高中生物浙科版 (2019)选择性必修3 生物技术与工程第二节 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得学案设计

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第二节　纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得
课标内容要求
核心素养对接
1.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。
2.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。
1.生命观念——通过实例理解各类微生物都能适应其生活环境。
2.科学思维——根据微生物的代谢类型配制选择培养基；总结分离微生物的过程和测定微生物数量的常用方法。
3.科学探究——讨论土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的实验方法并对实验结果进行评价。

一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化
1．接种
(1)定义：接种是指微生物进入培养基质的过程。
(2)类型：自然接种和人为接种。
2．单菌落
在固体培养基上采用划线或稀释涂布的方法接种，通过培养能获得由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团，这样的细胞集团称为单菌落。
3．平板划线法
(1)连续平行划线是从培养基上的一点出发，向左右连续划平行线至覆盖整个培养基表面。(如图A)
(2)扇形划线是从培养基上的一点出发，向多方向多次划线，每划一条线都要将接种环在酒精灯的火焰上灭菌，然后再次从同一起点变换方向划线。(如图B)

A．连续平行划线　B．扇形划线
(3)多次连续平行划线接种时，划线可分3～4次进行。将培养皿旋转一定角度后，不需再次蘸取菌种，只需在上一次划线的末端区域直接开始划线即可。(如图C)

(1)　　　　(2)　　　(3)　　　　(4)
C．多次连续平行划线
4．稀释涂布平板法
稀释涂布平板法(pour spread method)接种时，通常需要先将菌液进行梯度稀释，并在培养皿侧面或底面做好标记后，将稀释度不同的菌液各取0.1 mL，加在固体培养基表面，然后用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面上进行培养。
二、稀释涂布平板法和显微镜计数法可测定微生物的数量
1．测定微生物数量的目的：了解目标微生物的繁殖速度_。
2．稀释涂布平板法
(1)问题：平板上的菌落即使是分开的，也可能难以数清其数量。如果菌落太多，准确数出菌落数并不容易，这会导致最终的计算结果出现较大误差。而菌液稀释度过大，菌落数少，虽然容易准确计数菌落数，但可能存在较大的随机误差。
(2)解决方法：一是在保证能准确计数的前提下减小稀释度；二是将相同稀释度下的多组数值取平均值后再进行计算。即：每毫升菌液中微生物细胞的数量＝某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数。
3．显微镜计数法
(1)血细胞计数板
①侧面观

1．血细胞计数板　2.盖玻片　3.中央平台　4.凹槽
②中央平台上、下两个部分各刻有一个计数区。
③计数区由长、宽各1 mm的9个大方格组成。
④大方格
a．每个大方格内的液体体积：0.1_mm3。
b．分类：红细胞计数区和白细胞计数区。
c．红细胞计数区又用双线分成25(或16)个中方格，每个中方格再用单线划分为16(或25)个小方格。
(2)用显微镜进行酵母细胞计数
①步骤：先将专用的盖玻片盖在计数板上，再用吸管在中央平台盖玻片边缘滴加摇匀的酵母菌悬液，让菌液渗入盖玻片下直至充满计数区。
②注意事项：滴加菌液时，一方面要避免菌液滴到盖玻片上，另一方面要注意防止产生气泡，以免影响计数结果。
③计数区域：红细胞计数区。
④取样原则：随机取样。
⑤对有25个中方格的红细胞计数区取样方法：“五点取样”。
⑥在计数每一小方格中的细胞数时，应只计数每一小方格上方和左侧线条上的细胞数(即“数上不数下”“数左不数右”)。
⑦每毫升菌液中的酵母细胞数：酵母细胞个数/mL＝80个小方格细胞总数/80×400×10_000×稀释倍数。
三、调整培养基的配方和培养方式可有目的地培养某种微生物
1．不同自然环境中生活着的微生物代谢类型不尽相同。
2．许多微生物的代谢方式并不唯一。
(1)某些异养型微生物在有有机物存在的情况下可同时将CO2转变为自身的物质。
(2)自养型微生物也并非不能利用有机物生长。
(3)营养方式的可变性提高了微生物在环境中的生存能力。
3．培养基中营养物质的浓度及比例都会影响微生物的生长。
4．选择培养基
(1)概念：在培养基中添加(或减去)某种化学成分，使得只有某些特定的微生物能够生长，其他微生物均不能生长，这样的培养基称为选择培养基。
(2)用途
①从混杂的微生物群体中快速筛选出所需种类的目标微生物。
②从已知种类的混杂的细胞群体中筛选出特定的细胞。

