人教版 (新课标)选修1《生物技术实践》专题5 DNA和蛋白质技术课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段优质ppt课件

这是一份人教版 (新课标)选修1《生物技术实践》专题5 DNA和蛋白质技术课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段优质ppt课件，共27页。PPT课件主要包含了㈠DNA分子的结构，HONP，元素组成，脱氧核苷酸，基本单位，一基础知识，脱氧核苷，脱氧核糖，含氮碱基，腺嘌呤A等内容，欢迎下载使用。

一个核苷酸上的磷酸基团上的“－OH”和另一个核苷酸分子的第3位碳原子上的羟基之间失去一分子水，形成磷酸二酯键，即在相邻的两个脱氧核苷酸的3’和5’碳原子之间形成磷酸二酯键。数量庞大的四种脱氧核苷酸通过3’、5’、磷酸二酯键彼此连接起来形成脱氧核苷酸链。通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端
3.多脱氧核苷酸链得形成
多脱氧核苷酸链结构简图
4.DNA分子的双螺旋结构
⑴.DNA分子是由 的（即一条链为3’－5’，另一条链为5’－3’）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则 结构。
⑵. 与 交替连结，排列在外侧，构成基本骨架； 排列在链的内侧。
⑶.两条链上的碱基通过 连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与 配对， 一定同胞嘧啶配对。
有丝分裂间期减数第一次分裂前的间期。
细胞核（主要）、线粒体、叶绿体。
由一个DNA形成两个完全相同的DNA的过程。
酶:解旋酶、DNA聚合酶能量:ATP原料:四种脱氧核苷酸模板:DNA的两条链
⑴.边解旋边复制(过程）
⑵.半保留复制（结果）
DNA分子通过复制使遗传信息从亲代传给了后代，从而保持了遗传信息的连续性
⑴规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板
⑵碱基互补配对能力保证了复制准确无误的进行
总结：胞内DNA复制的基本体系
打开DNA双链提供DNA复制的模板合成子链的原料催化合成DNA子链使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸
㈢.PCR(多聚酶链式反应）
2.DNA聚合酶作用过程
当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后， DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链，DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。
1.定义：是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。
PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。在80－100°C的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。
耐高温的Taq DNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化。
4.Taq DNA聚合酶的应用
5.需要为PCR反应提供的物质
缓冲液、DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
6.细胞内和细胞外DNA复制环境的区别
实质上一台能够自动调控温度的仪器。
一种薄壁塑料管，总容积为0.5ml
用于定量转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次。
按照PCR反应体系的配方将所需用的试剂摆放在实验桌上。
用微量移液器按照PCR反应体系配方往微量离心管里面加入各种试剂。
混合后盖严微量离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁。
⑴过程：将微量离心管放在离心机上,离心约10s。
⑵离心目的：使反应液体集中在离心管底部，提高反应效果。
将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序。
PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为三个基本步骤──变性、复性和延伸.
PCR技术高度灵敏，为了避免外源DNA等因素的污染而造成干扰实验，PCR操作时要注意做到：
⑴隔离操作区，所用微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用必须进行高压灭菌；
⑵分装试剂，简化操作程序，使用一次性枪头
㈠.理论上DNA扩增数目的计算
1.一条DNA，复制n次，DNA为2n
2.a条DNA，复制n次，DNA为a×2n
㈡.实验中DNA含量的测定
可以通过计算DNA含量来评价扩增的效果，DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA的含量有关。
2uLPCR反应液，加入98uL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释.
以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零。
取DNA稀释液100uL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值
DNA含量(g)＝50×(260nm的读数)×稀释倍数
50：1 g /ml的DNA在厚度为1cm比色杯中的吸光值为0.02
例如：PCR产物每轮循环增加一倍，30轮循环扩增量达230个拷贝（109拷贝）
PCR技术是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出特点