高中生物一轮复习讲练第40讲动物细胞工程含解析答案

这是一份高中生物一轮复习讲练第40讲动物细胞工程含解析答案，共40页。试卷主要包含了 单克隆抗体的应用，5℃±0等内容，欢迎下载使用。

1.阐明动物细胞培养是从动物体获得相关组织，分散成单个细胞后，在适宜的培养条件下让细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养是动物细胞工程的基础。2.阐明动物细胞核移植一般是将体细胞核移入一个去核的卵母细胞中，并使重组细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的过程。3.阐明动物细胞融合是指通过物理、化学或生物学等手段，使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。4.概述细胞融合技术是单克隆抗体制备的重要技术。5.简述干细胞在生物医学工程中有广泛的应用价值。
考点一 动物细胞培养
1．动物细胞培养的概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
2．动物细胞培养的条件
3．动物细胞培养的过程
概念辨析 细胞贴壁和接触抑制
细胞贴壁是指体外培养的细胞贴附在瓶壁生长的现象；接触抑制是指当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖的现象。
4．干细胞培养及其应用
情境长句·练思维
1．原代培养的细胞核型比较稳定,为什么在动物细胞培养中还是需要传代培养呢? 。
2．动物细胞培养中使用的是合成培养基,这是将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基,但还需要添加血清等一些天然成分的原因是 。
3．科学家认为iPS细胞的应用前景优于胚胎干细胞的原因是 。
4．实验动物细胞培养的基本过程如下图所示，下列叙述正确的是（ ）
A．应选择幼龄动物的皮肤组织进行动物细胞培养
B．甲过程需要用纤维素酶和果胶酶处理
C．丙过程是传代培养，细胞都不能保持二倍体核型
D．乙过程是原代培养，一般不会出现接触抑制现象
5．为研究小鼠皮肤愈合机理,现将小鼠皮肤进行分离培养,过程如图所示,请回答有关问题:

（1）在对小鼠皮肤组织进行培养过程中，过程甲中要对实验小鼠进行 处理，过程乙必须用 处理。
（2）体外培养动物细胞时，通常要加入 等天然成分，为防止细菌感染,培养液中应添加 ，且还要置于含5%CO2气体环境中，CO2的作用是 。
（3）丁过程属于 。在机体内，皮肤干细胞分化成皮肤是机体细胞中 的结果。
归纳比较植物组织培养与动物细胞培养
[易错提醒]
有关植物组织培养与动物细胞培养的三点提醒
（1）植物组织培养过程中存在脱分化和再分化，而动物细胞培养过程中没有脱分化和再分化过程。
（2）植物组织培养可获得新个体，体现了细胞的全能性，而动物细胞培养只能得到细胞，没有体现细胞的全能性。
（3）两种技术手段培养过程中都进行有丝分裂，不涉及减数分裂。
考点二 动物细胞融合技术与单克隆抗体
（一）动物细胞融合技术
1．概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
2．结果：形成杂交细胞，且具有原来两个或多个细胞的遗传信息。
3．诱导方法：PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。
4．意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。
5．应用
（1）是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。
（2）杂交瘤技术为制造单克隆抗体开辟了新途径。
（二）单克隆抗体及其应用
1．单克隆抗体的制备
（1）制备原理
①B淋巴细胞特点：一种B淋巴细胞只分泌种特异性抗体。
②骨髓瘤细胞特点：能在体外大量增殖。
③杂交瘤细胞的特点：既能大量增殖，又能产生足够数量的特定抗体。
（2）制备过程
2. 单克隆抗体的应用
（1）作诊断试剂，在多种疾病的诊断和病原体鉴定中发挥重要作用。
（2）用于运载药物和治疗疾病。
情境长句·练思维
6．19世纪30年代,科学家曾在患肺结核、天花和麻疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。解释这一现象产生的原因 。
7．制备的单克隆抗体在临床上不能直接用于人体,还需要对抗体进行人源化,即对鼠源单克隆抗体进行改造,使其大部分氨基酸序列被人源序列所替代,该过程的意义是 。
8．单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上各具有什么优势? 。
（2020·海南卷，T16）
9．将人细胞与小鼠细胞融合得到的人-鼠杂种细胞进行长期培养，杂种细胞随机丢失一部分人的染色体后，染色体数目会保持稳定。选取三种杂种细胞，对编码人的芳烃羟化酶（AHH）和磷酸甘油酸激酶（PGK）的基因进行染色体定位研究，结果如表（“+”表示有，“-”表示无）。
下列有关叙述错误的是（ ）
A．聚乙二醇可诱导入细胞与小鼠细胞融合
B．培养杂种细胞时，通常需在培养液中添加一定量的抗生素
C．编码AHH的基因在11号染色体上
D．编码PGK的基因在X染色体上
（2020·江苏卷，T28，节选）
10．新型冠状病毒可通过表面的刺突蛋白（S蛋白）与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2受体结合，侵入人体，引起肺炎。图1为病毒侵入后，人体内发生的部分免疫反应示意图。单克隆抗体可阻断病毒的黏附或入侵，故抗体药物的研发已成为治疗新冠肺炎的研究热点之一。图2为筛选、制备抗S蛋白单克隆抗体的示意图。请据图回答下列问题：
(1)图1中人体内抗原递呈细胞吞噬病毒，并将病毒的抗原暴露在细胞表面，被 细胞表面的受体识别后激活该细胞。
(2)B细胞识别入侵的病毒后，在细胞因子作用下，经过细胞的 ，形成 细胞。
(3)为判断疑似患者是否为新型冠状病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原学检查，检测病毒的 ；采集血液样本主要用于血清学检查，检测 。
(4)据图2所示，研制抗S蛋白单克隆抗体，需先注射 免疫小鼠以激活小鼠的免疫细胞，再提取激活的B细胞与骨髓瘤细胞融合，用HAT培养基筛选获得 细胞。
1.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
2.单克隆抗体制备过程中两次筛选分析
考点三 动物体细胞核移植技术和克隆动物
1．动物细胞核移植技术的概念和类型
（1）概念
①供体：动物一个细胞的细胞核；
②受体：去掉细胞核的卵母细胞；
③结果：重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体。
（2）类型
哺乳动物核移植可分为胚胎细胞核移植和细胞核移植。
2．体细胞核移植的过程
3．体细胞核移植技术的应用前景
（1）在畜牧生产中，可以加速家畜遗传改良进程、促进优良畜群繁育。
（2）在医药卫生领域
①生物产品：培育转基因克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白。
②器官移植：转基因克隆动物的细胞、组织或器官可以作为异种移植的供体；以患者作为供体培育的人核移植胚胎干细胞，经过诱导分化能形成相应的细胞、组织或器官，将它们移植给患者时可以避免免疫排斥反应。
③科学研究：研究克隆动物，深入了解胚胎发育及衰老过程；克隆一批遗传背景相同的动物，对比分析致病基因；克隆特定疾病模型动物，为研究该疾病的致病机制和开发相应的药物提供帮助。
（3）在保护濒危物种方面，有望增加濒危物种的存活数量。
4．体细胞核移植技术存在的问题
（1）体细胞核移植技术的成功率非常低。
（2）克隆动物存在健康问题，表现出遗传和生理缺陷等。
情境长句·练思维
11．2017年,中国科学家成功培育出全球首批体细胞克隆猴“中中”和“华华”。克隆猴的成功为阿尔茨海默病、自闭症等脑部疾病以及免疫缺陷、肿瘤等疾病机理的研究、干预、诊治带来了前所未有的光明前景。与以往用普通猴子做实验相比,克隆猴作为实验动物模型的两大优势是 。
（2020·天津卷，T1）
12．在克隆哺乳动物过程中，通常作为核移植受体细胞的是去核的（ ）
A．卵原细胞
B．初级卵母细胞
C．次级卵母细胞
