辽宁省沈阳市浑南区东北育才学校2023-2024学年高二下学期4月月考生物试题（原卷版+解析版）

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1. 发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品．目前在许多领域得到了广泛的应用。下列说法错误的是（ ）
A. 发酵工程大多使用单一菌种，可以从自然界中筛选也可以通过诱变育种或基因工程育种获得
B. 发酵工程的中心环节是分离、提纯产物，如果产品是微生物细胞本身，可采用过滤、沉淀等方法分离
C. 在酸性和碱性条件下谷氨酸棒状杆菌积累的代谢产物不同，发酵过程需严格控制pH值
D. 发酵工程可用于生产微生物农药，主要是利用微生物或其代谢物来防治病虫害
【答案】B
【解析】
【分析】发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等方面。发酵工程以其生产条件温和、原料来源丰富且价格低廉、产物专一、废弃物对环境的污染小和容易处理等特点，在食品工业、医药工业和农牧业等许多领域得到了广泛的应用，形成了规模庞大的发酵工业。
【详解】A、发酵工程一般用到单一菌种，可从自然界筛选，也可通过基因工程育种或诱变育种获得，A正确。
B、发酵工程的中心环节是发酵，B错误；
C、谷氨酸棒状杆菌在中性和弱碱性条件下会积累谷氨酸，在酸性条件下则容易形成谷氨酰胺和N-乙酰谷氨酰胺，C正确；
D、发酵工程可用于生产微生物农药，与传统的化学农药不同，微生物农药是利用微生物或其代谢物来防治病虫害的。例如，苏云金杆菌可以用来防治80多种农林虫害，一种放线菌产生的井冈霉素可以用于防治水稻纹枯病，D正确。
故选B。
2. 安化黑茶是一种发酵茶，其制作流程包括杀青、初揉、渥堆、复揉、烘焙、压制和发花等。其中杀青是指将茶叶放入300℃左右的铁锅中炒制2分钟，而发花是形成“金花”的关键环节。“金花”是冠突散囊菌(一种霉菌)发酵的产物。冠突散囊菌是对人体有益的菌类，能分泌淀粉酶和氧化酶，可催化茶叶中的淀粉转化为单糖，并催化多酚类化合物氧化，转化成对人体有益的物质，使茶叶的口感等特性优化。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 杀青能减少茶叶中营养成分的分解B. 揉捻有利于后续微生物发酵的进行
C. 安化黑茶的制作需利用霉菌等多种细菌进行发酵D. 培养冠突散囊菌时往往将培养基调至酸性
【答案】C
【解析】
【分析】 虽然各种培养基的具体配方不同，但一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时需将培养基的pH调至酸性，培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件。
【详解】A、杀青是将茶叶放入300℃左右的铁锅中炒制2分钟，因此杀青既能去除茶叶中的水分，又能使一些酶失活，从而减少茶叶中营养成分的分解，A正确；
B、揉捻不仅有利于塑造茶叶外形，更可以使细胞破碎，将细胞内物质释放出来，从而有利于后续微生物发酵的进行，B正确；
C、霉菌是真菌，不是细菌，C错误；
D、培养冠突散囊菌时往往会在培养基中添加一些乳酸，其主要目的是调节培养基pH至酸性以抑制细菌生长，促进霉菌生长，D正确。
故选C。
3. 大量繁殖名贵的兰花品种寒兰，最适合的生物工程技术手段是（ ）
A. 取部分寒兰组织置于适合条件下进行组织培养
B. 利用细胞融合技术将寒兰组织细胞与骨髓瘤细胞融合
C. 将寒兰的体细胞核移植到其他植物去核卵细胞中实现大规模的克隆
D. 利用基因工程将促进寒兰生长发育的基因转入到寒兰细胞中
【答案】A
【解析】
【分析】植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养广义叉叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在无菌条件下接种在含有各种营养物质及植物激素的培养基上进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义是指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
【详解】A、将寒兰的组织放置在培养基中进行植物组织培养，是最快也最简单的方式，A正确；
B、寒兰组织细胞是植物细胞，骨髓瘤细胞是动物细胞，这两种细胞融合的难度很大，且要求的技术较高，成功率低，B错误；
C、由于植物体细胞全能性易体现，因此将寒兰的体细胞核移植到其他植物去核卵细胞中，对于植物细胞来说太过繁琐，一般核移植多用于动物克隆，C错误；
D、将生长素基因转入野生寒兰获得生长速度快的寒兰，要求的技术较高，成功率低，D错误。
故答案为A。
4. 人绒毛膜促性腺激素（HCG）是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。抗HCG单克隆抗体制备流程如图所示，下列叙述正确的是（ ）

A. 过程①可用电脉冲诱导细胞融合，利用了细胞膜的选择透过性
B. 过程②筛选得到的杂交瘤细胞可直接用于生产单克隆抗体
C. 过程④也可将杂交瘤细胞注射到小鼠体内增殖
D. 需要给小鼠注射免疫抑制剂，抑制B细胞和骨髓瘤细胞之间的免疫排斥
【答案】C
【解析】
【分析】分析题图：给小鼠注射HCG，从小鼠的脾脏中获取B淋巴细胞；①过程将该B淋巴细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合；②过程为杂交瘤细胞的筛选与培养；③过程为专一抗体检验并筛选出能产生抗HCG抗体的杂交瘤细胞；④过程为体外培养。
【详解】A、①过程为诱导动物细胞融合，常用的诱导因素有灭活的病毒、聚乙二醇、电激等，利用了细胞膜的流动性，A错误；
B、②过程为用特定的选择性培养基筛选杂交瘤细胞，在筛选出的杂交瘤细胞中，有的能产生抗HCG抗体，有的不能产生抗HCG抗体，B错误；
C、④过程为体外培养，该过程也可将杂交瘤细胞注射到小鼠体内（腹腔中）增殖，C正确；
D、由于B细胞和核骨髓瘤细胞均来自于同一只小鼠，因此不需要给小鼠注射免疫抑制剂，D错误。
故选C。
