河北省沧州市泊头市第一中学2023-2024学年高二下学期4月月考生物试题（原卷版+解析版）

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1. 下列关于微生物纯培养与发酵工程的说法正确的是（ ）
A. 微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物
B. 平板划线法既可以用于微生物的纯培养，又可用于微生物计数
C. 利用酵母菌发酵产生的单细胞蛋白属于分泌蛋白，可制成微生物饲料
D. 在农牧业中，利用发酵工程生产的微生物肥料一般是微生物的代谢产物
【答案】D
【解析】
【分析】微生物常见的接种的方法：
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
【详解】A、微生物的纯培养物就是由单一个体繁殖所获得的微生物群体，A错误；
B、平板划线法可以用于微生物的纯培养，不可用于微生物计数，B错误；
C、利用酵母菌发酵产生的单细胞蛋白属于微生物菌体，可制成微生物饲料，C错误；
D、在农牧业中，利用发酵工程生产的微生物肥料一般是微生物的代谢产物，D正确。
故选D。
2. 青霉素别名为盘尼西林，它是最早发现、最先提纯、临床上应用最广的一种抗生素，发酵工程中常利用产黄青霉来生产青霉素。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 选育菌种时，可以借助诱变育种、杂交育种等技术获取高产青霉素的产黄青霉菌株
B. 由于青霉素对细菌具有广泛的抑制作用，所以对生产青霉素的发酵设备进行消毒处理即可
C. 由于产黄青霉生长最适温度和生产青霉素的适宜温度不同，所以发酵时不同阶段要控制不同温度
D. 发酵结束后，可根据青霉素的化学性质采用过滤、沉淀等方法从发酵液中提取青霉素
【答案】C
【解析】
【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配置、灭菌，接种，发酵、产品的分离、提纯等方面。
【详解】A、产黄青霉属于真菌，不能利用杂交育种技术获取高产青霉素的菌种，A错误；
B、有些杂菌会分泌青霉素酶将青霉素分解掉，因此对生产青霉素的发酵设备要进行严格的灭菌处理，B错误；
C、发酵过程中要根据微生物生长和代谢等因素来确定控制的温度，因此发酵时不同阶段要控制不同温度，C正确；
D、青霉素属于代谢产物，根据其化学性质采用分离、提纯等方法从发酵液中提取青霉素，D错误。
故选C。
3. 如图为植物组织培养技术的流程图，下列相关说法错误的是（ ）
A. 组织块在原植株中没有发育成个体，是由于在特定时间和空间条件下基因发生了选择性表达
B. ②试管中细胞全能性最高
C. ①→②、②→③分别是脱分化和再分化过程
D. ①→④过程培养基成分保持不变
【答案】D
【解析】
【分析】植物细胞一般具有全能性。在一定的激素和营养等条件的诱导下，已经分化的细胞可以经过脱分化，即失去其特有的结构和功能，转变成未分化的细胞，进而形成不定形的薄壁组织团块，这称为愈伤组织。愈伤组织能重新分化成芽、根等器官，该过程称为再分化。植物激素中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素,它们的浓度、用量的比例等都会影响植物细胞的发育方向。将愈伤组织接种到含有特定激素的培养基上，就可以诱导其再分化成胚状体，长出芽和根，进而发育成完整的植株。
【详解】A、组织块在原植株中没有发育成个体，是由于在特定时间和空间条件下基因发生了选择性表达，即发生了细胞分化，A 正确；
B、①试管中为高度分化的组织细胞，②试管中细胞为脱分化形成的愈伤组织细胞，具有较高的全能性，③试管中为愈伤组织再分化后形成的幼体，所以②试管中细胞全能性最高，B正确；
C、①→②表示为由高度分化的组织细胞经过脱分化形成愈伤组织的过程、②→③表示为由愈伤组织经过再分化形成幼体的过程，C正确；
D、植物组织培养过程需细胞分裂素和生长素共同调节，细胞分裂素和生长素的比例不同，愈伤组织分化的方向也不同，故脱分化和再分化过程中所用的培养基不同，D错误。
故选D。
4. 荔枝果肉多汁酸甜可口，营养价值很高。如图是科研荔花药离。人员利用现代生物科技培育无核荔枝的流程图。下列叙述错误的是（ ）

A. 过程①获得的原生质体具有的结构包括细胞膜、细胞质及细胞核
B. 过程②需要用秋水仙素处理诱导细胞壁再生
C. 过程③获得的无核荔枝可能具有荔枝 A 和荔枝 B的优良性状
D. 三倍体荔枝的培育过程中用到了植物体细胞杂交技术、植物组织培养技术等
【答案】B
【解析】
【分析】植物的体细胞杂交是将不同植物的细胞通过细胞融合技术形成杂种细胞，进而利用植物的组织培养将杂种细胞培育成多倍体的杂种植株。植物体细胞杂交依据的原理是细胞膜的流动性和植物细胞的全能性。
【详解】A、过程①表示去除细胞壁，获得的原生质体包括细胞膜、细胞质及细胞核，A正确；
B、过程②细胞壁再生，不需要秋水仙素处理，秋水仙素是诱导染色体加倍的，B错误；
C、由于无核荔枝具备荔枝A单倍体和荔枝B的遗传物质，所以无核荔枝可能具有荔枝A和荔枝B的优良性状，C正确；
D、三倍体荔枝的培育过程中用到了植物体细胞杂交技术、植物组织培养技术等，D正确。
故选B。
5. 研究发现，雪莲次生代谢物对急性酒精肝损伤具有较好的防治作用，利用植物细.胞培养技术生产雪莲次生代谢物的大致流程如图。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 从雪莲中提取的次生代谢物是雪莲生长所必需的
B. 经射线处理①后可能获得雪莲次生代谢物高产的细胞
C. 切取雪莲茎尖进行组织培养可获得脱毒苗
D. 培养细胞获得次生代谢物时使用的是液体培养基
【答案】A
【解析】
【分析】植物组织培养过程是：离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养依据的原理是植物细胞的全能性。
【详解】A、次生代谢物不是雪莲生长必需的产物，A错误；
B、可用射线处理①愈伤组织，促使其发生突变，从中筛选雪莲培养物高产的细胞，B正确；
C、茎尖中带毒少或无毒，因而切取一定大小的茎尖进行组织培养可获得脱毒苗，C正确；
D、细胞产物的工业化生产是从人工培养的愈伤组织细胞中提取某种成分，该过程使用的是液体培养基，D正确。
故选A。
6. Khler和Milstein通过将小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，得到了杂交瘤细胞，进而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破为医学与生物学基础研究开创了新纪元。下列关于单克隆抗体的制备叙述错误的是（ ）
A. 小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合依赖于细胞膜的流动性
B. 将某抗原纯化反复注射到小鼠体内，从小鼠血清中分离出的抗体也是单克隆抗体
C. 单克隆抗体可以用于运载药物、疾病的诊断和病原体鉴定等
D. 利用杂交瘤技术可大量生产抗体，且与传统方法相比，该技术生产的抗体纯度更高
【答案】B
【解析】
【分析】1、动物细胞融合技术就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息；
2、把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞融合，所得到的融合细胞就可能大量增殖，产生足够数量的特定抗体，得到单克隆抗体。
【详解】A、小鼠骨髓瘤细胞和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞的融合依赖于细胞膜的流动性，A正确；
B、单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原的抗体，通常利用杂交瘤技术来制备，将抗原纯化反复注射到小鼠体内，从小鼠血清中分离出的抗体不是单克隆抗体，B错误；
C、单克隆抗体可以用于运载药物、多种疾病的诊断、病原体鉴定等，其本身也可以用于治疗疾病，C正确；
D、与传统的免疫动物方法制备抗体相比，利用杂交瘤技术可以制备出高纯度的单克隆抗体，并且可以进行单克隆抗体的大量生产，D正确。
故选B。
7. 图1为某种质粒简图，图2表示某外源DNA上的目的基因，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcRⅠ、BamHⅠ、HindⅢ的酶切位点。下列有关叙述错误的是( )
A. 在基因工程中若只用一种限制酶完成对质粒和外源DNA的切割，则可选EcRⅠ
B. 如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcRⅠ酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcRⅠ酶切点有1个
