2023届高考生物二轮复习通用版48细胞工程作业含答案

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专题48 细胞工程
一、单选题
1．（2022高二下·衡水期中）下列有关细胞工程的叙述，正确的是（　　）
A．PEG是促细胞融合剂，可直接诱导植物细胞融合
B．植物原生质体融合的方法有电融合法、PEG融合法、灭活的病毒诱导法
C．骨髓瘤细胞经免疫处理，可直接获得单克隆抗体
D．核移植克隆的动物，其线粒体DNA来自供卵母体
【答案】D
【知识点】植物体细胞杂交的过程及应用；动物细胞核移植技术
【解析】【解答】A、PEG是促细胞融合剂，但不能直接诱导植物细胞融合，植物细胞需要先去除细胞壁再诱导融合，A错误；
B、植物原生质体融合的方法有电融合法、PEG融合法，灭活的病毒诱导法用于动物细胞的融合，B错误；
C、骨髓瘤细胞不能产生抗体，骨髓瘤细胞与浆细胞融合形成的杂交瘤细胞经过筛选后才可获得单克隆抗体，C错误；
D、线粒体位于细胞质中，故核移植克隆的动物，其线粒体DNA来自供卵母体，D正确。
故答案为：D。

【分析】1、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：
细胞工程
植物体细胞杂交
动物细胞融合
理论基础
细胞的全能性、细胞膜的流动性
细胞增殖、细胞膜的流动性
融合前处理
酶解法去除细胞壁（纤维素酶、果胶酶）
注射特定抗原，免疫处理正常小鼠
诱导手段
物理法： 离心、振动、电激
化学法：聚乙二醇（PEG）
物理法： 离心、振动、电激
化学法：聚乙二醇（PEG）
生物法：灭活的病毒（灭活的仙台病毒）
诱导过程
第一步：原生质体的制备（酶解法）
第二步：原生质体融合（物、化法）
第三步：杂种细胞的筛选和培养
第四步：杂种植株的诱导与鉴定
正常小鼠免疫处理动物细胞的融合（物、化、生法）杂交瘤细胞的筛选与培养专一抗体检验阳性细胞培养单克隆抗体的提纯
用途和意义
克服远缘杂交的不亲和障碍，大大扩展杂交的亲本组合范围
应用：克服远缘杂交的不亲和障碍
制备单克隆抗体。诊断、治疗、预防疾病，例如“生物导弹”治疗癌症
2、 体细胞核移植技术
（1）将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。原理是动物细胞核的全能性。
（2）体细胞核移植过程：
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（3）体细胞核移植的应用：a、加速家畜的遗传改良进程，促进优良种群繁育；b、转基因克隆动物做生物反应器，生产珍贵的医用蛋白；c、克隆动物的组织、器官做移植的供体；d、研究克隆动物和克隆细胞可使人类更深入地了解胚胎发育及衰老过程。
体细胞核移植技术存在的问题：①胚胎成活率低；②动物健康存在问题；③克隆动物食品的安全性问题。
2．（2022高二下·龙岩期中）植物体细胞杂交技术在培育植物新品种等方面具有独特的优势，下面有关该技术的叙述正确的是（　　）
A．可在低渗溶液中用纤维素酶和果胶酶处理获得原生质体
B．可用聚乙二醇或灭活的病毒诱导两种植物原生质体融合
C．该技术获得的杂种植株均能表现出双亲所有的性状
D．该技术的优势是可以克服远缘杂交不亲和的障碍
【答案】D
【知识点】植物体细胞杂交的过程及应用
【解析】【解答】A、为防止原生质体吸水涨破，植物原生质体获得需在较高渗透压的溶液中用纤维素酶和果胶酶处理获得，A错误；
B、灭活的病毒可诱导动物细胞融合，不能诱导植物原生质体融合，B错误；
C、由于存在细胞分化，利用植物体细胞杂交获得的杂种植株，不一定能同时表现出两个亲本的所有性状，C错误；
D、植物体细胞杂交可以获得杂种植株，该技术能克服远缘杂交不亲和的障碍，D正确。
故答案为：D。