5. 嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）免疫疗法能赋予T细胞肿瘤靶向性、更强的杀伤活性和持久的杀伤力，达到高效识别、杀死癌细胞的治疗效果。该疗法的主要流程如图所示。下列说法错误的是（ ）

A. ②过程的核心工作是构建含有CAR结构的表达载体
B. ③过程之前需要对构建的CAR-T细胞进行检测和鉴定，以确定细胞表面含有嵌合抗原受体
C. ③过程需要在含有95%空气和5%CO2的CO2培养箱中进行
D. 只要提供合适的条件并及时传代，CAR-T细胞可在培养条件下不断增殖
【答案】D
【解析】
【分析】CAR-T细胞疗法是通过设计CAR基因,并导入癌症患者的T细胞中，使其转化为CAR-T细胞。CAR-T细胞膜 上的 CAR蛋白与癌细胞表面抗原特异性结合后，可激活CAR-T细胞使其增殖、分化，从而实现对癌细胞的特异性杀伤和记忆。
【详解】A、基因工程的核心步骤使构建含有目的基因的基因表达载体，A正确；
B、目的基因进入受体细胞后，需要经过检测与鉴定以确定目的基因在受体细胞中是否稳定维持和表达其遗传特性，B正确；
C、③过程属于体外动物细胞培养，过程需要在含有95%空气和5%CO2的CO2培养箱中进行，C正确；
D、CAR-T细胞属于导入目的基因的正常细胞，不具备无限增殖的能力，D错误。
故选D。
6. 下图是科研人员利用白鼠和黑鼠的早期胚胎培育黑白嵌合体小鼠的流程，下列叙述不正确的是（ ）

A. 过程①使用的早期胚胎可以是桑葚胚
B. 早期胚胎培养过程中需要添加血清
C. 代孕母鼠生产的嵌合鼠毛色黑白相间，是四倍体小鼠
D. 过程③通过同期发情处理代孕母鼠可提升受孕成功率
【答案】C
【解析】
【分析】图中为科研人员利用白鼠和黑鼠的早期胚胎培育黑白嵌合鼠的简要过程，其中①是获取早期胚胎的过程，②是将白鼠和黑鼠的早期胚胎嵌合的过程，③是胚胎移植过程。
【详解】A、过程①中的两个卵裂球可以取自于桑葚胚，也可以取自卵裂期，A正确；
B、血清中含有促进动物细胞生长和增殖的相关物质，因此早期胚胎培养过程中需要添加血清，B正确；
C、②过程并没有发生细胞的融合，代孕母鼠生产的嵌合鼠毛色黑白相间，仍然是二倍体小鼠，C错误；
D、过程③是胚胎移植过程，在进行操作前，需要对代孕母鼠进行同期发情处理，以保证受体与供体的生理变化是相同的，进而提升受孕成功率，D正确。
故选C。
7. 下列有关“DNA粗提取与鉴定”、“PCR扩增”、“琼脂糖凝胶电泳”实验的叙述中，正确的是（ ）
A. DNA的粗提取与鉴定实验中可利用DNA在酒精中溶解度较大的特点来提取DNA
B. 将提取到的丝状物与二苯胺溶液充分混匀后，溶液即可变为蓝色
C. PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶在延伸过程中起作用
D. 凝胶载样缓冲液中加入的核酸染料能与DNA分子结合，便于在紫外灯下观察
【答案】C
【解析】
【分析】本题考查基因工程中的相关实验。DNA不溶于酒精，而某些蛋白质溶于酒精；鉴定DNA时，需要先将DNA溶解在NaCl溶液中，再与二苯胺溶液混合，并在水浴加热条件下呈现蓝色；耐高温的DNA聚合酶在延伸环节时进行子链的合成。
【详解】A、DNA的粗提取与鉴定实验中利用DNA不溶于酒精、但某些蛋白质溶于酒精的原理，可以初步分离DNA与蛋白质，A错误；
B、将丝状物溶于2ml/L的5mL的NaCl溶液中，然后向试管中加入4mL的二苯胺试剂，沸水浴加热5min，试管冷却后溶液呈现蓝色，B错误；
C、PCR反应体系中需加入耐高温的DNA聚合酶，该酶在延伸过程中根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，C正确；
D、用电泳缓冲液配制的琼脂糖溶液中加入的核酸染料能与DNA分子结合，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来，D错误。
故选C。
8. 某实验室通过提高小鼠胚胎干细胞pSTAT3基因的表达水平，体外制备出桑葚胚样全能细胞。该细胞在分子水平及发育潜能上均具有自然胚胎桑葚期细胞特性，并在体外成功模拟了小鼠胚胎发育至原肠胚阶段。根据该研究，下列叙述正确的是（ ）

注：pSTAT3是调控胚胎发育的关键基因
A. 桑葚胚发育成囊胚的过程中，pSTAT3的表达上升
B. 诱导桑葚胚样细胞时，基因的碱基序列和表达的情况都发生改变
C. 囊胚期细胞重置至桑葚样细胞的过程类似于脱分化
D. 桑葚胚样细胞不可诱导发育至囊胚期
【答案】C
【解析】
【分析】胚胎发育过程:(1)卵裂期：细胞进行有丝分裂，数量增加，胚胎总体积不增加；(2)桑葚胚：当卵裂产生的子细胞逐渐形成致密的细胞团, 形似桑葚时，这时的胚胎称为桑葚胚。之前所有细胞都有发育成完整胚胎的潜能，属全能细胞；(3)囊胚：胚胎进一步发育，细胞逐渐分化。聚集在胚胎 一端的细胞形成内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织;；而沿透明带内壁扩展和排列的细胞，称为滋养层细胞，它们将来发育成胎膜和胎盘；(4)原肠胚：囊胚孵化后，将发育形成原肠胚。原肠胚表面的细胞层为外胚层，向内迁移的细胞形成内胚层。随着发育的进行， 一部分细胞还会在内、外两个胚层之间形成中胚层。这三个 胚层将逐渐分化形成各种组织、器官等。
【详解】A、具体分析通过提高小鼠胚胎干细胞pSTAT3基因的表达水平，体外制备出桑葚胚样全潜能细胞，因此推断桑葚胚发育成囊胚的过程中，pSTAT3的表达下降，A错误；
B、诱导桑葚胚样细胞时，其本质是细胞分化，基因的碱基序列并未发生改变，B错误；
C、胚胎发育至囊胚期即开始了细胞分化，因此囊胚期细胞重置至桑葚样细胞的过程类似于脱分化，C正确；
D、胚胎发育的过程为受精卵→桑椹胚→囊胚→原肠胚→幼体，桑葚胚样全能细胞在体外成功模拟了小鼠胚胎发育至原肠胚阶段，因此桑葚胚样细胞可诱导发育至囊胚期，D错误。
故选C。
9. 实验小组从甲醛含量丰富的工厂活性污泥中筛选出了能快速降解甲醛的菌株W，用于甲醛降解的生物处理，并探究了甲醛浓度对甲醛降解率的影响，实验结果如图所示。下列说法错误的是（ ）

A. 筛选培养基中的甲醛能为菌株W的生长提供碳源
B. 在350mg·L-1和600 mg·L-1时，菌株W的降解甲醛的量相同