C. 为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时可使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理
D. 一个图1所示的质粒分子经EcRⅠ切割后，含有2个游离的磷酸基团
【答案】B
【解析】
【详解】目的基因两侧都有，且质粒也有的限制酶是EcRⅠ，所以在基因工程中若只用一种限制酶完成对质粒和外源DNA的切割，可选EcRⅠ，A正确；如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcRⅠ酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcRⅠ酶切点有2个，B错误；为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时可使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理，C正确；一个图1所示的质粒分子经EcRⅠ切割后，产生两个黏性末端，含有2个游离的磷酸基团，D正确。
8. 镰状细胞贫血是一种单基因遗传病，由正常血红蛋白基因(HbA)突变为异常血红蛋白基因(Hbs)引起，它们的某片段如图甲。现对一胎儿进行基因检测，主要原理：限制酶MstⅡ处理扩增后的DNA，加热使酶切片段解旋后用荧光标记的 CTGACTCCT 序列与其杂交，最后电泳分离。图乙为电泳后荧光出现的三种可能性。下列叙述不正确的是（ ）
A. 提取胎儿DNA 样品后，扩增DNA 需要添加特定的引物
B. 若该胎儿检测结果为图乙一b，则其为镰状细胞贫血患者
C. 荧光标记序列越长，图乙-c中两个 DNA 条带间的距离越大
D. 用限制酶MstⅡ处理 DNA不充分，可能把正常人误判为携带者
【答案】C
【解析】
【分析】PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端向3'端延伸的。
【详解】A、引物的作用是作为DNA复制开始时DNA聚合酶的结合位点，在细胞外的条件下，只有通过引物，DNA才可以开始进行复制，因此提取胎儿DNA 样品后，扩增DNA需要添加特定的引物，A正确；
B、据图可知，正常血红蛋白基因 (HbA) 中含有MstⅡ限制酶的酶切位点，而贫血症基因 (Hbs) 中没有，限制酶MstⅡ处理扩增后的DNA，会导致正常血红蛋白基因(HbA)变短，单个分子量变小，出现图乙-aDNA条带，DNA条带距离加样孔较远，说明DNA分子量小，则表示含有正常血红蛋白基因 (HbA) ；出现图乙-bDNA条带，DNA条带距离加样孔较近，说明DNA分子量大，没有被切割，表示含有贫血症基因 (Hbs) ；出现图乙-cDNA条带表示含有贫血症基因 (Hbs) 和正常血红蛋白基因 (HbA) ，因此若某胎儿检测结果为图乙-b， 则该胎儿为镰刀形细胞贫血症患者，B正确；
C、凝胶电泳中，DNA分子量越大跑得越慢，因此图乙-c 中两个DNA 条带间的距离与切割后DNA分子量的大小有关，与荧光标记序列长短无关，C错误；
D、据图可知，正常血红蛋白基因 (HbA) 中含有MstⅡ限制酶的酶切位点，而贫血症基因 (Hbs) 中没有，用 MstⅡ限制酶处理DNA 不充分，正常血红蛋白基因 (HbA) 中中间位置可能没有被切割，结果可能与贫血症基因 (Hbs) 结果一样，因此可能把正常人误判为携带者，D正确。
故选C。
9. 回文序列是一段特定的核苷酸片段，其特点是一条核苷酸链与其互补链从5'端到3'端的碱基序列相同。短回文序列往往是限制酶的识别位点，下列叙述正确的是（ ）
A. 回文序列中（A+T）的数目与（C+G）的数目相等
B. 回文序列可能会存在于质粒中
C. 限制酶作用于回文序列的氢键
D. 短回文序列均由6个核苷酸组成
【答案】B
【解析】
【分析】限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。它们能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中的特定部位的磷酸二酯键断开。
【详解】A、回文序列是一段特定的核苷酸片段（两条链碱基互补），回文序列中(A+C)的数目与(T+G)的数目相等，A错误；
B、短回文序列往往是限制酶的识别位点，质粒是一段环状的DNA分子，存在限制酶的识别位点，故回文序列可能会存在于质粒中，B正确；
C、限制酶作用于回文序列的磷酸二酯键，C错误。
D、短回文序列往往是限制酶的识别位点，故短回文序列可能由4、6、8个或其他数量的核苷酸组成，D错误。
故选B。
10. 常见的启动子可分为三类：组织特异型启动子，调控基因只在某些特定的部位中表达；组成型启动子，驱动基因在所有细胞、组织和器官中持续表达；诱导型启动子，通常在光、盐等信号作用下，使目的基因的转录水平有所提高。下列叙述正确的是（ ）
A. 启动子是一段有特殊序列结构的DNA片段，是DNA聚合酶识别和结合的部位
B. 细胞分化与组织特异型启动子调控有关，与组成型启动子无关
C. 乳腺生物反应器的构建需要将组成型启动子与目的基因连接
D. 植物在长日照下开花，与诱导型启动子被激活有关
【答案】D
【解析】
【分析】动物基因工程的应用：培育快速生长的转基因动物，如转基因绵羊、转基因鲤鱼；改善畜产品品质的转基因动物，如乳汁中含乳糖较少的转基因牛；生产药物的转基因动物，如利用乳腺生物反应器生产药物；作器官移植供体的转基因动物，如无免疫排斥的转基因猪。
【详解】A、启动子是RNA聚合酶识别和结合的位点，A错误；
B、根据题干信息“组成型启动子，驱动基因在所有细胞、组织和器官中持续表达”，所以在细胞分化过程中，与组成型启动子有关，B错误；
C、组织特异性启动子，调控基因只在某些特定的部位中表达，而乳腺生物反应器需要将组织特异性启动子与目的基因连接，导入细胞中，保证基因在乳腺细胞中表达，C错误；
D、长日照下植物开花，跟特定基因的表达有关，需要相应的诱导型启动子被激活，D正确。
故选D。
11. 水中雌激素类物质（E物质）污染会导致鱼类雌性化等异常。斑马鱼的肌细胞、生殖细胞等均存在E物质受体，且幼体透明。科学家将绿色荧光蛋白基因（GFP）、生殖细胞凋亡基因（dg）转入斑马鱼，建立了一种快速的水体E物质监测方法。下列相关叙述错误的是（ ）

A. 构建含有GFP基因的表达载体时需使用限制酶和DNA连接酶
B. E物质一受体复合物可直接促进GFP基因的转录和翻译过程
C. 在被雌激素类物质污染的河水中该种斑马鱼的幼体会显绿色
D. 导入基因dg的目的是防止GFP基因扩散到其他生物体内
【答案】B
【解析】
【分析】将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
【详解】A、构建含有GFP基因的表达载体时需使用限制酶切割目的基因和载体，用DNA连接酶连接目的基因和载体，A正确；
B、E物质一受体复合物通过激活启动子直接进GFP基因的转录过程，不能促进翻译过程，B错误；
C、在被雌激素类物质污染的河水中，雌激素类物质（E物质）能够与相应的受体结合形成E物质一受体复合物，促进了FFP基因的表达，则该种斑马鱼的幼体会显绿色，C正确；
D、dg可促进生殖细胞的凋亡，可防止GFP基因扩散到其他生物体内，D正确。
故选B。
12. 日常生活中的泡菜、酸奶、果醋等许多食物和饮品都是由发酵技术获得的。下列有关叙述正确的是（ ）
A. 进行泡菜、酸奶、果醋发酵的微生物均通过有丝分裂进行增殖
B. 泡菜制作过程中，泡菜坛内增加的液体主要由微生物代谢产生
C. 家庭自制瓶装酸奶时，需对鲜奶进行高温灭菌，并定期拧松瓶盖
D. 制作果醋时，可利用果酒作为醋酸菌发酵所需要的碳源
【答案】D
【解析】
【分析】果酒制作的原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厌氧微生物，在缺氧条件下进行无氧呼吸，在氧气充足的条件下进行有氧呼吸，酵母菌具有核膜包被的细胞核，属于真核生物，适宜酵母菌生长的温度范围是18~25°C；果醋制作的原理是在氧气充足的条件下，醋酸菌将葡萄糖或者乙醇转化成醋酸，醋酸菌无核膜包被的细胞核，是原核生物，属于好氧菌，醋酸菌适宜生长的温度范围是30-35°C。
【详解】A、有丝分裂是真核生物体细胞的增殖方式，泡菜、酸奶的菌种乳酸菌、果醋的菌种醋酸菌，均为原核生物，进行二分裂，A错误；
B、泡菜制作过程中，泡菜坛内增加的液体主要由植物细胞中的水，B错误；
C、酸奶是乳酸菌进行乳酸发酵的产物，乳酸菌为厌氧菌，因此不能定期拧松瓶盖，C错误；
D、果醋发酵的菌种为醋酸菌，可以利用酒精产生醋酸，D正确。
故选D。
13. 我国《生活饮用水卫生标准》中关于生活饮用水的细菌标准的具体规定如下：细菌总数1mL水中不超过100个，大肠杆菌数1mL水中不超过3个。为了检验某城市自来水是否达标，某生物兴趣小组进行了相关的实验。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 实验过程中应用到涂布器、移液管等操作工具
