高中生物人教版 (2019)选择性必修3第1章 发酵工程第2节 微生物的培养技术及应用二 微生物的选择培养和计数教课内容ppt课件

这是一份高中生物人教版 (2019)选择性必修3第1章 发酵工程第2节 微生物的培养技术及应用二 微生物的选择培养和计数教课内容ppt课件，共60页。PPT课件主要包含了课前·新知导学，生存环境，目的菌，抑制或阻止，稀释涂布平板法，稀释度，一个活菌，菌落数，～300，平均值等内容，欢迎下载使用。
　　　　　微生物的选择培养1．微生物筛选的原理(1)自然界中目的菌株的筛选原理：根据它对____________的要求，到相应的环境中去寻找。(2)实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于_________生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时____________其他微生物的生长。2．选择培养基在微生物学中，将允许_____种类的微生物生长，同时___________其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。
能在选择培养基上生长的一定是目的菌吗？__________________________________________。【答案】原则上选择培养基只允许特定种类的微生物生长，但实际上，微生物的培养是一个非常复杂的问题，有些微生物可以利用其他微生物的代谢物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的不一定是目的菌，还需要进一步验证
　　　　　能分解尿素的微生物所需要的碳源和氮源分别是(　　)A．CO2和N2B．葡萄糖和NH3C．CO2和尿素D．葡萄糖和尿素【答案】D【解析】能分解尿素的微生物以尿素为氮源，这种微生物是异养型微生物，不能利用CO2等无机物，需以葡萄糖为碳源，D符合题意。
　　　　　微生物的数量测定1．活菌计数法____________________除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。(1)原理：当样品的________足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的__________。通过统计平板上的________，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(2)统计方法：为了保证结果准确，至少要设置_____个平板，选择菌落数在___________的平板进行计数，并求其__________。(3)误差及原因分析：此方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目______，这是因为当______________细胞连在一起时，平板上观察到的只是____________。
2．显微镜直接计数法(总菌计数法)利用特定的____________________________，在显微镜下直接观察和计数。
细菌计数板或血细胞计数板　
用稀释涂布平板法进行计数时，为什么每个稀释度下至少要设置3个重复组实验？若3个重复组实验结果相差太大，如何进行分析？____________________________。【答案】每个稀释度下设置3个重复组的目的是增强实验的说服力与准确性。若3个重复组的实验结果相差太大，可能意味着操作有误，应该重新实验
　　　　　用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为1×106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是(　　)A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数分别是215和260，取平均值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233
【答案】D【解析】用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数时，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板进行计数，求其平均值，再通过计算得出土壤中细菌总数。因此，A、B、C不符合题意，D符合题意。