C. 浓度超过750 mg·L-1后，高浓度的甲醛可能会抑制菌株的活性
D. 筛选后的培养基在丢弃前可用高压蒸汽锅进行灭菌处理
【答案】B
【解析】
【分析】选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。
【详解】A、甲醛中含有碳元素，可以为菌株W提供碳源，A正确；
B、在甲醛浓度为350mg·L-1和600mg·L-1时，菌株W对甲醛的降解率基本相同，但是降解量未知，B错误；
C、浓度超过750 mg·L-1后，培养基中高浓度的甲醛可能会导致菌株失水，从而影响菌株的活性，C正确；
D、筛选后的培养基在丢弃前可用高压蒸汽锅进行灭菌处理，以免污染环境或感染操作正确，D正确。
故选B。
10. 某研究人员设计了下图所示技术路线，以期获得甘蓝和萝卜体细胞杂交植株。下列说法正确的是（ ）
A. 可用无菌水洗涤去除图中所用的酶来纯化原生质体
B. 原生质体A和原生质体B诱导融合前需要调整密度比例
C. 诱导融合体出芽通常使用两类植物激素，其中生长素起主要作用
D. 取材选用植株生长点附近细胞进行培养将增大再生植株品质退化的概率
【答案】B
【解析】
【分析】植物体细胞杂交技术：就是将不同种的植物体细胞原生质体在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成完整植物体的技术。（1）诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等，化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。（2）细胞融合完成的标志是新的细胞壁的生成。（3）植物体细胞杂交的终点是培育成杂种植株，而不是形成杂种细胞就结束。（4）杂种植株的特征：具备两种植物的遗传特征，原因是杂种植株中含有两种植物的遗传物质。
【详解】A、由于原生质体没有了细胞壁的保护作用，因此应该用等渗溶液洗涤去除图中所用的酶来纯化原生质体，A错误；
B、收集了原生质体A和原生质体B后，在诱导融合前需要调整密度比例，B正确；
C、诱导融合体出芽通常使用两类植物激素，即生长素和细胞分裂素，其中细胞分裂素促进芽的分化起主要作用，C错误；
D、感染病毒后，该植物会发生退化，取生长点附近组织进行培养获得脱毒苗可降低再生植物感染病毒后品质退化的概率，D错误。
故选B。
11. 为研究拟南芥植株E基因的功能，科研人员将T-DNA插入到E基因中，导致其发生突变，突变后的基因记为e。为验证某拟南芥植株的基因型，科研人员根据基因E和T-DNA的序列，设计了三种引物，引物的结合位置如图所示。已知完整的E基因和T-DNA整合后，因片段长度过大，不能完成整个融合基因的PCR扩增。科研人员提取该植株的总DNA，分别用引物“I+III”组合及“II+III”组合进行PCR，两种引物组合均能完成扩增。拟南芥植株的基因型为（ ）

A. EeB. EEC. eeD. EE或Ee
【答案】A
【解析】
【分析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术，利用的原理是DNA复制。
【详解】根据题干“已知完整的基因E和T-DNA整合后，因片段长度过大，不能完成整个融合基因的PCR扩增”，且e的产生是T-DNA插入到基因E中，因此当拟南芥的基因型为EE时，用引物“Ⅱ+Ⅲ”组合，可以获得PCR产物，但用引物“I+Ⅲ”组合时，不能获得PCR产物；当拟南芥的基因型为Ee时，用引物“Ⅱ+Ⅲ”组合和引物“I+Ⅲ”组合时，都能获得PCR产物；当拟南芥的基因型为ee时，用引物“Ⅱ+Ⅲ”组合，不能获得PCR产物，但用引物“I+Ⅲ”组合时，能获得PCR产物；即该拟南芥植株的基因型为Ee，BCD错误，A正确。
故选A。
12. 由C基因编码的C蛋白和V基因编码的V蛋白均能特异性杀死玉米害虫，这两种蛋白的结构和作用原理不同。现利用C—V融合基因和如图所示载体，获得具高抗虫性的转基因玉米。下列有关叙述错误的是（ ）

A. 构建含有C—V融合基因的载体需要限制酶和DNA连接酶
B. 载体中的目的基因可以通过农杆菌的转化进入玉米细胞
C. 在玉米细胞染色体DNA上检出C—V基因就说明培育成功
D. 以单转C基因玉米为食比以该玉米为食的害虫更易产生抗性
【答案】C
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：
(1) 目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
(2)基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
(3)将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法，将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法，将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
(4)目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、基因表达载体的构建方法是先用同种限制酶切割载体和含目的基因的DNA分子，再用DNA连接酶进行连接，因此构建含有C—V融合基因的载体需要限制酶和DNA连接酶，A正确；
B、农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上。载体中的目的基因可以通过农杆菌的转化进入玉米细胞，B正确；
C、在玉米细胞染色体DNA上检出C—V基因不能说明培育成功，因为融合基因可能不能正常表达，C错误；
D、该玉米具有C-V融合基因具有高抗虫性，与单转C基因玉米相比，此玉米可延缓害虫抗性基因频率增加，即以单转C基因玉米为食比以该玉米为食的害虫更易产生抗性，D正确。
故选C
13. 蜘蛛丝（丝蛋白）被称为“生物钢”，有着超强的抗张强度，下图为蛛丝蛋白基因对应的DNA片段结构示意图，其中1-4表示DNA上引物可能结合的位置，目前利用现代生物技术生产蜘蛛丝已取得成功。下列有关叙述错误的是（ ）

A. 若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，会破坏4个磷酸二酯键