B. 取样水龙头应用火焰灼烧，打开水龙头一段时间后再取样
C. 检验自来水中大肠杆菌数是否达标，可用稀释涂布平板法来分离并计数
D. 若空白对照组上有6个菌落，则在实验组数据基础上减去6，以获得最准确数据
【答案】D
【解析】
【分析】间接计数法（活菌计数法）：
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作：a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。
【详解】A、实验过程中应用到涂布器、移液管等操作工具，A正确；
B、为避免杂菌污染，取样水龙头应用火焰灼烧，打开水龙头一段时间后再取样，是为了防止温度过高杀死目的菌；B正确；
C、稀释涂布平板法可以用于活菌计数，故检验自来水中大肠杆菌数是否达标，可用稀释涂布平板法来分离并计数，C正确；
D、若空白对照组上有6个菌落，则说明该实验失败，实验数据不能采用，D错误。
故选D。
【点睛】
14. 某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”。下列有关叙述，错误的是
A. 消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害
B. 在愈伤组织培养中加入细胞融合的诱导剂，可获得染色体加倍的细胞
C. 出芽是细胞再分化的的结果，受基因选择性表达的调控
D. 生根时，培养基通常应含α-萘乙酸等生长素类调节剂
【答案】B
【解析】
【详解】植物组织培养过程为：离体组织脱分化形成愈伤组织，再分化长出丛芽，诱导生根，然后移栽形成完整植株。植物组织培养中要求无菌操作，以防止细菌感染，消毒时既要杀死材料表面的微生物，又要尽量减少消毒剂对细胞的伤害。因此A对；出芽是细胞再分化的结果，分化的实质是基因的选择性表达，受基因选择性表达的调控。因此C对；在诱导生根的过程中，需要生长素和细胞分裂素的共同作用，生长素与细胞分裂素比值高时，有利于根的分化，因此生根时，培养基中会含有α-萘乙酸等生长素类似物等调节剂，因此D对；B选项中，由于植物细胞有细胞壁，植物细胞的融合必须首先破坏细胞壁，再利用细胞膜的流动性加以融合，如果在愈伤组织培养中直接加入细胞融合的诱导剂，不能导致细胞融合，因此B选项错误，选B。
15. 吴茱萸是一种中药，其主要成分为吴茱萸碱（EVO），为研究EVO对人胃癌细胞增殖的影响及作用机制，科研人员做了相关实验。研究发现，EVO不仅能通过诱导胃癌细胞中p53蛋白的表达，使其细胞周期阻滞在G2/M期，还能影响细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达，最终起到治疗胃癌的作用。下列说法错误的是（ ）
A. 培养胃癌细胞，需将含动物血清的培养基置于恒温培养箱中
B. 加入胰蛋白酶制备的胃癌单细胞悬液，会出现接触抑制现象
C. p53可能是一种细胞周期抑制蛋白，EVO能够抑制胃癌细胞的增殖
D. 患者服用EVO后，胃癌细胞中Caspase-3含量会增加
【答案】B
【解析】
【分析】根据题干信息，“EVO不仅能通过诱导胃癌细胞中p53蛋白的表达，使其细胞周期阻滞在G2/M期，还能影响细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达”，说明EVO抑制胃癌细胞的增殖，促进胃癌细胞的凋亡，最终起到治疗胃癌的作用。
【详解】A、细胞培养时培养液中一般需加入动物血清，因为血清可以补充合成培养基中缺乏的物质（如促细胞生长因子等），A正确；
B、胃癌细胞糖蛋白减少，粘着性降低，不会出现接触抑制现象，B错误；
C、根据题干信息，“EVO不仅能通过诱导胃癌细胞中p53蛋白的表达，使其细胞周期阻滞在G2/M期”，说明p53可能是一种细胞周期抑制蛋白，EVO能够抑制胃癌细胞的增殖，C正确；
D、EVO影响细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达，则患者服用EVO后，胃癌细胞中Caspase-3的含量会增加，促进胃癌细胞的凋亡，D正确。
故选B。
16. 非洲猪瘟病毒(ASFV)是一种有囊膜的双链DNA病毒，可感染家猪和野猪，引起家猪和野猪的死亡。研究者尝试利用ASFV 的. p30蛋白制作单克隆抗体(单抗)，并用如图所示方法对单克隆抗体制备过程中的12个杂交瘤细胞所产生的单抗进行检测。下列说法不正确的是（ ）
A. 利用含动物血清的培养基培养ASFV，获得p30蛋白
B. 利用p30作为抗原免疫小鼠，取其脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合
C. 图示过程所用的p30抗原量和二抗量远超待测单抗的量
D. 可根据反应体系中颜色的深浅来判断待测单抗的含量
【答案】A
【解析】
【分析】题图分析：图中所示为单克隆抗体筛选过程：把抗原固定在一定的固体表面，把待测单克隆抗体与抗原混合，如果单克隆抗体与该抗原能发生结合反应，则该单克隆抗体就是所需要的抗体。但是该反应无法用肉眼观察，因此还要用二抗来进行显色。显色的原理是，用单抗作为抗原制备出二抗，然后把催化无色底物反应的酶与之结合，单抗和二抗会发生特异性结合，二抗上携带的酶催化无色底物反应，生成有色产物。依据发不发生显色反应，可以判定单克隆抗体与固体表面抗原有没有发生特异性结合，从而判定待测单抗是否是目的单抗。
【详解】A、病毒没有细胞结构，要寄生在宿主细胞中，所以利用含动物血清的培养基培养ASFV，无法获得子代病毒，也无法获得p30蛋白，A错误；
B、把p30蛋白注射到小鼠体内，小鼠被p30蛋白免疫，脾脏中会存在相应的被p30蛋白免疫的B淋巴细胞，已免疫的B淋巴细胞可与骨髓瘤细胞融合，B正确；
C、图示过程所用的p30抗原量要大，才能尽可能的与单抗结合，提高检测准确度。二抗的量也应该大，一是因为量大产物多，颜色明显。二是二抗量大，即使单抗量少也能检测得出来，提高检测的准确性，C正确；
D、反应体系中单抗越多，结合的二抗越多，酶催化产生的有色产物越多颜色越深，D正确。
故选A。
17. 我国科学家利用体细胞诱导产生多能干细胞（iPS 细胞），并将其注射到无法发育到 成体阶段的四倍体囊胚中，最终获得克隆鼠，经鉴定证实克隆鼠确实从 iPS 细胞发育而来，并可繁殖后代。实验流程见下图，下列分析正确的是（ ）
A. 克隆鼠的遗传物质来自于黑鼠和灰鼠
B. 为避免胚胎移植带来的免疫排斥，应对白鼠使用免疫抑制剂
C. 本实验使用到体外受精和胚胎分割移植等技术
D. 诱导多能干细胞技术可应用于组织器官移植
【答案】D
【解析】
【分析】胚胎移植是指将雌性动物的早期胚胎或者通过体外受精及其他方式得到的胚胎移植到同种的、生理状态相同的其他雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。其中提供胚胎的个体称为“供体”，接受胚胎的个体叫“受体”。
【详解】A、分析图可知，克隆鼠的遗传物质来自于黑鼠，A错误；
B、大量的研究证明，一般来说受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能，B错误；
C、本实验运用到动物细胞培养、胚胎移植，没有使用到体外受精和胚胎分割移植等技术，C错误；
D、诱导多能干细胞技术可增殖分化形成特定的组织和器官，应用于组织器官移植，减少免疫排斥反应，D正确。
故选D。
18. 为了增加菊花花色类型，研究者从其他植物中克隆出花色基因C(图1)，拟将其与质粒(图2)重组，再借助农杆菌导入菊花中。下列操作与实验目的不符的是（ ）

A. 用限制性内切核酸酶EcRⅠ和DNA 连接酶构建重组质粒
B. 用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞
C. 在培养基中添加卡那霉素，筛选被转化的菊花细胞
D. 用PCR技术检测C基因是否整合到菊花染色体上
【答案】C
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：
(1)目的基因的获取：方法有从基因文库中获取利用PCR技术扩增和人工合成。
(2)基因表达载体的构建：基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
(3)将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法:将目的基因导入动物细胞最有效的方法是是微注射法:将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
(4)目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原—体杂交技术。