【分析】进行植物体细胞杂交时先用酶解法去除植物细胞的细胞壁，进行植物原生质体的融合，形成杂种细胞，再通过植物的组织培养将杂种细胞培育成杂种植株。不同种的植物之间具有生殖隔离，该种方法打破了不同种植物间的生殖隔离，克服了远缘杂交不亲和的障碍。
3．（2022高二下·洛阳期中）下列有关植物细胞工程的说法，不正确的是（　　）
A．植物培养基中常用的植物生长调节剂一般可以分为生长素类和细胞分裂素类
B．胡萝卜的愈伤组织继续培养，重新分化成根、芽等器官的过程叫再分化
C．同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因型不一定相同
D．培养的愈伤组织需要经过再分化产生特定的组织细胞后才能产生特定的细胞产物
【答案】D
【知识点】植物组织培养的过程
【解析】【解答】A、常用的植物生长调节剂可分为生长素类和细胞分裂素类，生长素类通常可以诱导植物组织生根、生芽，与细胞分裂素类搭配可以使高等植物向生芽、生根和保持愈伤组织状态生长，A正确；
B、愈伤组织是一团未分化的细胞，可以再分化为根、芽等器官，B正确；
C、同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因型不一定相同，如体细胞和生殖细胞（花药离体培养仅得到体细胞一半的染色体）培养得到的愈伤组织基因型就不同，C正确；
D、利用愈伤组织细胞的分裂和代谢产生所需要的产物，不需要经过再分化过程，即如果要收集细胞产物，只要培养到愈伤组织细胞的阶段就可以了，D错误。
故答案为：D。

【分析】植物组织培养
（1）原理是植物细胞的全能性。嫩枝或分化程度较低的部位的细胞分裂能力强、分化程度低，全能性容易表达，故外植体一般选用嫩枝或分化程度较低的部位成功率更高。
（2）植物组织培养过程是：离体的植物器言、组织或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养的流程为：制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→移裁→栽培。
（3）植物组织培养的注意事项：①接种时应注意的事项：a、接种室要消毒；b、无菌操作；接种时要防止交叉污染；c、接种完立刻盖好瓶口。②外植体接种前，需要将接种室、接种箱灭菌和对外植体消毒的操作：a、接种前一天，将接种室的四个角落用甲醛溶液和高锰酸钾重蒸。b、接种前1小时，在接种室内用喷雾器喷洒来苏水；桌椅也用来苏水擦拭；接种箱内用甲醛溶液和高锰酸钾重蒸。c、将灭菌室和接种箱内用紫外灯灭菌。d、接种前，操作者用肥皂清洗双手，擦干，再用酒精棉球擦拭双手。e、用次氯酸钠溶液将外植体消毒。
（4）在离体的植物器言、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，需要的条件：①消毒灭菌；②一定浓度的植物激素；③适宜的温度； ④充足的养料。
（5）影响植物组织培养的因素：①培养基配制；②外植体选取；③激素的运用；④消毒；⑤温度、pH、光照。
（6）植物组织培养中植物激素使用：物组织培养中关键性激素是生长素和细胞分裂素；同时使用生长素和细胞分裂素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。
初生代谢是生物生长和生存所必需的代谢活动，初线代谢物有糖类、脂质、蛋白质、核酸等。次生代谢物指植物代谢产生的一些一般认为不是植物基本生命活动所必需的产物，一类小分子有机化合物（如酚类、菇类和含氨化合物等）。

4．（2022高二下·衡水期中）下列关于动物细胞核移植技术的叙述，错误的是（　　）
A．在体细胞核移植过程中，普遍使用的去核方法是显微操作法
B．克隆动物所利用的细胞核可以是卵细胞或精子中的细胞核
C．核移植技术与干细胞诱导技术结合，可用于修补人体损伤的器官
D．由于体细胞分化程度高，因此体细胞核移植难度明显高于胚胎细胞核移植
【答案】B
【知识点】动物细胞核移植技术
【解析】【解答】A、体细胞核移植过程中去核的方法有显微操作法、梯度离心法或紫外线短时间照射等，A正确；
B、克隆动物所利用的细胞核应该为胚胎细胞或体细胞的细胞核，而卵细胞或精子中的细胞核只含有一半染色体，目前还没有人成功用卵细胞或精子中的细胞核来培育克隆动物的，B错误；
C、核移植技术与干细胞诱导技术结合，形成特定的组织和器官，可用于修补人体损伤的器官，C正确；
D、哺乳动物核移植包括胚胎细胞核移植和体细胞核移植，由于体细胞分化程度高，胚胎细胞的全能性高于体细胞，所以动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎核移植，D正确。
故答案为：B。