　　　　　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验操作与提示1．实验设计(1)土壤取样细菌适宜在酸碱度接近________的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距地表__________的土壤层。
(2)样品的稀释①稀释的原因：样品的__________直接影响平板上生长的菌落数。②稀释的标准：选用一定稀释范围的样品液进行培养，保证获得菌落数在___________之间，便于计数。③细菌的稀释倍数：一般选用________________________倍稀释的稀释液。
1×104、1×105、1×106　
(3)微生物的培养与观察①培养：不同种类的微生物，往往需要不同的培养________和培养________。细菌一般在__________的温度下培养________d。②观察：每隔______h统计一次____________，最后选取菌落数目________时的记录作为结果。
2．操作提示(1)将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中________，然后再放在________上灼烧。(2)取土样时用的铁铲和取样纸袋在使用前都需要________。操作完成后，一定要洗手。(3)实验中用到的平板和试管使用前要做好标记。在标记培养皿时应在皿底上标上组别、____________________________________等。
培养日期和平板上培养样品的稀释度　
根据微生物菌落的统计标准，怎样判断样品稀释倍数是否合适呢？____________________________________________。【答案】若菌落数目在30～300之间，说明菌液稀释倍数是合适的
　　　　　下列关于土壤取样的叙述，错误的是(　　)A．土壤取样，应选取肥沃、湿润的土壤B．先铲去表层土3 cm左右，再取样C．取样用的小铁铲和信封在使用前不用灭菌D．应在火焰旁称取土壤【答案】C【解析】微生物的培养要注意无菌操作，土壤取样用的小铁铲和信封在使用前需灭菌，后续稀释等操作均需在火焰旁进行。
微生物的选择培养的原理和方法
1．微生物选择的原理根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性不同而制备培养基。
2．接种的方法平板划线法和稀释涂布平板法。两者比较如下：
下面是筛选能分解尿素的细菌的培养基的配方，请分析：
(1)从物理性质看，该培养基属于________培养基，从功能上看属于________培养基。(2)该培养基是怎样实现对能分解尿素的细菌的选择的？(3)怎样证明该培养基确实起到了选择作用？(4)怎样证明所用的培养基灭菌是彻底的？
提示：(1)固体　选择(2)该培养基中的尿素作为唯一的氮源，对能分解尿素的细菌进行了选择。(3)设置对照，在一个全营养培养基上进行接种实验，若全营养培养基上菌落的数目多于该培养基上菌落的数目，说明该培养基确实起到了选择作用。(4)设置一个未接种的培养基进行培养，若培养基上没有菌落生长，说明所用的培养基灭菌彻底。
1．如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1→2→3→4→5，下列说法正确的是(　　)A．操作前要将接种环用酒精消毒B．划线操作需在酒精灯火焰附近进行C．只有在5区才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5区域中划线前后都不需要对接种环灭菌【答案】B
【解析】进行平板划线操作之前，以及每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在酒精灯火焰上灼烧，不能用酒精消毒，A错误；为防止杂菌污染，划线操作需在酒精灯火焰附近进行，B正确；由题图可知，5区域是最后一个区域，有可能在5区域获得所需要的菌落，但在4区域也有可能得到所需要的菌落，C错误；每次划线前后都要灼烧接种环，目的是杀死接种环上原有的微生物(第一次划线前和每次划线结束后接种环上残留的菌种)，使每次划线的菌种都来自上一次划线的末端，划线结束后灼烧接种环以防止污染环境和感染操作者，D错误。
2．(2023·四川自贡阶段练习)平板划线法和稀释涂布平板法是常用的两种接种方法。下列相关叙述错误的是(　　)A．两种方法都能获得由单个细胞繁殖而成的单菌落B．如果菌液本来浓度不高，则可以适当降低稀释倍数C．接种环在第一次划线前和最后一次划线后都需要灼烧灭菌，其余过程不需要D．平板划线法要求在培养基表面连续划线，且除第一次划线外，每一次划线都是从上一次划线的末端开始【答案】C
