[生物][期末]新疆阿勒泰地区2023-2024学年高二下学期期末联考试卷(解析版)

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1. 使用平板划线法进行接种，应选择的接种工具是图中的（ ）
A. B.
C. D.
【答案】A
【分析】接种环：主要用于微生物的接种操作。可以用来挑取单菌落，将其转移到新的培养基上进行培养，从而实现菌种的纯化、分离或接种到特定的培养环境中。 涂布器：用于将菌液均匀地涂布在固体培养基表面，以获得单菌落或进行平板计数等。 胶头滴管：可用于吸取和滴加少量液体，比如在一些微生物实验中吸取和添加试剂等。 接种针：与接种环类似，也是用于微生物接种。通常更适合用来穿刺接种，比如将菌种穿刺到半固体培养基中观察其运动性等。
【详解】A、图示为接种环可以用来挑取单菌落，将其转移到新的培养基上进行培养，从而实现菌种的纯化、分离或接种到特定的培养环境中，A正确；
B、图示为涂布器用于将菌液均匀地涂布在固体培养基表面，以获得单菌落或进行平板计数等，B错误；
C、图示为胶头滴管可用于吸取和滴加少量液体，比如在一些微生物实验中吸取和添加试剂等，C错误；
D、 图示为接种针：通常更适合用来穿刺接种，比如将菌种穿刺到半固体培养基中观察其运动性等，D错误。
故选A。
2. 尿素在（ ）的作用下水解成氨气
A. 脲酶B. 纤维素酶
C. 淀粉酶D. 葡萄糖水解酶
【答案】A
【分析】培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
【详解】尿素在脲酶的作用下水解成氨气，BCD错误，A正确。
故选A。
3. 在分离、纯化细菌的实验中，划线接种（甲）及培养结果（乙）如图所示，a、b、c、d是划线的四个区域。下列叙述正确的是（ ）
A. 实验所用培养基一般用干热灭菌法进行灭菌
B. 为了防止杂菌污染，接种环灼烧后立即蘸取菌液进行划线
C. 图中d区域的划线操作是从c区域划线的末端开始的
D. 图示划线接种过程中至少需要对接种环灼烧5次
【答案】D
【分析】图示过程为平板划线法，平板划线法可对微生物进行纯化，只有第一次划线蘸取菌液，其余每次划线的菌落来自于上一次划线的末端。
【详解】A、实验所用培养基一般用湿热灭菌法（高压蒸汽灭菌）进行灭菌，A错误；
B、接种环灼烧后需适当冷却再蘸取菌液进行划线，避免将菌种烫死，B错误；
C、图中a对应的区域出现了单菌落，d区域菌落最多，因此a区域应该为划线的最终区域，d区域为划线的起始区域，即图中c区域的划线操作是从d区域划线的末端开始的，C错误；
D、蘸取菌液前需要灼烧一次接种环，之后在c、b、a区域划线前都要灼烧接种环，以保证菌种来自上一次划线的末端，划线结束后也要灼烧接种环，防止接种环上的菌种污染环境、感染接种者,因此接种过程中至少需要对接种环灼烧5次，D正确。
故选D。
4. 与传统发酵技术相比，发酵工程的产品种类更加丰富，产量和质量明显提高。下列关于发酵工程的叙述，不正确的是（ ）
A. 发酵工程与传统发酵技术都需要利用微生物来进行发酵
B. 发酵工程的产品主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身
C. 发酵工程中发酵条件不会影响微生物的代谢途径
D. 发酵工程中获得的大量的微生物菌体是单细胞蛋白
【答案】C
【详解】A、发酵工程与传统发酵技术都需要利用微生物来进行发酵，发酵工程应用无菌技术获得纯净的微生物，利用单一菌种；传统发酵技术利用天然的混合菌种，A正确；
B、发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身，B正确；
C、在发酵工程的发酵环节中，发酵条件不仅影响微生物的生长繁殖，也会通过影响酶的活性影响微生物的代谢途径，C错误；
D、单细胞蛋白是指利用发酵工程获得的大量的微生物菌体，D正确。
故选C。
5. 下图为某同学进行的平板划线法分离酵母菌，正确的划线操作应该是（ ）
A. B.
C. D.
【答案】B
【分析】平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
【详解】用平板划线法进行酵母菌的分离时，灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始第二次划线。重复以上操作，做第三、第四、第五次划线，注意不要将最后一次滑线与第一次划线相连，每次划线完成后都需要灼烧，杀死上一次残留的菌种，B正确，ACD错误。
故选B。
6. 在生产生活实践中人们经常需要用到消毒或杀菌的方法以避免微生物大量繁殖，下列关于培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶适宜采用的消毒或杀菌方法依次是（ ）
①化学药物消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒⑤湿热灭菌⑥巴氏消毒
A. ⑤③②④①⑥B. ③⑤②①④⑥
C. ⑤③②①④⑥D. ③⑤④②①⑥
【答案】C
【详解】培养基宜用湿热灭菌法灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌法灭菌；接种环可用灼烧灭菌法灭菌，以达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药物进行消毒，如用酒精擦拭双手；对于空气，可用紫外线消毒法；为了不破坏牛奶的营养成分，可采用巴氏消毒法对其进行消毒，C正确，ABD错误。
故选C。
7. 中国科学家构建了一株嗜盐单胞菌，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产新型可降解材料。下列叙述错误的是（ ）
A. 发酵工业使用的菌种需要满足高产的条件
B. 大规模发酵生产中菌种需要多次扩大培养以缩短发酵时间
C. 为获得对蔗糖耐受能力强的菌株，可不断提高蔗糖浓度进行筛选
D. 培养过程中需定期取样并用划线分离法进行菌落计数，评估菌落的增殖情况
【答案】D
【分析】在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。
【详解】A、发酵工业使用的菌种需要满足高产的条件，因此常需要通过筛选获得所需要的菌种，A正确；
B、在大规模发酵生产中，培育得到的菌种经扩大培养，达到一定数量后再接种，可以缩短发酵时间，B正确；
C、为获得对蔗糖耐受能力强的菌株，可在液体培养基中将蔗糖作为唯一碳源，并不断提高蔗糖浓度进行筛选，C正确；
D、划线分离法不能用于菌体计数，D错误。
故选D。
8. 下列哪项食品不是传统发酵食品（ ）
A. 豆腐B. 酱油C. 醋D. 豆豉
【答案】A
【分析】发酵指人们借助微生物在有氧或无氧条件下的生命活动来制备微生物菌体本身、或者直接代谢产物或次级代谢产物的过程。
【详解】A、豆腐主要的生产过程一是制浆，即将大豆制成豆浆；二是凝固成形，即豆浆在热与凝固剂的共同作用下凝固成含有大量水分的凝胶体，即豆腐，不是发酵食品，A符合题意；
B、酱油是指以大豆和(或)脱脂大豆(豆粕或豆饼)、小麦和(或)麸皮为原料，经微生物发酵制成的具有特殊色、香、味的液体调味品，属于传统发酵食品，B不符合题意；
C、制醋是利用醋酸菌的有氧呼吸，属于传统发酵食品，C不符合题意；