B. 若用PCR技术获取目的基因，则图中的1、4分别是2种引物结合的位置
C. 若受体细胞为大肠杆菌，则需先用Ca2+处理，更利于实现转化
D. 在PCR仪中根据选定的引物至少需经过6次循环才可获得32个符合要求的目的基因
【答案】B
【解析】
【分析】由图可知，由于DNA聚合酶只能从5′→3′延伸子链，图中的磷酸基团为5'端，羟基为3′端，由于引物要延伸子链，子链和模板链反向平行，因此根据引物的延伸方向可知图中与引物结合的部位是2、3。
【详解】A、若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，DNA每条链上会破坏2个磷酸二酯键，共会破坏4个磷酸二酯键，A正确；
B、由于DNA聚合酶只能从5′→3′延伸子链，图中的磷酸基团为5'端，羟基为3′端，由引物3′端延伸子链，子链和模板链反向平行，因此根据引物的延伸方向可知图中与引物结合的部位是2、3，B错误；
C、自然条件下，细菌的转化效率很低，通过化学和物理方法的处理可以增强细菌捕获外源 DNA 的能力，成为感受态细胞。因钙离子能促进细菌摄取外源的 DNA，科学家常使用 CaCl2溶液制备感受态细胞，进而转入外源DNA。若受体细胞为大肠杆菌，大肠杆菌常用的转化方法是：先用 Ca2+ 处理细胞，再将载体DNA分子溶于缓冲液中与此种细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，C正确；
D、 如图所示，设X基因为目的基因。经过第一轮复制以亲代DNA的两条链做模板，可以得到①和②两种DNA；经过第二轮复制可以得到①和③、②和④；经过第三轮复制可以得到①和③、③和⑤、②和④、④和⑤；第四轮复制得到16个DNA分子，即①和③、2个③和2个⑤、②和④、2个④和2个⑤、第三轮的2个⑤得到4个⑤（统计为①、②、3个③、3个④、8个⑤）；第五轮复制得到32个DNA分子，即①和③、②和④、3个③和3个⑤、3个④和3个⑤、第四轮的8个⑤得16个⑤（统计为①、②、4个③、4个④、22个⑤；⑤为目的基因即还未获得32个目的基因），第六轮复制得64个DNA分子，即①和③、②和④、4个③和4个⑤、4个④和4个⑤、第五轮的22个⑤得44个⑤（统计为①、②、5个③、5个④、52个⑤；⑤为目的基因，即此时获得32以上符合条件的目的基因），综上所述，需要至少6次循环可获得32个符合要求的目的基因，D正确。
故选B
14. 碱裂解法提取质粒的原理是染色体 DNA 与质粒 DNA 在碱性条件下变性，在中性条件下质粒DNA 可以复性，而染色体 DNA 不能复性，并可聚集成不可溶的网络状聚合物，提取过程如图所示，字母代表各阶段。其中各种试剂的作用如下：溶液 Ⅰ 含 Tris-Cl（稳定溶液pH）、EDTA（抑制 DNA 酶的活性），溶液Ⅱ含 NaOH 和 SDS（破裂膜结构，解聚核蛋白），溶液 Ⅲ 含醋酸钾和醋酸，酚/氯仿/异戊醇（去除X 中的蛋白质杂质）。下列叙述错误的是（ ）

A. 可通过培养液离心收集沉淀或者从培养平板上挑取的方法收集菌体
B. b过程中的 X含有需要提取的质粒DNA
C. 加入溶液 Ⅱ 后染色体DNA 与 RNA 形成沉淀
D. c中加入无水乙醇使DNA易于聚合发生沉淀
【答案】C
【解析】
【分析】核酸是生物有机体中的重要成分，在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。核酸分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两大类，在真核细胞中，前者主要存在于细胞核中，后者主要存在于细胞质及核仁里。在制备核酸时，通过研磨破坏细胞壁和细胞膜，使核蛋白被释放出来。提取DNA有多种方法，“CTAB法”和“SDS法”是提取DNA的常用方法，二者既有区别又有联系。
【详解】A、离心可将菌体沉淀收集，也可以通过平板培养法挑取菌落，A正确；
B、b过程加入酚/氯仿/异戊醇是为了去除X中的蛋白杂质，而X含有质粒DNA，B正确；
C、由题可知，染色体DNA在中性条件下不能复性，所以加入溶液 Ⅱ 后染色体DNA 不能与RNA形成沉淀，C错误；
D、DNA与乙醇不发生化学反应，c中加入无水乙醇使DNA易于聚合发生沉淀，D正确。
故选C。
15. 研究者用绿色荧光染料标记干细胞的蛋白质，再将其中一个干细胞子集注射到早期的猴子桑葚期胚胎，最后产生出了2只发光的嵌合猴。下列说法错误的是（ ）
A. 胚胎干细胞必须从胚胎中获取，涉及伦理问题，限制了它在医学上的应用
B. 受精卵发育成桑葚胚的体外培养过程需要定期更换培养液，以便及时清除代谢物并及时补充营养
C. 含有干细胞子集的早期胚胎移植后一般不需要对受体母猴注射免疫抑制剂
D. 嵌合猴具备来自两个不同胚胎的细胞，其不同部位的细胞中基因型可能不同
【答案】B
【解析】
【分析】胚胎干细胞简称ES细胞，存在于早期胚胎中，具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能。
【详解】A、胚胎干细胞存在于早期胚胎中，必须从胚胎中获取，涉及伦理问题，限制了它在医学上的应用，A正确；
B、体外培养动物细胞时，细胞在培养液中产生的代谢产物可能会对细胞本身有毒害作用，所以要定期更换培养液，以便清除细胞代谢产物，B错误；
C、含有干细胞子集的早期胚胎移植后，受体母猴对移植入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，因此一般不需要对受体母猴注射免疫抑制剂，C正确；
D、嵌合猴具备来自两个不同胚胎的细胞，将会分别发育为不同组织，因此其不同部位的细胞中基因型可能不同，D正确。
故选B。
二、不定项选择题（共5小题）
16. 由单一B细胞克隆产生的针对某一特定抗原的抗体，称为单克隆抗体；由多种抗原刺激机体，相应地就产生多种抗体混杂在一起，称为多克隆抗体。如图表示单克隆抗体和多克隆抗体的制备过程，下列相关叙述错误的是（ ）
A. 两种技术均依赖于细胞膜的流动性，②③④⑤的差异是由细胞内基因不同造成的
B. 两种技术均需要对小鼠进行特定抗原的免疫和特定细胞的筛选、鉴定和培养
C. 两种技术均需要从小鼠的血清中收集抗体，但单克隆抗体具有更高的特异性
D. ①含有的多种抗体，源于不同的浆细胞，可与同种病原体的不同抗原结合