【解析】平板划线法和稀释涂布平板法都能获得由单个细胞繁殖而成的单菌落，A正确；如果菌液本来浓度不高，则可以适当降低稀释倍数，以保证平板上形成的菌落数在30～300个，B正确；接种环每次使用前后都要进行灼烧灭菌，C错误；平板划线法要求连续多次划线，且除了第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的终点，D正确。
微生物数量测定的方法可分为直接计数法和间接计数法，两者的比较如下：
微生物的数量测定方法分析
1．(2023·广东佛山期中)关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验的叙述正确的是(　　)A．培养基应以尿素为唯一氮源，该细菌与硝化细菌所利用的碳源物质是相同的B．选择菌落数在30～300间的所有平板进行计数，以平均数为实验结果
C．对10 mL土样稀释10倍后，取0.1 mL该溶液进行重复的涂布实验，测得的菌落数分别为18、234、277、254，则该10 mL土样中分解尿素的细菌数为2.55×108个D．应该设置对照以排除非测试因素对实验结果的干扰，提高可信度【答案】D
【解析】从土壤中分离分解尿素的细菌，培养基应以尿素为唯一氮源，尿素分解菌为异养型，利用的是有机碳源，硝化细菌是自养型，以二氧化碳为碳源，二氧化碳为无机物，A错误；用稀释涂布平板法测定同一样品中的细菌数时，为了保证结果准确，在每一个梯度浓度内，至少要涂布3个平板，确定对照组无菌后，应将菌落数相差较远的平板舍弃，选择菌落数在30～300之间且相差无几的平板进行记数，求其平均值，再通过计算得出土壤中的细菌总数，B错误；
对10 mL土样稀释10倍后，取0.1 mL该溶液进行重复的涂布实验，测得的菌落数分别为18、234、277、254，舍去18，则该10 mL土样中分解尿素的细菌数为[(234＋277＋254)÷3]÷0.1×10×10＝2.55×105个，C错误；分离微生物时，需要设置不接种的培养基与实验组一起培养做空白对照，以排除实验组中非测试因素对实验结果的干扰，提高可信度，D正确。
2．(2023·广东江门期末)如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验示意图。据图分析正确的是(　　)
A．4号稀释液培养得到的菌落平均数恰为5号试管的10倍B．5号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109个C．将稀释液涂布到以尿素为唯一碳源的选择培养基上培养D．该实验方法统计得到的结果往往会比实际活菌数目要高【答案】B
【解析】4号中稀释液进行平板培养，稀释倍数比5号的低10倍，如果稀释倍数适当，得到的菌落平均数可能是5号的10倍，但不一定，A错误；统计菌落时应选择30～300之间的平板进行计数，5号试管进行稀释涂布平板法计数的结果表明每克土壤中的菌株数为(168＋175＋167)÷3÷0.1×106＝1.7×109个，B正确；本实验的目的是“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”，故应将稀释液涂布到以尿素为唯一氮源的选择培养基上培养，C错误；稀释涂布平板得到的菌落可能存在两个或多个细菌细胞长成一个菌落，使该实验方法统计得到的结果往往比实际活菌数目低，D错误。
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验分析
1．实验流程土壤取样→制备培养基→样品稀释→涂布平板→培养与观察→菌落计数。
2．实验过程分析(1)取土样时用的小铁铲和取样纸袋在使用前都需要灭菌。(2)制备培养基时应同时制备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基两种类型的培养基，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否具有选择作用。(3)样品稀释和涂布平板时需要注意：初次实验，可以将稀释范围放宽到1×103～1×107倍。每个稀释度下需涂布3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。此外，两种培养基还应各有一个作为空白对照。
(4)不同微生物往往需要不同的培养温度和时间，应设置合适的培养温度和时间。(5)菌落计数时应选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落数目。
