高中生物人教版 (新课标)选修1《生物技术实践》课题3 血红蛋白的提取和分离背景图ppt课件

这是一份高中生物人教版 (新课标)选修1《生物技术实践》课题3 血红蛋白的提取和分离背景图ppt课件，共24页。PPT课件主要包含了凝胶色谱法，凝胶电泳法，血液组成成分，血液100mL，释放血红蛋白，使红细胞大量吸水胀裂，溶解红细胞的细胞膜，加速红细胞的破裂，分离血红蛋白，分离过程等内容，欢迎下载使用。

课题3 血红蛋白的提取和分离

一、基础知识：（一）蛋白质提取和分离原理 （二）蛋白质提取和分离的方法 1）凝胶色谱法：又称分配色谱法 2）电泳法（三）缓冲液的作用
二、实验操作－－实验步骤
蛋白质提取与分离的依据－－ 蛋白质的物理化学性质差异： 1.分子的形状、大小 2.电荷性质和多少 3.溶解度 4.吸附性质 5.对其他分子亲和力
（1）原理：（2）材料：凝胶
大分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢。
凝胶是微小的多孔性球体，如葡聚糖或琼脂糖。内部有许多贯穿的通道.
根据相对分子质量的大小分离蛋白质的方法
不同蛋白质的带电性质（正电荷或负电荷）、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。
2）影响蛋白质分子运动速度的因素
电泳：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
思考：蛋白质为什么带有电荷？
在一定的PH下，蛋白质可解离的基团会带上电荷
3）常用电泳方法 琼脂糖凝胶电泳 聚丙酰胺凝胶电泳 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 加入带负电荷多的SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。
影响蛋白质分子运动速度的因素
由弱酸和相应的强碱弱酸盐溶解于水中。如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等
（4）缓冲溶液－－洗脱剂 作用： 配制：
调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。
抵制外界酸碱对溶液pH的干扰而保持 pH稳定。
思考：如何配制不同PH值不同的缓冲液？
阅读思考：血液由______和________两部分组成。血细胞中________细胞数量最多，细胞的含量最高的化合物是_____________。该化合物是由 _____________和____________构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的______________________基团。
1.洗 涤 红 细 胞
阅读思考：洗涤的目的是什么？洗涤的方法是什么？洗涤干净的标志是什么？
重复洗涤3次，直至上清液没有黄色
阅读思考：释放血红蛋白过程中，在洗涤好的红细胞加入了哪些物质？为了加速释放过程，采取了什么措施？
目的分析：蒸馏水的作用是______________________________。加入甲苯的作用是____________________________。充分搅拌的目的是____________________________。
去除血红蛋白中的小分子杂质
1.凝胶色谱柱的制作：
2.凝胶色谱柱的装填：
立刻用磷酸缓冲液洗涤平衡12h
一次性缓慢倒入；轻轻敲打
凝胶颗粒＋蒸馏水→充分溶胀
根据色谱柱体积计算凝胶用量
色谱柱垂直固定在支架上
材料：交联葡聚糖凝胶G-75 20mml/L磷酸缓冲液“G”表示什么？75代表什么？
注意： 色谱柱不能内不能有气泡； 装完后，立即用缓冲液洗涤，平衡凝 胶是凝胶装填紧密
1.调液面
2.加样 3.再调液面
1. 红细胞的洗涤： 洗涤次数不能过少；低速、短时离心。2.色谱柱的装填： 装填尽量紧密，降低颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。3. 凝胶的预处理： 沸水浴法时间短，还能除去微生物和气泡4. 色谱柱成功标志：红色区带均匀一致地移动。