诊断试剂。一般是将抗体检测呈阳性的__________细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖，从细胞__________或小鼠__________中获取大量的单克隆抗体。
24．下图表示科学家通过植物细胞工程，培育“矮牵牛-粉蓝烟草”杂种植株的过程。根据所学知识完成下列问题：
（1）在自然条件下，“矮牵牛”和“粉蓝烟草”进行有性杂交不能产生后代，原因是两者之间存在_____。
（2）③之前进行过程①②的原因是_____。
（3）在利用杂种细胞培育杂种植株的过程中，⑤过程依据的原理是_____，其中过程③称为原生质体融合，体现了细胞膜的_____。人工诱导原生质体融合的方法基本可分为两大类——物理法和化学法，其中化学法包括_____、_____，植物体细胞融合完成的标志是_____。
（4）过程⑤依赖_____技术，其中涉及的细胞分裂方式为_____。
（5）“矮牵牛-粉蓝烟草”杂种植株的体细胞内含_____条染色体，属于_____倍体植株。
25．如图为经过体外受精和胚胎分割移植培育优质奶牛的过程。请回答下列问题：
（1）受精过程中，A细胞要培养到__________期，才具备与精子受精的能力。体内受精在精子触及卵细胞膜的瞬间，卵细胞膜外的__________发生生理反应，阻止后来的精子进入透明带。然后，精子人卵。精子入卵后，__________也会立即发生生理反应，拒绝其他精子再进入卵内。
（2）胚胎分割时，一般采用发育良好、形态正常的__________。对囊胚进行分割时，要特别注意将__________均等分割，否则会影响分割后的胚胎恢复和进一步发育。来自同一胚胎分割产生的后代具有__________的遗传物质，因此，胚胎分割可以看作动物无性繁殖或克隆的方法之一。
（3）①过程分割出的少量胚体细胞用来做性别鉴定，此时应该取__________细胞进行性别鉴定。
参考答案
1．答案：D
解析：A、发酵工程具有条件温和、原料来源丰富且价格低廉、产物单一、污染小和容易处理的特点，A错误；B、发酵工程的产品包括微生物的代谢产物、酶和菌体本身，应用于食品工业、医药工业和农牧业等领域，B错误；C、通常所指的发酵条件包括温度控制、溶解氧控制、pH控制，环境条件不仅会影响微生物的生长繁殖，而且会影响微生物代谢物的形成，C错误；D、传统发酵技术和现代发酵工程最大的相同之处是利用各种微生物的代谢来实现相关产品的生产，D正确。故选D。
2．答案：A
解析：A.家庭制作果酒、果醋与腐乳过程中所用的菌种均来源于自然环境,有多种微生物参与发酵过程,因此均不是纯种发酵, A正确。
3．答案：C
解析：A、平板划线法中每次划线前都要灼烧接种环，保证菌种来自于上一次划线的末端，划线结束后也要灼烧接种环，防止污染环境、感染接种者， A正确； B、连续划线可以将聚集的菌种逐步稀释，以便获得单个菌落，B正确； C、图中a对应的区域出现了单个菌落，d区域菌落最多，因此a区域应该为划线的最终区域，d区域为划线的起始区域，C错误； D、为了防止空气中杂菌的污染，蘸取菌液和划线都要在酒精灯火焰旁进行，D正确。故选C。
4．答案：B
解析：A、微生物生长繁殖需要氮源，氮源物质为该微生物提供必要的氮素，A正确；B、该碳源是二氧化碳，属于无机物，不能作为微生物的能源物质，B错误；C、无机盐是微生物生长繁殖不可缺少的营养物质，C正确；D、生命活动离不开水，水是该微生物的营养要素之一，D正确。故选B。
5．答案：A
解析：①两种方法都需要在无菌条件下操作，①错误；
②两种方法都需要配制固体培养基，均需要添加琼脂，②错误；
③平板划线法不能对菌落进行计数，稀释涂布平板法能进行活菌计数，③正确；
④平板划线法的接种工具是接种环，稀释涂布平板法的接种工具是涂布器，④正确。
综上正确的选项是③④，故选A。
6．答案：C
解析：图中①是脱分化过程、②是再分化过程，A正确；对培养基进行灭菌时，应采用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，B正确；培养基中生长素与细胞分裂素用量的比值高时，有利于根的分化、抑制芽的形成，C错误；植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，根据酶的专一性原理，获得原生质体需要用纤维素酶和果胶酶，D正确。