【详解】A、根据目的基因两侧的限制酶切割位点可知，用限制性内切核酸酶EcRⅠ和DNA连接酶构建重组质粒，A正确；
B、将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，即用含C基因的农杆菌侵染菊花愈伤组织，将C基因导入细胞，B正确；
C、图2中显示标记基因是潮霉素抗性基因，因此可在培养基中添加潮霉素，筛选被转化的菊花细胞，C错误；
D、可采用PCR技术检测C基因是否整合到菊花染色体上，D正确。
故选C。
19. 引物在极大程度上决定了 PCR 的成败，下列关于引物的说法不正确的有（ ）
A. PCR 和生物体内的DNA合成都需要引物，PCR 引物一般是单链DNA
B. 若引物的 CG碱基含量相对较高，PCR 退火步骤的温度需要适当升高
C. 在 PCR 的退火步骤，两种引物分别结合在模板链的3'端和5'端
D. 若初始有 10个胰岛素基因，PCR 中进行10轮循环，至少需要20 460个引物分子
【答案】C
【解析】
【分析】PCR原理：在高温作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。
【详解】A、PCR和生物体内的DNA合成都需要引物，体内的DNA复制引物通常是RNA，PCR引物一般是单链DNA，A正确；
B、G与C之间有3个氢键，稳定性高，若引物的CG碱基含量相对较高，PCR退火步骤的温度需要适当升高，B正确；
C、在PCR的退火步骤，两种引物都结合在模板链的3’端，C错误；
D、若初始有10个胰岛素基因，PCR中进行10轮循环，得到10×210个=10240个DNA分子，共1024×2=20480条链，由于初始的20条链不需要引物，故至少需要20480-20=20460个引物分子，D正确。
故选C。
20. 土壤农杆菌含有一个大型的Ti质粒，在侵染植物细胞的过程中，其中的T-DNA片段转入植物的基因组。若想用基因工程手段获取抗旱植株，以下分析不合理的是（ ）
A. 若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，目的基因的插入位置应该在T-DNA片段内，且要保证复制起始点和用于转移T-DNA的基因片段不被破坏
B. 将重组Ti质粒导入土壤农杆菌中时，可以用钙离子处理细菌
C. 用含有重组Ti质粒的土壤农杆菌感染植物细胞后，可通过植物组织培养技术得到具有抗旱基因的植物
D. 若能在植物细胞中检测到抗旱基因，则说明该基因工程项目获得成功
【答案】D
【解析】
【分析】农杆菌的特点是易感染双子叶植物和裸子植物，对单子叶植物没有感染力。农杆菌的Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。农杆菌转化过程：目的基因插入Ti质粒的T-DNA→农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生的识记能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系的能力；能从题文提取有效信息，并结合所学知识，对生物学问题作出准确判断的能力。
【详解】A、土壤农杆菌含有一个大型的Ti质粒，在侵染植物细胞的过程中，其中的T-DNA片段可转入植物的基因组，所以若用Ti质粒作为抗旱基因的载体时，目的基因的插入位置应该在T-DNA片段内，且要保证复制起始点和用于转移T-DNA的基因片段不被破坏，A正确；
B、将目的基因导入细菌时，需要用Ca2+处理细菌，使其成为易于吸收周围环境中DNA分子的感受态，B正确；
C、用含有重组Ti质粒的土壤农杆菌去感染植物细胞，使其具有抗旱基因，然后再通过植物组织培养技术将受体细胞培养成具有抗旱基因的植物，C正确；
D、能够在植物细胞中检测到抗旱目的基因，只能说明目的基因导入成功，不能说明该基因成功表达，即不能说明该基因工程项目获得成功，D错误。
故选D。
21. 奶酪是人类最古老的食品之一，其种类繁多。如图是天然奶酪的简要制作过程，其中凝乳是指凝固的牛奶，酸性物质一般都可以使牛奶变性凝固，小牛的胃中有一种称为凝乳酶的物质也可以将牛奶凝固成凝乳利于消化。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 为了保证奶酪的营养成分，牛奶在乳酸发酵之前应该煮沸消毒处理
B. 乳酸发酵过程中可能产生了有机酸或凝乳酶能使牛奶中蛋白质凝固
C. 加热压缩过程可以去除凝乳中多余的水分，有利于奶酪的硬化和保存
D. 由奶酪制作过程可推测，儿童食用天然奶酪比牛奶更容易消化吸收
【答案】A
【解析】
【分析】奶酪是以牛奶为原料，加入乳酸菌发酵而成，牛奶经乳酸菌的发酵后形成凝乳，利于消化。酸性物质一般都可以使牛奶变性凝固，小牛的胃中有一种称为凝乳酶的物质也可以将牛奶凝固成凝乳利于消化。
【详解】A、煮沸消毒法是在 100℃煮沸 5～6分钟可以杀死微生物细胞和一部分芽孢，但对于牛奶这些不耐高温的液体，使用巴氏消毒法，在 70～75℃煮钟或 80℃煮钟，不仅可以杀死牛奶中的微生物，还可以使牛奶的营养成分不被破坏， A 错误；
B、由题干信息可知酸性物质和凝乳酶都可以促使牛奶凝固形成凝乳，而图中经过了乳酸发酵，牛奶形成了凝乳，因此乳酸发酵过程中可能产生了有机酸或凝乳酶能使牛奶中蛋白质凝固， B 正确；
C、加热压缩过程去除水分，水分减少，奶酪的硬度加大，不利于微生物生长，有利于储存， C 正确；
D、由制作过程可知，奶酪制作过程中经过了微生物发酵，将牛奶中蛋白质分解或变性处理，都有利于蛋白质的消化和吸收，D 正确。
故选A。
【点睛】
22. 为了解病原微生物对四种抗生素的敏感程度，某研究小组进行了相关药敏实验，图 1 为部分实验器材。将含有相同浓度的抗生素 I～Ⅳ四个大小相同的纸片分别贴在长满测试菌的平板上，实验结果如图 2。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 为获得长满测试菌的平板，需要使用图 1 中器材①②③
B. 图 2 中 II 形成的抑菌圈较小，可能是病原微生物对药物较敏感
C. 图 2 抑菌圈中的菌落可能是在抗生素 IV 作用下产生了突变株
D. 不同抗生素在平板上的扩散速度不同会影响实验结果
【答案】D
【解析】
【分析】1、微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养；在划线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。
2、分析题图：抑菌圈越大，对抗生素的抗性越强，则对抗生素Ⅳ的抗性最强，但其中出现了菌落，可能是发生了突变。
【详解】A、为获得长满测试菌的琼脂平板，需要采用稀释涂布平板法，该方法需要使用图1中①酒精灯（操作需要在酒精灯火焰旁进行，酒精灯对涂布器进行灼烧灭菌）、④涂布器和③培养基， ②为接种环(接种工具)，是平板划线法接种时需要使用的接种工具，用平板划线法不能获得长满测试菌的平板，A错误；
B、图2中II处透明圈最小，说明此处微生物对该药物敏感度最低，B错误；
C、突变株的出现不是在抗生素的作用下产生的，抗生素只能起选择作用，C错误；
D、不同抗生素在平板上的扩散速度不同会影响实验结果中抑菌圈的大小 ，D正确。
故选D。
23. 如图表示工厂化生产紫杉醇的过程，对红豆杉愈伤组织进行液体悬浮培养，分离出单细胞，再用组成为“普通培养基 +0.5mg⋅L⁻¹NAA+0.5mg.L⁻¹BA(BA是一种细胞分裂素)+25g•L⁻¹蔗糖”的培养液培养获得大量红豆杉细胞，下列叙述错误的是（ ）
A. 培养液中添加的“NAA+BA”可以促进愈伤组织细胞增殖
B. 选取红豆杉树皮做外植体不易获得紫杉醇
C. 紫杉醇为红豆杉体内生长所必需的一种次生代谢物
D. 外植体的使用及整个培养过程中需要保证严格的无菌环境
【答案】C
【解析】
【分析】除了幼嫩纸条外，其余树皮均为死细胞积累而成。通过对红豆杉细胞进行培养可以获得紫杉醇，说明紫杉醇是红豆杉细胞外分泌的物质，不是红豆杉细胞基本生命活动所必需的物质。
【详解】A、“普通培养基+0.5mg·Ｌ-1NAA+0.5mg·Ｌ-1BA（BA是一种细胞分裂素）＋25g·L-1蔗糖”的培养液培养红豆杉愈伤组织获得大量红豆杉细胞，说明“NAA+BA”可以促进愈伤组织细胞增殖，A正确；
B、除了幼嫩枝条外，其余树皮均为死细胞积累而成，所以选取红豆杉树皮做外植体不容易获得活细胞，就更不易得到紫杉醇，B正确；
C、通过对红豆杉细胞进行培养可以获得紫杉醇，说明紫杉醇是红豆杉细胞外分泌的物质，不是红豆杉细胞基本生命活动所必需的物质，C错误；
D、外植体使用及整个培养过程中需要保证严格的无菌环境，以免被杂菌污染，造成培养细胞大面积死亡或产物被转化，D正确。
故选C。
24. 某兴趣小组为研究“使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响”，将每道菜分为3盘，一盘取样冷藏，一盘使用公筷，一盘不用公筷，实验过程如下图。下列相关操作或叙述正确的是（ ）