【答案】ABC
【解析】
【分析】单克隆抗体的制备：
（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞。
（2）获得杂交瘤细胞。①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合。②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。
（3）克隆化培养和抗体检测。
（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。
（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。
【详解】A、两种技术中只有单克隆抗体的制备涉及细胞的融合，依赖细胞膜的流动性，B淋巴细胞的基因相同，②③④⑤的差异与细胞内基因的选择性表达有关，A错误；
B、两种技术均需要对小鼠进行特定抗原的免疫，但只有单克隆抗体的制备需要特定细胞的筛选、鉴定和培养，B错误；
C、多克隆抗体需要从小鼠的血清中收集抗体，单克隆抗体从细胞培养液或小鼠的腹水中获得，单克隆抗体具有更高的特异性，C错误；
D、①含有的多种抗体，源于不同的浆细胞，多种抗体的获得是因为病原体表面的不同抗原导致不同浆细胞的形成，不同浆细胞产生的抗体可与同种病原体的不同抗原结合，D正确。
故选ABC。
17. 在体细胞克隆猴培育过程中，为调节相关基因的表达，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂（TSA）处理，使胚胎的发育率和妊娠率提高，具体培育流程如图所示。下列说法正确的是（ ）

A. 去核时使用的梯度离心、紫外光照射和化学物质处理等方法可以在没有穿透卵母细胞透明带的情况下进行
B. 灭活的仙台病毒表面含有糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚而发生融合
C. 组蛋白低甲基化和高乙酰化水平均有利于重构胚的发育
D. 胚胎移植前需要对供、受体进行HLA检测
【答案】ABC
【解析】
【分析】细胞核移植概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微直接去除法还有人采用密度梯度离心，紫外光短时间照射、化学物质处理等方法。
【详解】A、采用梯度离心，紫外光短时间照射、化学物质处理等方法去除细胞核。这些方法都是在没有刺破透明带或卵母细胞质膜的情况下实现细胞核的去除或使卵细胞核DNA变性，从而达到去核的目的，A正确；
B、灭活的仙台病毒诱导细胞融合的原理是病毒表面含有糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质（主要是磷脂）分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，B正确；
C、研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂TSA处理了它，即将组蛋白去甲基化和增加乙酰化（高乙酰化），有利于重构胚的分裂和发育，使其完成细胞分裂和发育进程，C正确；
D、由于供受体处于相同的生理状态，不会发生免疫排斥，故胚胎移植前不需要进行HLA检测，D错误。
故选ABC。
18. 研究小组采用预加菌液法探究氮苄青霉素（Amp）和卡那霉素（Kan）对大肠杆菌的选择作用，即将菌液直接加入培养基中，摇匀倒平板，冷却后在相应区域放置圆形滤纸片，一段时间后测量抑菌圈直径，I、Ⅱ、Ⅲ代筛选实验结果如下图所示。下列相关叙述正确的有（ ）
A. 为防止培养基凝固，加入菌液时培养基温度不得低于65℃
B. 抑菌圈内有两个菌落，可能是具有抗药性的大肠杆菌或其他杂菌形成的
C. Kan较Amp对大肠杆菌的抑菌效果强，且随培养代数增多两者抑菌效果减弱
D. 一定浓度的抗生素会诱导细菌产生耐药性的变异，故使用抗生素时需适量
【答案】BC
【解析】
【分析】细菌抗药性是由基因突变产生的，抗生素起到了选择作用。抑菌圈的直径越小，说明细菌对抗生素的抗性逐渐增强，抗生素的抑菌效果越差。
【详解】A、温度超过65℃会影响菌种的生存，甚至高温能杀死菌种，因此加入菌液时培养基温度不能太高，A错误；
B、抑菌圈源于抗生素或其他抑菌物质对细菌生长的抑制作用，抑菌圈内有两个菌落，可能是具有抗药性的大肠杆菌或其他杂菌形成的，B正确；
C、据柱状图可知，Kan较Amp组抑菌圈的直径更大，说明其对大肠杆菌的抑菌效果强，且随培养代数增多，两者菌圈的直径都减小，抑菌效果都减弱，C正确；
D、细菌繁殖过程中会发生基因突变，产生抗药性变异和不抗药性变异，一定浓度的抗生素会杀死不抗药性变异，抗药性变异保留下来，不是抗生素会诱导细菌产生耐药性的变异，D错误。
故选BC。
19. 图甲为某种棉花的酶D基因及拟南芥叶绿体膜上的转运肽基因，图乙为Ti质粒。为增加油菜种子的含油量，可将酶D基因与转运肽基因相连，导入油菜叶片细胞并获得高产转基因油菜品种。下列叙述正确的是（ ）
A. 用限制酶ClaI和DNA连接酶处理图甲两种基因后，可使A、D端相连
B. 图乙的Ti质粒被限制酶切割一次后，会产生4个游离的磷酸基团
C. 将目的基因插入图乙T-DNA中构建重组质粒，其可能在农杆菌中表达
D. 将农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到的即为高产转基因油菜
【答案】AC
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：
(1)目的基因的获取；
(2)基因表达载体的构建；
(3)将目的基因导入受体细胞；
(4)目的基因的检测与鉴定。
【详解】A、用限制酶ClaI切割图甲两种基因后，会使A、D端产生相同的粘性末端，再用DNA连接酶可使A、D端相连，A正确；
B、图乙的Ti质粒被限制酶切割一次后，会产生2个游离的磷酸基团，B错误；
C、将目的基因插入图乙T-DNA中构建重组质粒，其可能在农杆菌中表达，C正确；
D、普通的质粒也含有四环素抗性基因，故将农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到的不一定为高产转基因油菜，D错误。