1．分离能分解尿素的细菌的正确步骤是(　　)①土壤取样　②称取10 g土壤放入盛有90 g无菌水的锥形瓶中　③吸取0.1 mL进行平板涂布　④依次稀释到1×101、1×102、1×103、1×104、1×105、1×106、1×107稀释度A．①→②→③→④B．①→③→②→④C．①→④→②→③D．①→②→④→③【答案】D
【解析】分离能分解尿素的细菌的过程：①土壤取样→②称取10 g土壤加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中→④依次稀释至1×101、1×102、1×103、1×104、1×105、1×106、1×107稀释度→③吸取0.1 mL进行平板涂布，D正确。
2．如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的示意图，下列有关叙述错误的是(　　)
A．在配制步骤②③的培养基时，应先调pH后高压蒸汽灭菌B．步骤③采用稀释涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素C．步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力D．步骤③纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落【答案】B
【解析】在配制步骤②③的培养基时，应先调pH后高压蒸汽灭菌，A正确；要筛选出能高效分解尿素的细菌，所选用的培养基要以尿素为唯一氮源，但牛肉膏和蛋白胨都能提供氮源，因此步骤③所用的培养基中不能含有牛肉膏蛋白胨，B错误；步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力，C正确；步骤③纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落，D正确。
易错易混1：微生物纯化中的“多次划线”与“充分稀释”微生物纯化培养的常见方法有平板划线法和稀释涂布平板法，两者的目的是一样的，即都是获得由单个细胞繁殖而成的菌落。但平板划线法是通过“多次划线”操作而将多个菌种稀释成单菌落的，稀释涂布平板法是通过“充分稀释”操作而将多个菌种稀释成单菌落的。若平板划线法中的划线次数太少或稀释涂布平板法中的稀释倍数不够，则得到的可能是由多个细胞繁殖而来的子细胞群体，其中甚至可能掺杂着其他杂菌，达不到纯化的目的。
例1　平板划线法和稀释涂布平板法是常用的两种接种方法。下列相关叙述错误的是(　　)A．平板划线法要求在培养基表面连续划线，且除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的终点B．除第一次划线前需要将接种环灼烧灭菌外，以后的划线可以不用灭菌即可划线C．如果菌液本来浓度不高，则可以适当降低稀释倍数D．“充分稀释”和“连续划线”的目的都是获得由单一细胞繁殖而成的菌落【答案】B
【解析】在平板划线法中，连续划线的目的是使菌种的浓度降低，除第一次划线外，以后的每一次划线的起点都是上一次划线的终点，A正确；将接种环灼烧灭菌并冷却后蘸取菌液进行第一次划线，以后的每一次划线前都要将接种环进行灼烧灭菌，B错误；稀释倍数要随菌液的浓度而定，如果菌液的浓度过高，则需要更高的稀释倍数，否则就可以适当降低稀释的倍数，C正确；稀释涂布平板法中的“充分稀释”和平板划线法中的“连续划线”，目的都是获得由单个细胞繁殖而成的菌落，D正确。
错因分析：一是没有理解平板划线法和稀释涂布平板法的含义，对实验操作过程掌握程度不够；二是对平板划线法和稀释涂布平板法的操作原理和目的理解不到位，平板划线法是通过“连续划线”从而获得单个菌落，稀释涂布平板法是通过“充分稀释”从而获得单个菌落。
易错易混2：能分解尿素的细菌的分离与计数实验中的两种对照实验分析
例2　下列与土壤中能分解尿素的细菌的分离与计数相关的叙述，不正确的是(　　)A．可以通过设置空白对照组来检验培养基是否受到了杂菌的污染B．每个稀释度下至少需要接种3个选择培养基和1个全营养培养基C．统计能分解尿素的细菌的数目时应该选择菌落数多的培养基进行计数D．能分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨后会使培养基pH上升【答案】C
【解析】该实验可设置空白对照组，以检验培养基是否受到杂菌污染，同时也能确定培养基是否符合要求，A正确；每个稀释度下需要设置至少3个重复组，减少实验误差，同时需要设置一个全营养液培养基，判断选择培养基是否具有选择作用，B正确；统计能分解尿素的细菌的数目时，以菌落数在30～300的平板进行计数，求其平均值，C错误；能分解尿素的细菌合成的脲酶可催化尿素分解成氨，从而会使培养基pH升高，据此通常在培养基中加入酚红指示剂来鉴别能分解尿素的细菌，D正确。