判断对错(正确的打“√”，错误的打“×”)
1．转换划线角度后需要灼烧接种环再进行划线。 (√)
2．在用涂布器涂布平板时，为了操作方便可完全打开培养皿盖。
(×)
提示：为了防止杂菌污染，不能完全打开皿盖。
3．统计菌落数目时，统计的菌落数就是活菌的实际数目。 (×)
提示：由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目少。
4．借助于显微镜、血细胞计数板也能在显微镜下直接对菌液中的酵母细胞进行计数。 (√)
5．异养微生物只能以有机物为碳源，自养微生物也可以利用有机物生长。 (×)
提示：某些异养微生物在有有机物存在的情况下可同时将CO2转变为自身的物质，它们只是不以CO2为唯一碳源。
6．分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的pH降低。 (×)
提示：尿素分解菌将尿素转化为氨，使培养基的pH升高。

　采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化
1．两种纯化方法的比较
主要方法
平板划线法
稀释涂布平板法
主要步骤
接种环在固体培养基表面划线
系列梯度稀释操作和涂布平板操作
接种工具
接种环
涂布器
菌体获取
在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体
从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体
能否用于计数
不能计数
可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板
共同点
都能将微生物分散到固体培养基表面，以获得单细胞菌落，达到分离纯化微生物的目的，也可用于观察菌落特征
2.接种、培养并分离酵母菌
(1)目的要求
①用平板划线法或稀释涂布平板法接种酵母菌。
②用液体培养基大量扩增酵母菌。
(2)方法步骤
制作平板→接种(用平板划线法接种、用稀释涂布平板法接种，将菌种接种到液体培养基中)→培养→观察培养结果→挑取菌落利用划线法接种至试管斜面培养基中。
(3)注意事项
①在用接种环蘸取菌液进行接种前，应在酒精灯火焰上从接种环的圆环处依次向上灼烧灭菌。
②为避免灭菌后接种环的高温烫死菌种，应在挑取菌种前将接种环贴在培养容器内壁上降温。
③初次划线时可参照培养皿底面的标记点进行划线，以保证有最好的划线分离效果。
④在使用蘸有酒精的涂布器对平板中的菌液进行涂布时，应先在火焰上使酒精燃烧尽。此时手持涂布器的部位应高于火焰上的部位，以免酒精沿器具流下，烧伤手指。
⑤涂布和划线均应在酒精灯旁进行。
⑥用接种环在无菌条件下将菌液接种到液体培养基中，同时以不接种菌液的液体培养基作为对照。

1．在分离、纯化酵母菌实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如图所示，且甲、乙的对应位置不变。有关叙述错误的是(　　)

甲　　　　乙
A．配制培养基时需进行高压蒸汽灭菌
B．甲中a区域为划线的起始位置
C．连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落
D．图示接种过程中接种环灼烧了5次
B　[为了能彻底灭菌，配制的培养基需进行高压蒸汽灭菌，A正确；起始划线的区域长出的菌落多且密，甲中d区域为划线的起始位置，a区域为划线的结束位置，B错误；连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落，C正确；由于每次使用接种环前后都要灼烧灭菌，图示甲中共有4次划线接种，接种过程中接种环灼烧了5次，D正确。]
2．下列关于统计菌落数目的方法的叙述，不正确的是(　　)
A．采用稀释涂布平板法获得的菌落数往往少于实际的活菌数
B．当样品的稀释度足够高时，一个活菌往往会形成一个菌落
C．为了保证结果准确，一般采用菌落密度较大的平板进行计数
D．在某一浓度下涂布三个平板，若三个平板统计的菌落数差别不大，则应以它们的平均值作为统计结果
C　[稀释涂布平板法常用来统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，值得注意的是，该方法统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，A、B正确。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数；设计实验时，一定要至少用三个平板做重复实验，才能增强实验的说服力和准确性。分析结果时，一定要考虑所设置的重复实验的结果是否一致，差别不大时，取平均值作为统计结果，C错误，D正确。]
　微生物的数量测定和选择培养
1．微生物的计数
常用的微生物的计数方法有直接计数法和间接计数法。二者比较如下：
内容
直接计数法
间接计数法
主要用具
显微镜、血细胞计数板
涂布器
计数依据
细菌个数
培养基上菌落数
优点
计数方便、操作简单
计数的是活菌
缺点
不能区分死菌与活菌
操作较复杂，且有一定误差
计算公式
每毫升原液含菌株数＝400×10 000×每小格平均菌株数×稀释倍数
每毫升原液含菌株数＝×稀释倍数
2.特定培养基的设计原理与应用实例
特定培养基
的设计原理
应用实例
具体处理
分离菌种
依据营
养需求
不添加碳源
自养微生物(硝化细菌等)
不添加氮源
固氮微生物(圆褐固氮菌等)
以尿素为唯一氮源
能分解尿素的微生物
以石油为唯一碳源
能分解石油的微生物
加入某种化学物质，其不作为营养物质，对目标微生物无害，但会抑制或杀死其他微生物
加入青霉素、四环素或链霉素
抑制细菌和放线菌生长→分离酵母菌、霉菌等
加入10%的酚
抑制细菌和霉菌生长→分离放线菌
利用特
殊环境
置于无氧条件下
厌氧型和兼性厌氧型微生物→分离乳酸菌、酵母菌等
置于高盐环境中
其他菌在高盐环境中易失水而不能生存→分离金黄色葡萄球菌
置于高温环境中
其他微生物因酶失活而无法生存→分离耐高温微生物