D．卵细胞
（2021·湖南·统考高考真题）
13．M 基因编码的M蛋白在动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验，将外源DNA片段F插入M 基因的特定位置，再通过核移植、胚胎培养和胚胎移植等技术获得M 基因失活的转基因克隆动物A，流程如图所示。回答下列问题：
（1）在构建含有片段F的重组质粒过程中，切割质粒DNA的工具酶是 ，这类酶能将特定部位的两个核苷酸之间的 断开。
（2）在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的是 。
（3）与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率更低，原因是 。从早期胚胎中分离获得的胚胎干细胞，在形态上表现为 （答出两点即可），功能上具有 。
（4）鉴定转基因动物：以免疫小鼠的 淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合，筛选融合杂种细胞，制备M蛋白的单克隆抗体。简要写出利用此抗体确定克隆动物A中M 基因是否失活的实验思路 。
动物体细胞核移植技术和克隆动物
（1）核移植中供体动物、提供卵母细胞的动物、代孕动物和克隆动物之间的关系：克隆动物绝大部分性状与供体动物相同，少数性状（由线粒体DNA控制的性状）与提供卵母细胞的动物相同，与代孕动物的性状无遗传关系。
（2）核移植产生的克隆动物与提供细胞核的亲本可能不同的3个原因：
①克隆动物细胞质基因来源于另一个亲本，与植物组织培养不同（来自一个亲本），即克隆动物遗传物质来自两个亲本。
②在发育过程中可能发生基因突变、染色体变异导致性状改变。
③外界环境条件的影响引起不可遗传的变异。
（3）细胞核移植技术形成重组细胞并发育成一个新个体，体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。
（4）克隆属于无性繁殖，产生新个体的性别、绝大多数性状与供核亲本一致。
（2024·吉林·高考真题）
14．从小鼠胚胎中分离获取胚胎成纤维细胞进行贴壁培养，在传代后的不同时间点检测细胞数目，结果如图。下列叙述正确的是（ ）
A．传代培养时，培养皿需密封防止污染
B．选取①的细胞进行传代培养比②更合理
C．直接用离心法收集细胞进行传代培养
D．细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大有关
（2024·浙江·高考真题）
15．某动物细胞培养过程中，细胞贴壁生长至接触抑制时，需分装培养，实验操作过程如图。
下列叙述错误的是（ ）
A．①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离B．②加培养液的目的是促进细胞增殖
C．③分装时需调整到合适的细胞密度D．整个过程需要在无菌、无毒条件下进行
（2024·湖北·高考真题）
16．糖尿病是危害人类健康的主要疾病之一。恢复功能性胰岛B细胞总量是治疗糖尿病的重要策略。我国学者研究发现，向患有糖尿病的小鼠注射胰高血糖素受体单克隆抗体（mAb），可以促进胰岛A细胞增殖，诱导少数胰岛A细胞向胰岛B细胞转化，促进功能性胰岛B细胞再生。根据上述实验结果，下列叙述错误的是（ ）
A．mAb的制备可能涉及细胞融合技术
B．注射mAb可降低胰腺分泌胰高血糖素的量
C．mAb和胰高血糖素均能与胰高血糖素受体特异性结合
D．胰高血糖素主要通过促进肝糖原分解和非糖物质转化为糖，升高血糖水平
（2024·江西·高考真题）
17．某病毒颗粒表面有一特征性的大分子结构蛋白S（含有多个不同的抗原决定基，每一个抗原决定基能够刺激机体产生一种抗体）。为了建立一种灵敏、高效检测S蛋白的方法，研究人员采用杂交瘤技术制备了抗-S单克隆抗体（如图）。下列说法正确的是（ ）
A．利用胶原蛋白酶处理，可分散贴壁生长的骨髓瘤细胞
B．制备的单克隆抗体A和单克隆抗体B是相同的单克隆抗体
C．用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，但不能冻存
D．单克隆抗体A和单克隆抗体B都能够特异性识别S蛋白
（2024·全国·高考真题）
18．某种病原体的蛋白质A可被吞噬细胞摄入和处理，诱导特异性免疫。回答下列问题。
(1)病原体感染诱导产生浆细胞的特异性免疫方式属于 。
(2)溶酶体中的蛋白酶可将蛋白质A的一条肽链水解成多个片段，蛋白酶切断的化学键是 。
(3)不采用荧光素标记蛋白质A，设计实验验证蛋白质A的片段可出现在吞噬细胞的溶酶体中，简要写出实验思路和预期结果 。
（2023·北京·统考高考真题）
19．甲状旁腺激素（PTH）水平是人类多种疾病的重要诊断指标。研究者制备单克隆抗体用于快速检测PTH，有关制备过程的叙述不正确的是（ ）
A．需要使用动物细胞培养技术
B．需要制备用PTH免疫的小鼠
C．利用抗原-抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞
D．筛选能分泌多种抗体的单个杂交瘤细胞
（2023·海南·高考真题）
20．某团队通过多代细胞培养，将小鼠胚胎干细胞的Y染色体去除，获得XO胚胎干细胞，再经过一系列处理，使之转变为有功能的卵母细胞。下列有关叙述错误的是（ ）
A．营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞不会发生接触抑制
B．获得XO胚胎干细胞的过程发生了染色体数目变异
C．XO胚胎干细胞转变为有功能的卵母细胞的过程发生了细胞分化
D．若某濒危哺乳动物仅存雄性个体，可用该法获得有功能的卵母细胞用于繁育
（2022·山东，15）
21．如图所示，将由2种不同的抗原分别制备的单克隆抗体分子，在体外解偶联后重新偶联可制备双特异性抗体，简称双抗。下列说法错误的是（ ）
A．双抗可同时与2种抗原结合
B．利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞
C．筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原
D．同时注射2种抗原可刺激B细胞分化为产双抗的浆细胞
（2022·江苏，19）
22．下图表示利用细胞融合技术进行基因定位的过程，在人-鼠杂种细胞中人的染色体会以随机方式丢失，通过分析基因产物进行基因定位。现检测细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中人的4种酶活性，只有Ⅱ具有芳烃羟化酶活性，只有Ⅲ具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脱氢酶活性。下列相关叙述正确的有（ ）
A．加入灭活仙台病毒的作用是促进细胞融合
B．细胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分别为人-人、人-鼠、鼠-鼠融合细胞
C．芳烃羟化酶基因位于2号染色体上，乳酸脱氢酶基因位于11号染色上
D．胸苷激酶基因位于17号染色体上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色体上
（2020·全国Ⅰ，38）
23．为研制抗病毒A的单克隆抗体，某同学以小鼠甲为实验材料设计了以下实验流程。
回答下列问题：
（1）上述实验前必须给小鼠甲注射病毒A，该处理的目的是 。
（2）写出以小鼠甲的脾脏为材料制备单细胞悬液的主要实验步骤： 。
（3）为了得到能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞，需要进行筛选。图中筛选1所采用的培养基属于 ，使用该培养基进行细胞培养的结果是 。图中筛选2含多次筛选，筛选所依据的基本原理是 。
（4）若要使能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞大量增殖，可采用的方法有 （答出2点即可）。
一、选择题：每小题给出的四个选项中只有一个符合题目要求。
24．人造皮肤的构建需要使用动物细胞培养技术，下列相关叙述正确的是（ ）
A．进行动物细胞培养时常用胃蛋白酶来分散细胞
B．只要进行好消毒，动物细胞培养可以在恒温培养箱进行
C．贴壁细胞在分裂生长到出现接触抑制后会分化为不同类型
D．培养动物细胞所需的基本条件与细胞所处的内环境理化条件接近
（2021·辽宁1月适应性测试，14）
25．下列有关于细胞的叙述，错误的是（ ）