故选AC。
20. 下表表示某科研小组比较了不同脱毒方法对滁菊体内菊花B病毒(CVB)和菊花矮化类病毒(CSVd)脱除的效果；下图是对不同试管苗进行RT-PCR(逆转录PCR)后的电泳示意图(引物根据CVB的基因序列设计)。下列叙述错误的是（ ）

A. 试管苗2、5号已成功脱去CVB
B. 只脱除CSVd时，可选择病毒唑结合茎尖分生区组织培养
C. 与第一组相比，热处理对试管苗同时脱去两种病毒脱毒率没有显著作用
D. 相比于第一组，热处理、病毒唑处理后，试管苗存活率下降
【答案】AC
【解析】
【分析】本实验研究的是不同的脱毒方法对滁菊体内菊花B病毒（CVB）和菊花矮化类病毒（CSVd）脱除的效果，实验的自变量是脱毒方法，因变量是样本存活率等，据此分析作答。
【详解】A、据图可知，2、5号电泳结果显示标准片段之外的阳性结果，3、4号则没有，说明3、4号成功脱去CVB，2、5号未能脱去CVB，A错误；
B、据表可知，只脱除CSVd时，病毒唑结合茎尖分生区组织培养的脱毒率最高，脱毒效果相对较好，B正确；
C、据表可知，热处理和病毒唑处理后，试管苗同时脱去两种病毒的脱毒率分别是35.21%、36.62%，与第一组(16.88%)相比，有显著作用，C错误；
D、相比于第一组，热处理和病毒唑处理后，试管苗的存活个体数减少，存活率下降，D正确。
故选AC。
三、非选择题（共5小题）
21. 反硝化细菌是一类能将硝态氮（NO3-—N）通过一系列中间产物（NO2-、NO、N2O）还原为气态氮（N2）的细菌群，反硝化作用也是产碱过程。反硝化细菌对于解决水体富营养化和亚硝酸盐对水生动物的毒害，具有十分重要的意义。某课题小组通过采集活性污泥样品，并从中分离反硝化细菌，研究影响菌株反硝化作用的主要环境因素，为反硝化细菌在养殖废水处理应用中提供理论指导。反硝化细菌的分离和鉴定流程如下，回答下列问题：
（1）将采集活性污泥样品1mL加入到装有9mL、pH7．2的磷酸盐缓冲液的l00mL烧杯中，取样接种到富集培养基中培养，富集培养基的成分有：KNO32g，FeSO40．2g，KH2PO41．0g，MgSO40．5g，NaCl2g，CaCO35g，其中为反硝化细菌提供氮源的是_____，富集培养的目的是_____。
（2）将富集后的样品进行梯度稀释后，使用_____（填工具）将样液均匀涂布在BTB培养基（BTB培养基初始pH=6．8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了_____，放在30℃环境中培养2~3天后，挑选周围显_____色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
（3）将液体培养基导入大试管中，将杜氏小试管倒立放入大试管中，试管中的气体排尽，接入纯菌株，30℃恒温培养5~7d，观察到小管内有气泡，检测到N20，即可鉴定纯菌株为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是_____。
（4）向几组等量的灭菌后的反硝化培养基中分别以1%、3%、5%、7%和10%的接种量接入菌株N1，在30℃，120r/min摇床震荡培养，24h后测量NO3-—N等指标，结果如右图所示：
①本研究的目的是_____。
②当投菌量达到_____时，反硝化效果最好，NO3-—N和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，NO3-—N和总脱氮率反而下降，推测可能的原因是_____（答1点）。
【答案】（1） ①. KNO3 ②. 对反硝化细菌进行扩增
（2） ①. 涂布器 ②. 设置重复，取平均值，减少实验误差 ③. 蓝
（3）其他微生物也能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低
（4） ①. 探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响 ②. 5% ③. 投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢
【解析】
【分析】微生物接种常用的两种方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过足够稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后，可形成单菌落。
【小问1详解】
培养基的成分主要包括碳源、氮源、水、无机盐等，培养基中KNO3含有N，可以提供氮源。富集培养的目的是对反硝化细菌进行扩增，增加目的菌落的数量。
【小问2详解】
稀释涂布平板法用到涂布器将样液均匀涂布在BTB培养基上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了设置重复，取平均值，减少实验误差；分析题干，反硝化细菌可以产生碱性物质，BTB是酸碱指示剂碱性条件下为蓝色，放在30℃环境中培养2~3天后，挑选周围显蓝色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
【小问3详解】
反硝化细菌和其他微生物都能利用硝酸盐进行代谢，硝酸盐浓度同样会降低，因此不能依据培养液中硝酸盐浓度变低来鉴定目的菌。
【小问4详解】
①分析题干，该实验的自变量是菌株N1的接种量，因变量是反硝化效果，因此可知，本研究的目的是探究反硝化细菌投菌量（接种量）对反硝化效果的影响；
②分析图，当投菌量达到5%时，反硝化效果最好，NO3-—N和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，NO3-—N和总脱氮率反而下降，因为投菌量过大，使培养基中的碳源很快消耗完，细菌数量下降；或是由于投菌量过大，耗氧速度加快，使体系中氧气供应不足，不利于细菌生长和代谢。
22. 异源多倍体指的是体细胞内所含染色体组来源于不同物种的多倍体生物，下图表示两种获得异源多倍体的思路(其中A、B分别代表不同物种的一个染色体组)。请分析回答下列有关问题：
（1）在实践过程中，途径一遭到了失败，原因是__________________。
（2）请根据途径二回答下列问题：
