高中二 微生物的选择培养和计数第2课时课时训练

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第2课时　微生物的选择培养和计数
基础过关练
题组一　选择培养基的配制
1.选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物,通过不含有机物的培养基、缺氮培养基、含尿素(不含其他氮源)的培养基,可从土壤中分离出的微生物依次是 (深度解析)
A.硝化细菌、放线菌、根瘤菌
B.根瘤菌、青霉菌、固氮菌
C.异养型细菌、放线菌、硝化细菌
D.自养型细菌、固氮菌、分解尿素的细菌
2.(2020上海黄浦高三一模)某些土壤细菌可将尿素[CO(NH2)2]分解为CO2和NH3供植物吸收和利用,但分解物CO2不能为该菌提供营养。下列关于配制分离这一菌种的选择培养基的成分符合要求的是 (　易错　)
　　　　　　　　　　　　　　　　　　
A.仅尿素 B.尿素+葡萄糖
C.仅葡萄糖 D.牛肉膏蛋白胨
3.以氮源设计选择培养基,下列叙述错误的是 (　易错　)
A.培养基中以尿素为唯一氮源,分离的微生物一定是分解尿素的微生物
B.培养基中以NH3为唯一氮源可分离硝化细菌
C.培养基中无氮源,可分离固氮微生物　
D.以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养细菌后,指示剂变红色,可判断该细菌能分解尿素
4.下列有关微生物筛选的叙述中,不正确的是 (深度解析)
A.用全营养马铃薯琼脂培养基筛选酵母菌
B.用高NaCl的培养基筛选抗盐突变菌
C.含酚红的尿素培养基筛选鉴别出分解尿素的细菌
D.利用高温条件筛选水生栖热菌
题组二　微生物的选择培养
5.用1 mL无菌移液管吸取100倍的土壤稀释液0.5 mL,移入多少毫升无菌水的试管中,可得到1 000倍的稀释液　 (　　)
A.4.5 mL B.5 mL
C.10 mL D.49.5 mL
6.稀释涂布平板法是微生物培养的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是 (　　)
A.操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释
B.不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落
C.需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面
D.操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理
7.若在固体培养基上用稀释涂布平板法接种细菌,看到的培养结果不可能是 (　　)

8.(2021河南郑州高三二模)苹果树腐烂病是由黑腐皮壳菌引起的,是限制苹果产量的重要因素之一。生产上主要以化学药剂防治该病。为开发生物防治途径,科研人员拟从土壤中分离筛选出能抑制黑腐皮壳菌生长的枯草芽孢杆菌,实验流程图如下:

(1)①中木糖和硝酸钾的作用分别是　　　　　　　　。 
(2)②→③中梯度稀释的目的是　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 
(3)常用的两种接种方法中,操作上的共同点是　　　　　　　　　　　。从④到⑤的接种方法是　　　　　　。培养过程中,主要根据　　　　特征鉴别出枯草芽孢杆菌。 
题组三　微生物数量的测定
9.(2021四川绵阳南山中学高三月考)下列不能测定样品微生物数目的方法是 (　　)
A.稀释涂布平板法 B.细菌计数板计数法
C.血细胞计数板计数法 D.平板划线法
10.(2021湖北高二月考)用101、102和103倍稀释液进行涂布培养细菌后,其菌落平均数为2 890、270和50,则每毫升样品中菌落总数(涂布平板时所用的稀释液体积为0.1 mL)为 (　　)
A.2.89×105个 B.3.85×105个
C.6.0×105个 D.2.70×105个
11.(2020河南安阳五一中学高二期中)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述,其中错误的是 (　易错　)
