人教版 (2019)选择性必修3第1章 发酵工程第2节 微生物的培养技术及应用一 微生物的基本培养技术课文配套ppt课件

这是一份人教版 (2019)选择性必修3第1章 发酵工程第2节 微生物的培养技术及应用一 微生物的基本培养技术课文配套ppt课件，共37页。PPT课件主要包含了基础知识，牛刀小试，实验目的，实验设计，实验步骤，结果分析与评价，高考链接等内容，欢迎下载使用。

什么是选择培养基？如何通过调整培养基的配方来有目的的培养某种微生物？测定微生物数量的常用方法有哪些？
微生物的选择培养与计数
1、 科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶
启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。
筛选原因：因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，使耐热的Taq细菌保留下来。
PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。1966年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的Taq细菌，并分离到耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）。
高温环境（热泉、火山口）
结果：培养一定时间后，目的菌数量上升，再通过稀释涂布平板等方法对它进行纯化培养。
2、实验室中微生物的筛选原理：
人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。
允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。
不加有机碳源
能消除石油污染的微生物
抑制其他微生物生长，促进目的微生物的生长
用尿素作唯一氮源的培养基来筛选尿素分解菌
伊红—美蓝培养基鉴定大肠杆菌
选择培养基和鉴别培养基
原理：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。稀释度足够高时，能在培养基表面形成单个菌落。
Ⅰ.系列稀释操作a.编号为101～106试管中分别盛有 水。b.用移液管吸取 培养的菌液，注入101倍稀释的试管中，得到稀释菌液。c.从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中。依次类推，完成菌液的稀释。注意　移液管要经过灭菌，并且操作应在酒精灯火焰附近完成。
1个不接种平板（空白对照组）
三组，每组3个涂布平板（重复实验）
平板划线法和稀释涂布平板法的比较
利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里 样品中微生物的数量。
不能区分死菌与活菌（数值偏大）；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；
注意事项①选择菌落数在30--300的平板上进行计数。②用三个或三个以上的平板，计算出菌落平均数（重复实验，减少误差）。③统计的细菌数往往比实际数目低。④因此，统计结果一般用菌落数 而不是活菌数表示。
因为当两个或多个细胞连在一起时，繁殖后形成的还是一个菌落
2.间接计数法（活菌计数法） （1）常用方法：稀释涂布平板法。 （2）原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
(3) 注意：在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数为30～300、适于计数的平板。在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计算，然后求出平均值。
3、常见的分解尿素的微生物
芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。
某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的细菌数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4
每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M
C：代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数。V：代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL）。M：代表稀释倍数。
尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。
2、细菌能利用尿素的原因
绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌
②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌
要求：从酸碱度接近中性的潮湿土壤中取样；取样层：先铲去表层土，在距地表约3～8cm的土壤层取样
◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。
准备选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。 在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目，应明显多于选择培养基。因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
(1)稀释倍数：测定土壤中细菌的数量，一般选用1×104、1×105和1×106倍稀释的稀释液进行平板培养；(2)由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个比较宽的范围，将1×103～1×107倍稀释的稀释液分别涂布到平板上培养，以保证能从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数
（四）微生物的观察与培养
（1）不同种类的微生物往往需要不同的培养温度和时间，细菌一般在30～37 ℃的温度下培养1～2 d；（2）本实验中，我们可以每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果；（3）一般来说，在一定的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，包括菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等方面
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌： 30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌： 25～28℃的温度下培养3～4d。
（四）微生物的培养与观察
1、结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。2、是否获得了某一稀释度下，菌落数目在30——300的平板。在这稀释度下，是否至少有两个平板的菌落数相近？3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？
2017·江苏卷，31)苯酚及其衍生物广泛存在于工业废水中，对环境有严重危害。小明同学准备依据下图操作步骤，从处理废水的活性污泥中分离筛选酚降解高效菌株。请回答下列问题：
(1)酚降解菌富集培养基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作为碳源的有________。(2)将采集到的样品接种培养，苯酚用量应随转接次数增加而逐渐________，以达到富集酚降解菌的目的。若上图平板中菌落过于密集，应进一步________，以便于菌落计数与分离。制备平板培养基时除了需要水、营养物质外，还必须添加________。(3)下图为连续划线法示意图，在图中________(填图中序号)区域更易获得单菌落。
(4)采用比色测定法(使用苯酚显色剂)检测降解后的废水中苯酚残留量。先制作系列浓度梯度并进行显色反应，下表中1～5 号比色管的苯酚浓度应分别为__________________________________________________________________。
如果废水为50 mg/L苯酚溶液，降解后约有21% 的苯酚残留，则需将残留液稀释________(填序号：①5　②10　③20)倍后，再进行比色。