A. 配制培养基X并在121℃、100kPa条件下处理15~30min
B. 固体培养基X对菜品中的细菌有选择性
C. 在固体培养基X上可用平板划线法或涂布法接种细菌
D. 根据菌落的特征可以准确判断细菌的种类
【答案】A
【解析】
【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；微生物培养的关键是无菌技术。
【详解】A、配制培养基需要采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，即在121℃、100kPa条件下处理15～30min，A正确；
B、固体培养基没有做任何处理，所以对菜品中的细菌没有选择性，B错误；
C、据题意可知，在固体培养基X上接种后还需进行计数，故只能用涂布法接种而不能用平板划线法，C错误；
D、在一定的培养条件下，不同种微生物表现出各自稳定的菌落特征，根据菌落的形状、大小、颜色等特征，可以初步区分出不同种微生物，但不能准确判断，D错误。
故选A。
25. 2n/4n嵌合体胚胎是指用四倍体(4n)胚胎与二倍体(2n)胚胎或胚胎干细胞(ES 细胞)进行聚合，形成由二倍体和四倍体细胞组成的嵌合体。嵌合体胚胎构建的常用方法如图。通过检测发现用ES细胞经2n/4n嵌合体方法获得的克隆鼠体内均为 2n细胞来源。下列叙述错误的是（ ）

A. 图中受精卵是发育到MⅡ期的卵母细胞和获能的精子体外受精而形成
B. 利用显微注射法将2n的 ES细胞注射至 A 的囊胚内完成2n/4n嵌合体胚胎B的构建
C. 嵌合体胚胎 C发育到原肠胚时期可植入代孕母鼠，移植前通常对代孕母鼠作同期发情处理
D. 推测2n/4n嵌合体胚胎发育时2n和4n这两种细胞类型表现出非随机性分布的特点
【答案】C
【解析】
【分析】1、胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。胚胎工程的许多技术，实际是在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。
2、嵌合体-遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的个体。
【详解】A、图中为体外受精，受精卵是将发育到减数第二次分裂中期的卵母细胞和经过获能处理后的精子体外受精而形成的，A正确；
B、显微注射法是构建嵌合体胚胎常用的方法，为了提高成功率，待胚胎A发育到囊胚期时，利用显微注射法将2N的ES细胞注射至A的囊胚内完成2n/4n嵌合体胚胎B的构建，B正确；
C、待嵌合体胚胎C发育到桑椹胚或囊胚期可植入代孕母鼠体内，移植前通常对代孕母鼠做同期发情处理使其达到受孕的状态，C错误；
D、2n/4n嵌合体方法获得的克隆鼠体内均为2n细胞来源由图可知只有胎盘由4n细胞发育而成，由此推测，2n/4n嵌合体胚胎在发育过程中，2n和4n这两种细胞类型表现出非随机性分布的特点，D正确。
故选C。
26. 甲醇酵母菌是基因工程中常用的受体菌，它可以高效表达外源蛋白，但自身蛋白分泌到培养基的较少。研究人员将人的胶原蛋白基因导入甲醇酵母中并成功表达。下列有关叙述正确的是（ ）
A. 用两种酶切割目的基因和质粒，可防止目的基因反向连接和质粒的自身环化
B. 常用显微注射法将胶原蛋白基因导入甲醇酵母中
C. 与大肠杆菌相比，甲醇酵母作受体菌所表达出的胶原蛋白与人体产生的胶原蛋白结构更相近
D. 与其他酵母菌相比，甲醇酵母作受体菌便于表达出的胶原蛋白的分离与纯化
【答案】ACD
【解析】
【分析】基因工程通常要有多种工具酶、目的基因、载体和宿主细胞等基本要素，并按照一定的程序进行操作，它包括目的基因的获得、重组DNA的形成，重组DNA导入受体细胞、筛选含有目的基因的受体细胞和目的基因的表达等几个方面。基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合 ）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心，其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。
【详解】A、用两种酶切割目的基因和质粒，可以防止目的基因的反向连接和质粒的自身环化，A正确；
B、显微注射法一般用来将目的基因导入受精卵中，不能用显微注射法将胶原蛋白基因导入甲醇酵母中，常用Ca2+处理细胞，使其处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组目的基因导入微生物细胞，B错误；
C、与大肠杆菌做受体相比，甲醇酵母为真核生物，表达出的胶原蛋白经过内质网和高尔基体的加工，所以与人体产生的胶原蛋白结构更相近，C正确；
D、与其他酵母菌相比，甲醇酵母可以高效表达外源蛋白，但自身蛋白分泌到培养基的较少，便于目的蛋白的分离和纯化，D正确。
故选ACD。
27. 枯草杆菌蛋白酶能催化蛋白质水解为氨基酸，在有机溶剂中也能催化多肽的合成。这些碱性蛋白酶具有重要的应用价值，被广泛应用于洗涤剂、制革及丝绸工业。将枯草杆菌蛋白酶分子的Asp（99）和Glu（156）改成，可使其在时的活力提高10倍。下列说法正确的是（ ）
A. 完成氨基酸的替换需要通过改造基因实现
B. 该成果体现了蛋白质工程在培育新物种方面具有独特的优势
C. 经蛋白质工程改造后的枯草杆菌蛋白酶活性提高这一性状不可遗传
D. 蛋白质工程最终要达到的目的是获取编码蛋白质的基因序列信息
【答案】A
【解析】
【分析】蛋白质工程是将控制蛋白质的基因进行修饰改造或合成新的基因，然后运用基因工程合成新的蛋白质。蛋白质工程的过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）。
【详解】A、氨基酸的的排列顺序是由基因决定的，因此完成氨基酸的替换需要通过改造基因实现，A正确；
B、该成果培育了新品种，而不是新物种，B错误；
C、经蛋白质工程改造后的枯草杆菌蛋白酶的基因发生了改变，因此经蛋白质工程改造后的枯草杆菌蛋白酶活性提高这一性状可以遗传，C错误；
D、蛋白质工程是在深入了解蛋白质分子的结构与功能关系的基础上进行的，虽然合成了改造的基因，但它最终要达到的目的是改造现有蛋白质或制造新的蛋白质，满足人类的需求，D错误。
故选A。
28. 为使玉米获得抗除草剂性状，科研人员进行了相关操作(如图所示)。含有内含子的报鉴基因不能在原核生物中正确表达，但能在真核生物中正确表达，其正确表达产物能催化无色物质 K 变为蓝色物质。转化过程中愈伤组织表面常残留农杆菌，残留的农杆菌会导致未转化的愈伤组织也可在含除草剂的培养基中生长。下列叙述错误的是（ ）

A. T-DNA 可将基因G转移并整合到愈伤组织细胞的染色体DNA 上
B. 利用物质 K 和抗生素进行筛选1，可获得蓝色的农杆菌菌落
C. 利用物质 K 和除草剂进行筛选 2，易于获得抗除草剂的转基因植株
D. 题中愈伤组织重新分化为芽、根等器官的过程中，需要添加植物激素
【答案】B
【解析】
【分析】1、农杆菌转化法的具体过程：（1）利用土壤的Ti质粒构建基因表达载体，即将目的基因整合到土壤农杆菌的Ti质粒上。（2）将整合了目的基因的Ti质粒导入土壤农杆菌细胞内。（3）利用土壤农杆菌感染植物细胞，该过程实际上是将含有目的基因的土壤农杆菌Ti质粒导入植物细胞内。（4）含有目的基因的土壤农杆菌Ti质粒进入植物细胞后，可以把自己的一段基因整合到细胞核中的染色体上，这段基因中包含了目的基因。2、原理：农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上。3、农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对单子叶植物没有感染力；Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。4、转化：目的基因插入Ti质粒的T-DNA上 农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。
【详解】A、农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上，根据农杆菌的这一特点，将目的基因（基因G）插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因（基因G）整合到愈伤组织细胞的染色体DNA上，A正确；
B、农杆菌属于原核生物，含有内含子的报告基因不能在原核生物中正确表达，故不会出现农杆菌的蓝色菌落，B错误；
C、根据题意可知，报告基因的产物能催化无色物质K呈现蓝色，而愈伤组织表面残留的农杆菌会导致未转化的愈伤组织能在含除草剂的培养基中生长，因此利用物质K和除草剂进行筛选2，更易于获得抗除草剂的转基因植株，C正确；
D、愈伤组织重新分化为芽、根等器官的过程中，需要添加植物激素，如生长素和细胞分裂素，D正确。
故选B。