A.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各1 mL,分别涂布于各组平板上
B.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基,经高温、高压灭菌后倒平板
C.统计的菌落数目往往比活菌的实际数目小
D.确定对照组无菌后,选择菌落数在30~300之间的实验组平板进行计数
12.测定同一土壤样品中的细菌数,在对应稀释倍数为106的培养基中,得到以下几种统计结果,其中正确的是 (　　)
A.涂布了一个平板,统计的菌落数是230
B.涂布了两个平板,统计的菌落数是216和260,取平均值238
C.涂布了三个平板,统计的菌落数分别是21、212和256,取平均值163
D.涂布了三个平板,统计的菌落数分别是210、240和256,取平均值235
题组四　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
13.(2021山东烟台莱州一中高二月考)某生物兴趣小组尝试对土壤中分解尿素的细菌进行分离并计数,相关叙述正确的是 (　　)
A.制备选择培养基时,需加入尿素、琼脂、葡萄糖、硝酸盐等物质
B.用活菌计数法统计结果,活菌的实际数目往往比统计的菌落数低
C.脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH降低,加入酚红指示剂后变红
D.测定土壤中细菌的数目,一般选用104、105、106倍的稀释液进行平板培养
14.(2021辽宁锦州义县高级中学高二月考)关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述正确的是 (　　)
A.培养基应以尿素为唯一氮源,该细菌与硝化细菌所利用的碳源是相同的
B.对微生物进行分离、纯化用平板划线法,而计数只能用稀释涂布平板法
C.对10 mL土样稀释106倍后,取0.1 mL该溶液进行重复的涂布实验,测得的菌落数分别为18、234、276,则该10 mL土样中分解尿素的细菌数为2.55×108个
D.应该设置对照以排除非测试因素对实验结果的干扰,提高可信度
15.(2021湖北鄂州高二期末)研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从石油污染的土壤中筛选出一种高效石油降解菌。下列相关叙述错误的是 (　　)
A.这种培养基是一种选择培养基
B.培养基中的碳源应该以石油为唯一碳源
C.高效石油降解菌可以降解土壤中的石油,修复土壤
D.高效石油降解菌在未被石油污染的土壤中含量较高
16.(2021山东聊城高二期末)幽门螺杆菌(能产生脲酶)感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素,严重者则发展为胃癌。我国的共餐制是导致幽门螺杆菌高发的重要原因。在患者体内采集样本并制成菌液后进行培养。下列叙述错误的是 (　　)
A.对幽门螺杆菌进行分离和计数可用稀释涂布平板法
B.分离纯化幽门螺杆菌时应使用以尿素为唯一氮源的培养基
C.进行幽门螺杆菌培养需要提供高湿度的环境
D.培养幽门螺杆菌时需将培养基调至中性或弱碱性
17.(2020山东烟台莱州一中高二月考改编)分解尿素的微生物广泛存在于农田等土壤中,某生物实验小组尝试对分解尿素的微生物进行分离与计数。请回答下列问题:
(1)分解尿素的微生物能产生　　　　酶;配制培养基时应以　　　　作为唯一氮源。 
(2)该小组在接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间,这样做的目的是　　　　　　　　　　　　;然后将1 mL样液稀释10 000倍,在3个平板上用稀释涂布平板法分别涂布0.1 mL稀释液;经适当培养后,3个平板的菌落数分别为39、42和45。据此可得出每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数为　　　　　　个。 
(3)微生物的培养与观察
①培养:不同种类的微生物,往往需要不同的培养　　　　和培养　　　　。 
②观察:每隔24 h统计一次　　　　　数目,最后选取菌落数目　　　　时的记录作为结果。 
