高中浙科版 (2019)第二节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得教案配套ppt课件

这是一份高中浙科版 (2019)第二节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得教案配套ppt课件，共22页。PPT课件主要包含了稀释涂布平板法，单菌落，血细胞计数板，红细胞，白细胞，产生气泡，“五点取样”，×108等内容，欢迎下载使用。

第二节 纯净的目标微生物可通过 分离和纯化获得（2）
接种、培养并分离酵母菌，学习并体验微生物的显微计数方法
1．目的要求(1)用平板划线法或____________________接种酵母菌。(2)用_________培养基大量扩增酵母菌。2．方法步骤(1)制作平板：对两个直径为90 mm的培养皿进行_________，分别向其中倒入未凝固的固体培养基，使培养基铺满培养皿底部，厚度约2 mm。标记：班级、姓名、日期、接种稀释度、LB或尿素。
二、活动：接种、培养并分离酵母菌
(2)接种方法平板划线法：①在用接种环蘸取菌液进行接种前，应在酒精灯火焰上从接种环的圆环处依次向上灼烧灭菌。②为避免灭菌后接种环的高温烫死菌种，应在挑取菌种前将接种环贴在培养容器内壁上降温。③初次划线时可参照培养皿底部的标记点进行划线，以保证有最好的划线分离效果。
稀释涂布平板法：①用 无菌水对酵母菌菌液进行一定浓度的稀释。②取0.1mL的稀释菌液加入平板中央。③在使用蘸有酒精的涂布器对平板中的菌液进行涂布时，应先在火焰上使酒精燃烧尽。此时手持涂布器的部位应高于火焰，以免酒精沿器具流下，烧伤手指。
(3)将菌种接种到液体培养基中。在无菌条件下用接种环将菌液接种到液体培养基中，同时以不接种菌液的液体培养基作为对照。(4)培养。将所有培养容器置于______℃下培养24 h。(5)观察培养结果。获得__________后，可挑取菌落，并利用平板划线法接种至斜面培养基中。小思考：在划线操作时，如果接种环不慎划破培养基，可以继续正常进行操作吗？为什么？【答案】不能。因为划破培养基会造成划线不均匀，难以分离单菌落，可能导致微生物的无氧呼吸或杂菌污染。
讨论1.判断液体培养基成功接种酵母菌的依据是什么？2.如何判断是否分离出酵母菌的单菌落？判断依据是什么？3.在固体培养基表面涂布的菌种是否出现形态、颜色不同的单菌落？你认为出现该现象的原因是什么？4.仅从菌落特征是否能够认定你分离出了酵母菌？怎样进行进一步的鉴定？
否。①挑取单菌落接入糖水中,培养一段时间检查是否能产生酒味②接入面团中观察能否发面;③挑取菌落样品，制作临时装片，在显微镜下观察、识别
与未接种的培养基相比，接种的培养基由于酵母菌的增殖而变浑浊。
与用酵母菌纯种在固体培养基表面接种的结果相比，用样品稀释液接种的固体培养基表面出现特征相同的、最小菌落即认为可能是分离出了酵母菌单菌落。
若出现，可能是在接种过程中有杂菌污染
三、采用稀释涂布平板法和显微镜计数法可测定微生物的数量倒平板的具体要求
(1)培养基灭菌后，需冷却至60 ℃时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
二、采用稀释涂布平板法和显微镜计数法可测定微生物的数量1.稀释涂布平板法可对微生物进行计数
(2)原则：在保证能准确计数的前提下，减小稀释度。在实际操作中，适于计算的平板上菌落数的数目通常为30到300。统计的菌落数往往比活菌的实际数目要少，因为当两个或多个细胞，连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。(3)计数要求：在同一稀释度下涂布3个(或3个以上)平板，取平均值。(4)公式：每毫升菌液中微生物细胞的数量＝某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数。
（1）原理： 当样品稀释度足够高时,平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌，用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时,通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。