【分析】1、动物细胞核移植技术：将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。原理是动物细胞核的全能性。
2、体细胞核移植过程：

5．（2022高二下·衡水期中）第一只克隆猫“大蒜”的出生标志着我国在克隆领域的一大进步，下图为获得克隆猫的基本流程图，下列叙述错误的是（　　）

A．动物细胞培养过程中，需定期更换培养液以防止培养过程中细胞代谢产物积累
B．A猫卵母细胞去核的目的是使克隆猫的遗传物质主要来自有价值的供体细胞细胞核
C．将早期胚胎移植到代孕猫时一般选择发育良好、形态正常的桑葚胚或原肠胚
D．对受体C猫进行同期发情处理以便接受外源胚胎
【答案】C
【知识点】动物细胞培养技术；动物细胞核移植技术；胚胎移植
【解析】【解答】A、动物细胞培养时，需要定期更换培养液，以便清除细胞代谢产物，A正确；
B、对卵母细胞去核的目的是保证核遗传物质主要来自供体细胞，B正确；
C、将早期胚胎移植到代孕猫时一般选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚，C错误；
D、胚胎移植时需进行同期发情处理，使受体和供体处于相同的生理状况，有利于完成胚胎移植，D正确。
故答案为：C。

【分析】1、动物培养条件：
（1）无菌、无毒的环境：①消毒、灭菌；②添加一定量的抗生素；③定期更换培养液，以清除代谢废物。（2）营养物质：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等，还需加入血清、血浆等天然物质。（3）温度和pH。（4）气体环境：95%空气（细胞代谢必需的）和5%的CO2（维持培养液的pH）。
2、胚胎移植的基本程序主要包括：①对供、受体的选择和处理。选择遗传特性和生产性能优秀的供体，有健康的体质和正常繁殖能力的受体，供体和受体是同一物种。并用激素进行同期发情处理，用促性腺激素对供体母牛做超数排卵处理。②配种或人工授精。③对胚胎的收集、检查、培养或保存。配种或输精后第7天，用特制的冲卵装置，把供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来（也叫冲卵）。对胚胎进行质量检查，此时的胚胎应发育到桑葚胚或胚囊胚阶段。直接向受体移植或放入-196℃的液氨中保存。④对胚胎进行移植。⑤移植后的检查。对受体母牛进行是否妊娠的检查。
6．（2022高二下·衡水期中）“白菜-甘蓝”的培养过程如图所示，下列有关说法错误的是（　　）

A．杂种细胞与愈伤组织细胞中遗传物质相同
B．诱导原生质体的融合可用PEG或灭活的病毒
C．获取原生质体可用纤维素酶和果胶酶处理体细胞
D．愈伤组织形成白菜-甘蓝幼苗需添加一定量的植物激素
【答案】B
【知识点】植物体细胞杂交的过程及应用
【解析】【解答】A、愈伤组织细胞由杂种细胞脱分化而来，遗传物质未发生变化，A正确；
B、诱导植物原生质体融合不能用灭活的病毒，B错误；
C、原生质体是植物细胞去除细胞壁之后的结构，植物细胞壁的主要成分为纤维素和果胶，故可用纤维素酶和果胶酶对白菜和甘蓝的体细胞进行去壁处理，C正确；
D、再分化培养基需要加入一定量的生长素和细胞分裂素，D正确。
故答案为：B。

【分析】1、进行植物体细胞杂交时先用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除植物细胞的细胞壁，进行植物原生质体的融合，形成杂种细胞，再通过植物的组织培养将杂种细胞培育成杂种植株。不同种的植物之间具有生殖隔离，该种方法打破了不同种植物间的生殖隔离，克服了远缘杂交不亲和的障碍。 2、在离体的植物器言、组织或细胞脱分化形成愈伤组织和再分化的过程中，需要的条件：①消毒灭菌；②一定浓度的植物激素；③适宜的温度； ④充足的养料。