18.(2021河南许昌高三二模改编)尿素最初是从人的尿液中发现的,但随着科学家成功实现尿素的体外人工合成,尿素的生产逐渐走向工业化,尿素也逐步成为一种重要的农业氮肥。如图是土壤中分解尿素的细菌分离与计数的基本流程,请回答有关问题:
土壤取样→制备培养基→接种→培养观察→计数
(1)配制好的培养基转移到锥形瓶中后,可采用　　　　　　　　进行灭菌。 
(2)该过程采用的接种方法是　　　　　　　　,培养一段时间要能在培养基表面形成单菌落,从操作层面需要满足两个条件:一是　　　　　　　　;二是涂布时要尽量做到均匀涂布。 
(3)该实验中的选择培养基对分解尿素的细菌具有选择作用,其原理是　　　　　　　　　　　　　　。若要判断选择培养基是否起到了筛选的作用,对照组的设置是　　　　　　　　　　　　。 
(4)一般选择菌落数在30~300的平板进行计数,统计的菌落数往往比活菌的实际数目低,原因是　 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 

能力提升练

题组一　微生物的计数方法
1.(2021山东泰安新泰一中高二期中,)下列有关稀释涂布平板法计数和显微镜直接计数法的描述不正确的是 (　　)
A.利用血细胞计数板计数属于显微镜直接计数法,其缺点是不能区分死菌与活菌
B.两种计数方法,其统计值与实际值相比均有差异,但差异原因不同
C.两种计数方法均能在计数的同时能观察到所研究微生物的形态特征
D.当菌落数目稳定时,一般选取菌落数在30~300的且差异不大的平板进行计数
2.(2021江苏泰州高三期末,)研究小组利用稀释涂布平板法来估测大肠杆菌的数量,每一个浓度涂布四个平板。下列关于操作步骤的叙述正确的是 (　　)
A.因为实验前后形成对照,因此本实验不必设置空白对照组
B.涂布前将沾有少量酒精的涂布器引燃,待涂布器冷却后再涂布
C.为避免混淆应在培养皿的皿盖上做标记,并将培养皿倒置培养
D.用此法估测的数值往往偏小,故应以菌落数最多平板计数为准
题组二　微生物的选择培养
3.(2021辽宁铁岭六校高二联考,)某科研人员欲从被石油污染的土壤中分离获得能降解石油成分“多环芳烃菲”的菌株X,为消除石油污染提供微生物资源。下列叙述错误的是 (　　)

A.若图中A~C以“多环芳烃菲”为唯一碳源的选择培养基进行培养,可提高降解菌的浓度
B.本实验用到的固体培养基在接种前是不透明的,周围有透明圈的菌落即为目的菌落
C.在接种前,可将灭菌后的空白平板先培养一段时间,目的是检测培养基平板灭菌是否合格
D.可用平板划线法或稀释涂布平板法对分离出的菌种进行纯化并计数
4.(2021辽宁朝阳高三月考,)大肠杆菌含量是国家饮用水重要检测指标之一,如图所示,用滤膜法和伊红—亚甲蓝琼脂培养基(EMB培养基)测定水中大肠杆菌含量的大致流程为准备工作→用滤膜过滤待测水样→将滤膜转移到EMB培养基上→培养→观察并统计菌落数目。下列叙述正确的是 (　　)
伊红—亚甲蓝琼脂培养基配方
基础培养基 100 mL
20%乳糖溶液 2 mL
2%伊红水溶液 2 mL
0.5%亚甲蓝水溶液 1 mL
琼脂 1.5 g
A.EMB培养基从用途来分属于选择培养基
B.配方的基础培养基中除水外还必须含有无机盐和碳源
C.观察并统计菌落数目时,应选择培养基上的深紫色菌落进行计数
D.选用滤膜孔径的大小不会影响实验结果
5.(不定项)(2021山东济南外国语学校高三月考,)营养缺陷型菌株是野生型菌株经过人工诱变或自发突变失去合成某种成长因子的能力,只能在补充了相应的生长因子的基本培养基中才能正常生长的变异菌株。某研究小组对酵母菌用紫外线照射后将其接种到甲培养皿的培养基上,一段时间后将甲培养皿的菌落影印接种(不改变菌落位置)到乙、丙两培养皿的培养基中,进一步培养得到如图所示结果。

下列分析正确的是 (　　)
A.接种到甲培养皿采用的是稀释涂布平板法
B.甲、丙两培养皿中的培养基是基本培养基
C.甲培养皿中菌落数有可能比接种的酵母菌数少
D.甲、乙、丙三个培养皿都可能存在营养缺陷型
6.(2021四川成都七中高二期中,)某种物质S(一种含氮有机物)难以降解,会对环境造成污染,只有某些细菌能降解S。研究人员按照如图1所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要Ⅰ、Ⅱ两种培养基,Ⅰ的组分为无机盐、水和S,Ⅱ的组分为无机盐、水、S和Y。