错因分析：一是没有理解两种对照的作用是什么，空白对照组的作用是判断培养基是否污染，全营养液培养基的作用是判断选择培养基是否有选择作用；二是对统计菌落数的标准和计算方法没有熟记；三是对能分解尿素的细菌的进一步鉴定的原理没有掌握。
解题技巧：信息题解题方法例3　豆瓣酱——美味川菜的灵魂，是以蚕豆、面粉、辣椒及盐水为主要原料发酵而成的传统豆类调味食品，有多种微生物参与，发酵过程中会生成多种物质，其中包含一些有毒物质，如生物胺(一类含氮有机化合物)。为控制生物胺的含量，保障食品安全，近年来，安全环保的生物学方法越来越被消费者所接受，如在食品发酵过程中添加降解生物胺的菌株控制生物胺的含量。请回答下列问题。
(1)寻找降解生物胺的菌株时，应根据它对______________的要求，到________________________________中去寻找。(2)某科研人员欲对降解生物胺的目的菌株进行初步筛选，他取5 g酱醅于100 mL锥形瓶中，加入50 mL生理盐水，于摇床上充分振荡混匀，再接种到以生物胺为唯一氮源的固体培养基中，置于37 ℃培养箱中培养，待菌落生长良好后进行下一步实验。
①上述接种最常采用的方法有________________________。②一段时间后，若观察到上述培养基表面仅出现了形态相同但大小不同的一种菌落，由此实验结果能否证明该培养基具有筛选功能？请作出判断并说明理由。_________________________________。③若已知上述固体培养基具有筛选功能，根据观察到的菌落的大小，有人认为菌落更大的就是降解生物胺能力更强的菌株，你认为能得出此结论的依据是_____________________________________。
④该科研人员认为还需进一步实验鉴定才能判断菌株降解生物胺的能力大小，请补充完善其实验思路并预期结果及结论。实验思路：取等量来自不同大小菌落的菌株分别接种到体积相同且____________的培养液中，在相同且适宜的条件下培养相同时间后，分别________________________________________；预期结果及结论：_________________________________。
【答案】(1)营养物质　生物胺含量丰富的环境(如酱醅)　(2)①稀释涂布平板法或平板划线法　②能证明，形态相同说明为同种菌落，大小不同可能是菌落的发育起点不一样③菌落更大，说明菌落的发育情况更好，可能是降解利用生物胺的能力更强导致的　④稀释浓度相同　对目的菌株进行计数　菌株数量多的一组，则说明该菌株降解生物胺的能力强；菌株数量少的一组，则说明该菌株降解生物胺的能力弱
审题流程：第一步　解读题干，提取信息分析题干内容，提取有用信息。“豆瓣酱发酵过程中会生成多种物质，其中包含一些有毒物质，如生物胺(一类含氮有机化合物)。为控制生物胺的含量，保障食品安全，近年来，安全环保的生物学方法越来越被消费者接受，如在食品发酵过程中添加降解生物胺的菌株控制生物胺的含量。”
从题干中可以提取有用的信息“①生物胺是一种有毒物质，会危及人体健康；②为了降低发酵食品中生物胺的含量，在食品发酵过程中添加了降解生物胺的菌株”。从而本实验转化成了：如何筛选出降解生物胺的菌株？如何判断降解生物胺的菌株的降解能力？
第二步　对接教材，迁移知识首先弄清考查的知识点，对应教材中的相关知识进行分析。根据题干“在食品发酵过程中添加降解生物胺的菌株控制生物胺的含量”与教材中“微生物的选择培养和计数”密切相关，首先利用选择培养基选择出降解生物胺的菌株，微生物的选择培养应该根据微生物对营养物质的需求，到相应的环境中寻找；微生物纯化的方法有稀释涂布平板法和平板划线法；从平板上选择降解生物胺的菌株需要根据菌落特征进行筛选；筛选出的目的菌株降解生物胺的能力，可以根据微生物发酵分解反应物的能力进行判断。
第三步　各项击破，正确解答根据小题设计，结合教材相关知识，进行解答。(1)寻找降解生物胺的菌株时，应根据它对营养物质的要求，到相应环境中去寻找，即在生物胺含量丰富的环境如酱醅中寻找。
(2)①微生物常用的接种方法有稀释涂平板法和平板划线法。②以生物胺为唯一氮源的固体培养基，能利用生物胺的微生物生长繁殖，不能利用生物胺的微生物不能生长繁殖，若观察到上述培养基表面仅出现了形态相同但大小不同的一种菌落，能证明此固体培养基具有筛选功能，形态相同说明为同种菌落，大小不同可能是菌落的发育起点不一样。
③根据观察到的菌落大小，有人认为更大的菌落就是降解生物胺能力更强的菌株，得出此结论的依据是菌落更大，说明以生物胺为氮源为繁殖后代提供的能量更多，从而说明目的菌株降解生物胺的能力更强。科研人员认为还需要进一步实验鉴定才能判断菌株降解生物胺的能力大小，取等量来自不同大小菌落的菌株分别接种到体积相同且稀释浓度相同的培养液中，在相同且适宜的条件下培养相同时间后，分别对目的菌株进行计数。菌株数量多的一组，则说明该菌株降解生物胺的能力强；菌株数量少的一组，则说明该菌株降解生物胺的能力弱。