29. 大肠杆菌经溶菌酶和阴离子去垢剂（SDS）处理后，拟核DNA就会缠绕在细胞壁碎片上，静置一段时间，质粒分布在上清液中。利用上述原理可初步获得质粒DNA。下列关于质粒的粗提取和鉴定的分析错误的是（ ）
A. DNA不溶于酒精，而某些蛋白质溶于酒精，可以用冷酒精析出上清液中的DNA
B. DNA能溶于2ml/L的NaCl溶液，可用二苯胺试剂在沸水加热条件下鉴定DNA
C. 用限制酶I和Ⅱ处理提取的产物，电泳出现图结果，说明未提取到质粒
D. 用琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒，被染色的质粒还需要通过紫外灯照射才能看到结果
【答案】C
【解析】
【分析】DNA的鉴定：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。
DNA不容易酒精溶液，细胞中的某些蛋白质可以溶解于酒精，利用这一原理可以将蛋白质和DNA进一步分离。
【详解】A、通过分析可知，DNA不溶于酒精，而某些蛋白质溶于酒精，可以用冷酒精析出上清液中的DNA，A正确；
B、DNA能溶于2ml/LNaCl溶液，这样可以去除DNA中的某些杂质，提取的DNA可用二苯胺试剂在沸水加热条件下生成蓝色，B正确；
C、限制性酶Ⅰ和限制性酶Ⅱ处理提取的产物，只得到一条带，说明提取物是环状DNA，即提取物为质粒，C错误；
D、用琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒，被染色的质粒还需要通过紫外灯照射才能看到结果，D正确。
故选C。
【点睛】
30. 脱氧核苷三磷酸((dNTP)3'-C上的一OH 脱 O 后转化为双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。在 PCR 反应体系中加入模板、4 种dNTP、1种³²P标记的ddNTP 和1种引物及其他所需材料，经扩增后获得不同长度的DNA片段混合物。分别利用如图所示 4 种³²P标记的adNTP 进行PCR 后，将产物点样在变性凝胶上进行电泳分离，通过放射性自显影检测，不可以读出DNA的核苷酸序列。下图为某待测DNA 片段的电泳检测结果，下列说法错误（ ）

A. PCR反应体系中的退火温度适当升高可以提高PCR 特异性
B. 连接到核苷酸链上的ddNTP 因3’—C 上没有—OH 而导致 DNA 延伸中断
C. 该 DNA 片段的待测碱基序列为5'-TTGGCTGCAA-3'
D. 该 PCR 过程中待测 DNA 片段只有 1条链作为模板
【答案】C
【解析】
【分析】在合适的条件下，当DNA模板、引物及脱氧核苷三磷酸（dNTP）存在时，耐高温的DNA聚合酶能够催化DNA链的合成。ddNTP是双脱氧核苷三磷酸，其3'-C位上连的是脱氧后的羟基。在一般情况下，3'-C位上-OH作为下一个dNTP连接的位点，因此失去氧原子的ddNTP不能与下一个dNTP连接，从而终止DNA链的延伸。
【详解】A、升高退火温度可增加引物与模板结合的特异性，从而提高PCR特异性，A正确；
B、ddNTP为双脱氧核苷三磷酸，只要ddNTP掺入链端，该链就停止延长的原因是3'-C上不是-OH，不能与下一个脱氧核苷酸的磷酸形成磷酸二酯键，B正确；
C、当ddNTP结合时，DNA合成终止，因此DNA合成链可能随机停止在任何碱基处，根据四种碱基的条带位置反向推出DNA序列。PCR扩增时，由5'端向3'端延伸，则根据电泳图及点样点的位置可知，该DNA片段的待测碱基序列为3'-TTGGCTGCAA-5'，C错误；
D、该PCR过程中待测DNA片段如果有两条链做模板，四种碱基的条带位置可能会有四条，图示都少于四条，故只有1条链作为模板，与引物结合后，在DNA聚合酶作用下子链沿从5′端向3′端方向进行延伸反应，D正确。
故选C。
二、多项选择题(15分)
31. 通过设计引物，运用 PCR 技术可以实现目的基因的定点诱变。如图为基因工程中获取突变基因的过程，其中引物1序列中含有一个碱基T不能与目的基因片段配对，但不影响引物与模板链的整体配对，反应体系中引物1 和引物2的5'端分别设计增加限制酶 a 和限制酶b的识别位点。有关叙述不正确的是 （ ）

A. 在 PCR 反应体系中还需要加入 4种游离核苷酸、解旋酶、Taq DNA 聚合酶等
B. 第2 轮 PCR，引物1 能与图中②结合并且形成两条链等长的突变基因
C. 引物中设计两种限制酶识别位点有利于目的基因定向插入运载体
D. 第3轮 PCR 结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA 占 1/2
【答案】ABD
【解析】
【分析】PCR的原理是DNA双链复制，步骤包括高温变性、复性、延伸。该过程需要耐高温的DNA聚合酶催化，需要四种游离的脱氧核苷酸做原料。根据图中可得，由于引物的一个碱基在不影响与模板链整体配对的前提下不与目的基因配对，再利用PCR技术实现了目的基因的定点诱变。其技术原理是碱基互补配对原则。
【详解】A、在PCR反应体系中还需要加入4种游离脱氧核苷酸、Taq酶等，但不需要加入解旋酶（高温解旋），A错误；
B、第2轮PCR，引物1能与图中②结合并且形成两条链不等长的突变基因，②较长，B错误；
C、引物中设计两种限制酶识别位点，可以配合载体的限制酶识别位点，帮助目的基因定向定点插入运载体，避免发生自身环化，C正确；
D、在第3轮PCR结束后，含突变碱基对且两条链等长的DNA有2个，总DNA分子共8个，所以比例为1/4，D错误。
故选ABD。
32. 为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行下图A所示的实验。同学甲进行步骤④的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图B所示。同学乙也按照同学甲的接种方法进行了步骤④的操作：将1mL样品稀释100倍，在5个培养基平板上分别接入0.1mL稀释液，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，无菌落产生。下列叙述正确的是（ ）

A. 乙同学计算得出每升样品中的活菌数约为3.3×108个
B. 步骤③与步骤②中培养基成分的最大区别是步骤③的培养基中石油是唯一碳源
C. 步骤④甲同学出现图B结果可能的操作失误是样品的稀释程度太低导致
D. 步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出能分解石油的细菌
【答案】B
【解析】
【分析】1、实验室中微生物的筛选，可以人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基，本题中③为以石油为唯一碳源的选择培养基，能分解石油的细菌可以生长。
2、稀释涂布平板法除可以用于分离微生物外，也常用来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数为30~300的平板进行计数。
【详解】A、乙同学实验平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191，数据之间差值过大，应分析误差产生的原因，重新进行实验，不能这些数值去计算，A错误；
B、该实验的目的是为了分离和纯化高效分解石油的细菌，因此步骤③是以石油是唯一碳源的选择培养基，与步骤②中培养基成分相比，最大的区别是石油是唯一碳源，B正确；
C、步骤④甲同学出现图B结果是菌落分布不均匀，可能的操作失误是用涂布器涂布平板时涂布不均导致，C错误；
D、步骤⑤后取样测定石油含量的目的是筛选出能高效分解石油的细菌，D错误。
故选B。
33. 研究者通过如图所示的操作过程，获得导入S基因的基因编辑小鼠。下列相关叙述不正确的是（ ）

A. 过程①用促性腺激素处理以获得更多卵母细胞
B. 过程②在雌鼠a的输卵管内完成受精
C. 过程③需将表达载体注射到子宫中
D. 过程④需抑制雌鼠b对植入胚胎的免疫排斥
【答案】BCD
【解析】
【分析】胚胎移植的生理学基础：①动物发情排卵后，同种动物的供、受体生殖器官的生理变化是相同的。这就为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境。②早期胚胎在一定时间内处于游离状态。这就为胚胎的收集提供了可能。③受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应。这为胚胎在受体的存活提供了可能。④供体胚胎可与受体子宫建立正常的生理和组织联系，但供体胚胎的遗传特性在孕育过程中不受影响。
【详解】A、过程①用促性腺激素对供体进行超数排卵处理，获得更多的卵母细胞，A正确；
B、过程②是体外受精，体外受精是将获能的精子和培养成熟的卵子置于适当的培养液中共同培养一段时间，来促使它们完成受精，B错误；