回答下列问题:
(1)实验中,盛有水或培养基的摇瓶通常采用　　　　　　进行灭菌。Ⅱ培养基中的Y物质是　　　　。Ⅰ、Ⅱ培养基均属于　　　　培养基。 
(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2×107个/mL,若要在每个平板上涂布0.1 mL稀释后的菌液,且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个,则至少应将摇瓶M中的菌液稀释　　　　倍。 
(3)物质S在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。从淤泥中分离目标菌的过程中,发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落(如图2所示)。如果要得到目标菌,应该选择　　　　菌落进一步纯化,选择的依据是　。 

(4)淤泥中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲菌能否利用空气中的氮气作为氮源,请简要写出实验思路、预期结果和结论,即　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 







答案全解全析
第2课时　微生物的选择培养和计数
基础过关练
1.D
2.B
3.A
4.A
5.A
6.B
7.D
9.D
10.B
11.A
12.D
13.D
14.D
15.D
16.D

1.D　不含有机物的培养基中能筛选出自养微生物,如硝化细菌;缺氮培养基可以筛选固氮微生物,如固氮菌;含尿素(不含其他氮源)的培养基能筛选合成脲酶的微生物,如分解尿素的细菌,D正确。
归纳总结
微生物选择培养的分类
(1)利用营养缺陷型选择培养基进行的选择培养:通过控制培养基的营养成分,使营养缺陷型微生物不能正常生长。
(2)利用化学物质进行的选择培养:在完全培养基中加入某些化学物质,利用加入的化学物质抑制某些微生物的生长,同时选择所需的微生物。
(3)利用培养条件进行的选择培养:改变微生物的培养条件(如高温、pH等),筛选特定微生物。
2.B　根据题意可知,该土壤细菌是异养微生物,要配制分离这一菌种的选择培养基需要含碳有机物作为碳源,尿素作为唯一氮源,B符合要求。
易错警示
选择培养基以基本培养基为基础,依据选择微生物的特性,通过改变某种营养成分或培养条件等实现,并非只含某种特定物质。
3.A　在以尿素为唯一氮源的培养基中能够生长繁殖的微生物不一定全是分解尿素的微生物,因为自生固氮菌也可以在这种培养基上生存,A错误;培养基中以NH3为唯一氮源可以分离硝化细菌,硝化细菌可利用NH3生成硝酸的过程中释放的能量将CO2和H2O合成糖类,B正确;用缺乏氮源的培养基能够分离固氮微生物,C正确;以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,培养细菌后,如果pH升高,指示剂变红,可判断该细菌能分解尿素,D正确。
易错警示
选择培养基上生长的并非都是所需微生物
选择培养基是依据某种微生物的生长特性而设计的,但由于不同微生物的生长条件可能相同,故选择培养基上生长的可能是多种微生物,如固氮微生物也可在以尿素为唯一氮源的选择培养基上生长,因此选择培养基获得微生物后还需进行进一步鉴定。
4.A　全营养马铃薯琼脂培养基常用于大肠杆菌的培养,该培养基对酵母菌无选择作用,筛选酵母菌应在选择培养基中培养,A错误;抗盐突变菌具有耐高盐的能力,因此可以利用高NaCl的培养基进行选择培养,B正确;分解尿素的细菌能将尿素分解产生氨,使培养基pH升高,因此可以利用含酚红的尿素培养基筛选鉴别出分解尿素的细菌,C正确;利用高温条件可以筛选水生栖热菌,D正确。
归纳总结
混淆常见的选择培养基
(1)加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。
(2)加入高浓度的NaCl可得到金黄色葡萄球菌等抗盐微生物。
(3)无氮源培养基可分离出固氮微生物。
(4)以石油为唯一碳源的培养基,可分离出能消除石油污染的微生物。