故选择C选项。
7．答案：C
解析：A、紫杉醇属于次生代谢物,次生代谢物不是生物生长所必需的,A错误;B、培养愈伤组织细胞获得紫杉醇的过程所用培养基为液体培养基,B错误;C、获得愈伤组织的过程为脱分化,该过程与细胞中基因的选择性表达有关,C正确;D、利用植物细胞工程获得紫杉醇的过程只培养到了愈伤组织时期,不能体现植物细胞的全能性,D错误。故选C。
8．答案：D
解析：A、动物细胞培养的原理是细胞增殖，A错误；B、理论上杂交瘤细胞或骨髓瘤细胞能在体外培养条件下能不断增殖，但是实际上，在一个培养瓶中培养是要受到很多外界条件的影响的，比如空间限制，营养限制，细胞之间竞争等，因此不可能的，B错误；C、分化程度低的细胞全能性较高，比分化程度高的细胞更易培养，C错误；D、动物细胞培养的气体环境是95%空气(细胞代谢必需的)和5%CO2(维持培养液的pH)，D正确。所以D选项是正确的。
9．答案：B
解析：利用纤维素酶、果胶酶处理,去除细胞壁,利用胰蛋白酶处理使动物细胞分散,利用的是酶的专一性,A正确;植物组织培养利用了细胞的全能性,动物细胞培养利用了细胞的分裂能力,B错误;原生质体融合和动物细胞融合依赖于生物膜的流动性,C正确;紫草细胞培养和杂交瘤细胞的培养的基础是细胞具有一定的分裂能力,D正确。
10．答案：C
解析：A、体细胞分化程度高于胚胎细胞，动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植，A正确； B、核基因完全来自供体动物，而细胞质基因主要来自受体细胞，故细胞核遗传物质来自提供细胞核的体细胞，B正确； C、将体细胞注入到去核卵母细胞，所以细胞质遗传物质也来自供体细胞，C错误； D、细胞核移植是体细胞克隆的关键步骤，因为细胞核经过移植后才能在卵母细胞提供的细胞质的作用下表现全能性，D正确。
故选：C。
11．答案：A
解析：卵子发生时,MⅠ和MⅡ过程是不连续的,细胞质也不均等分配,A错误。
12．答案：C
解析：A、用促性腺激素对供体羊进行超数排卵处理，可以获得较多的卵母细胞，A错误；B、采集到的精子需要在获能溶液中进行获能培养，B错误；C、人工受精后，若观察到两个极体或雌雄原核，说明卵子已经完成了受精，C正确；D、胚胎分割后获得的胚胎基因型相同，D错误。故选C。
13．答案：D
解析：用体细胞进行动物克隆，目前只能通过体细胞核移植技术实现，该技术需要将待克隆动物体细胞的细胞核移植到去核的卵母细胞中，形成重构胚，再经过动物细胞培养和胚胎移植，最终培育出新个体。
14．答案：A
15．答案：A
解析：植物细胞使用纤维素酶和果胶酶处理细胞壁获得原生质体，故A错误。
16．答案：C
解析：图中①是倒平板，②是用接种环蘸取菌液，③是进行平板划线，④是培养。倒平板操作时，倒好后应待平板冷却凝固后再将平板倒过来放置，A错误；灼烧后的接种环需在火焰旁冷却后再蘸取菌液进行平板划线，B错误；步骤③通过连续划线，使接种物逐渐稀释分布在培养基的表面，在数次划线后培养，可分离得到由一个细胞繁殖而来的单个菌落，C正确；平板划线法接种的培养基上，由于起始段菌体密集，因此无法对其计数，D错误。
17．答案：ABC
解析：A、在无氧条件下,乳酸菌能将葡萄糖分解成乳酸,腌制泡菜利用了乳酸菌的乳酸发酵,A正确;
B、参与腐乳制作的微生物主要是毛霉,制作腐乳利用了毛霉等产生的蛋白酶、脂肪酶,B正确;
C、酵母菌在无氧条件下,可通过无氧呼吸产生酒精和二氧化碳,制作果酒利用了酵母菌在无氧条件下产生酒精,C正确;
D、制作果醋利用了醋酸菌在有氧条件下产生醋酸,D错误。
18．答案：BC
解析：A、发酵工程与传统发酵技术都需要利用微生物来进行发酵,A错误;
B、由分析可知,发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身,B正确;
C、在发酵工程的发酵环节中,发酵条件不仅影响微生物的生长繁殖,也会通过影响酶的活性影响微生物的代谢途径,C正确;
D、单细胞蛋白是指利用发酵工程获得的大量的微生物菌体,D错误。
19．答案：AB
解析：A、动物细胞培养是动物细胞工程的基础,在进行细胞培养时培养基中只加入细胞所需的各种营养物质;在制作微生物的培养基的过程中,可以通过添加琼脂作为凝固剂来将液体培养基转化为固体培养基或半固体培养基,A选项错误;B、动物细胞融合不能形成杂种个体,而植物体细胞杂交能形成杂种个体,但两者都能形成杂种细胞,B选项错误。