D、豆豉以黑豆或黄豆为主要原料，利用毛霉、曲霉或者细菌蛋白酶的作用，分解大豆蛋白质，达到一定程度时，用加盐、加酒、干燥等方法，抑制酶的活力，延缓发酵过程而制成，属于传统发酵食品，D不符合题意。
故选A。
9. 保障粮食安全，既要满足口粮需求，也要满足饲用基本需求。利用发酵工程生产的单细胞蛋白既可以作为食品添加剂，也可以制成饲料，应用前景广阔。下列相关叙述错误的是（ ）
A. 单细胞蛋白营养丰富，不仅富含蛋白质，还含有脂质、糖类等多种营养物质
B. 相比传统饲料，单细胞蛋白的生产过程既不需要过多占用耕地，也不受季节的限制
C. 在青贮饲料中加入乳酸菌，可以提高饲料品质，使饲料保鲜，动物食用后还能提高免疫力
D. 从微生物菌体中提取代谢物可得到单细胞蛋白
【答案】D
【分析】发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品分离、提纯等方面。
【详解】A、单细胞蛋白指的是微生物菌体本身，其营养丰富，不仅富含蛋白质，还含有脂质、糖类等多种营养物质，A正确；
B、相比传统饲料，单细胞蛋白的生产过程利用现代发酵工程技术，既不需要过多占用耕地，也不受季节的限制，B正确；
C、乳酸菌是益菌，在青贮饲料中加入乳酸菌，可以提高饲料品质，使饲料保鲜，动物食用后还能提高免疫力，C正确；
D、单细胞蛋白指的是微生物的菌体，D错误。
故选D。
10. 动物细胞核移植技术可以用来探讨遗传、发育等方面的问题，下列叙述错误的是（ ）
A. 体细胞克隆技术已经成熟，可广泛应用于各个科学研究或生产实践领域
B. 该过程需要对MⅡ期去核卵母细胞进行显微注射操作
C. 哺乳动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植的难度
D. 该过程所得动物称作克隆动物，可用于获得特定疾病模型动物
【答案】A
【分析】动物细胞核移植技术是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新的胚胎，继而发育成动物个体的技术。用核移植方法得到的动物称为克隆动物。
【详解】A、动物细胞核移植技术发展不成熟，成功率较低，不能广泛应用，A错误；
B、动物细胞核移植需要对MⅡ期去核卵母细胞进行显微注射操作，B正确；
C、由于动物胚胎细胞分化程度低，表现全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难，因此动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植的难度，C正确；
D、克隆特定疾病模型的动物减少了人工操作，利于研究致病机理以及开发合适的药物，D正确。
故选A。
11. 对某种动物的肝肿瘤细胞进行细胞培养，下列说法正确的是（ ）
A. 传代培养时，用胰蛋白酶处理悬浮的细胞，再用离心法收集
B. 细胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的主要作用是刺激细胞呼吸
C. 定期更换培养液是为了给体外培养的细胞提供无菌环境
D. 在合成培养基中，通常需加入血清等天然成分
【答案】D
【分析】动物细胞培养的条件：（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物。（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。（3）温度和pH。（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（CO2的作用是维持培养液的pH）
【详解】A、传代培养时，悬浮的细胞直接用离心法收集，A错误；
B、胞培养应在含5%CO2的恒温培养箱中进行，CO2的主要作用是维持培养液的pH，B错误；
C、定期更换培养液是为了清除代谢废物，C错误；
D、合成培养基的成分包括糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，通常需加入血清、血浆等天然成分，以补充合成培养基缺乏的营养物质，D正确。
故选D。
12. 动物细胞工程的技术基础是（ ）
A. 动物细胞培养B. 细胞融合
C. 单克隆抗体D. 核移植
【答案】A
【分析】 动物细胞培养是指从动物体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和繁殖的技术。
【详解】动物细胞融合、单克隆抗体、核移植是动物细胞工程常用的技术手段，但不是动物细胞工程的技术基础。动物细胞培养是动物细胞工程的技术基础。
故选A。
13. 动物细胞融合技术最重要的用途是（ ）
A. 克服远缘杂交不亲和
B. 制备单克隆抗体
C. 培育新品种
D. 生产杂种细胞
【答案】B
【分析】动物细胞融合：动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程．融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞；诱导动物细胞融合的方法有物理法（电激等）、化学法（聚乙二醇PEG)、生物法（灭活的病毒）等；动物细胞融合的意义：打破了生殖隔离，使远缘杂交成为可能；成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。
【详解】A、动物细胞融合技术可以克服远缘杂交不亲和，但这不是该技术的用途，而是该技术的意义，A错误；
BCD、动物细胞融合技术最重要的用途是制备单克隆抗体，B正确，CD错误；
故选B。
14. 下列属于植物的快速繁殖技术的是（ ）
A. 用兰花的芽尖组织培育兰花幼苗
B. 水稻种子萌发并长成新个体
C. 扦插的葡萄枝长成新个体
D. 柳树芽发育成枝条
【答案】A
【分析】人们形象的把用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技术，叫做植物的微型繁殖技术，也叫快速繁殖技术。
【详解】A、茎尖不带病毒，故采用茎尖组织培养技术来脱毒苗，A正确；
B、水稻种子萌发并长成新个体属于自然生长过程，不需要植物组织培养技术，B错误；
C、扦插的葡萄枝长成新个体属于营养繁殖，不需要植物组织培养技术，C错误；
D、柳树芽发育成枝条，为芽的发育过程，不需要植物组织培养技术，D错误。
故选A。
15. 菊科植物甜叶菊叶片中含有菊糖苷，其甜度为蔗糖的150~300倍，是天然甜味剂。菊糖苷既可作为食品添加剂，也可辅助治疗糖尿病、高血压等。甜叶菊因其种子小、发芽率低、根系弱等特点使其生产受到限制，研究发现采用组织培养技术可大量生产甜叶菊。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 甜叶菊外植体需用体积分数为95%的酒精消毒处理
B. 接种后需在18~22℃、光照条件下诱导形成愈伤组织
C. 生长素与细胞分裂素用量比值的不同会使愈伤组织向不同方向分化
D. 愈伤组织形成试管苗的实质是使细胞失去原来特有的结构和功能
【答案】C
【分析】植株组织培养的原理是利用植物细胞的全能性。离体的植物组织或细胞，在培养一段时间后，会通过细胞分裂形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植株体。