A．干细胞是具有分裂和分化能力的细胞
B．造血干细胞可定向诱导分化成机体所有种类的细胞
C．胚胎干细胞在饲养层细胞上培养能够维持不分化的状态
D．移植胚胎干细胞可使退化的组织得以修复并恢复正常功能
26．在利用细胞融合技术生产单克隆抗体的过程中，不需要考虑（ ）
A．多次注射特定抗原蛋白，对实验小鼠进行免疫
B．淋巴B细胞和骨髓瘤细胞之间的免疫排斥
C．向细胞培养液中加入促融剂的种类和处理时间
D．选择特定试剂筛选能产生特定抗体的杂交瘤细胞
（2023·江苏连云港高三模拟）
27．新冠变异毒株“奥密克戎”表面的刺突蛋白（S蛋白）存在30多处改变，使其与细胞膜上的受体结合更紧密，逃避抗体结合的能力增强。下列说法不正确的是（ ）
A．新冠病毒变异的根本原因是控制S蛋白合成的基因发生了突变
B．生产灭活疫苗需先培养病毒宿主细胞
C．毒株“奥密克戎”抗原检测利用了抗原－抗体特异性结合的原理，需要设计多种引物
D．大规模人群免疫接种，群体免疫力增强，新冠病毒无症状感染者比例也会上升
28．下图为肾脏上皮细胞培养过程示意图，下列叙述不正确的是（ ）
A．甲→乙过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理
B．丙过程指细胞在添加血清的合成培养基中进行原代培养
C．丙和丁过程均会出现细胞贴壁和接触抑制现象
D．丁过程是传代培养的细胞，该过程体现了动物细胞的全能性
29．下列有关动物细胞工程操作的叙述，正确的是（ ）
A．动物细胞培养是动物细胞工程的基础，在进行细胞培养时培养基中除了加入细胞所需的各种营养物质外，还需要加入琼脂
B．单克隆抗体制备过程中，第一次筛选的目的是获得足够数量的能产生所需抗体的杂交瘤细胞
C．干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等
D．体细胞核移植过程中只能通过显微操作方法去除细胞核
（2023·辽宁沈阳高三质量监测）
30．大熊猫是我国的国宝，尽管采取了许多保护措施，但由于其繁殖能力及幼仔成活率均较低，数量仍然非常少。有科学家尝试采用体细胞核移植技术来克隆大熊猫。下列相关叙述错误的是（ ）
A．在体细胞核移植过程中，普遍使用的去核方法是显微操作法
B．用体细胞核移植技术克隆大熊猫，体现了动物细胞具有全能性
C．由于体细胞分化程度高，因而体细胞核移植难度明显高于胚胎细胞核移植
D．在保护濒危物种方面，体细胞核移植技术有望增加濒危物种的存活数量
（2023·山东烟台高三期末）
31．治疗性克隆有望最终解决供体器官的短缺和器官移植出现的排异反应。如图表示治疗性克隆的过程，下列有关叙述不正确的是（ ）
A．上述过程利用了动物细胞核移植、动物细胞培养等技术
B．上述过程充分说明动物细胞具有全能性
C．①过程的完成离不开胚胎干细胞的增殖和分化潜能
D．①、②过程都发生DNA复制和蛋白质合成
二、选择题：每小题给出的四个选项中有一个或多个符合题目要求。
32．下列关于动物细胞培养的叙述，错误的是（ ）
A．动物细胞培养所需的营养物质与植物细胞培养不同
B．传代培养时需要用胃蛋白酶处理贴壁生长的细胞
C．癌细胞在培养瓶中培养会出现接触抑制现象
D．动物细胞培养时需要添加抗生素以防止杂菌污染
（2023·湖南岳阳高三期末）
33．科学家将Oct3/4、Sx2、c－Myc和Klf4基因通过逆转录病毒转入小鼠成纤维细胞中，然后在培养ES细胞的培养基上培养这些细胞。2～3周后，这些细胞显示出ES细胞的形态、具有活跃的分裂能力，它们就是iPS细胞。这一研究成果有望为人类某些疾病的治疗带来福音。下列有关该实验的分析，不正确的是（ ）
A．实验中逆转录病毒作为外源基因的载体，需经显微注射才能转入小鼠成纤维细胞
B．要排除iPS细胞的产生不是培养基作用的结果，需要将小鼠成纤维细胞直接在培养基上培养作为对照
C．若将病人的皮肤成纤维细胞诱导成iPS细胞再使其转化为需要的细胞移植也会发生免疫排斥反应
D．由于iPS细胞具有活跃的分裂能力，用它进行治疗时可能存在安全风险
34．研究人员将猴胚胎细胞（a）中的细胞核取出，移植入一雌猴的去核卵母细胞（b）中，得到重组细胞（c），经培养获得胚胎并移植到另一雌猴（d）体内进一步发育，获得克隆猴（e）。下列叙述正确的是
A．e的细胞内的全部基因都来自a，b不提供基因
B．c经一系列增殖和分化形成e的过程中，细胞核起控制作用
C．d为胚胎发育提供遗传物质和其他适宜条件
D．e的形成过程中没经过受精作用，其体细胞中无同源染色体
（2023·辽宁抚顺高三模拟）
35．治疗性克隆的一般流程是把患者（供体）体细胞移植到去核卵母细胞中形成重构胚，再把重构胚体外培养到囊胚，然后从中分离出ES细胞，并诱导ES细胞定向分化为所需的特定细胞类型用于移植。下列说法正确的是（ ）
A．供体细胞注入去核卵母细胞后还需诱导融合
B．ES细胞在核遗传上和供体细胞相同
C．治疗性克隆是治疗遗传病的根本措施
D．治疗性克隆可解决器官移植时的免疫排斥问题
三、非选择题
（2023·河北石家庄高三模拟）
36．下图为筛选、制备单克隆抗体的示意图，①~⑤代表相关过程，a~g代表相关细胞。请回答下列问题：
(1)由图可看出，单克隆抗体制备过程运用的动物细胞工程技术有 （写出2个）。过程①是给小鼠注射S抗原蛋白，其目的是 ，过程②的促融方法有 （写出一种生物促融的方法）。
(2)图中过程③④为两次筛选过程，过程③是指把c细胞群稀释放在 培养基的多孔培养皿中培养，只有 能够存活且增殖，因此，细胞集落为单个存活细胞的克隆。过程④是用 方法经多次筛选得到能产生所需抗体的杂交瘤细胞群。
(3)已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。小鼠的淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂。小鼠的骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂。若将小鼠的这两种细胞在含氨基蝶呤的试管中混合后促融，则试管中细胞的种类数和能增殖的细胞种类数分别是（不考虑三个及以上细胞融合） （填“3和1”、“5和3”、“5和1”或“3和3”）。
37．中国科学家成功培育出全球首例体细胞克隆猴“中中”和“华华”。体细胞克隆猴的培育过程如图所示。请分析回答问题：

(1)据图可知，克隆猴培育过程用到了 、 和胚胎移植等技术。体细胞核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植技术，原因是 。
(2)上述实验核移植的受体一般选用A猴处于减数分裂Ⅱ中期的 ，原因是该细胞体积大、易操作、营养物质丰富且含有促进 表达的物质。
(3)目前核移植技术中普遍使用的去核方法是 。
(4)克隆猴的成功培育为阿尔茨海默病、自闭症等脑疾病以及免疫缺陷病、肿瘤等疾病的机理研究、干预、诊治带来前所未有的光明前景。与以往用普通猴子做实验相比，克隆猴作为实验动物模型的优势是 （答出一点即可）。
（2023·湖北·统考高考真题）
38．某病毒对动物养殖业危害十分严重。我国学者拟以该病毒外壳蛋白A为抗原来制备单克隆抗体，以期快速检测该病毒，其主要技术路线如图所示。

回答下列问题：
(1)与小鼠骨髓瘤细胞融合前，已免疫的脾细胞（含浆细胞） （填“需要”或“不需要”）通过原代培养扩大细胞数量；添加脂溶性物质PEG可促进细胞融合，该过程中PEG对细胞膜的作用是 。
(2)在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基（如HAT培养基），该培养基对 和 生长具有抑制作用。
(3)单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，其目的是 。
(4)构建重组质粒需要使用DNA连接酶。下列属于DNA连接酶底物的是 。

（2024•湖北一模）
39．BBWV（蚕豆萎蔫病毒）会侵染蚕豆、辣椒等多种作物，导致作物产量和品质的下降，经筛选克隆，获得抗BBWV单克隆抗体
(1)小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合形成 细胞，获得该细胞常用的培养基从功能上划分属于 培养基。
(2)科学家制备出2株抗BBWV单克隆抗体（简称单抗A和B），再分别从感染BBWV的蚕豆、辣椒等多种作物中分离出BBWV，发现同一株单抗对不同BBWV分离物的特异性表现出差异，直接原因是 。