①操作时，首先需对番茄和马铃薯的韧皮部细胞用_______________酶处理，以去除细胞壁获得原生质体，再用_______________诱导原生质体融合得到细胞甲。
②筛选出细胞甲后，还需经植物组织培养技术获得杂种乙，其中细胞甲在有丝分裂后期有_____个染色体组;细胞甲在形成愈伤组织过程中，细胞的同化类型是_______(填“自养型”或“异养型”)。
（3）途径二获得植株乙的过程不属于有性生殖，原因是__________________。
（4）途径二相较于途径一具有______________________优点。
【答案】 ①. 番茄与马铃薯之间存在生殖隔离 ②. 纤维素酶和果胶 ③. 聚乙二醇（PEG）（或离心、振动、电激） ④. 8 ⑤. 异养型 ⑥. 没有两性生殖细胞的形成；没有两性生殖细胞的结合 ⑦. 克服远源杂交不亲和的障碍
【解析】
【分析】植物体细胞杂交过程：1、酶解法去壁获取原生质体；2、人工诱导原生质体融合；3、再生出新细胞壁，标志着原生质体融合完成；4、经脱分化和再分化过程，通过组织培养把杂种细胞培育成杂种植株。
【详解】（1）番茄和马铃薯属于不同物种，存在生殖隔离，不能得到杂种一（AB），因此遭到了失败。
（2）①植物细胞壁的成分为纤维素和果胶，因此用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁。聚乙二醇（PEG）（或离心、振动、电激）的方法可诱导原生质体融合。②由题意知A、B分别表示一个染色体组，细胞甲（AABB）本来有4个染色体组，但有丝分裂后期，姐妹染色单体分离后，将出现8个染色体组。细胞甲在形成愈伤组织的过程中，需利用培养基中现成的营养物质，不能制造有机物，因此属于异养型。
（3）途径二得到的植株乙是利用体细胞进行植物组织培养得到的，没有两性生殖细胞的形成或两性生殖细胞的结合，因此不属于有性生殖。
（4）途径一和途径二使用的材料均为番茄和马铃薯属于不同的物种。但通过途径二可以得到异源多倍体，因此相较于途径一，途径二可克服远源杂交不亲和的障碍。
【点睛】本题考查植物体细胞杂交技术相关知识点，掌握相关知识结合题意答题。
23. 肿瘤细胞可以表达CD47蛋白，并与吞噬细胞表面的信号调节蛋白a（SIRPa）结合，向吞噬细胞发出“别吃我”的信号，以逃脱机体免疫系统的攻击。因此阻断CD47/SIRPa信号，有望恢复吞噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。请回答有关问题：
（1）利用外源DNA、质粒制备含CD47基因的重组质粒。如图为含CD47基因的外源DNA、质粒的有关信息，EcRⅠ、BamHⅠ、SalⅠ、XhⅠ均为限制酶，Kan'、Tc'分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。
①为了形成合适的重组质粒，应该选用BamHⅠ、XhⅠ限制酶切割外源DNA和质粒DNA，原因是：a、______；b、____________。
②重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需经筛选才能获得导入成功的受体细胞。结合图所获得的重组质粒分析，所选受体细胞应具备______条件。
（2）如图是利用上述基因工程获得的CD47蛋白制备相应单克隆抗体及相关治疗效果检测实验过程。
①图中获得细胞A的器官通常是______。
②图中过程b可以采用的方法有______。（答出一点）
③图中“筛选”一般需要进行两次，目的依次是：第一次______，第二次______。
④如图中共同培养吞噬细胞和肿瘤细胞，在实验组加入不同浓度的CD47抗体，测定吞噬细胞的吞噬指数（吞噬指数与吞噬细胞所吞噬的肿瘤细胞数量成正相关），实验结果如图所示。该实验结果对临床治疗肿瘤有何指导意义？_____。
【答案】（1） ①. 能将目的基因完整切割 ②. 只破坏一个标记基因 ③. 能在含卡那霉素的培养基上生长而不能在含四环素的培养基上生长
（2） ①. 脾脏 ②. 物理方法（离心法、电融合法）、化学方法[聚乙二醇（PEG）融合法]、灭活病毒诱导法 ③. 筛选出杂交瘤细胞 ④. 筛选出既能无限增殖又能产生抗CD47蛋白抗体的杂交瘤细胞 ⑤. 使用CD47抗体治疗肿瘤需要严格控制抗体的浓度
【解析】
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【小问1详解】
①CD47基因为目的基因，其中含有限制酶SalⅠ的识别序列和切割位点，因此获取目的基因时不能用限制酶SalⅠ进行切割；为了防止目的基因和运载体切割后自身环化或不定向连接，应该选用两种限制酶进行切割，可以选择限制酶BamHⅠ和XhⅠ或限制酶EcRⅠ和XhⅠ，若选择限制酶EcRⅠ和XhⅠ会破坏质粒上的两个标记基因，因此不能选用该组限制酶，应该选用限制酶BamHⅠ和XhⅠ。
②由于限制酶XhⅠ将Tc′基因破坏，而Kan′没有被破坏，所以受体细胞应具备能在含卡那霉素的培养基上生长而不能在含四环素的培养基上生长。
【小问2详解】
①a是将CD47蛋白注入小鼠体内，目的是要获得已免疫的B淋巴细胞，能够产生对CD47有抗性的抗体，细胞A是B细胞，B细胞可以从脾脏中获得，因此获得细胞A的器官通常是脾脏。
②b是将B细胞和骨髓瘤细胞融合，常采用的方法有物理方法（离心法、电融合法）、化学方法[聚乙二醇（PEG）融合法]、灭活病毒诱导法。
③图中“筛选”的目的是选择出既能无限增殖又能产生抗CD47蛋白抗体的杂交瘤细胞，采用的方法一是先用特定的选择培养基筛选，将未融合的亲本细胞和融合具有同种核的细胞淘汰，二是对杂交瘤细胞进行抗体检测，所以采用了2种方法。
④从题图中看出，随着CD47抗体浓度的增加，在低于25μg/mL时，与对照相同，而达到50μg/mL时，吞噬指数大幅增加，所以使用CD47抗体治疗肿瘤需要严格控制抗体的浓度。
24. CRlaa和mCRlaa是两种早期胚胎培养常用的培养液，这两种培养液中除NaCl浓度不同外，其他成分及浓度均相同。为了比较这两种培养液对体外胚胎培养的差异情况，科研人员进行了相关实验，所得实验结果如下表所示。回答下列问题。
注：卵裂率（％）＝卵裂数／卵母细胞总数x100％。囊胚率（％）＝囊胚数／卵母细胞总数x100％。