【详解】A、甜叶菊外植体需用体积分数为70%的酒精和次氯酸钠溶液进行消毒处理，A错误；
B、接种后需在18~22℃、无光条件下诱导形成愈伤组织，B错误；
C、植物组织培养过程中两种关键的激素是生长素和细胞分裂素，生长素与细胞分裂素的用量比值不同会诱导愈伤组织向不同方向分化，C正确；
D、愈伤组织形成试管苗的过程为再分化，其实质是基因的选择性表达，D错误。
故选C。
16. 下图是胚胎发育过程中某阶段示意图，下列有关叙述错误的是（ ）
A. 图中②将来发育成胎膜和胎盘
B. 图中③可发育成胎儿的各种组织
C. 高等哺乳动物胚胎发育过程中，细胞分化始于桑葚胚期，终止于生命结束
D. 胚胎从①中伸展出来的过程发生于囊胚期
【答案】C
【分析】胚胎进一步发育，细胞逐渐分化。聚集在胚胎一端的细胞形成内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织；而沿透明带内壁扩展和排列的细胞，称为滋养层细胞，它们将来发育成胎膜和胎盘。随着胚胎的进一步发育，胚胎的内部出现了含有液体的腔—囊胚腔，这个时期的胚胎叫作囊胚。囊胚进一步扩大，会导致透明带破裂，胚胎从其中伸展出来，这一过程叫作孵化。孵化非常重要，如果不能正常孵化，胚胎就无法继续发育。
【详解】A、图中②为滋养层细胞，将来发育成胎膜和胎盘，A正确；
B、图中③为内细胞团，将来发育成胎儿的各种组织，B正确；
C、高等哺乳动物胚胎发育过程中，细胞分化始于囊胚期，终止于生命结束，C错误；
D、胚胎从①中伸展出来的过程称为孵化，发生于囊胚期，D正确。
故选C。
17. 下图表示用灭活的仙台病毒诱导动物细胞融合的部分过程，下列相关叙述正确的是（ ）
A. 细胞A和细胞B必须为同种细胞才能融合
B. 细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质
C. 该融合过程体现了细胞膜具有选择透过性
D. 植物细胞的融合过程与动物细胞完全相同
【答案】B
【分析】动物细胞融合技术就是使两个或 多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。 动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同。
【详解】A、不同种的细胞也能融合，如人、鼠细胞融合，A错误；
B、动物细胞融合技术就是使两个或 多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。融合后形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。 动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理相同。图中，细胞A和细胞B融合成一个细胞，细胞C同时有细胞A和细胞B的遗传物质，B正确；
C、该融合过程体现了细胞膜具有一定的流动性，C错误；
D、植物细胞的融合通常要先去掉细胞壁，过程与动物细胞不完全相同，D错误。
故选B。
18. 利用“细胞农业”技术（即通过细胞扩大培养形成产物）已成功培育出“人造咖啡”，其含有咖啡因、单宁酸等植物基本生命活动的非必需物质。下列相关叙述，错误的是（ ）
A. “人造咖啡”培育过程需用PEG、灭活的病毒诱导原生质体融合
B. “细胞农业”技术培育“人造咖啡”可减少对森林的大面积砍伐
C. “人造咖啡”的生产过程中可采用液体悬浮培养，以增加其产量
D. “人造咖啡”中的咖啡因与单宁酸属于植物细胞的次生代谢产物
【答案】A
【分析】植物细胞培养是在离体条件下，将愈伤组织或其他易分散的组织置于液体培养基中进行震荡培养，得到分散成游离的悬浮细胞，通过继代培养使细胞增殖，从而获得大量细胞群体的一种技术。
【详解】A、根据题意，利用“细胞农业”技术（即通过细胞扩大培养形成产物）培育“人造咖啡”运用的是植物细胞培养技术，不需用PEG、灭活的病毒诱导原生质体融合，A错误；
B、利用“细胞农业”技术培育“人造咖啡”可以不用种植咖啡树便能产生咖啡因，可减少对森林的大面积砍伐，B正确；
C、植物细胞液体培养基可以使细胞在其中悬浮，获得更好的营养和生长环境，所以“人造咖啡”的生产过程中可采用液体悬浮培养， 以增加其产量，C正确；
D、植物次生代谢产物是由次生代谢产生的一类细胞生命活动或植物生长发育正常运行的非必需的小分子有机化合物，咖啡因与单宁酸属于植物细胞的次生代谢产物，D正确。
故选A。
19. 为培育具有市场竞争力的无子柑橘，研究者设计如下流程。下列相关叙述不正确的是（ ）

A. 过程①需使用几丁质酶处理
B. 实现过程②可采用高Ca2+—高pH融合法
C. 过程③需应用植物组织培养技术
D. 三倍体植株可结出无籽柑橘
【答案】A
【分析】分析图示可知，①过程为原生质体的制备过程，需要纤维素酶和果胶酶，②过程为原生质体的融合过程，需要诱导剂诱导融合，③过程为植物组织培养的过程。
【详解】A、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，所以过程①需使用纤维素酶和果胶酶处理，A错误；
B、②过程为细胞融合过程，依赖膜的流动性，可采用高Ca2+-高pH融合法，B正确；
C、过程③需应用植物组培技术将杂种细胞培养形成个体，C正确；
D、三倍体植株含有三个染色体组，减数分裂时联会紊乱，可产生无籽柑橘，D正确。
故选A。
20. 动物细胞培养技术是动物细胞工程的基础技术，该项技术的基本流程如图所示。下列有关分析正确的是（ ）

A. 传代培养时需要收集细胞，都可以直接利用离心法收集
B. 过程①③可用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理
C. 细胞培养时，大多数种类的动物细胞可悬浮在培养液中生长增殖
D. ②④过程所用的培养液中都须加有一定量的血清和动物激素
【答案】B
【分析】在从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖。因此，在进行细胞培养时，首先要对新鲜取材的动物组织进行处理，或用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间，将组织分散成单个细胞。然后，用培养液将细胞制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养皿或培养瓶内，置于适宜环境中培养。体外培养的动物细胞可以分为两大类：一类细胞能够悬浮在培养液中生长增殖；另一类则需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，大多数细胞属于这种类型，这类细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为细胞贴壁。悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻。贴壁细胞在生长增殖时，除受上述因素的影响外，还会发生接触抑制现象，即当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。这时就需要对细胞进行分瓶培养，让细胞继续增殖。人们通常将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养，将分瓶后的细胞培养称为传代培养。在进行传代培养时，悬浮培养的细胞直接用离心法收集；贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集。之后，将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养。