(3)BBWV的外壳蛋白上有多个与抗体结合的位点。为研究单抗A、B与BBWV结合的位点是否相同，按如图所示简要流程进行实验操作。

将图中应使用的抗体填入表中①②③处（填“A”、“B”或“无关抗体”），完善实验方案，并写出支持两株单抗与BBWV结合位点相同假说的预期结果。
预期结果： 。
种类
胚胎干细胞
成体干细胞
诱导多能干细胞
来源
早期胚胎
骨髓、脐带血和外周血
体细胞（如成纤维细胞等）
特点
能分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的组织和器官甚至个体
分化成特定的细胞或组织
能诱导分化成类似胚胎干细胞的细胞
应用
分化成心肌细胞、神经元和造血干细胞等
造血干细胞用于治疗白血病；神经干细胞用于治疗帕金森病、阿尔茨海默病等
治疗小鼠的镰状细胞贫血、阿尔茨海默病、心血管疾病等
比较项目
植物组织培养
动物细胞培养
理论基础
植物细胞全能性
细胞增殖
培养
基
类型
固体或半固体培养基
液体培养基
成分
水、矿质元素、维生素、蔗糖、氨基酸、琼脂
葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子、动物血清等
取材
植物幼嫩部位或花药等
动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织
关键环节
细胞的脱分化和再分化
细胞增殖和癌变
结果
新的组织或植株个体，可以体现全能性
新的细胞系或细胞株，不形成个体，不体现全能性
应用
①植株快速繁殖②脱毒植株的培育
③制备人工种子
④生产药物、杀虫剂等
⑤转基因植物的培育
①蛋白质生物制品的生产②皮肤移植材料的培育
③检测有毒物质
④生理、病理、药理学研究
相同点
①两技术手段培养过程中细胞都进行有丝分裂，都是无性繁殖，都可称克隆，都不涉及减数分裂②均为无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件
杂种细胞
人的染色体
AHH
PGK
2号
11号
17号
X
甲
－
＋
－
＋
－
＋
乙
＋
＋
－
－
＋
－
丙
－
＋
＋
＋
－
＋
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性、细胞的全能性
细胞膜的流动性、细胞增殖
融合前处理
除去细胞壁
使细胞分散开
相关酶
纤维素酶和果胶酶
胰蛋白酶或胶原蛋白酶
诱导方法
物理法：离心、电融合法；化学法：聚乙二醇融合法、高Ca2＋－高pH融合法等
除电融合法和PEG融合法，还可以用灭活的病毒诱导
结果
杂种植株
杂交细胞
应用
培育植物新品种
主要用于制备单克隆抗体
意义
突破远缘杂交不亲和的障碍，打破了生殖隔离，扩展了杂交的亲本组合
相同点
原生质体融合原理相同，原生质体融合的方法相似
项目
第一次筛选
第二次筛选
筛选原因
诱导融合后会得到多种杂交细胞，另外还有未融合的细胞
由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经选择性培养获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞
筛选方法
用特定的选择培养基筛选：未融合的细胞和同种细胞融合后形成的细胞（“BB”细胞、“瘤瘤”细胞）都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞（“B瘤”细胞）才能生长
用多孔培养皿培养，在每个孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始克隆化培养和抗体检测，经多次筛选得到能产生特异性抗体的细胞群
筛选目的
得到杂交瘤细胞
得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
未标记抗体
荧光标记抗体
实验组
①
B
对照组1
②
③
对照组2
B
B
《第40讲动物细胞工程》参考答案：
1．无论是悬浮培养还是贴壁培养,后期都会面临细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏等问题,细胞增殖速度开始减慢,尤其是贴壁培养的细胞还有接触抑制的现象,所以在需求大批量细胞产品的工程中,需要分瓶进行传代培养
【解析】略
2．整个动物细胞培养的环境是模拟动物细胞生活的内环境,而血清中含有多种维持细胞正常代谢和生长的物质,如糖类、氨基酸、未知的促生长因子等
【解析】略
3．ES细胞必须从胚胎中获取,这涉及伦理问题,因而限制了其在医学上的应用。iPS细胞的诱导过程无须破坏胚胎,而且可以来自病人自身的体细胞,将它移植回病人体内后,理论上可以避免免疫排斥反应
【解析】略
4．A
【分析】1、动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
2、细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁．细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
【详解】A、应选择幼龄动物的皮肤组织进行动物细胞培养，细胞分裂能力较强，A正确；
B、甲过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，B错误；
C、丙过程是传代培养，传代培养10代以内的细胞一般能保持二倍体核型，C错误；
D、原代培养也会出现接触抑制现象，D错误。
故选A。
【点睛】
5． 消毒 胰蛋白酶 血清、血浆 抗生素 维持培养液的pH 传代培养 基因选择性表达
【分析】据图分析，甲表示取实验小鼠的组织细胞，甲过程需要对实验小鼠进行消毒处理，乙过程表示对皮肤组织用用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶处理分散成单个细胞，丙过程表示原代培养，形成的细胞株遗传物质没有发生改变，具有正常的二倍体核型，丁表示传代培养。
【详解】（1）离体动物细胞培养需要无菌、无毒的环境，因此在对小鼠皮肤组织进行培养过程中，过程甲中要对实验小鼠进行消毒处理，过程乙必须用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶处理，使之分散成单个细胞。
（2）由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚，所以体外培养动物细胞过程中，在使用合成培养基时，通常要加入血清、血浆等天然成分；为防止细菌感染，培养液中应添加抗生素，且还要置于含5%CO2气体环境中，CO2的作用是维持培养液pH的相对稳定。
（3）丁过程属于传代培养；细胞分化是基因选择性表达的结果。
【点睛】本题考查动物细胞培养，意在考查学生的识图和理解能力，难度不大，解题的关键是理解过程，即取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。
6．病毒诱导了患者病理组织中多个体细胞的融合
【解析】略
7．鼠源单克隆抗体对人而言可能是异种抗原,经人源化后能保留抗体的特异性,降低其异源性
【解析】略
8．单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与特定的抗原反应,因此检测的特异性和灵敏程度大大提高;生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用,有利于控制产品的质量和标准化生产诊断试剂盒。ADC能够协同发挥抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿瘤细胞的杀伤作用,因此它在临床上具有靶点清楚,毒副作用小等优点
【解析】略
9．C
【分析】1、动物细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。动物细胞融合的方法：物理法（离心、振动、电刺激等）、化学法（聚乙二醇（PEG））以及生物法（灭活病毒等）。动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性。
2、动物细胞培养最好采用幼龄动物的组织或器官，因为幼龄动物生命力旺盛，细胞分裂能力强，易于培养。剪碎动物组织块后，还要用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬液，再进行细胞培养（原代培养和传代培养）。
【详解】A、聚乙二醇是诱导动物细胞融合的常用化学试剂，A正确；
