微生物的实验室培养课件

这是一份微生物的实验室培养课件，共41页。PPT课件主要包含了微生物，非细胞类，霉菌等，原生生物，微生物的类群，微生物的特性，一球菌，二杆菌，三螺旋菌，细菌的形态等内容，欢迎下载使用。
细菌、放线菌、支原体、蓝藻等
病毒、类病毒、朊病毒等
①种类多；②分布广；③易培养；④个体微小；⑤结构简单；⑥繁殖快；⑦代谢强；⑧易变异。
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体（不是繁殖体），叫做芽孢。
芽孢的壁很厚，含水量极低，抗逆性极强（对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力）。
环境适宜时，芽孢可以萌发，形成一个细菌。
菌落具有大小、形状、光泽度、颜色、透明度等基本特征。
菌落是鉴定菌种的重要依据。
菌落由单个细菌（或其他微生物）细胞或少数同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落。
课题1 微生物的实验室培养
专题2 微生物的培养与应用
（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、 半固体培养基。（2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分分：天然培养基和合成培养基。
人们按照微生物对__________的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基
按培养基的功能（用途）
碳源、氮源、水、无机盐
CO2、CO32-、HCO3-
N2 、NH4＋、NO3-
牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等
注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源。
主要用于合成细胞物质、作为能源物质
主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物
pH、特殊营养物质（如维生素等）、氧气的需求等。
部分加生长因子——是微生物生长不可缺少的微量有机物，一般是酶和核酸的组成成分。（ 主要包括维生素、氨基酸和碱基等）
⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当
根据微生物的种类、培养目的选择原料
1、无菌技术就是获得纯净培养物的关键是
对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行__________将培养皿、接种用具进行_________接种的过程要在_________附近进行。实验后对培养基等也要_______处理
防止杂菌污染的操作技术。
消毒：指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。
灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5~6min2、巴氏消毒法：70~75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精;氯气消毒水源等4、紫外线消毒……
3.常用的消毒与灭菌的方法
1、灼烧灭菌接种环、接种针等接种工具及试管口2、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min.
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1） 培养细菌用的培养基与培养皿（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管（3） 实验操作者的双手
答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
答：（1）中培养基用高压蒸汽、培养皿与（2）用干热灭菌；（3）用酒精擦拭消毒。
例题：消毒和灭菌是两个不同的概念，下列哪些事物适用于消毒处理(　 　)  ①皮肤　 ②饮用水 　③牛奶　 ④注射器　 ⑤培养皿  ⑥接种环　 ⑦培养基　 ⑧果汁　 ⑨酱油　 ⑩手术刀 A． ④⑤⑥⑦⑩ B．①②③⑧⑨  C．①②③④⑤⑥⑧  D．以上全部
以牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌纯化培养为例
1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
（1）.计算：依配方计算100mL培养基所需各成分的用量。
（2）称量：玻璃棒挑取牛肉膏于称量纸上称取。
注：牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖。
牛肉膏、称量纸 、少量水加入烧杯→加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→搅拌溶解→冷却调pH→琼脂→搅拌熔化→补水至100mL
牛肉膏黏稠，保证粘附在称量纸上的牛肉膏也溶于水中，减少误差
防止琼脂糊底而导致烧杯破裂
(4)灭菌：培养基装入锥形瓶，加棉塞，包牛皮纸扎紧，高压蒸汽灭菌；培养皿5～8套作一包，放于干热灭菌箱内灭菌。
培养基冷却至约50℃左右时
(6)无菌检查： 37℃倒置培养24～48h，观察是否有微生物生长。
灭菌时避免水蒸气浸湿棉塞，取出培养基时，也起到隔绝空气中杂菌的作用
①溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热?②加琼脂的目的是什么?为什么要用玻璃棒搅拌？③在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的 锥形瓶的目的是什么？④培养皿能否用高压蒸汽灭菌？
可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中,减少误差
作为凝固剂；防止琼脂糊底导致烧杯破裂。
在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞,在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用
不能,因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌.
答：用手触摸锥形瓶，感觉刚刚不烫手时。
2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：既可以防止培养基表面的水分过快挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
答：最好不要用。因为空气中的微生物可能在此滋生。
微生物接种：最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法
微生物的接种技术还包括斜面接种、穿刺接种等方法。虽然这些技术和操作方法各不相同，但是，其核心都是要防止杂菌污染，保证培养物纯度。
1、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？
①操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物
②杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，防止菌落连成一片。
③及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
2、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
以免接种环温度太高，杀死菌种。
3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
4.平板划线时不能划破培养基的原因？
例：有关平板划线操作正确的是 （ ）A．打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌，取出菌种后需要马上塞上棉塞B．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌 C．最后将平板倒置，放入恒温箱中培养D．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可
各梯度分别涂布3个平板
例、平板划线法和稀释涂布平板法接种大肠杆菌的操作中，相同的是（ ） ①可以用相同的培养基  ②都需要使用接种针进行接种 ③菌液均需稀释后再接种④都可以用来计数活菌⑤依据的原理相同⑥都需要在火焰旁进行接种 A．①② B．③④ C．①⑥ D．②④
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？
应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。
培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同
1、培养基的制作是否合格
如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。
2、接种操作是否符合无菌要求
如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。
3、是否进行了及时细致的观察与记录
1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保藏。以后每3-6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。这种方法保存的时间不长，菌种易被污染和产生变异。
2、长期保存：甘油管藏法。在3ml的甘油瓶中，装入1ml甘油后灭菌。将1ml培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中保存。
1.（2007.宁夏高考）某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。（1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 和 。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是 和 。（2）对培养基进行灭菌，应该采取的方法是 。
（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于 中培养，培养的温度设定在37℃。要使该实验所得的结果可靠，还应该同时在另一平板上接种 作为对照进行实验。（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有 种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越 。
2.（2009.宁夏高考）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑 、 和渗透压等条件。由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、 、 等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行 （填“消毒”或“灭菌”）；操作者的双手需要进行清洗和 （填“消毒”或“灭菌”）；静止空气中细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能 。
（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的 。 （4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的 。 （5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法是 、 。 。（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过 处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
空白培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。
例3．右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类型是 。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入 .