【详解】A、在进行传代培养时，悬浮培养的细胞直接用离心法收集；贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集，A错误；
B、过程①是对新鲜取材的动物组织进行处理，或用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间，将组织分散成单个细胞。过程③是进行传代培养时，悬浮培养的细胞直接用离心法收集；贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集，B正确；
C、体外培养的动物细胞，大多数需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，C错误；
D、动物细胞培养所用的培养液中，含有糖类、氨基酸、无机 盐、维生素等，此外还需要添加动物血清，不需要加入动物激素，D错误。
故选B。
21. 下列关于胚胎工程技术的叙述，错误的是（ ）
A. 胚胎工程实际上是对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的体外模拟操作
B. 在实际胚胎工程操作中，常以观察到两个极体作为是否受精的标志
C. 胚胎移植的实质是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移
D. 进行胚胎工程时，为了鉴定性别，常取内细胞团细胞做DNA分析
【答案】D
【详解】A、胚胎工程的许多技术，实际上是在体外条件下，对动 物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作，因此 了解哺乳动物受精和早期胚胎发育的规律十分重要，A正确；
B、在受精后，次级卵母细胞会继续进行减数第二次分裂，形成卵细胞和第二极体，因此受精的标志：在卵细胞膜和透明带之间的间隙可以观察到两个极体（一个是第一极体，还有一个是第二极体)，B正确；
C、早期胚胎需移植到与供体生理状态相同的代孕母牛体内，实质上是早期胚胎在相同生理环境条件下空间位置的转移，C正确；
D、胚胎移植前为避免对胚胎造成影响，通常取囊胚的滋养层细胞进行DNA分析，鉴定性别，D错误。
故选D。
22. 在单克隆抗体的制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合后，要用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活的细胞是（ ）
①B淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞
A. ①②③④B. ①③⑤C. ②④D. ②⑤
【答案】A
【详解】特定培养基培养细胞的目的是筛选出既能大量增殖、又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，因此除了⑤杂交瘤细胞，其他的细胞都不能在此培养基上生存。所以在这种培养基上不能存活和增殖的细胞有：①B淋巴细胞， ②小鼠骨髓瘤细胞 ，③B淋巴细胞自身融合细胞，④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞；A符合题意；B、C、D不符合题意。
故选A。
23. 下列关于植物细胞工程实际应用的叙述，正确的是（ ）
A. 脱毒苗是利用基因工程技术，将脱毒基因导入植物细胞培育而成的新品种
B. 利用茎尖组织培育的幼苗全是脱毒幼苗
C. 快速繁殖技术涉及的生殖方式为有性生殖
D. 快速繁殖技术可快速实现种苗的大量繁殖，还可保持优良品种的遗传特性
【答案】D
【分析】植物细胞工程技术的应用：植物繁殖的新途径（微型繁殖、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。
【详解】A、脱毒苗是利用没有受到病毒感染的细胞经过植物组织培养获得的个体，A错误；
B、利用茎尖组织培育的幼苗不一定全是脱毒幼苗，材料茎尖组织可能带有病毒，B错误；
C、快速繁殖技术涉及的生殖方式为无性生殖，C错误；
D、快速繁殖技术为无性生殖，可快速实现种苗的大量繁殖，还可保持优良品种的遗传特性，D正确。
故选D。
24. 珍稀植物红豆杉因能产生具有良好抗癌作用的紫杉醇而闻名。下图所示为相关实验流程，相关叙述错误的是（ ）
A. 诱导愈伤组织需要考虑外植体的取材部位、培养基组成和激素种类等
B. 利用植物细胞培养技术获得初生代谢产物紫杉醇能避免大量破坏野生红豆杉种群
C. 用液体培养基扩大培养愈伤组织生产紫杉醇时，通常要通入无菌空气
D. 同一株植物不同部位的组织细胞经诱导培养获得的植株基因型不一定相同
【答案】B
【分析】植物组织培养的原理是植物细胞具有全能性，其过程为：离体的植物组织，器官或细胞经过脱分化过程形成愈伤组织（高度液泡化，无定形状态薄壁细胞组成的排列疏松、无规则的组织），愈伤组织经过再分化过程形成胚状体，进一步发育成为植株。
【详解】A、外植体的取材部位、培养基组成和激素种类等都会影响愈伤组织的形成，A正确；
B、紫杉醇是植物体内的次生代谢物，B错误；
C、用液体培养基扩大培养愈伤组织生产紫杉醇时，通常要通入无菌空气，以保证无菌环境，C正确；
D、同一株植物不同部位的组织细胞经诱导培养获得的植株基因型不一定相同，比如花粉粒最终获得的是单倍体植物，D正确。
故选B。
25. 近日，某创新团队培育的“克隆奶牛”顺利出生。该团队选择群体中高产、长寿和抗逆性能优异的明星奶牛，采集其耳缘细胞，通过核移植来生产克隆胚胎，并进行胚胎移植，所得犊牛体型、花色与明星奶牛完全一致，若不考虑突变，下列相关叙述正确的是（ ）
A. 所得犊牛的核遗传物质与明星奶牛不完全相同
B. 该过程将动物耳缘细胞培养成完整个体，体现了动物细胞的全能性
C. 核移植过程中，通过显微操作技术对卵母细胞去核的实质是去除纺锤体-染色体复合物
D. 可将获得的克隆胚胎培养至囊胚或原肠胚时进行分割，分割囊胚要注意将内细胞团均等分割
【答案】C
【分析】动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体，核移植得到的动物称克隆动物。
【详解】A、所得犊牛的核遗传物质来源于明星奶牛，所以与明星奶牛完全相同，A错误；
B、该过程将动物耳缘细胞培养成完整个体，体现了动物细胞核的全能性，B错误；
C、去核是去除减数分裂Ⅱ期卵母细胞中的纺锤体-染色体复合物，C正确；
D、可将获得的克隆胚胎培养至囊胚或桑葚胚时进行分割，分割囊胚要注意将内细胞团均等分割，D错误。
故选C。
26. 下列有关“筛选”的叙述错误的是（ ）
A. 培育转基因抗虫棉时，需从分子水平和个体水平进行筛选
B. 胚胎分割时，需选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚
C. 制备单克隆抗体时，需从分子水平筛选能产生所需抗体的杂交瘤细胞
D. 单倍体育种时，需对F1的花药进行筛选后再进行组织培养
【答案】D
【分析】目的基因的检测与鉴定:分子水平上的检测；①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因；②检测目的基因是否转录出了mRNA； ③检测目的基因是否翻译成蛋白质:抗原抗体杂交技术。个体水平上的鉴定:抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。单倍体育种的原理是染色体数目变异，其优点是明显缩短了育种年限，得到的后代-般均为纯合子.由于同一种抗原可能激活多种B细胞，这些不同种类的B细胞与骨髓瘤细胞融合后能形成多种杂交瘤细胞，因此还要进行第次筛选以获得能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
【详解】A、检测转基因抗虫棉的染色体DNA上是否插入了目的基因或者目的基因是否成功转录和翻译,需用进行分子水平检测，检测抗虫棉的抗虫效果，需要进行个体水平检测，A正确；
B、胚胎移植前，需要对通过体外受精或其他方式得到的胚胎进行质量筛选，需选择发育良好、形态正常的桑椹胚或囊胚，以便选择发育良好的胚胎进行移植,提高移植后胚胎的成活率，B正确；
C、利用抗原抗体杂交的原理(即抗体检测)对获得的杂交瘤细胞进行筛选，属于分子水平的筛选，C正确；
D、单倍体育种时，不需对F1的花药进行筛选，直接利用植株产生的花药进行离体培养获得单倍体植株，D错误。
故选D。
27. 进行DNA分子体外复制实验时，依据DNA复制原理需要加入的酶是（ ）
A. DNA聚合酶B. RNA聚合酶
C. 逆转录酶D. 端粒酶
【答案】A
【分析】PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术，该过程所需要的条件为：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、Taq酶。
【详解】DNA复制需要解旋酶、DNA聚合酶，但PCR中是通过加热使DNA双链解旋的，故体外进行DNA复制（PCR）过程中需要用到的酶是耐高温的DNA聚合酶，A正确，BCD错误。
故选A。
28. 在重组DNA技术中，将外源基因导入受体细胞，通常是利用质粒作为载体。下列关于质粒的叙述，正确的是（ ）
A. 质粒是一种结构简单的环状RNA分子
B. 质粒的复制和表达过程都遵循中心法则和碱基互补配对原则
C. 目的基因只有通过质粒整合到受体细胞的DNA中才能表达
D. 大多数天然质粒都不需要人工改造，可以直接作为载体使用
【答案】B
【详解】A、质粒存在于许多细菌以及酵母菌（真核细胞）中的有自主复制能力的小型环状DNA分子，A错误；
B、质粒的复制和表达都遵循中心法则，也遵循碱基互补配对原则，B正确；
C、只需要将含有目的基因的质粒导入受体细胞，无需整合到受体细胞的DNA中也能表达，C错误；
D、天然的质粒不能直接作为载体，基因工程中用到的质粒都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的，D错误。
故选B。
29. 下列关于生物工程和技术的表述错误的是（ ）
A. 杂交瘤细胞制备过程中，可用灭活的病毒诱导细胞融合
B. 胚胎移植中，供体和受体相当于双亲中的父本和母本
C. PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定，需要在紫外灯下观察
D. 用PCR技术扩增目的基因时，不需要提前知道基因的全部序列
【答案】B
【详解】A、杂交瘤细胞制备过程中，可以用灭活的病毒诱导细胞融合，A正确；
B、胚胎移植中，供体雄性个体和供体雌性个体相当于双亲中的父本和母本，受体并没有为其提供遗传物质，B错误；
C、琼脂糖凝胶电泳中的缓冲液中含指示剂，这些指示剂因为含有颜色，并且在电泳时的迁移速度比DNA快，所以可以用于指示不同目的的条带DNA在电泳过程中的位置，防止DNA跑出胶外。凝胶中的DNA分子通过核酸染料染色，可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来，C正确；
D、用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列，只需要知道一段已知目的基因的核苷酸序列，从而根据这段序列合成引物，D正确。
故选B。
30. 下表中是几种限制酶的识别序列，不同酶切割产生的末端可以用DNA连接酶连接的是（ ）
A. EcRⅠ和BamHⅠB. BamHⅠ和KpnⅠ
C. EcRⅠ和MfeⅠD. KpnⅠ和HindⅢ
【答案】C
【分析】限制酶主要从原核生物中分离纯化出来。特异性：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂，形成黏性末端和平末端两种。
【详解】A、EcRⅠ和BamHⅠ切割产生的末端不能碱基互补配对，不可以用DNA连接酶连接，A错误；
B、BamHⅠ和KpnⅠ切割产生的末端不能碱基互补配对，不可以用DNA连接酶连接，B错误；
C、EcRⅠ和MfeⅠ切割产生的末端可以碱基互补配对，故可以用DNA连接酶连接，C正确；
D、KpnⅠ和HindⅢ切割产生的末端不能碱基互补配对，可以用DNA连接酶连接，D错误。
故选C。
31. DNA的粗提取与鉴定实验中，用于溶解DNA和鉴定DNA的物质分别是（ ）
A. 体积分数为95%的冷酒精和二苯胺试剂
B. 2ml·L-1的NaCl溶液和体积分数为95%的冷酒精
C. 2ml·L-1的NaCl溶液和二苯胺试剂
D. 研磨液和体积分数为95%的冷酒精
【答案】C
【分析】DNA的粗提取与鉴定：利用DNA与其他物质在物理和化学性质上的差异，进行DNA粗提取；比如利用DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精；DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能将DNA提取出来。
【详解】DNA的粗提取与鉴定实验中，研磨液有利于充分研磨，DNA 不溶于酒精，能溶解DNA和鉴定DNA的物质分别是2 ml·L-1的NaCl溶液和二苯胺试剂，C项符合题意。
故选C。
32. 以下没有使用植物细胞工程技术的是（ ）
A. 用多倍体育种技术培育无子西瓜
B. 利用白菜和甘蓝体细胞培育白菜-甘蓝
C. 利用转基因技术培育抗软化番茄
D. 培养红豆杉细胞，提取紫杉醇
【答案】A
【分析】植物细胞工程技术包括植物组织培养技术和植物体细胞杂交技术。
【详解】A、植物细胞工程技术包括植物组织培养技术和植物体细胞杂交技术，用多倍体育种技术培育无子西瓜，其原理是染色体畸变，没有使用植物细胞工程技术，A正确；
B、利用白菜和甘蓝体细胞培育白菜-甘蓝，使用了植物体细胞杂交技术，B错误；
C、利用转基因技术培育抗软化番茄，需要用到植物组织培养技术将含有目的基因的细胞再生成完整的植株，C错误；
D、培养红豆杉细胞，提取紫杉醇，需要用到植物组织培养技术对红豆杉细胞扩大培养，从而增加紫杉醇产量，D错误。
故选A。
33. 下列关于基因工程中载体的叙述，正确的是（ ）
A. 载体是基因工程所需的三种工具酶之一
B. 载体质粒中必须有抗生素抗性基因