1．(2023·广东高三统考专题练习)下图为不同稀释度的酵母菌培养液涂布后的实验结果图，下列叙述正确的是(　　)
A．实验中使用接种环完成上述涂布过程B．涂布时避免涂布到琼脂边缘，因为沿着琼脂边缘计数菌落更加困难C．酵母菌扩大培养过程中需要使用液体培养基静置培养D．计数10-5稀释度下培养皿的菌落数，可以计算出每毫升培养液的酵母细胞个数【答案】B
【解析】由图可知，培养基上菌落分布均匀，使用的接种方法应为稀释涂布平板法，故应用涂布器完成上述涂布过程，A错误；由于菌落生长在边缘时，且易连成片，不容易计数，故涂布时避免涂布到琼脂边缘，B正确；酵母菌在氧充足的条件下大量增殖，酵母菌扩大培养过程中需要使用液体培养基振荡培养，增大培养液中氧气的含量，C错误；符合计数的培养基上的菌落数在30～300之间，10-5稀释度 下培养皿的菌落数很少，故不可用于计算每毫升培养液的酵母细胞个数，D错误。
2．某同学测得每克土壤样品中分解尿素菌落数是2×108个，涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL，且每个平板上的菌落数分别为190、200、210个，则土壤样品的稀释倍数为(　　)A．2×103　　B．2×104C．2×105D．2×106【答案】C
【解析】根据同学测得每克土壤样品中分解尿素菌落数是2×108个，涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL，且每个平板上的菌落数分别为190、200、210个，平均菌落数为200个，则土壤样品的稀释倍数M为2×108÷(200÷0.1)＝2×105，C正确。
3．(2023·广东佛山期末)某种物质X(一种含有C、H、O、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解X。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解X的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和X，乙的组分为无机盐、水、X和Y。下列相关叙述中不正确的是(　　)
A．甲、乙培养基均属于选择培养基，乙培养基组分中的Y物质是琼脂B．若要筛选高效降解X的细菌菌株，甲、乙培养基中X是唯一的碳源C．步骤⑤的筛选过程中，根据对照原则各培养瓶中X溶液的浓度不同D．步骤⑤的筛选过程中，若X浓度过高，某菌株对X的降解量可能下降【答案】C
【解析】甲、乙培养基均只含有机物X，属于选择培养基，乙培养基组分中除了X外，还加入了Y物质琼脂，获得固体培养基，从而分离出所需的菌种，A正确；若要筛选高效降解X的细菌菌株，需要甲、乙培养基中的X是唯一提供碳源的有机物，不能利用物质X的微生物不能在该培养基上生长，从而筛选出高效降解X的细菌菌株，B正确；步骤⑤中自变量是挑取的不同的菌落，各培养瓶中的X溶液的浓度应该是一致的，因为X溶液的浓度属于无关变量，需要保持相同，C错误；步骤⑤的筛选过程中，若培养基中的X浓度过高，可能会导致菌体失水影响菌体的正常生长，因此某菌株对X的降解量可能下降，D正确。
4．(2023·广东云浮期末)某研究小组在大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验，在a、b、c处分别贴浸有不同抗生素(浓度相同)的无菌滤纸片，d处滤纸片浸有无菌水。培养后的结果如下图所示。下列判断错误的是　 　 (　　)A．图中微生物的接种方法为稀释涂布平板法B．a、b处的抗生素的抑菌效果相差不大C．c处的微生物发生了基因突变，产生了抗药性D．该培养基的pH为中性或弱碱性【答案】C
 【解析】结合图示菌落可知，图中微生物的接种方法为稀释涂布平板法，A正确；a、b处的抗生素的抑菌圈大小接近，因此效果相差不大，B正确；c处未产生抑菌圈，证明c处抗生素对大肠杆菌无抑制作用，C错误；大肠杆菌属于细菌的一种，细菌适宜的pH为中性或弱碱性，D正确。
5．(2023·广东佛山期中)如图是某小组培养从土壤中分离出能够分解尿素的细菌的结果示意图，以下相关说法正确的是(　　)A．运用图1所示的接种方法统计所得的活菌数比实际值偏高
B．运用图2所示的接种方法需把接种环插入培养基中操作C．若所得菌落的形状、大小、颜色不一，说明土壤中含多种分解尿素的细菌D．分离尿素分解菌时需往完全培养基额外加入尿素制成选择培养基【答案】C