(1)原理：利用特定_________________，在显微镜下计算一定体积的样品中微生物的数量。(2)方法：用血细胞计数板计数（显微镜计数法）。(3)显微镜下观察：
2.显微镜计数法可直接对菌液中的微生物进行计数
计数微生物——显微镜计数法
1. 每个血细胞计数板的正中央有2个计数区。各9个大方格（中央为红细胞计数区，4个角为白细胞计数区）2. 红细胞计数区共400个小方格。
①大方格：_____个。长、宽各1 mm。1个大方格液体体积＝1 mm2×0.1 mm＝0.1 mm3。计数区正中间的大方格为___________计数区。四角的四个大方格是_________计数区。②中方格：红细胞计数区又用双线分成______(或16)个中方格。③小方格：每个中方格再用单线划分为______(或25)个小方格。(4)计数时的几个注意点①滴加菌液要避免菌液滴到盖玻片上并防止______________，以免影响计数结果。先盖盖玻片再滴加菌液，让菌液自行渗入②对有25个中方格的红细胞计数区可采用______________对酵
母细胞进行计数。③在计数每一小方格中的细胞数时，为了避免重复计数压在小方格边缘线上细胞的数目，应_____________________________。④为了保证结果的可信度，消除误差，应对同一红细胞计数区中的细胞数进行_____ 次计数后取平均值，再按比例进行换算小思考：显微镜直接计数法有什么缺点吗？【答案】不能区分死菌和活菌；个体小的菌体在显微镜下难以进行观察。
“数上不数下”“数左不数右”
例10：回答下列相关问题。（1）用血细胞计数板对酵母菌计数时，吸取培养液前要轻轻振荡几次试管的目的是_________________________________。（2）若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多,难以计数,应先_______后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有________个。
使酵母菌分布均匀，计数准确
使用血细胞计数板的注意事项：1.先盖盖玻片再滴加菌液，让菌液自行渗入，多余的菌液用滤纸吸去。2.滴加菌液时避免菌液滴到盖玻片上，还要防止产生气泡。3.计数时应不时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。4.对压线细胞计数时，数上不数下，数左不数右。5.为减小误差，应对同一红细胞计数区中的细胞进行3次计数后取平均值。6. 血球计数板使用完后，用自来水冲洗，洗后自行晾干或用吹风机吹干。7.血细胞计数板计数时不能区分死菌和活菌。
影响实验结果的误差分析及改进办法
例题11.红细胞计数区由25×16=400个小方格组成,容纳液体的总体积为0.1 mm3。现将1 mL酵母菌样品加99 mL无菌水稀释,用无菌吸管吸取少许摇匀的酵母菌悬液滴在盖玻片边缘,使其自行渗入计数区,并用滤纸吸去多余菌液。现观察到图中所示a、b、c、d、e5个中方格内共有酵母菌44个,则上述1 mL酵母菌样品中约有菌体(　　)A.2.2×108个 B.2.2×107个 C.2.2×106个 D.2.2×104个
例题12.在对菌液中的酵母细胞进行计数时,下列有关实验方法与注意事项的描述,错误的是(　　)A.计数菌液中酵母细胞数量可用五点取样法B.改变菌液的pH,对酵母细胞的数量有影响C.从试管中吸取菌液时要将试管轻轻振荡几次D.应先向计数区中滴加菌液后再盖盖玻片进行显微镜观察
13.某同学在三种稀释度下吸取0.1 mL的菌液涂布平板,统计菌落数,得到以下的数据,试计算1 g样品中的活菌数。
提示 105的稀释度下取0.1 mL的菌液涂布的三个平板上的菌落数在30~300之间,计算其平均值为(212+234+287)÷3≈244。进一步可以换算出1 g样品中的活菌数约为244÷0.1×105=2.44×108。
[归纳提升]测定微生物数量的方法的比较