C. 必须具有自我复制能力
D. 具有一个至多个限制酶切割位点，以便目的基因的插入
【答案】D
【分析】作为基因工程中的载体应具备的条件： ①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组DNA的筛选； ③能在宿主细胞中稳定存在并复制； ④是安全的，对受体细胞无害。
【详解】A、载体是基因工程所需的三种工具之一，但载体不属于酶，A错误；
B、载体质粒中必须有标记基因，但不一定是抗生素抗性基因，B错误；
C、运载体应具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制，C错误；
D、载体具有一个至多个限制酶切割位点，以便插入目的基因，D正确。
故选D。
34. 几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化其水解。将几丁质酶基因转入菊花体内，可增强其抗真菌病的能力。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 将几丁质酶基因插入Ti质粒的T-DNA上构建基因表达载体
B. 可通过显微注射法将农杆菌导入菊花受体细胞
C. 可用PCR等技术检测目的基因是否成功导入
D. 可用真菌接种实验检测转基因菊花对真菌的抗性程度
【答案】B
【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA—分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质：抗原—抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
【详解】A、Ti质粒的T­DNA可以转移到受体细胞中，并且整合到受体细胞染色体的DNA上，根据这一特点，构建表达载体时，应该将目的基因即几丁质酶基因插入到Ti质粒的T－DNA上，A正确；
B、可通过农杆菌转化法将农杆菌导入菊花受体细胞，显微注射法是用于将目的基因导入动物细胞的方法，B错误；
C、在基因工程技术中，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素作标记，以此作为探针，使探针与基因组DNA杂交，故可用PCR技术或DNA分子杂交技术检测目的基因是否成功导入，C正确；
D、几丁质酶基因转入菊花体内，可增强其抗真菌病的能力，故可用真菌接种实验检测转基因菊花对真菌的抗性程度，D正确。
故选B。
35. 目前将目的基因导入动物细胞最常用、最有效的方法是（ ）
A. 显微注射法B. 农杆菌转化法
C. Ca2＋处理D. 花粉管通道法
【答案】A
【分析】将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不同。
（1）将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；
（2）将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；
（3）将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
【详解】A、显微注射法是迄今为止转基因动物中采用最多、最有效的一种将目的基因导入动物细胞的方法，符合题意，A正确；
B、农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞常用的方法之一，不符合题意，B错误；
C、Ca2＋处理微生物的目的是使其处于感受态，感受态细胞容易被转化，进而提高目的基因导入的成功率，不符合题意，C错误；
D、花粉管通道法是将目的基因导入植物细胞常用的方法之一，不符合题意，D错误。
故选A。
36. 下列关于质粒的存在及本质的叙述，错误的是（ ）
A. 一个大肠杆菌可含有多个质粒B. 质粒是一种小型环状分子
C. 质粒存在于拟核区D. 质粒的化学本质是DNA
【答案】C
【分析】质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。
【详解】AC、质粒存在于细菌拟核DNA之外，一个大肠杆菌可含有多个质粒，A正确，C错误；
BD、质粒是一种很小的双链环状DNA分子，其本质是DNA，BD正确。
故选C。
37. 蛛丝蛋白是一种特殊的纤维蛋白，有着超强的抗张强度，被称为“生物钢”。某科研小组欲利用转基因大肠杆菌生产蛛丝蛋白。如图为蛛丝蛋白基因对应的DNA片段结构示意图，其中1～4表示PCR过程中DNA 上引物可能结合的位置。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，限制酶会破坏4个磷酸二酯键
B. PCR 技术需加入1种引物
C. 在PCR 反应缓冲液中加入Mg2+的作用是激活耐高温的DNA 聚合酶
D. 受体细胞一般需先用Ca2+处理为感受态，更利于实现转化
【答案】B
【分析】由图可知，由于DNA聚合酶只能从5′→3′延伸子链，图中的磷酸基团为5'端，羟基为3′端，由于引物要延伸子链，子链和模板链反向平行，因此根据引物的延伸方向可知图中与引物结合的部位是2、3。
【详解】A、若从该DNA片段中直接获取蛛丝蛋白基因，DNA每条链上会破坏2个磷酸二酯键，共会破坏4个磷酸二酯键，A正确；
B、PCR 技术需加入2种引物，B错误；
C、在PCR 反应缓冲液中加入Mg2+的作用是激活耐高温的DNA 聚合酶 ，C正确；
D、受体细胞一般需先用Ca2+处理，使其称为感受态细胞，更容易吸收基因表达载体，更利于实现转化，D正确。
故选B。
38. 下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。下列相关叙述正确的是（ ）
A. ②的构建需要限制酶和DNA聚合酶的参与
B. ③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上
C. ④的染色体上若含抗虫基因，代表抗虫植株培育成功
D. ④→⑤经过了脱分化和再分化的过程
【答案】D
【分析】农杆菌转化法：取Ti质粒和目的基因构建基因表达载体、将基因表达载体转入农杆菌、将农杆菌导入植物细胞、将植物细胞培育为新性状植株。
【详解】A、②是基因表达载体的构建，需要限制酶和DNA连接酶的参与，A错误；
B、③侵染植物细胞后，重组Ti质粒上的T-DNA整合整合到④的染色体上，B错误；
C、④的染色体上若含抗虫基因，如果不能成功转录或翻译，不一定能表现出抗虫性状，不代表抗虫植物培育成给，C错误；
D、④→⑤是植物组织培养，经过了脱分化和再分化，D正确。
故选D。
39. 小鼠正常2细胞期胚胎经过电融合诱导形成四倍体胚胎，四倍体胚胎具有发育缺陷，只能发育形成胎盘等胚体以外的结构。ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘。将ES细胞和四倍体胚胎聚合形成新的重构胚，可发育成完整小鼠个体，称为四倍体补偿技术。下列说法错误的是（ ）
A. 重构胚中的ES细胞具有自我更新能力，但很难分化为胎盘等胚外组织
B. 重构胚发育至桑葚胚或囊胚再移植到生理状态相同的小鼠子宫内才能发育成完整小鼠个体