B、培养杂种细胞时，通常需在培养液中添加一定量的抗生素以防止杂菌污染，B正确；
CD、由表中信息可知，编码AHH的基因在2号染色体上，编码PGK的基因在X染色体上，C错误，D正确。
故选C。
10．(1)辅助性T
(2) 增殖、分化 浆细胞和记忆B
(3) 核酸 抗新型冠状病毒抗体
(4) 刺突蛋白（或S蛋白） 杂交瘤
【分析】体液免疫包括三个阶段：除少数抗原可以直接刺激B细胞外，大多数抗原被吞噬细胞摄取和处理，并暴露出其抗原决定簇；吞噬细胞将抗原呈递给辅助性T细胞，再由辅助性T细胞呈递给B细胞；B细胞接受抗原刺激后，开始进行一系列的增殖、分化，形成记忆细胞和浆细胞；浆细胞分泌抗体与相应的抗原特异性结合，发挥免疫效应。单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取B淋巴细胞，将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞。
【详解】（1）据题图1可知，人体内抗原递呈细胞吞噬新冠病毒，并将新冠病毒的抗原暴露，呈递给辅助性T细胞，被辅助性T细胞表面的受体识别后激活辅助性T细胞。
（2）激活的辅助性T细胞释放细胞因子，并将抗原呈递给B细胞，B细胞识别入侵的病毒后，迅速增殖、分化成浆细胞和记忆B细胞。
（3）临床上为判断疑似患者是否为新型冠状病毒感染者，采集鼻咽拭子主要用于病原学检查，检测疑似患者的呼吸道是否有新冠病毒的核酸，采集血液样本主要用于血清学检查，检测血清中是否产生抗新型冠状病毒的抗体。
（4）据题中图2所示，结合单克隆抗体制备方法，要研制抗刺突蛋白单克隆抗体，需先注射新冠病毒的刺突蛋白（或S蛋白），以激活小鼠的免疫细胞，再提取激活的B细胞与骨髓瘤细胞融合，获得融合的、未融合的细胞，用HAT筛选培养基培养，未融合的B细胞不能长期生存而死亡，未融合的骨髓瘤细胞不能合成DNA而死亡，只有杂交瘤细胞能成活。
11．一是体细胞克隆猴遗传背景相同,避免个体间差异对实验结果的干扰、动物细胞培养等,大大减少了实验动物的使用数量;二是体细胞克隆猴制备时间短
【解析】略
12．C
【分析】体细胞核移植过程：
【详解】在克隆哺乳动物过程中，通常选择减数第二次分裂中期的去核卵母细胞作为受体细胞，即次级卵母细胞。
故选C。
13． 限制性核酸内切酶（限制酶） 磷酸二酯键 清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害，同时给细胞提供足够的营养 动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难 细胞体积小，细胞核大，核仁明显（任选两点作答） 发育的全能性 B 取动物A和克隆动物A的肝组织细胞，分别提取蛋白质进行抗原—抗体杂交
【分析】1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术，个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
2、核移植：
（1）概念：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物；
（2）原理：动物细胞核的全能性；
（3）动物细胞核移植可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。原因：动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难。
【详解】（1）基因工程中切割DNA的工具酶是限制性核酸内切酶（限制酶），故在构建含有片段F的重组质粒过程中，切割质粒DNA的工具酶是限制性核酸内切酶（限制酶）。限制性内切核酸内切酶是作用于其所识别序列中两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键。不同的限制酶可以获得不同的末端，主要分为黏性末端和平末端。
（2）在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时，需要定期更换培养液，目的是清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。
（3）由于动物胚胎细胞分化程度低，恢复其全能性相对容易，动物体细胞分化程度高，恢复其全能性十分困难，故与胚胎细胞核移植技术相比，体细胞核移植技术的成功率低。胚胎干细胞在形态上表现为细胞体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。
（4）先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，制备M蛋白的单克隆抗体；若要利用此抗体确定克隆动物A中M基因是否失活，如果M基因已经失活，则克隆动物A中无法产生M蛋白的单克隆抗体，则可利用抗原—抗体杂交技术进行检测。故实验思路为：取动物A和克隆动物A的肝组织细胞，分别提取蛋白质进行抗原—抗体杂交。
【点睛】本题结合图示考查基因工程、核移植、胚胎移植、单克隆抗体的相关知识，涉及知识点较多，但难度不大，要求考生掌握基础知识，属于考纲中识记与理解层次。
14．D
【分析】动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。动物细胞培养需要的条件有：①无菌、无毒的环境；②营养；③温度和pH；④气体环境：95%空气+5%CO2；动物细胞培养技术主要应用在：制备病毒疫苗、制备单克隆抗体、检测有毒物质等。
【详解】A、传代培养时培养器皿容许内部气体和培养箱中的气体进行交换，A错误；
B、选取②的细胞进行传代培养比①更合理，②时细胞增长开始变得缓慢，B错误；
C、对于贴壁生长的细胞进行传代培养时，先需要用胰蛋白酶等处理，使之分散为单个细胞，然后再用离心法收集，C错误；
D、细胞增长进入平台期可能与细胞密度过大、细胞间产生接触抑制有关，D正确。
故选D。
15．B
【分析】动物细胞培养条件：（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物。（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。（3）温度和PH：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的PH）。
【详解】A、①加消化液的目的是使细胞与瓶壁分离，A正确；
B、②加培养液，多次加培养液先洗去残留的消化酶，然后终止消化液的消化作用，并对细胞加以稀释，B错误；
C、③分装时需调整到合适的细胞密度，因为若密度过大细胞直接仍存在接触抑制，C正确；
D、动物细胞培养需要无菌无毒环境，因此整个过程需要在无菌、无毒条件下进行，D正确。
故选B。
16．B
【分析】血糖调节是神经调节和体液调节共同作用的结果。胰岛素是唯一降血糖的激素，胰高血糖素和肾上腺素是升血糖的激素。血糖平衡调节：由胰岛A细胞分泌胰高血糖素（分布在胰岛外围）提高血糖浓度，促进血糖来源；由胰岛B细胞分泌胰岛素（分布在胰岛内）降低血糖浓度，促进血糖去路，减少血糖来源。
【详解】A、单克隆抗体的制备涉及细胞融合技术和动物细胞培养技术，mAb属于单克隆抗体，其制备可能涉及细胞融合技术，A正确；
B、单克隆抗体（mAb），可以促进胰岛A细胞增殖；而胰岛A细胞可分泌胰高血糖素，可见注射mAb可提高胰岛A细胞分泌胰高血糖素的量，B错误；
C、题干信息，mAb是胰高血糖素受体单克隆抗体，可见Ab和胰高血糖素均能与胰高血糖素受体特异性结合，C正确；
D、胰高血糖素主要作用于肝，促进肝糖原分解成葡萄糖进入血液，促进非糖物质转变成糖，使血糖浓度回升到正常水平，D正确。
故选B。
17．AD
【分析】单克隆抗体的制备：用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞，将多种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合，利用特定的选择培养基进行筛选：在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。对上述经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测，经多次筛选，就可获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。将抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养，或注射到小鼠腹腔内增殖。从细胞培养液或小鼠腹水中获取大量的单克隆抗体。
