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    生物:第二部分《实验六 α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测》课件14(浙科版选修1)
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    高中生物课题1 果酒和果醋的制作评课课件ppt

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    这是一份高中生物课题1 果酒和果醋的制作评课课件ppt,共13页。PPT课件主要包含了细胞多采用包埋法固定,实验原理,α-淀粉酶,β-淀粉酶,糖化淀粉酶,麦芽糖,葡萄糖,层析住等内容,欢迎下载使用。

    二、a-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测
    一、固定化技术基础知识
    一、固定化技术基础知识
    固定化技术:利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术,包括吸附法、包埋法、化学结合法(将酶分子或细胞相互结合,或将其结合到载体上)。
    酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定化
    不管是固相柱还是固相悬浮体,回收后,在一定条件下贮存,还可以利用。
    1.使底物溶液通过装有固相酶的柱,柱留出液即为酶催化的产物。
    2.有时也可将固相酶或固定化细胞悬浮于底物溶液中,一定时间后溶液即成酶催化的产物。
    二、α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测
    运用吸附法将α-淀粉酶的固定在石英砂上。一定浓度的淀粉溶液经过固定化的α-淀粉酶催化后,生成糊精,使流出液加入KI-I2指示液后呈红色,表明水解产物糊精生产。
    5mml/L KI-I2溶液称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml。
    a-淀粉酶的固定化在烧杯中将5mg a-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。再加入 5g石英砂,不时搅拌,30分钟后装入层析柱中。用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱以除去未吸附的游离淀粉酶,流速控制为1ml/min。
    可溶性淀粉溶液取50mg可溶性淀粉溶于100ml热水中,搅拌均匀。
    2.试验后,用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱,放置在4℃冰箱里,几天后再重复上述实验,看是否有相同结果。
    1.将灌注了固定化酶的层析柱放在铁架台上,用滴管滴加淀粉溶液,使淀粉溶液已0.3mL /min的流速过柱。在流出5mL后接收2mL流出液,加入1-2滴KI-I2 溶液,观察颜色。用水稀释1倍后再观察颜色。
    a.控制滴灌流速。0.3mL/min的流速,我们就可以控制每分钟滴管流出量为每分钟6滴(6=0.3mL/ 50uL)。这样做的目的是控制流速让淀粉和淀粉酶充分接触,反应。
    b.显色。在流出5mL后接取2mL过滤液,然后向试管中加入1-2滴KI-I2 溶液。切记,KI-I2 溶液不要加入太多,以免碘液颜色覆盖糊精淀粉反应后的颜色。
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