C. 通过四倍体补偿技术得到的小鼠个体的基因型与供体ES细胞的基因型不同
D. 利用四倍体补偿技术，可将ES细胞经过体外遗传学修饰，得到经过人为修饰的目的小鼠
【答案】C
【分析】胚胎工程是指对动物早期胚胎或配子所进行的多种显微操作和处理技术。包括体外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干细胞培养等技术。胚胎工程的许多技术，实际是在体外条件下，对动物自然受精和早期胚胎发育条件进行的模拟操作。嵌合体-遗传学上用以指不同遗传性状嵌合或混杂表现的个体。
【详解】A、据题干信息“ES细胞能够诱导分化形成所有的细胞类型，但很难分化形成胎盘”，所以重构胚中的ES细胞具有自我更新能力，但很难分化为胎盘等胚外组织，可分化为处胎盘以外的所有细胞类型，A正确；
B、胚胎发育至桑椹（桑葚）胚或囊胚期再移植入与之生理状态相同的小鼠子宫内才可以进一步发育，B正确；
C、四倍体胚胎与ES细胞的嵌合体则会使二者的发育潜能相互补偿，可得到ES小鼠，其中的四倍体胚胎只能发育成胚外组织，所以嵌合体发育形成的ES小鼠基因型与供体ES细胞的基因型相同，C错误；
D、正常小鼠是二倍体，所以两个2细胞期胚胎用灭活病毒等诱导法使细胞融合，可得到一个含四个染色体组的细胞，再经胚胎的早期培养可得到四倍体胚胎，可将ES细胞经过体外遗传学修饰，得到经过人为修饰的目的小鼠，D正确。
故选C。
40. 多项生物技术中都需要经过“筛选”才能达到目的，下列与之相关的叙述中错误的是（ ）
A. 植物体细胞杂交后要进行筛选，选择出杂种细胞后才能进一步培养
B. 目的基因导入受体细胞后需要筛选，以确保目的基因已经成功导入
C. 单克隆抗体制备中第一次筛选，可选择出能产生特定抗体的杂交瘤细胞
D. 利用尿素为唯一氮源的选择培养基，可筛选出能分解尿素的细菌
【答案】C
【详解】A、植物体细胞杂交后要筛选出杂种细胞才能进一步培养，A正确；
B、目的基因导入受体细胞后需要筛选，以确保目的基因已经成功导入，B正确；
C、单克隆抗体制备中第一次筛选，可选择出杂交瘤细胞，C错误；
D、只有能分解尿素的细菌采用在以尿素为唯一氮源的选择培养基上生产，因此用该培养基可筛选出能分解尿素的细菌，D正确。
故选C。
二、非选择题（除标注外，每空1分，共40分）
41. 某种在田间广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用会污染土壤。为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能有效降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度一定，该除草剂的培养基不透明，培养皿中会残留少量无菌空气）。回答下列问题：

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行_____处理。
（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、营养成分的角度要求上述培养基具备的特点是_____。若需要调节培养基pH，应在灭菌_____（填“前”或“后”）进行。
（3）取1ml土壤浸出液加入剩有_____ml的无菌水中，依次等比稀释。
（4）若对活菌进行计数，常用的接种方法为_____。为了测定微生物的数量，一位同学在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液 0.1 mL，培养后菌落数目分别为155、160、176、149，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为_____个。
【答案】（1）稀释 （2）①. 以除草剂为唯一氮源的固体培养基 ②. 前
（3）9 （4）①. 稀释涂布平板法 ②. 1.6×109
【分析】分析题图：该实验是从土壤中筛选分离能降解除草剂的微生物的过程。这样的实验要将土壤稀释处理，以除草剂为唯一的氮源进行处理筛选土壤微生物，以菌落计数法进行统计计数。
【小问1详解】
制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理。
【小问2详解】
要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从物理性质、营养成分的角度要求上述培养基的特点是：固体培养基且以除草剂作唯一氮源；若需要调节培养基pH，应该在各种成分都溶化后且分装前进行。
【小问3详解】
每次需要稀释10倍，取1ml土壤浸出液加入剩有9ml的无菌水中，依次等比稀释。
【小问4详解】
接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法还可用于对微生物进行计数。在4个平板培养基上分别接种稀释倍数为106的土壤样液0.1mL，培养后菌落数分别为155、160、176、149个，则每毫升原土壤样液中上述微生物数量为（155+160+176+149）÷4÷0.1×106=1.6×109个。
42. 我国是世界上啤酒的生产和消费大国。啤酒是以大麦为主要原料经酵母菌发酵制成的，其工业化生产流程如下图所示。
（1）酿酒的原理是_____（用反应式表示）。
（2）发酵过程中，发酵过程分为_____两个过程。
（3）未经过程分装的啤酒称为“生啤”或“鲜啤”，经过程分装并且过滤、消毒、调制后的啤酒为“熟啤”。你认为保质期较长的是_____（填“生啤”或“熟啤”）。
（4）发酵产品分离、提纯时要根据产品类型的不同选择合适的方法。如果发酵产品是酵母菌单细胞蛋白，常常采用_____等方法分离、提纯。
（5）请写出一条发酵工程在食品工业、医药工业和农牧业等领域得到广泛应用的原因_____。（写出1点）
【答案】（1）C6H12O62C2H5OH+2CO2+能量
（2）主发酵、后发酵 （3）熟啤
（4）过滤、沉淀 （5）生产条件温和；原料来源丰富且价格低廉；产物专一；废弃物对环境污染小、易处理
【分析】发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术。发酵工程的内容包括菌种选育、培养基的配置、灭菌、扩大培养、接种、发酵和产品的分离提纯等方面。
【小问1详解】
酿酒的原理是酵母菌在无氧条件下进行无氧呼吸产生酒精，其反应式可表示为C6H12O62C2H5OH+2CO2+能量。
【小问2详解】
啤酒的发酵过程分为主发酵和后发酵两个阶段。酵母菌的繁殖、大部分糖的分解和代谢物的生成都在主发酵阶段完成；主发酵结束后，发酵液还不适合饮用，要在低温、密闭的环境下储存一段时间进行后发酵，这样才能形成澄清、成熟的啤酒。
【小问3详解】
由于熟啤经过消毒等环节，减少微生物的作用，利于长期储存，故其保质期较长。
【小问4详解】
如果发酵产品是酵母菌单细胞蛋白，即菌体本身，则常常采用过滤、沉淀等方法分离、提纯。
【小问5详解】
现代发酵工程生产条件温和，原料来源丰富且价格低廉，产物专一，废弃物对环境污染小、易处理，能够帮助人们制造食品，制造药品，开发能源，净化环境，对人类生产生活起着十分重要的作用。
43. 科学家利用植物体细胞杂交技术成功获得了番茄—马铃薯杂种植株，为了便于杂种细胞的筛选和鉴定，科学家利用红色荧光和绿色荧光分别标记番茄和马铃薯的原生质体膜上的蛋白质，其培育过程如图所示，请据图回答下列问题：