【详解】A、胶原蛋白酶可以催化分解细胞外的胶原蛋白，因此利用胶原蛋白酶处理，可分散贴壁生长的骨髓瘤细胞，A正确；
B、由于蛋白S含有多个不同的抗原决定基，每一个抗原决定基能够刺激机体产生一种抗体，单克隆抗体A和单克隆抗体B来自不同的杂交瘤细胞，因此制备的单克隆抗体A和单克隆抗体B不是相同的单克隆抗体，B错误；
C、用于生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可传代培养，也可以冷冻保存，C错误；
D、单克隆抗体A和单克隆抗体B都来自筛选出的杂交瘤细胞，因此都能够特异性识别S蛋白上的抗原决定簇，D正确。
故选AD。
18．(1)体液免疫
(2)肽键
(3)实验思路：以蛋白质A的片段为抗原，制备单克隆抗体，利用差速离心法将吞噬细胞中的溶酶体分离，并提取溶酶体中的蛋白质，利用抗原抗体杂交技术进行检测
预期结果：出现杂交带，表明蛋白质A的片段可出现在吞噬细胞的溶酶体中
【分析】非特异性免疫（先天性免疫）：第一道防线：皮肤、黏膜等；第二道防线：体液中的杀菌物质和吞噬细胞；特异性免疫（获得性免疫）第三道防线：由免疫器官和免疫细胞借助血液循环和淋巴循环组成。
【详解】（1）特异性免疫包括体液免疫和细胞免疫。病原体感染诱导产生浆细胞的特异性免疫方式属于体液免疫。
（2）蛋白酶可将蛋白质A的一条肽链水解成多个片段，因此蛋白酶切断的是肽键。
（3）为验证蛋白质A的片段可出现在吞噬细胞的溶酶体中，可以蛋白质A的片段为抗原，制备单克隆抗体，利用差速离心法将吞噬细胞中的溶酶体分离，并提取溶酶体中的蛋白质，利用抗原抗体杂交技术进行检测，若出现杂交带，则表明蛋白质A的片段可出现在吞噬细胞的溶酶体中。
19．D
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞，诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】A、单克隆抗体制备过程中需要对骨髓瘤细胞等进行培养，即需要使用动物细胞培养技术，A正确；
B、该操作的目的是制备单克隆抗体用于快速检测PTH，故应用PTH刺激小鼠，使其产生相应的B细胞，B正确；
C、抗原与抗体的结合具有特异性，可利用抗原-抗体结合的原理筛选杂交瘤细胞，C正确；
D、由于一种B细胞经分化形成浆细胞后通常只能产生一种抗体，故筛选出的单个杂交瘤细胞无法分泌多种抗体，D错误。
故选D。
20．A
【分析】动物细胞培养需要满足以下条件：
（1）充足的营养供给—微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。
（2）适宜的温度：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。
（3）无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
（4）气体环境：95%空气+5%CO2．O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
【详解】A、营养供应充足时，传代培养的胚胎干细胞也会发生接触抑制，A错误；
B、XO胚胎干细胞中丢失了Y染色体，因而该细胞的获得过程发生了染色体数目变异，B正确；
C、XO胚胎干细胞转变为有功能的卵母细胞的过程发生了细胞分化，即细胞的功能发生了特化，因而发生了细胞分化，C正确；
D、若某濒危哺乳动物仅存雄性个体，可用该法，即获得有功能的卵母细胞，进而用于繁育，实现濒危物种的保护，D正确。
故选A。
21．D
【分析】单克隆抗体的制备过程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】A、根据抗原和抗体发生特异性结合的原理推测，双抗可同时与2种抗原结合，A正确；
B、 根据抗原与抗体能够发生特异性结合的特性，利用双抗可以将蛋白类药物运送至靶细胞，从而使药物发挥相应的作用，B正确；
C、在两种不同的抗原刺激下，B细胞增殖、分化产生不同的浆细胞分泌形成两种抗体，因此，筛选双抗时需使用制备单克隆抗体时所使用的2种抗原来进行抗原-抗体检测，从而实现对双抗的筛选，C正确；
D、 同时注射2种抗原可刺激B细胞分化形成不同的浆细胞，而不是分化成产双抗的浆细胞，D错误。
故选D。
22．ACD
【分析】分析题干信息：Ⅰ保留X、11号染色体，Ⅱ保留2、11号染色体，具有芳烃羟化酶活性，Ⅲ，保留X、11、17号染色体具有胸苷激酶活性，Ⅰ、Ⅲ都有磷酸甘油酸激酶活性，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均有乳酸脱氢酶活性，所以支配芳烃羟化酶合成的基因位于2号染色体上，支配胸苷激酶合成的基因位于17号染色体上；支配磷酸甘油酸激合成的基因位于X号染色体上；支配乳酸脱氢酶合成的基因位于11号染色体上。
【详解】A、动物细胞融合过程中，可以利用灭活的仙台病毒或聚乙二醇作诱导剂促进细胞融合，A正确；
B、细胞Ⅲ中保留了人的X、11、17号染色体，故不会是鼠-鼠融合细胞，B错误；
CD、根据分析可知，芳烃羟化酶基因位于2号染色体上，乳酸脱氢酶基因位于11号染色上， 胸苷激酶基因位于17号染色体上，磷酸甘油酸激酶基因位于X染色体上，CD正确。
故选ACD。
23． 诱导小鼠甲产生能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞 取小鼠甲脾脏剪碎，用胰蛋白酶处理使其分散成单个细胞，加入培养液制成单细胞悬液 选择培养基 只有杂交瘤细胞能够生存 抗原与抗体的反应具有特异性 将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内增殖；将杂交瘤细胞在体外培养
【分析】由图可知，筛选1指用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，筛选2指进行克隆化培养和专一抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
【详解】（1）实验前给小鼠甲注射病毒A，是为了诱导小鼠甲产生能够分泌抗病毒A抗体的B淋巴细胞。
（2）取小鼠的脾脏，剪碎组织，用胰蛋白酶处理获得单个细胞，加入培养液可以制成单细胞悬液。
（3）图中筛选1需要用到选择培养基，只有杂交瘤细胞可以存活。筛选2是为了获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞，该过程要用到抗原抗体杂交，故筛选所依据的原理是抗原-抗体反应具有特异性。
（4）获得能产生抗病毒A的单克隆抗体的杂交瘤细胞后，可以在体外培养液中进行培养，或在小鼠的腹腔中进行培养，使杂交瘤细胞大量增殖。
【点睛】制备单克隆抗体的过程中，需要用到动物细胞融合和动物细胞培养，需要用到两次筛选，第一次筛选的目的是获得杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是获得能产生特定抗体的杂交瘤细胞。
24．D
【分析】动物细胞培养的过程：取动物组织块→剪碎组织→用胰蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养液中（原代培养）→放入二氧化碳培养箱培养→贴满瓶壁的细胞用酶分散为单个细胞，制成细胞悬液→转入培养液（传代培养）→放入二氧化碳培养箱培养。
【详解】A、胃蛋白酶的最适pH为强酸性，进行动物细胞培养时常用胰蛋白酶来分散细胞，不能用胃蛋白酶，A错误；
B、动物细胞培养要保证无菌、无毒的环境，而消毒只能部分杀死微生物，B错误；
C、贴壁细胞在分裂生长到出现接触抑制后既不能分裂，也不能分化，C错误；
D、动物细胞培养所需要的条件应类似于细胞所处内环境的理化条件，D正确。
故选D。
25．B
【分析】1、干细胞(Stem Cell)是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称之为“万用细胞”。干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。它包括胚胎干细胞和成体干细胞。