20．答案：ACD
解析：A、抗生素可以抑制细菌的生长，所以在进行动物细胞培养过程中可以在培养液中添加抗生素，用以防治细菌的污染，A正确；
B、动物细胞培养液与植物组织培养的培养基不同，动物细胞培养液通常需要加入动物血清、血浆，B错误；
C、在动物细胞培养过程中，气体环境是95%的空气+5%CO2的混合气体，其中5%CO2气体是为保持培养液的pH稳定，C正确；
D、代谢产物积累会对细胞自身造成危害，营养物质减少不利于细胞的培养，所以动物细胞培养过程中需要定期更换培养液，为细胞提供充足营养并防治代谢产物积累危害细胞，D正确。
21．答案：（1）琼脂；氮源（碳源不作要求）；碳源；无机盐；水
（2）①②；③
（3）煮沸；基本不会破坏牛奶的营养成分
（4）稀释涂布平板法；接种环；A
（5）105；8.5×108
22．答案：（1）a；打开气阀a，不断通入无菌空气；调整温度为30-35℃
（2）
（3）毛霉；固体发酵；半固体发酵
解析：（1）果酒发酵是酵母菌进行无氧呼吸的过程,故装置中的充气口在果酒发酵时关闭,所以打开气阀a,不断通入无菌空气,此时需将温度严格控制在18-25℃.制作果酒后制果醋,应将温度控制在30-35℃;若在果汁中含有醋酸菌,在果酒发酵旺盛时,因为果酒发酵时缺氧能抑制醋酸菌的生长,且醋酸菌的发酵条件是氧气充足,所以醋酸菌不能将果汁中的糖发酵为醋酸。
（2）醋酸菌的新陈代谢类型是异养需氧型,醋酸菌进行无氧发酵时短时间中断通入氧气也会引起醋酸菌死亡,当缺少糖源时醋酸菌产生醋酸的反应简式:C3H6OH+O2CH3COOH+H2O。
23．答案：（1）95%空气+5%CO2
（2）机械；胰蛋白酶（胶原蛋白酶）；接触抑制；原代培养
（3）胰蛋白酶（胶原蛋白酶）；血清
（4）抗原的细微；大量制备；杂交瘤；培养液；腹水
24．答案：（1）生殖隔离
（2）细胞壁阻碍着细胞间的杂交（细胞壁阻碍原生质体的融合）
（3）植物细胞的全能性；流动性；PEG（或聚乙二醇）融合法；高Ca2+-高pH融合法；再生出新的细胞壁
（4）植物组织培养；有丝分裂
（5）38；四
解析：（1）矮牵牛和粉蓝烟草属于不同的物种,两者之间存在生殖隔离,因此在自然条件下矮牵牛和粉蓝烟草杂交不能产生后代。
（2）③是原生质体融合的过程,该过程的原理是细胞膜具有一定的流动性;③之前进行过程①②的目的是去除细胞壁,因为细胞壁的存在阻碍着细胞间的杂交。
（3）在利用杂种细胞培育杂种植株的过程中,⑤过程是植物组织培养过程,该过程依据的原理是植物细胞的全能性,其中过程③称为原生质体融合,该过程体现了细胞膜的流动性。人工诱导原生质体融合的方法很多,基本可分为两大类——物理法和化学法,其中化学法主要失活用PEG(或聚乙二醇)促融,杂种细胞再生出细胞壁是植物体细胞融合完成的标志。
（4）过程⑤依赖植物组织培养技术完成,该过程中细胞分裂方式为有丝分裂,因为有丝分裂是体细胞增殖的方式。
（5）“矮牵牛—粉蓝烟草”杂种植株的体细胞内含有的染色体数目是矮牵牛和粉蓝烟草的体细胞中染色体数目之和,为14+24=38,属于四倍体植株。
25．答案：（1）MⅡ(MⅡ中)；透明带；卵细胞膜
（2）桑葚胚或囊胚；内细胞团；相同
（3）滋养层
解析：（1）图中A为次级卵母细胞，需培养到减数第二次分裂中期才有可能受精；精子需进行获能处理后才具有受精能力；体内受精在精子触及卵细胞膜的瞬间，卵细胞膜外的透明带发生生理反应，阻止后来的精子进入透明带。然后，精子人卵。精子人卵后，卵细胞膜也会立即发生生理反应，拒绝其他精子再进入卵内。这是阻止多精入卵的两道屏障。
（2）胚胎分割时，一般采用发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚，在对囊胚进行分割时，应注意内细胞团均等分割，以免影响胚胎的恢复和进一步发育；来自同一胚胎分割产生的后代具有相同的遗传物质，因为它们是由同一个受精卵经过分裂、分化产生的细胞组成的，因此，胚胎分割可以看作动物无性繁殖或克隆的方法之一。
（3）①过程分割出的少量胚胎细胞用来做性别鉴定，此时应该取滋养层细胞进行性别鉴定，该部位的细胞将来发育成胎盘和胎膜。
平板划线法
稀释涂布平板法
①
需在无菌条件下操作
不需无菌操作
②
培养基中不加琼脂
培养基中加有琼脂
③
不可计算菌液中的活菌数
可计算菌液中的活菌数
④
需要接种环
需要涂布器