(5)将培养基放在高温环境中培养,可分离出耐高温的微生物。
5.A　根据题干信息可知,需要将土壤稀释液由100倍稀释为1 000倍,就在原来的基础上再稀释10倍,原来的土壤稀释液的量∶无菌水=1∶9,则得到1 000倍稀释液需添加无菌水的量为0.5×9=4.5(mL)。
6.B　稀释涂布平板法操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释,以获得单细胞菌落,A正确;只有稀释度足够高的菌液才可在培养基表面形成单菌落,若稀释度不够高,细胞聚集在一起,得不到单菌落,B错误;需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面,才可获得单菌落,C正确;操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理,以防杂菌污染,D正确。
7.D　由题图可知,ABC三项中固体培养基上所形成的是一个个分布较为均匀的单个菌落,是稀释涂布平板法得到的结果;D项中固体培养基上所形成的不是均匀的单菌落,是平板划线法得到的结果。
8.答案　(1)木糖提供碳源、硝酸钾提供氮源和无机盐　(2)将聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在固体培养基表面形成单菌落　(3)在酒精灯火焰旁接种等　平板划线法　菌落
解析　(1)微生物的生长需要碳源、氮源、水和无机盐等,①中木糖含有C、H、O,故能提供碳源,硝酸钾中含有N、K,可以提供氮源和无机盐。(2)分离筛选枯草芽孢杆菌需要得到单菌落,②→③中梯度稀释的目的是将聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在固体培养基表面形成单菌落。(3)常用的两种接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法,操作上的共同点是防止杂菌污染,需要在酒精灯火焰旁接种等。从④到⑤的接种方法是平板划线法。不同菌种形成的菌落大小、形状等不同,故培养过程中,主要根据菌落特征鉴别出枯草芽孢杆菌。
9.D　稀释涂布平板法能推测出样品中大约含有多少活菌,A正确;细菌计数板计数法和血细胞计数板计数法都可用于测定样品中微生物数目,B、C正确;平板划线法可用于分离微生物,但不能用于测定样品中微生物数目,D错误。
10.B　计数时一般选择平均菌落数在30~300之间的平板,题中所给菌落数在30~300之间的为270和50,50×103与270×102的比值约为1.9,应取二者的平均值进行计算,根据公式每克样品中的菌落数=(C÷V)×M,故每毫升菌落总数为(270÷0.1×102+50÷0.1×103)÷2=3.85×105(个)。
11.A　取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL,分别涂布于各组平板上,A错误;用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基,培养基经过高压蒸汽灭菌后倒平板,B正确;用活菌计数法统计菌落数目时,当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落,所以统计的菌落数目往往比活菌的实际数目小,C正确;确定对照组无菌后,通常选择菌落数在30~300的实验组平板进行计数,D正确。
易错警示
不知道统计的菌落数比实际值“偏高”还是“偏低”
稀释涂布平板法统计样品中的菌落数往往比实际值“偏低”,这是因为当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落。而显微镜直接计数法中由于不能区分死菌与活菌,故所得数值可能比实际值“偏高”。
12.D　涂布了一个平板,误差大,结果不准确,A错误;涂布了两个平板,误差大,结果不准确,B错误;选择菌落数在30~300的平板进行计数,菌落数21误差太大,C错误;涂布了三个平板,统计的菌落数分别是210、240和256,取平均值235,D正确。