（1）实验所用胚胎可通过体外受精培育而来，哺乳动物的体外受精主要包括__________________精子的获取和受精等几个主要步骤。获得的精子需进行__________________处理。
（2）CRlaa和mCRlaa两种培养液的成分除了含无机盐和有机盐类外，还需添加__________________（答出1点即可）、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及__________________等物质。根据表中信息比较这两种培养液对卵裂及囊胚发育的影响：__________________。
（3）囊胚期的滋养层细胞最终会发成__________________。
（4）将培养获得的囊胚通过__________________技术转移至受体的子宫内继续发育成胎儿。外来胚胎在受体内存活的生理学基础是__________________。
【答案】（1） ①. 卵母细胞的采集 ②. 获能
（2） ①. 维生素 ②. 动物血清 ③. CRlaa和mCRlaa对于卵裂期的发育影响接近，mCRlaa培养液更有利于囊胚发育 （3）胎膜和胎盘
（4） ①. 胚胎移植 ②. 受体对移入子宫的胚胎基本不发生免疫排斥反应
【解析】
【分析】动物细胞培养的条件：①营养（合成培养基+血清）；②无菌无毒（灭菌、加抗生素、更换培养基）；③适宜温度和PH值（36.5±0.5℃；7.2-7.4）；④气体环境（95%空气+5%CO2）⑤培养装置：CO2培养箱。胚胎移植成功的生理学基础受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生免疫排斥反应，为胚胎在受体内的存活提供了可能。
【小问1详解】
哺乳动物的体外受精主要包括卵母细胞的采集、精子的获取和受精等几个主要步骤，采集到的卵母细胞和精子，要分别在体外进行成熟培养和获能处理。
【小问2详解】
动物细胞培养液需要糖类、氨基酸、无机盐、维生素等营养物质以及动物血清等成分。根据表中信息可知CRlaa和mCRlaa对于卵裂期的发育影响接近，mCRlaa培养液更有利于囊胚发育。
【小问3详解】
囊胚期的滋养层细胞最终会发成胎盘和胎膜，内细胞团发育成胎儿的各种组织。
【小问4详解】
将培养获得的囊胚通过胚胎移植技术转移至受体的子宫内继续发育成胎儿。外来胚胎在受体内存活的生理学基础是受体对移入子宫的胚胎基本不发生免疫排斥反应。
25. 利用基因工程技术培育出油脂高产的四尾栅藻，是获取生物柴油的新途径。科学家欲从紫苏中提取DGAT1 基因（催化油脂合成的关键酶基因），导入到四尾栅藻细胞，获得转基因油脂高产的四尾栅藻，质粒pCAMBIA 与 PCR 扩增出的 DGATI 酶切位点如图所示。现有 BamHⅠ 、BgI Ⅱ、EcRⅠ三种限制酶，它们识别并切割的碱基序列如图，分析回答：
（1）从紫苏组织细胞中提取总 RNA 时，需要加入 RNA 酶抑制剂，目的是_________。过程①需要_________酶的催化，过程②通过PCR 技术实现，进行 PCR 时，需要在两种引物的_________端（填 5’或 3’）添加限制酶 BgIⅡ的识别序列。
（2）启动子往往具有物种特异性，在载体 pCAMBIA 质粒中插入紫苏 DGAT1 基因，其上游启动子应选择_________（填“紫苏”、“大肠杆菌”或“四尾栅藻”）启动子。
（3）用限制酶 BglⅡ切割 DGAT1,用限制酶_________切割 pCAMBlA,将充分酶切后的产物混合，加入 DNA 连接酶进行连接。若只考虑 DNA片段的两两连接，可得到_________种大小不同的连接产物。利用连接产物对大肠杆菌实施转化和筛选，筛选出的重组质粒不一定符合要求，原因是____________________.
（4）为进一步筛选出符合要求的重组质粒，选用限制酶 EcRⅠ对不同的重组质粒进行酶切处理，得到的电泳结果如图所示，其中_________组重组质粒为所需质粒。（已知质粒pCAMBIA中EcRI的酶切位点与BamHⅠ 的酶切位点间的最短距离为600bp）
【答案】（1） ①. 防止RNA酶降解RNA ②. 逆转录 ③. 5'
（2）四尾栅藻 （3） ①. BamH I ②. 3 ③. 重组质粒有正向连接和反向连接两种情况
（4）A
【解析】
【分析】基因工程技术的基本步骤：目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、基因的检测与鉴定。
【小问1详解】
从紫苏组织细胞中提取总RNA时，为避免RNA酶降解RNA，通常加入RNA酶抑制剂。①是RNA逆转录形成单链cDNA的过程，需要利用到逆转录酶。过程②是通过PCR技术实现的，由②的扩增产物两端的酶切序列为BglⅡ可知，进行PCR时，需要在两种引物的5'端添加限制酶BglⅡ的识别序列。
【小问2详解】
要达到让紫苏DGATI基因在四尾栅藻细胞中表达的目的，应该添加四尾栅藻的启动子。
【小问3详解】
BamHⅠ与BglⅡ分别切割质粒与目的基因，质粒与目的基因能连接的原因是酶切后的黏性末端相同，能进行碱基互补配对。若只考虑DNA片段的两两连接，构建重组质粒时可得到3种大小不同的连接产物，即目的基因自连、质粒自连以及目的基因和质粒相互连接的用产物。利用连接产物对大肠杆菌实施转化和筛选，筛选出的重组质粒不一定符合要求，原因是重组质粒可能有正向连接和反向连接两种情况。
【小问4详解】
利用EcRI限制酶切割重组质粒进行鉴定。已知质粒pCAMBLA中EcRⅠ的酶切位点与BamHI的酶切位点间的最短距离为600bp，根据质粒pCAMBIA和DGATI基因的长度可知，若利用EcRI限制酶切割重组质粒进行鉴定，正确连接的重组质粒酶切产物应为2400bp和800bp，A组重组质粒为所需质粒。脱毒方法
样本存活数
脱除CSVd率/%
脱除CVB率/%
脱除(CSVd+CVB)率/%
第一组茎尖分生区组织培养
77
20.78
44.16
16.88
第二组热处理结合茎尖培养
71
36.62
63.38
35.21
第三组病毒唑结合茎尖培养
71
46.48
49.30
36.62
组别
卵裂数
卵裂率
囊胚数
囊胚率
CRlaa
769
84.9%
189
20.6%
mCRlaa
750
83.7%
252
28.1%
BamHI
5'—G↓GATCC—3
BglⅡ
5'—A↓GATCT—3
EcR I
5'—G↓AATTC—3