1．在用稀释涂布平板法对微生物进行计数时，统计菌落数目的理论依据是什么？
提示：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
2．稀释涂布平板法和显微镜计数法对微生物计数产生的实验误差如何？试分析原因。
提示：稀释涂布平板法计数的值比实际值小，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落；显微镜计数法计数的结果比实际值大，原因是显微镜下无法区分细胞的死活，计数时包括了死细胞。

3．(2021·四川绵阳期末)某同学将1 mL土壤样液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57和58。下列叙述错误的是(　　)
A．可得出土壤样液中活菌大约为5.7×107个/L
B．此方法统计的菌落数往往比实际的活菌数目低
C．一般选择菌落数为30～300的平板进行计数
D．显微镜直接计数法统计的是稀释液中的活菌数
D　[将1 mL样品稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57和58，据此可得出每升样品中的活菌数为(56＋57＋58)÷3÷0.1×1 000×100＝5.7×107个/L，A正确；由于两个或多个细胞连在一起时，在平板上观察到的只是一个菌落，所以统计的菌落数往往比实际的活菌数目低，B正确；为保证结果准确，一般选择菌落数为30～300的平板进行计数，C正确；显微镜计数法统计的是稀释液中所有菌体的数目，包括活菌和死菌，D错误。]
4．(2020·济南外国语学校高二月考)某种菌在30 ℃的环境下，经过6周后会产生2种不同的酶，几乎可将PET塑料完全分解。下图是分离、纯化和保存菌株的过程，相关叙述正确的是(　　)

A．塑料垃圾中含有大量微生物，是分离该菌株的首选样品
B．筛选培养基中需要加入PET塑料粉末，通过菌落特征挑出分解PET塑料的菌落
C．通过涂布平板法可以获得单菌落
D．斜面培养基中含有大量营养物质，可在常温下长期保存菌株
B　[塑料垃圾中含有大量微生物，但不一定含有分解PET塑料的菌株，A项错误；筛选培养基中需要加入PET塑料粉末，通过菌落特征挑出分解PET塑料的菌落，从而获得分解PET塑料的菌株，B项正确；在涂布平板上长出的菌落，可以通过划线或稀释涂布平板法进一步纯化得到单个菌落，C项错误；斜面培养基中含有大量营养物质，可在低温下临时保存菌株，如果长期保存菌株应选择甘油管藏法，D项错误。]
　能分解尿素的微生物的分离与计数
1．实验原理
(1)分离原理
当培养基中只有尿素作为氮源时，只有能分泌脲酶(urease)的微生物才能在该培养基中生长。因为它们可以通过脲酶将尿素降解为氨，作为其生长的氮源。利用这种培养基就分离出土壤中能产生脲酶的微生物。
(2)鉴定原理
因为微生物分解尿素产生的氨会使培养基的碱性增强，若在培养基中加入在酸性情况下呈黄色、碱性情况下呈红色的酚红指示剂，就可根据菌落周围是否出现红色区域，进一步鉴定尿素分解菌。在相同培养条件下，圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力愈强。
2．目的要求
(1)利用选择培养基分离能产生脲酶的微生物。
(2)观察微生物代谢改变环境pH的现象。
(3)利用稀释涂布平板法对微生物进行计数。
3．方法步骤
制备培养基
↓　
灭菌：在121 ℃下灭菌15 min后待用
↓　
倒平板
↓　
制备土壤细菌悬液：梯度稀释