C、③是导入含S基因的表达载体，应该将含S基因的表达载体通过显微注射法注射至小鼠的受精卵中，C错误；
D、受体对移入子宫的外来胚胎不发生免疫排斥反应，故过程④不需要抑制雌鼠b对植入胚胎的免疫排斥，D错误。
故选BCD。
34. 基因工程在农牧业、医药卫生和食品工业等多方面的应用发展迅速，如图表示利用基因工程技术生产人血清白蛋白的两条途径。下列叙述错误的是（ ）
A. 若某基因是从人的细胞内提取mRNA经逆转录形成的，则该基因中不含启动子序列
B. 扩增目的基因时，利用耐高温的DNA聚合酶从引物a、b的3'－端进行子链合成
C. 导入人血清白蛋白基因的绵羊受体细胞是乳腺细胞
D. 利用农杆菌转化法可将含有目的基因的重组质粒整合到植物受体细胞的染色体DNA上
【答案】CD
【解析】
【分析】将目的基因导入植物细胞常用农杆菌转化法，农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可整合到受体细胞的染色体DNA上。基因表达载体常包括目的基因、启动子、终止子、标记基因。标记基因是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。
【详解】A、启动子是位于DNA上RNA聚合酶的结合部位，mRNA是由基因启动子后面的序列编码而来的，若某基因是从人的细胞内提取mRNA经逆转录形成的，则该基因中不含启动子序列，A正确；
B、引物的延伸方向为3'端，扩增目的基因时，利用耐高温的DNA聚合酶从引物a、b的3'－端进行子链合成，B正确；
C、导入人血清白蛋白基因的绵羊受体细胞不是乳腺细胞，而是受精卵或早期胚胎细胞，C错误；
D、农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上，根据农杆菌的这一特点，将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因的T-DNA整合到植物细胞中染色体的DNA上，D错误。
故选CD。
35. 表观遗传调节异常是肿瘤发生发展的重要因素之一，N6一甲基腺苷(m6A)是真核生物 mRNA上最常见的一种修饰。研究发现，胃癌细胞中存在 m6A 去甲基化酶(ALKBH5)过表达和 STC2(癌症相关基因)mRNA的m6A修饰水平降低的异常现象。科研人员利用基因工程技术实现ALKBH5 基因沉默和STC2 基因的过表达，以研究 ALKBH5 介导的m6A 甲基化修饰对胃癌细胞迁移的影响(其中STC2基因的α链为转录的模板链)。研究人员分别用不同方式处理胃癌细胞，并测得胃癌细胞迁移标志蛋白含量如图3所示。下列说法正确的是（ ）
注:a、b、c、d为四种引物序列;BamHⅠ、Hind Ⅲ、SacⅠ为限制酶。
A. PCR 反应体系需要加入耐高温的 DNA 聚合酶，该酶主要在延伸过程起作用
B. 利用PCR扩增目的基因时，需要在引物b的5'端添加BamHI识别序列和强启动子序列
C. 为确保目的基因正确插入质粒；需要选择限制酶BamHI和HindⅢ切割质粒
D. 据图3可知，ALKBH5 基因过表达导致STC2基因表达的mRNA去甲基化
【答案】AD
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：
1、目的基因的获取。
2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
4、目的基因的检测与鉴定：
（1）分子水平上的检测：检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原—抗体杂交技术。
（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶主要在延伸过程起作用，催化DNA双链打开，A正确；
B、利用PCR扩增目的基因STC2时，引物使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸，且STC2基因的a链为转录的模板链，需要在引物c的5'端添加BamHⅠ识别序列和强启动子序列，在引物b的5'端添加SacⅠ识别序列，B错误；
C、目的基因STC的两侧有BamHI、SacⅠ的识别位点，二者不会把强启动子切割掉，因此为确保目的基因正确插入质粒，需要选择BamHI、SacⅠ限制酶切割质粒，C错误；
D、根据题意“胃癌细胞中存在m6A去甲基化酶（ALKBH5）过表达和STC2（癌症相关基因）mRNA的m6A修饰水平降低的异常现象”，并结合图示可知ALKBH5基因过表达导致STC2基因表达的mRNA去甲基化，进而导致STC2基因过表达而引起癌细胞迁移，D正确。
故选AD。
三、非选择题(36分)
36. 饲养动物常用的植物饲料中含有难溶的植酸钙等物质，很难被动物吸收利用，还影响对其他营养物质的利用。若在饲料中添加植酸酶，则能催化其水解成为可以吸收利用的磷酸盐等。以下是科研人员从作物根部土壤中分离产植酸酶的菌株的过程示意图。请分析作答。
（1）上图培养基中至少需要添加_______________等物质。
（2）为防止杂菌污染，要对培养基和培养皿等进行灭菌处理，接种后需将培养皿呈________状态放置。
（3）统计平板上菌落数，就能大致推测出样品中的活菌数。通常每种稀释液需涂布3个平板，取其平均值，若将最后一个试管中的菌液每次吸取0.1mL涂布培养后获得平均值是à，则1g土壤中含有此菌的菌株数是________。统计获得的菌落数比实际的活菌数________，原因是________________________________________°
（4）若要对上述菌株进行纯化，在第一区域划线后须将该工具____________后再划线，在第二次划线时须从第一次划线的末端开始，这样做的目的是从上一区域获得菌种。
（5）产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示 A~E 五种菌株中，_______是产植酸酶最理想的菌株。
【答案】（1）水、碳源、氮源和无机盐
（2）倒置 （3） ①. a106 ②. 低##少 ③. 当两个或多个细胞连在一起时，观察计数时只能计为一个菌落 （4）灼烧、冷却
（5）E
【解析】
【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质和氧气的要求。
【小问1详解】
培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，因此上图培养基中至少需要添加，应含有碳源、氮源、水、无机盐等基本营养物质。
【小问2详解】
为防止杂菌污染，要对培养基和培养皿等进行灭菌；接种后须将培养皿呈倒置状态放置，这样做的目的是防止培养基中的水分过快蒸发和防止冷凝的水珠倒流污染培养基。
【小问3详解】
菌液每次吸取0.1mL涂布培养后获得平均值是a，图中用于计数的稀释倍数为105，则1g土壤中含有此菌的菌株数是a÷0.1×105=a×106个；图示计数方法是稀释涂布平板法，该方法统计获得的菌落数比实际的活菌数低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，观察计数时只能计为一个菌落。
【小问4详解】
接种时，在第一区域划线后须将接种环灼烧（为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端）并冷却（以免接种环温度太高，杀死菌种）后再划线。
【小问5详解】
产植酸酶的菌株会水解植酸钙，菌落的周围将形成透明的区域，根据透明区域的有无，可初步判断该菌是否产植酸酶。实验结果显示A-E五种菌株中，E菌株的透明圈最大，说明其水解植酸钙的能力最强，故E是产植酸酶最理想的菌株。
37. 花椰菜的维生素含量丰富，能帮助人体提高免疫力、预防高血压，还具有降血糖、降血脂等作用，还是医学界推荐的抗癌食物。花椰菜(2n=18)种植时容易遭受病菌侵害形成病斑，而紫罗兰(2n=14)具有一定的抗病性。科研人员利用植物体细胞杂交技术培育具有抗病性状的花椰菜新品种，如图所示。

请回答：
（1）科研人员分别取紫罗兰叶肉细胞和黑暗处发芽的花椰菜胚轴细胞，过程①经_______________酶处理后，得到两种原生质体。过程②用________试剂诱导两种原生质体融合。显微镜下选择·_________特征的细胞，通过植物组织培养技术形成试管苗。
（2）对部分杂合新植株的染色体计数，发现杂合新植株体细胞中有58 条染色体。从细胞融合时发生的变化角度分析，出现这种现象的原因是____________________(答出两点变化即可)。
【答案】（1） ①. 纤维素酶和果胶 ②. PEG##聚乙二醇 ③. 含有叶绿体且形态比较大
（2）形成杂种细胞时，多个细胞融合在一起，且部分染色体丢失
【解析】
【分析】植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。物体细胞杂交的终点是培育成杂种植株，而不是形成杂种细胞就结束;杂种植株的特征;具备两种植物的遗传特征，原因是杂种植株中含有两种植物的遗传物质;植物体细胞杂交克服了远缘杂交不亲和的障碍。