13.D　分离土壤中分解尿素的细菌,培养基中要添加尿素(唯一的氮源)、琼脂(凝固剂)、葡萄糖(提供碳源),尿素给分解尿素的细菌提供氮源,不需要加硝酸盐,A错误;用活菌计数法统计结果时,有的活菌在培养过程中会死亡,而有的菌落是由两个或多个活菌连在一起形成的,统计的菌落数比实际值偏小,故活菌的实际数目往往比统计的菌落数高,B错误;脲酶将尿素分解成氨使培养基的pH升高,加入酚红指示剂后变红,C错误;土壤中细菌的含量比较多,测定土壤中细菌的数量时,一般选用104、105、106倍的稀释液进行平板培养,D正确。
14.D　从土壤中分离分解尿素的细菌,培养基应以尿素为唯一氮源,尿素分解菌为异养微生物,利用的是有机碳源,硝化细菌是自养微生物,以二氧化碳为碳源,二氧化碳为无机物,A错误;平板划线法只能用来分离纯化微生物,不能计数,稀释涂布平板法既能计数活菌数目,又能用于纯化,B错误;计数时通常选择菌落数在30~300的实验组平板进行计数,若对10 mL土样稀释106倍后,取0.1 mL该溶液进行重复的涂布实验,测得的菌落数分别为18、234、276,则该10 mL土样中分解尿素的细菌数为[(234+276)÷2]÷0.1×106×10=2.55×1010(个),C错误;分离微生物时,需要设置不接种的培养基与实验组一起培养作空白对照,以排除实验组中非测试因素对实验结果的干扰,提高可信度,D正确。
15.D　分离获得能降解石油的菌株的关键是以石油作为唯一碳源的选择培养基进行培养,A、B正确;高效石油降解菌可以降解土壤中的石油,修复土壤,C正确;高效石油降解菌在被石油污染的土壤中含量较高,D错误。
16.D　分离纯化微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法,其中稀释涂布平板法可用于微生物计数,因此对幽门螺杆菌进行分离和计数可用稀释涂布平板法,A正确;幽门螺杆菌能产生脲酶,脲酶可将尿素分解为氨,因此分离纯化幽门螺杆菌时应使用以尿素为唯一氮源的培养基,B正确;幽门螺杆菌在胃内生活,胃内含有大量消化液,故培养时需要提供高湿度的环境,C正确;幽门螺杆菌生活在酸性环境中,因此培养幽门螺杆菌时需将培养基调至酸性,D错误。
17.答案　(1)脲　尿素　(2)检测平板灭菌是否合格　4.2×106　(3)①温度　时间　②菌落　稳定
解析　(1)分解尿素的微生物能产生脲酶;配制培养基时应以尿素作为唯一氮源。(2)在接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间,其目的是检测平板灭菌是否合格。每毫升样液中分解尿素的微生物活菌数=某一稀释度下培养基上生长的平均菌落数÷涂布平板时所用的稀释液的体积×稀释倍数=(39+42+45)÷3÷0.1×10 000=4.2×106(个)。(3)不同种类的微生物,在培养时往往需要不同的培养温度和培养时间,在培养过程中,每隔24 h统计一次菌落数目,最后选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
18.答案　(1)高压蒸汽　(2)稀释涂布平板法　菌液的稀释度要足够高　(3)只有合成脲酶的微生物才能分解尿素,利用以尿素为唯一氮源的选择培养基,可以从土壤中分离出分解尿素的细菌　用完全培养基接种后在相同条件下同时培养　(4)当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落
解析　(1)配制好的培养基转移到锥形瓶后,可采用高压蒸汽进行灭菌。(2)由于本实验需要进行计数,所以采用的接种方法是稀释涂布平板法;培养一段时间要能在培养基表面形成单菌落,需要菌液的稀释度要足够高,涂布时要尽量做到均匀涂布。(3)只有合成脲酶的微生物才能分解尿素,利用以尿素为唯一氮源的选择培养基,可以从土壤中分离出分解尿素的细菌,所以该培养基能够起到筛选分解尿素的微生物的作用,为判断其是否起到了筛选作用,需要用完全培养基接种后在相同条件下同时培养,如果完全培养基上的菌落数目大于选择培养基,则说明起到选择作用。(4)由于两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落,所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
能力提升练
1.C
2.B
3.D
4.C
5.AC