5．下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验操作的叙述，错误的是(　　)
A．利用稀释涂布平板法准确估计菌落数目的关键是有恰当的稀释度
B．若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置未接种的LB培养基作为对照
C．该实验应采用稀释涂布平板法
D．用以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后不会使酚红指示剂变红
B　[利用稀释涂布平板法估算菌落数目的关键是有恰当的稀释度，若稀释倍数太低，菌落太多，会长在一起，稀释倍数太高，平板上菌落数目过少，都不宜进行计数，A正确；若要判断选择培养基是否起到了选择作用，需设置接种在没有选择作用的LB培养基上培养作为对照，B错误；该实验应采用稀释涂布平板法，C正确；分解尿素的细菌能合成脲酶，将尿素分解产生氨，使培养基的碱性增强，用以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌，则能维持pH稳定，不会使酚红指示剂变红，D正确。]
6．自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请回答有关问题。
(1)若取土样6 g，应加入________mL的无菌水配制成稀释10的倍土壤溶液。因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成101～107不同浓度的土壤溶液。将103～107倍的稀释液分别吸取0.2 mL加入固体培养基上，用涂布器将菌液铺平，每个稀释度下至少涂布3个平板，这种接种方法称为_______________。将接种的培养皿放置在37 ℃恒温培养箱中培养24～48 h，观察并统计菌落数，结果如下表，其中________倍的稀释比较合适，由此计算出每克土壤中的菌落数为________个。这种方法测定的菌落数往往比活菌的实际数目________(填“低”或“高”)。
稀释倍数
103
104
105
106
107
菌落数/个
1号平板
478
367
277
26
5
2号平板
496
354
261
20
8
3号平板
509
332
254
29
3
(2)若研究尿素分解菌的群体生长规律，可采用平板划线法分离土壤中的尿素分解菌。操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_______________________________
________________________________________________________________。
将分离纯化后的单个菌落进行液体培养，可采用定期取样的方法进行计数。若以一个大方格(体积为0.1 mm3)有25个中方格的计数板为例进行计算，设5个中方格中总菌数为45，菌液稀释倍数为102，那么原菌液的菌群密度为________个/mL。
[解析]　(1)根据题意分析，需要稀释10倍的土壤溶液，因此应该将6 g土样加入54 mL的无菌水进行配制；将103～107倍的稀释液分别吸取0.2 mL加入固体培养基上，用稀释涂布平板法将菌液用涂布器涂布到固体培养基上；估算样品中的活菌数时，往往选取菌落数在30到300之间的平板，分析表格中数据可知，稀释倍数为105的平板菌落数在这一范围；每克土壤中的菌落数为(277＋261＋254)÷3×105÷0.2÷6＝2.2×107个。稀释涂布平板法进行微生物计数时，由于菌落之间会相互重叠，因此测定的菌落数往往比活菌的实际数目低。(2)用平板划线法分离土壤中的尿素分解菌时，为了将聚集的菌体逐步稀释以便获得(不连续)单个菌落，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。若以一个大方格(体积为0.1 mm3)有25个中方格的计数板为例进行计算，设5个中方格中总菌数为45，菌液稀释倍数为102，那么原菌液的菌群密度＝45×5÷0.1÷10－3×102＝2.25×108个/mL。
[答案]　(1)54　稀释涂布平板法　105　2.2×107　低　(2)将聚集的菌体逐步稀释以便获得(不连续)单个菌落　2.25×108


微生物合成的油脂是制备生物柴油的新型原料。如图为产油脂芽孢杆菌筛选的流程，其中B平板上的5个菌落是初筛得到的芽孢杆菌，C为B平板上菌落的原位影印，利用苏丹黑B可使脂类物质呈黑色的特性，对C进行染色，得到结果D。


通过本案例培养学生的演绎与推理和对实验结果的交流与讨论能力。

(1)图中对土壤菌液进行系列梯度稀释的目的是什么？(科学思维)
提示：将微生物分散成单个细胞，进而获得单个菌落。
(2)根据D的染色结果，判断B平板中产油脂芽孢杆菌的菌落是哪一个？(科学思维)
提示：3。
(3)采用什么方法将B平板中的产油脂芽孢杆菌的单菌落进一步纯化培养得到E？(科学思维)
提示：平板划线法或稀释涂布平板法。
[课堂小结]
知 识 网 络 构 建
核 心 语 句 背 诵

1.在固体培养基上采用划线或稀释涂布的方法接种，通过培养能获得由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团，这样的细胞集团称为单菌落。
2.平板划线法接种时，通常用接种环蘸取液体培养物或挑取固体表面的微生物后，在固体培养基表面进行连续平行划线、扇形划线或其他形式的划线，以实现接种的目的。
3.稀释涂布平板法接种时，通常需要先将菌液进行梯度稀释，并在培养皿侧面或底面做好标记后，将稀释度不同的菌液各取0.1 mL，加在固体培养基表面，然后用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面上进行培养。
4.利用稀释涂布平板法计数微生物数量：每毫升菌液中微生物细胞的数量＝某一稀释倍数下至少3个培养皿的平均菌落数÷菌液稀释液体积×稀释倍数。
5.利用显微镜进行酵母细胞计数：每毫升菌液中的酵母细胞数＝80个小方格细胞总数/80×400×10 000×稀释倍数。
6.在培养基中添加(或减去)某种化学成分，使得只有某些特定的微生物能够生长，其他微生物均不能生长，这样的培养基称为选择培养基。