2、胚胎干细胞简称ES或EK细胞，来源于早期胚胎或原始性腺（即囊胚期的内细胞团）。其特点是：具有胚胎细胞的特性，体积较小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物任何一种组织细胞；另一方面，在体外培养条件下，ES细胞可不断增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可以进行某些遗传改造。
【详解】A、干细胞具有分裂和分化能力，A正确；
B、造血干细胞可分化形成血细胞，胚胎干细胞在一定条件下可定向诱导分化成机体所有种类的细胞，B错误；
C、胚胎干细胞在饲养层细胞上，或在添加抑制因子的培养液中培养，能够维持不分化的状态，C正确；
D、当身体某一类细胞功能退化时，可以通过诱导胚胎干细胞定向分化来及时修补，并恢复正常功能，D正确。
故选B。
【点睛】本题考查干细胞的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力。
26．B
【分析】单克隆抗体的制备：（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞；（2）获得杂交瘤细胞：①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。（3）克隆化培养和抗体检测；将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖；（4）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取。
【详解】A、制备单克隆抗体过程中，要对免疫小鼠多次注射特定的抗原蛋白，对实验小鼠进行免疫，以获得B细胞，故需要考虑，A不符合题意；
B、免疫排斥是机体对移植物（异体细胞、组织或器官）通过特异性免疫应答使其破坏的过程，淋巴B细胞和骨髓瘤细胞之间不存在免疫排斥，故不需要考虑，B符合题意；
C、向细胞培养液中加入促融剂的种类和处理时间会影响细胞的融合，故需要考虑，C不符合题意；
D、需要考虑选择特定试剂筛选能产生特定抗体的杂交瘤细胞，否则会影响单克隆抗体的产量或得到单克隆抗体的特异性差，D不符合题意。
故选B。
27．C
【分析】1、单克隆抗体：由单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞系所产生出的化学性质单一、特异性强的抗体。具有特异性强、灵敏度高，并可能大量制备的特点。
2、单克隆抗体的制备过程：首先用特定抗原注射小鼠体内，使其发生免疫，小鼠体内产生具有免疫能力的B淋巴细胞，利用动物细胞融合技术将B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，单克隆抗体制备过程中的两次筛选：第一次筛选：利用特定选择培养基筛选，获得杂交瘤细胞，即AB型细胞(A为B淋巴细胞，B为骨髓瘤细胞)，不需要A、B、AA、BB型细胞。第二次筛选：利用多孔板法和抗原抗体杂交法筛选，获得产生特定抗体的杂交瘤细胞。
【详解】A、新冠病毒变异的根本原因是由于控制合成S蛋白的基因发生突变，A正确；
B、新冠病毒需要在细胞内繁殖，生产灭活的疫苗需要先培养病毒宿主细胞，B正确；
C、毒株“奥密克戎”抗原检测利用了抗原-抗体特异性结合的原理，只需要使用能与“奥密克戎”抗原特异性结合的抗体来检测就可以了(将抗原注射到动物体内，会发生免疫应答，动物体内产生相应的抗体，从而获得该抗体)，该过程不需要设计引物，C错误；
D、大规模人群免疫接种，群体免疫力增强，所以对新冠病毒的抵抗能力也就提升了，但是并不能降低感染几率，故新冠病毒无症状感染者比例也会上升，D正确。
故选C。
28．D
【分析】图甲操作是剪碎成肾脏组织块，乙为用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成的单个细胞悬液，丙图为转入培养液中进行原代培养的过程，该过程中细胞会表现为贴壁生长以及接触抑制的特点，丁图为将贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞培养，该过程为传代培养过程，传代培养的细胞一般传至10代后就不易传下去了，一般情况下，细胞传至10~50代时增殖会逐渐缓慢，以至完全停止。
【详解】A、甲→乙过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理获得单细胞悬液然后进行细胞培养，A正确；
B、由分析可知，丙过程指细胞在添加血清的合成培养基中原代培养的过程，B正确；
C、丙过程为原代培养，会出现细胞贴壁生长和接触抑制现象，C正确；
D、丁过程为传代培养，属于细胞培养，没有发育成一个完整个体，不能体现全能性，D错误。
故选D。
29．C
【分析】动物细胞工程有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、单克隆抗体的制备等。
【详解】A、动物细胞培养一般用液体培养基，不需要加入琼脂，A错误；
B、单克隆抗体制备过程中，第一次筛选是为了获得杂交瘤细胞，第二次筛选的目的是获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞，B错误；
C、干细胞存在于早期胚胎、骨髓和脐带血等多种组织和器官中，包括胚胎干细胞和成体干细胞等，胚胎干细胞具有发育的全能性，C正确；
D、目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法，也可以采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法，D错误。
故选C。
30．B
【分析】1、动物细胞核移植：是将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成一个新的个体。用核移植方法得到的动物称为克隆动物。哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。由于动物胚胎细胞分化程度低，表现全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难，因此动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植。体细胞核移植过程中通过显微操作去核。
2、动物体细胞核移植技术的应用：①加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育；②保护濒危物种，增大存活数量；③生产珍贵的医用蛋白；④作为异种移植的供体；⑤用于组织器官的移植等。
【详解】A、在体细胞核移植过程中，采集的卵母细胞需培养到减数第二次分裂中期时，用显微操作去核法去除卵母细胞的核，A正确；
B、用体细胞核移植技术克隆大熊猫，体现了动物细胞的细胞核具有全能性，不能体现细胞具有全能性，B错误；
C、相对于胚胎细胞，体细胞分化程度高，全能性不容易恢复，因此利用体细胞进行核移植的难度明显大于胚胎细胞的核移植，C正确；
D、动物体细胞核移植技术的应用前景包括加速家畜遗传改良进程；培养可用于移植的组织、器官；体细胞核移植技术还可以保护濒危物种，增加动物存活数量，D正确。
故选B。
31．B
【解析】分析题图：图示表示治疗性克隆的过程，该过程利用了动物细胞核移植技术，该技术体现了动物细胞核的全能性；由胚胎干细胞发育成组织是细胞分裂和分化的结果，所以①②过程中都存在细胞的分裂，都会进行DNA的复制和蛋白质的合成。
【详解】A、根据题意和图示分析可知：该过程涉及到许多生物技术，如细胞核移植、胚胎干细胞经过①②等过程涉及到动物细胞培养，A正确；
B、细胞全能性指高度分化的细胞离体后能发育成完整的生物个体的潜能。上述过程仅获得了脏器组织细胞、神经细胞等，没有得到个体，因而没有体现动物细胞的全能性，B错误；
C、①过程依赖于胚胎干细胞的增殖使细胞数量增多，依赖于细胞分化得到脏器组织干细胞和神经组织干细胞，C正确；
D、①、②过程都有细胞增殖，在细胞增殖的间期发生DNA复制和蛋白质合成，D正确。
故选B。
32．BC
【分析】1、动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。
2、细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互抑制时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。