【小问1详解】
植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，所以要获得原生质体需要用纤维素酶和果胶酶处理；诱导原生质体融合可以用PEG(聚乙二醇)试剂。根据题干信息，实验目的是培育具有抗病性状的花椰菜新品种，选择的材料是花椰菜的叶肉细胞，所以需要选择具有含有叶绿体且形态比较大的细胞，经过植物组织培养技术培育成植株。
【小问2详解】
花椰菜细胞中含有2n=18条染色体，紫罗兰细胞中含有2n=14条染色体，理论上通过植物体细胞杂交得到的杂合植株染色体数目为18+14=32条，现在发现杂合新植株体细胞中有58条染色体，可能是形成杂种细胞时，多个细胞融合在一起，且部分染色体丢失造成的。
38. 已知镰状细胞贫血是一种单基因遗传病，患者的血红蛋白分子β肽链第6 位氨基酸谷氨酸被缬氨酸代替，导致功能异常；而人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。乙型肝炎疫苗的研制先后经历了血源性疫苗和基因工程疫苗阶段。回答下列问题：

（1）用基因工程方法制备血红蛋白时，可先提取早期红细胞中的______，以其作为模板，在_______酶的作用下反(逆)转录合成cDNA。cDNA与载体需在_______________酶的作用下，构建基因表达载体，导入受体菌后进行表达。
（2）如图为“乙肝基因工程疫苗”的生产和使用过程，质粒中 lacZ 基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则成白色。图中过程①有两种限制酶选择方案；它们分别是______________或______________________。
（3）获取目的基因的方法除了图中用酶切的方法从细胞中分离以外，还可以通过_______来获得。据图可知，该目的基因的具体功能是__________________ 。
（4）为了筛选含目的基因的重组质粒的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的通用培养基中加 入_______________，培养一段时间挑选出_______色的菌落进一步培养获得大量目的菌。
【答案】（1） ①. mRNA ②. 逆转录 ③. 限制酶和DNA连接
（2） ①. 只用BamHⅠ ②. 同时用EcRⅠ和BamHⅠ
（3） ①. 人工合成（或PCR技术扩增） ②. 指导乙肝病毒蛋白质外壳的合成
（4） ①. 青霉素和X-gal ②. 白
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：
(1)目的基因的获取：方法有从基因文库中获取利用PCR技术扩增和人工合成。
(2)基因表达载体的构建：基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
(3)将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法:将目的基因导入动物细胞最有效的方法是是微注射法:将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
(4)目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：
①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因；
②检测目的基因是否转录出了mRNA；
③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原—体杂交技术。
【小问1详解】
因为血红蛋白基因只在早期红细胞中表达，所以可从其中提取mRNA，以mRNA为模板，在逆转录酶的作用下反（逆）转录合成cDNA。构建基因表达载体需要限制酶和DNA连接酶协助。
【小问2详解】
根据图解可知，含有目的基因的外源DNA和载体上都有限制酶BamHⅠ、EcRⅠ和EcRV的识别序列和切割位点，用EcRV切割会破坏目的基因，因此图中过程①有两种限制酶选择方案，它们分别是只用BamHⅠ或同时用EcRⅠ和BamHⅠ。
【小问3详解】
获取目的基因的方法：从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。根据图中④目的基因最终产生乙肝病毒外壳进行接种，说明该目的基因具体功能是指导合成乙肝病毒蛋白质外壳。
【小问4详解】
用限制酶BamHⅠ切割时破坏了lacZ基因，但没有破坏青霉素抗性基因，因此为了筛选含目的基因的重组质粒的大肠杆菌，可在培养大肠杆菌的通用培养基中加入青霉素和X-gal，根据题干信息“质粒中lacZ基因可使细菌利用加入培养基的物质X-gal，从而使菌落显现出蓝色，若无该基因，菌落则成白色”可知，培养一段时间挑选出白色的菌落进一步培养获得大量目的菌。
39. 依据已知肿瘤发生中涉及的异常分子和基因，设计针对这些特定分子和基因靶点的药物，选择性杀伤肿瘤细胞。这种治疗方法称为肿瘤药物的分子靶向治疗。近年来兴起的肿瘤分子靶向治疗药物——单克隆抗体，在临床上治疗肺癌，乳腺癌等恶性肿瘤中发挥着举足轻重的作用。
（1）如图表示细胞表面的转铁蛋白受体(TfR)与转铁蛋白(Tf)结合，将铁元素运输至细胞内的过程。.肿瘤细胞快速增殖时需要更多的铁元素，因此肿瘤细胞表面 TfR 表达量________(填“上升”或“下降”)。
（2）在制备抗 TfR 抗体时，将免疫接种过 TfR 的小鼠的B细胞与________融合，继而筛选出_________ 的杂交瘤细胞。
（3）在单克隆抗体治疗中，为了获取能产生抗肿瘤细胞的单克隆抗体的杂交瘤细胞，需要进行筛选。筛选用的培养基属于_________(按功能)培养基，筛选出来的杂交瘤细胞进行_____________和_________才可以获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
（4）科学家将细胞毒素与单克隆抗体结合，制成了抗体一药物偶联物(ADC)，ADC通常由________________三部分组成。
（5）过继性细胞治疗中，从肿瘤患者体内获取的免疫细胞置于适宜环境下培养，培养过程中出现接触抑制现象时，可用________________酶处理贴壁细胞使之分散成单个细胞进行传代培养。
【答案】（1）上升 （2） ①. 骨髓瘤细胞 ②. 既能无限增殖又能分泌抗TfR抗体
（3） ①. 选择 ②. 克隆化培养 ③. 抗体检测
（4）抗体、接头、药物（细胞毒素）
（5）胰蛋白酶、胶原蛋白
【解析】
【分析】单克隆抗体的制备利用的技术有动物细胞培养和动物细胞融合，所利用的原理是细胞增殖和细胞膜的流动性。在该过程中需要进行两次筛选，最终才能获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞。ADC上的单克隆抗体可以特异性识别肿瘤细胞表面的抗原，从而实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤。
【小问1详解】
据图判断，在肿瘤细胞外，铁必须先和转铁蛋白结合，再进入细胞；因肿瘤细胞增长快速，其所需要的铁元素增加，由于肿瘤细胞表面TfR能够与Tf结合，若需要运输更多的铁元素，用以适应肿瘤细胞的快速增长，那么肿瘤细胞表面的TfR表达量会上升。
【小问2详解】
若要获得抗TfR的单克隆抗体，可接种过TfR的免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，继而筛选出既能无限增殖又能分泌抗TfR抗体的杂交瘤细胞。
【小问3详解】
单克隆抗体制备过程中两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，用特定的选择培养基，未融合的亲本细胞、融合的具有同种核的细胞都死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长；第二次筛选出能合成特定抗体的杂交瘤细胞，以克隆化培养和抗体检测的方法进行，选择抗体检测阳性的。
【小问4详解】
ADC为抗体—药物偶联物，由抗体、接头和药物（如细胞毒素）三部分组成，抗体具有特异性，可以实现对肿瘤细胞的选择性杀伤，减少了用药量，也降低了副作用。
【小问5详解】
过继性细胞治疗中，从肿瘤患者体内获取的免疫细胞置于适宜环境下培养，可分为两大类：一类细胞悬浮培养，一类细胞贴壁。在细胞培养的过程中，由于细胞密度过大、有害代谢物积累、培养液中营养物质缺乏和接触抑制，细胞分裂受阻；培养过程中出现接触抑制现象时，可用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理贴壁细胞使之分散成单个细胞进行传代培养。