（1）过程①常用的酶是_____。
（2）植物体细胞杂交依据的生物学原理主要有_____。
（3）植物原生质体融合过程常利用化学法_____融合法，在鉴定杂种原生质体时可用显微镜观察，当观察到_____时可判断该原生质体是由番茄和马铃薯融合而成的。
（4）过程④中的培养基常添加的植物激素是_____。
（5）若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞内有n条染色体，则番茄—马铃薯细胞在有丝分裂后期含_____条染色体。
（6）图中的过程③是_____。
【答案】（1）纤维素酶和果胶酶
（2）细胞膜的流动性、植物细胞的全能性
（3）①. 聚乙二醇/PEG 或者高Ca2+ -高PH融合法 ②. 融合的细胞表面既有红色荧光又有绿色荧光
（4）生长素和细胞分裂素
（5）2（m＋n） （6）脱分化
【分析】根据题干信息可知，图示为植物体细胞杂交技术，由此可知图中的①是酶解法获取原生质体，②是诱导原生质体融合，③是脱分化，④是再分化。
【小问1详解】
分析题图可知，过程①是利用酶解法获取原生质体，常用的酶是纤维素酶和果胶酶。
【小问2详解】
植物体细胞杂交的过程主要涉及植物细胞间的融合与将杂种细胞培育成杂种植株，依据的生物学原理主要有细胞膜的流动性、植物细胞的全能性。
【小问3详解】
植物原生质体融合过程常利用化学法聚乙二醇/PEG 或者高Ca2+ -高pH融合法。根据题意，红色荧光和绿色荧光分别标记番茄和马铃薯的原生质体膜上的蛋白质，因此当观察到融合的细胞表面既有红色荧光又有绿色荧光时可判断该原生质体是由番茄和马铃薯融合而成的。
【小问4详解】
图中过程④是再分化，其培养基常添加的植物激素是生长素和细胞分裂素，可影响细胞分裂和细胞分化的方向。
【小问5详解】
植物原生质体融合过程中，融合后形成的细胞内染色体数目等于融合前的两细胞核内染色体数之和，若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞内有n条染色体，则番茄—马铃薯细胞中的染色体数为m＋n，在有丝分裂后期由于着丝粒分裂导致染色体数目加倍，故有丝分裂后期细胞内含2（m＋n）条染色体。
【小问6详解】
图示为植物体细胞杂交技术，过程③是脱分化形成愈伤组织。
44. 随着生物科学技术的发展，动物的生殖方式变得越来越多样化。如图表示胚胎工程技术研究及应用的相关情况，供体甲是良种荷斯坦高产奶牛，供体乙是健康的黄牛。请据图作答：
（1）应用①生殖方式为_____，应用②生殖方式为_____应用③生殖方式为_____。
（2）应用①中获得的良种小牛，遗传物质来源于_____，性别为_____性。
（3）应用③中对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将_____。若要对该阶段的胚胎进行性别鉴定，应取样_____细胞。
（4）应用④中对胚胎干细胞进行不同诱导可分化成不同的组织和器官，实质是_____。
【答案】（1）①. 无性生殖 ②. 有性生殖 ③. 无性生殖
（2）①. 供体甲和供体乙 ②. 雌
（3）①. 内细胞团均等分割 ②. 滋养层
（4）基因选择性表达
【分析】应用①：供体甲提供细胞核，供体乙提供细胞质，经过核移植技术形成重组细胞，并发育形成早期胚胎，再胚胎移植到受体子宫发育成小牛，称为克隆牛；应用②：优良公牛和供体甲配种形成受精卵，并发育成早期胚胎，再胚胎移植到受体子宫发育成小牛，属于有性生殖；应用④：从早期胚胎和原始性腺中获取胚胎干细胞，并进行体外干细胞培养。应用③：采用了胚胎分割技术。
【小问1详解】
应用①是经过核移植技术形成重组细胞，并发育形成早期胚胎，再胚胎移植到受体子宫发育成克隆牛，属于无性生殖；应用②优良公牛和供体甲配种形成受精卵，并发育成早期胚胎，再胚胎移植到受体子宫发育成小牛，属于有性生殖；应用③采用了胚胎分割技术，属于克隆的一种，为无性生殖。
【小问2详解】
应用①产生的小牛，供体甲提供核基因，供体乙提供质基因，性别与甲牛一样为雌性。
【小问3详解】
对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将内细胞团均等分割，以免影响胚胎的恢复和发育。若要对该阶段的胚胎进行性别鉴定，应取滋养层细胞，尽可能减少对胚胎发育的影响。
【小问4详解】
胚胎干细胞具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所以组织和器官甚至个体的潜能。细胞分化的实质是基因的选择性表达。
45. 二苯乙烯苷是我国传统药材何首乌特有的药效成分，具有抗氧化、清除自由基等功效。合成二苯乙烯苷的关键酶是芪合酶（STS），为获得大量的STS，研究人员利用质粒（如图2）将STS基因（如图1）转化到大肠杆菌细胞内进行表达。回答下列问题：
（1）采用PCR技术可以快速、大量获得目的基因，据图1分析，利用该技术扩增STS基因时，应选择的引物是_____，若目的基因扩增3代，则共消耗引物_____个，PCR的原理是_____。
（2）为使STS基因与质粒正确连接，同时选用_____两种限制酶切割质粒。基因工程的核心工作是_____。
（3）启动子是_____识别和结合的部位。很多启动子具有物种特异性，在图2质粒中插入STS基因，其上游启动子应选择_____（填写字母）。
A．何首乌启动子 B．大肠杆菌启动子 C．农杆菌启动子
（4）可将转化后的大肠杆菌接种到含_____的培养基上进行筛选。为了确认目的基因在受体细胞中是否成功表达，从分子水平通常使用_____法进行检测。
【答案】（1）①. 引物2和引物3 ②. 14 ③. DNA半保留复制
（2）①. XhI 和 NdeI ②. 基因表达载体的构建
（3）①. RNA 聚合酶 ②. B
（4）①. 氨苄青霉素 ②. 抗原-抗体杂交
【分析】基因工程的基本操作步骤主要包括四步：①目的基因的获取；②基因表达载体的构建；③将目的基因导入受体细胞；④目的基因的检测与表达。其中，基因表达载体的构建是基因工程的核心。
【小问1详解】
P端是5’端，OH端是3’端，在引物作用下，DNA聚合酶只能从引物3'端开始延伸DNA链，因此利用该技术扩增STS基因时，应选择的引物是引物2和引物3。若目的基因扩增3代，共生成子代DNA分子8个，其中2条母链不需要引物，则共消耗引物2×8-2=14个。PCR技术是一种在体外模拟DNA复制过程，故PCR的原理是DNA半保留复制。
【小问2详解】
据图2可知，质粒中存在三种限制酶切位点，其中限制酶SacⅠ会破坏抗生素标记基因，因此切割质粒应该用XhⅠ和NdeⅠ。基因表达载体的构建是基因工程的核心工作。
【小问3详解】
启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，启动基因的转录。据题意可知，本实验利用质粒将STS基因转化到大肠杆菌细胞内进行表达，因此在图2质粒中插入STS基因，其上游启动子应选择大肠杆菌启动子。
故选B。
【小问4详解】
质粒上含有氨苄青霉素抗性基因，故可将转化后的大肠杆菌接种到含氨苄青霉素的培养基上进行筛选。目的基因的表达产物是蛋白质，为了确认目的基因在受体细胞中是否成功表达，通常使用抗原-抗体杂交从分子水平进行检测。
EcRⅠ
BamHⅠ
KpnⅠ
MfeⅠ
Hind Ⅲ