1．下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是(　　)
A．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、琼脂、蒸馏水
B．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、琼脂、蒸馏水
C．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、尿素、琼脂、蒸馏水
D．KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4·7H2O、牛肉膏、蛋白胨、琼脂、蒸馏水
A　[在A项的培养基中既有尿素作为唯一氮源，又有其他各种成分，可以选择出分解尿素的细菌，而B项中无尿素作氮源，C项中缺少碳源，D项中有牛肉膏可提供氮源。]
2．(2020·山东淄博月考)下列关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的叙述，正确的是(　　)
A．只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素
B．统计样品中的活菌数目一般用平板划线法
C．筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培养基中唯一的营养物质
D．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到了分解尿素的细菌
A　[统计样品中的活菌数目时一般用稀释涂布平板法，B错误；筛选分解尿素的细菌时应以尿素作为培养基中的唯一氮源，培养基中还应含有水、无机盐、碳源等营养物质，C错误；在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，则表明筛选到了分解尿素的细菌，D错误。]
3．(2020·太原实验中学高二月考)判断选择培养基是否起到了选择作用时，需要设置的对照是(　　)
A．未接种的选择培养基
B．接种了的LB培养基
C．未接种的LB培养基
D．接种了的选择培养基
B　[选择培养基的作用是只允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类的微生物生长，若设置对照组，需要用接种了的LB培养基，若该培养基上微生物能生长且并非只有特定种类，则可证明选择培养基起到选择作用，B项符合题意。]
4．(2020·陕西延安吴起高中高二期末)下图表示培养和分离酵母菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是(　　)

①　　　　　　②　　　　　③
A．对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌处理
B．步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置
C．步骤②应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落
D．步骤③划线结束后在培养皿盖上做好标注
C　[图中①是倒平板，②是进行平板划线，③是培养。对实验操作的空间、操作者的衣着和手需要进行消毒处理，A项错误；倒完平板后立即盖上培养皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B项错误；步骤②应多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落，C项正确；图中操作结束后需在培养皿底标注菌种及接种日期等信息，而不是在培养皿盖上做标注，D项错误。]
5．尿素是一种重要的氮肥，农作物不能将其直接吸收利用，而是通过土壤中的细菌将其分解为氨和CO2后才能被农作物利用。请回答下列问题：
(1)土壤中的某些细菌能分解尿素是因为该种细菌能合成________。
(2)为筛选尿素分解菌而制备的培养基中含有的营养物质除尿素外，还包括水、碳源、________等，该培养基能筛选出目的菌株的原因是__________________
_________________________________________________________________
________________________________________________________________。
(3)一般依据尿素分解菌菌落的________、隆起程度和颜色等特征来统计菌落数目。现将10 mL尿素分解菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1 mL稀释倍数为106的样液接种到3个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为39、42、45，则1 mL悬液中活细菌数量为________个。上述过程采用的接种方法是______________。
(4)为检验培养基及培养皿灭菌是否合格，可采取的措施是_______________
_________________________________________________________________
_________________________________________________________________
________________________________________________________________。
[解析]　(1)分解尿素的细菌能合成脲酶，将尿素分解。(2)微生物的培养基中需含有水、无机盐、碳源和氮源，尿素作为氮源。因为只有能合成脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源生长，因此该培养基能筛选出分解尿素的细菌。(3)一个菌落为一个细菌繁殖的后代，不同的微生物的菌落特征不同，菌落的特征包括形状、大小、隆起程度，据此来统计菌落的数目。微生物计数的方法采用稀释涂布平板法接种，1 mL悬液中活细菌的数目为(39＋42＋45)÷3÷0.1×106＝4.2×108(个)。(4)可单独设置一个灭菌后不接种样液的(含培养基的)培养皿进行培养，观察该培养基上是否出现菌落，从而判断灭菌是否合格。
[答案]　(1)脲酶　(2)无机盐　只有以尿素为唯一氮源的细菌才能在该培养基上生长　(3)形状、大小　4.2×108　稀释涂布平板法　(4)单独设置一个灭菌后不接种样液的(含培养基的)培养皿进行培养