1.C　显微镜直接计数法无法区分死菌和活菌,A正确;稀释涂布平板法计数时,当两个或多个细菌连在一起时,平板上观察到的往往是一个菌落,故而统计值比实际值偏小,显微镜直接计数时不能区分死菌和活菌,故统计值大于实际值,因此两种计数方法,其统计值与实际值相比均有差异,但差异原因不同,B正确;稀释涂布平板法观察到的是菌落的形态特征,而不是微生物的形态特征,显微镜直接计数法观察到的是微生物的形态特征,C错误;当菌落数目稳定时,一般选取菌落数在30~300的且差异不大的平板进行计数,D正确。
2.B　该实验需要一个空白平板作对照,可以判断平板是否被杂菌污染,A错误;涂布器灭菌时,将沾有少量酒精的涂布器放在火焰上灼烧,待酒精燃尽、涂布器冷却后,再进行涂布,B正确;应在培养皿的皿底上做标记,因为如果标记在皿盖上,培养皿倒置后标记就看不到了,C错误;当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落,因此统计的菌落数往往比活菌的实际数目少,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数,密度过大会使计数结果偏小,影响结果的准确性,D错误。
3.D　步骤A~C应为选择培养,分离获得能降解石油成分“多环芳烃菲”的菌株X,培养液中加入多环芳烃菲作为唯一碳源,可提高降解菌的浓度,A正确;固体培养基接种前是不透明的,原因是培养基中含“多环芳烃菲”,当“多环芳烃菲”被降解后,培养基会变透明,所以其中有透明圈的菌落即为目的菌落,B正确;在接种前,随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间,目的是检测培养基平板灭菌是否合格,C正确;平板划线法不用于对微生物进行计数,D错误。
4.C　EMB培养基从用途来分属于鉴别培养基,A错误;配方的基础培养基中除水外还必须含有无机盐和氮源,乳糖可作为碳源,B错误;大肠杆菌在EMB培养基上可呈深紫色,并有金属光泽,观察并统计菌落数目时,应选择培养基上的深紫色菌落进行计数,C正确;选用滤膜孔径过大可能会导致实验结果比实际值偏小,D错误。
5.AC　甲培养皿的菌落均匀分布,接种方法应为稀释涂布平板法,A正确;甲、丙两培养皿中包括野生酵母菌菌株和某种营养缺陷型酵母菌菌株,乙培养皿中是野生型酵母菌菌株,乙培养皿中的培养基是基本培养基,甲和丙培养皿中是加入了同种营养成分的培养基,B错误;由于基因突变具有不定向性,接种到甲培养皿的酵母菌可能还有其他营养缺陷型,且有些菌落不一定由一个酵母菌形成,所以,甲培养皿中菌落数有可能比接种的酵母菌数少,C正确;乙培养皿中的培养基是基本培养基,形成的菌落只可能是野生型酵母菌菌落,D错误。
6.答案　(1)高压蒸汽　琼脂　选择　(2)104　(3)乙　乙菌落周围出现透明圈,说明乙菌能降解S　(4)将甲菌接种在不含氮源的培养基上,若甲菌能生长,则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源
解析　(1)实验中,盛有水或培养基的摇瓶通常采用高压蒸汽进行灭菌。Ⅱ培养基为固体培养基,因此,Ⅱ培养基中的Y物质是琼脂。Ⅰ、Ⅱ培养基均以物质S为唯一的氮源,属于选择培养基。(2)利用稀释涂布平板法对细菌进行计数,要保证每个平板上长出的菌落数不超过200,假设稀释倍数为a,在每个平板上涂布0.1 mL稀释后的菌液,则有200×a÷0.1=2×107,则稀释倍数a=104,即至少应将摇瓶M中的菌液稀释104倍。(3)物质S在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。据此可推测,随着物质S被降解,菌落周围应会出现透明圈,且透明圈越大,细菌分解物质S的能力越强,据图2可知,如果要得到目标菌,应该选择乙菌落进一步纯化,因为乙菌落周围出现透明圈,说明乙菌能降解S。(4)淤泥中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲菌能否利用空气中的氮气作为氮源,若甲菌能利用空气中的氮源,则在不含氮源的培养基上能生长,因此实验设计思路为:将甲菌分别接种在不含氮源的培养基上,若甲菌能生长,则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源。