【详解】A、动物细胞培养所需的营养物质与植物细胞培养不同，动物细胞培养需要血清等天然成分，植物细胞培养需要蔗糖等，A正确；
B、传代培养时需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞，不然会因为接触抑制而无法继续分裂，B错误；
C、癌细胞膜表面的糖蛋白减少，细胞间信息交流受到限制，在培养瓶中培养不会出现接触抑制现象，C错误；
D、动物细胞培养时需要添加抗生素以防止杂菌污染，D正确。
故选BC。
33．AC
【分析】胚胎干细胞具有胚胎细胞的特性，在形态上表现为体积小，细胞核大，核仁明显；在功能上，具有发育的全能性，可分化为成年动物体内任何一种组织细胞。另外，在体外培养的条件下，可以增殖而不发生分化，可进行冷冻保存，也可进行遗传改造。
【详解】A、若用病毒作为基因的载体，则不需要进行显微注射导入受体细胞，A错误；
B、对照组可以排除干扰因素，所以要排除iPS细胞的产生不是由培养基作用的结果需将小鼠成纤维细胞直接在培养基上培养作为对照，B正确；
C、由于用病人的皮肤成纤维细胞诱导成iPS细胞，其来源于病人，不属于异物，不会引起免疫反应，C错误；
D、由于iPS细胞具有活跃的分裂能力，若不受控制可能转化为癌细胞，所以用它进行治疗时可能存在安全风险，D正确。
故选AC。
34．B
【详解】E的细胞核基因全部来自于a，细胞质基因来自于b，A错误；
c经一系列增殖和分化形成e的过程中，细胞核起控制作用，B正确；
d为胚胎发育提供适宜的营养、环境等条件，但是没有提供遗传物质，C错误；
e的形成过程中没经过受精作用，属于无性繁殖，但是其体细胞中有同源染色体，D错误。
35．ABD
【分析】治疗性克隆是指把患者体细胞移植到去核卵母细胞中构建形成重组胚胎，体外培养到一定时期分离出ES细胞，获得的ES细胞定向分化为所需的特定类型细胞（如神经细胞、肌肉细胞和血细胞），用于治疗。此技术解决供体器官缺乏和器官移植后免疫排斥反应具有重要意义。
【详解】A、供体细胞注入去核卵母细胞后，还需通过电融合法等诱导融合，使供体核进入卵母细胞，形成重构胚，A正确；
B、治疗性克隆的ES细胞来源于供体细胞，在核遗传上和供体细胞相同，B正确；
C、治疗遗传病的根本措施是基因治疗，C错误；
D、治疗性克隆的目的是培养出能够用于医学治疗的供体器官，以解决目前临床上存在的供体器官不足和移植后免疫排斥的问题，D正确。
故选ABD。
36．(1) 动物细胞融合、动物细胞培养 诱导小鼠产生能够分泌抗S蛋白抗体的淋巴细胞 聚乙二醇融合法、电融合法、灭活的病毒诱导法
(2) 选择 B细胞和骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞 抗原—抗体杂交
(3)5和1
【分析】单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取免疫的B细胞，将免疫的B细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞（体内培养和体外培养），最后获取单克隆抗体。
【详解】（1）单克隆抗体制备过程中运用了动物细胞融合（B细胞和骨髓瘤细胞的融合）、动物细胞培养技术（培养骨髓瘤细胞）；过程①给小鼠注射S抗原蛋白，目的是刺激小鼠产生分泌抗S抗原的抗体的B淋巴细胞；过程②目的是促进B细胞和骨髓瘤细胞融合，促融方法有聚乙二醇处理、电融合法和灭活的病毒诱导法。
（2）过程③是指把c细胞群稀释，然后都放在选择培养基的多孔培养皿中培养，在该培养基中未融合的细胞和同种融合的细胞都死亡，只有杂交瘤细胞能存活且增殖；④是筛选能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，所用方法是抗原—抗体杂交法。
（3）在筛选杂交瘤细胞时，试管中共有5种细胞，分别是未融合的B细胞、B细胞的融合体、未融合的瘤细胞、瘤细胞的融合体、B细胞和瘤细胞的融合体，小鼠的淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但一般不分裂。因此未融合的B细胞、B细胞的融合体不能在此培养基上增殖，小鼠的骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂，说明其依靠D途径增殖，但D途径能被氨基蝶呤阻断，因此在含氨基蝶呤的试管中未融合的瘤细胞、瘤细胞的融合体也不能增殖，只有B细胞和瘤细胞形成的杂交瘤细胞可以依靠S途径增殖，故试管中细胞的种类数和能增殖的细胞种类数分别5和1。
37．(1) 动物细胞培养 动物体细胞核移植 体细胞分化程度高，表达全能性十分困难
(2) 卵母细胞 细胞核全能性
(3)显微操作（去核法）
(4)体细胞克隆猴遗传背景相同，可避免个体间差异对实验的干扰，大大减少实验动物的使用数量；体细胞克隆猴制备时间缩短，基因编辑等可在体外培养的细胞中进行
【分析】动物核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎。在体外将采集到的卵母细胞培养到减数第二次分裂中期才成熟，可以通过显微操作技术去除卵母细胞的细胞核和第一极体。
【详解】（1）据图可知，克隆猴培育过程用到了动物细胞培养、胚胎移植、动物细胞核移植技术。体细胞核移植技术的难度明显高于胚胎细胞核移植技术，原因是体细胞分化程度高，表达全能性十分困难。
（2）上述实验核移植的受体一般选用A猴减数分裂Ⅱ中期的（次级）卵母细胞，原因是卵母细胞体积大、易操作、营养物质丰富且含有促进细胞核全能性表达的物质。
（3）目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法，即在显微镜下进行去除细胞核的操作。
（4）与以往用普通猴子做实验相比，克隆猴作为实验动物模型的两大优势是体细胞克隆猴遗传背景相同，可避免个体间差异对实验的干扰，大大减少实验动物的使用数量；体细胞克隆猴制备时间缩短，基因编辑等可在体外培养的细胞中进行。
38．(1) 不需要
使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合
(2) 未融合的亲本细胞 融合的具有同种核的细胞
(3)通过抗体检测呈阳性来获得分泌所需抗体的杂交瘤细胞
(4)④
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】（1）浆细胞是高度分化的细胞，不能增殖，所以不需要通过原代培养扩大细胞数量。脂溶性物质PEG可使细胞接触处的磷脂分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
（2）在杂交瘤细胞筛选过程中，用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。
（3）单克隆抗体筛选中，将抗体与该病毒外壳蛋白进行杂交，是运用了抗原-抗体杂交技术，抗体检测呈阳性的细胞，即为所需的杂交瘤细胞。
（4）DNA连接酶能连接DNA片段，脱氧核苷酸的磷酸基团位于5'端，-OH位于3'端，①②③脱氧核苷酸链的两端基团有误；DNA连接酶能催化合成磷酸二酯键，即将一条脱氧核苷酸5'端的磷酸基团与另一条脱氧核苷酸链的3'端的-OH相连，④符合题意。
故选④。
39．(1) 杂交廇 选择
(2)不同BBWV具有不同的抗原
(3) A 无关抗体 B 实验组和对照组2的荧光强度相同，且小于对照组1的荧光强度
【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养或注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
【详解】（1）小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合形成多种杂交细胞，在选择培养基上筛选出既能无限增殖又能产生抗体的杂交瘤细胞。
（2）抗原和抗体特异性结合，同一株单抗对不同BBWV分离物的特异性表现出差异，直接原因是不同BBWV具有不同的抗原。
（3）为检测单抗A、B与BBWV结合的位点是否相同，注意实验设计时要注意单一变量原则和对照原则。实验组加未标记抗体A和荧光标记抗体B，对照组1加未标记的无关抗体和荧光标记抗体B，对照组2加未标记抗体B和荧光标记抗体B。若实验组和对照组2的荧光强度相同，且小于对照组1的荧光强度，则说明单抗A、B与BBWV结合的位点相同。因为实验组和对照组2中未标记抗体与BBWV结合后，标记的抗体B不能再结合了，应该荧光弱。