7．（2022·杭州模拟）为了研究治疗A型流感病毒感染引发肺部炎性损伤的方法，科研人员以免疫小鼠的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞为材料，制备了抗PA-X蛋白（PA-X蛋白是A型流感病毒复制需要的一种蛋白）的单克隆抗体。下列有关叙述错误的是（　　）
A．制备过程需要用到细胞融合、克隆培养法等技术
B．细胞培养液中可加入胰岛素等物质促进细胞克隆
C．制备过程中几次筛选都只获得产生目标抗体的杂交瘤细胞
D．制备过程可用胰蛋白酶处理使杂交瘤细胞脱落，随后稀释
【答案】C
【知识点】单克隆抗体的制备过程
【解析】【解答】A、单克隆抗体的制备需要将B细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，且对杂交瘤细胞进行筛选，最后对能产生单抗的细胞进行克隆培养，A正确；
B、胰岛素可以促进葡萄糖进入细胞，为细胞呼吸提供底物，为细胞分裂提供更多的能量，B正确；
C、第一次筛选是用HAT培养基获得杂交瘤细胞（B细胞和骨髓瘤细胞的融合细胞），两次抗体筛选：第一次是筛选能针对PA-X蛋白的杂交瘤细胞，第二次筛选是筛选针对PA-X蛋白特定部位（通常为5-6个氨基酸残基，为抗原决定簇），因此第一次筛选（HAT培养基）得到的有含有目标抗体的杂交瘤细胞，是混合细胞，也有能产生非目标抗体的细胞，C错误；
D、胰蛋白酶可以水解细胞间的蛋白质，使杂交瘤细胞脱落，更换新的培养液，D正确。
故答案为：C。

【分析】单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。
8．（2022·杭州模拟）用愈伤组织中的胚性细胞获得转基因植株的流程如图所示，其中①、②、③表示过程。下列叙述错误的是（　　）

A．①过程去除细胞壁可提高②过程中目的基因导入的成功率
B．①过程需要使用甘露醇，用NaCl或蔗糖也可能达到相同效果
C．除了图示途径，植物体细胞杂交也可打破远缘杂交不亲和的障碍
D．原生质体为球形，③过程中细胞胞质分裂的方式与动物细胞类似
【答案】D
【知识点】植物体细胞杂交的过程及应用；基因工程的操作程序（详细）
【解析】【解答】A、原生质体没有无细胞壁，①过程去除细胞壁，目的基因导入原生质体的成功率更高，A正确；
B、①过程需要使用甘露醇，为了防止原生质体破裂以及更好地酶解，因此一般用较高渗透压的甘露醇溶液，如果用NaCl或蔗糖，只要浓度适宜，也可能达到相同效果，B正确；
C、植物体细胞杂交可以将不同种类的植物细胞进行融合（原生质体融合）获得杂交植株，可以打破远缘杂交不亲和的障碍，C正确；
D、原生质体不能分裂，需要再生出细胞壁后才能进行分裂，因此③过程细胞分裂时会形成细胞板，进而形成细胞壁，与动物细胞向内凹陷形成环沟式分裂不同，D错误。
故答案为：D。

【分析】1、将目的基因导入受体细胞∶根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。①将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；②将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；③将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法（Ca2+处理法）。
2、愈伤组织是指原植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。胚性细胞就像胚胎细胞一样能转为该生物体的各种组织。
3、植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，去壁所用的是纤维素酶和果胶酶；原生质体融合所用的方法有物理法和化学法。物理法包括离心、振动、电激等，化学法一般是用聚乙二醇；再生细胞壁形成杂种细胞；脱分化形成愈伤组织，再分化形成植株，用选择培养基选择目的植株。不同种的植物之间具有生殖隔离，该种方法打破了不同种植物间的生殖隔离，克服了远缘杂交不亲和的障碍。
9．（2022·湖州模拟）原生质体的分离与培养在研究植物性状及其遗传特性的过程中起到了重要作用。下列叙述正确的是（　　）
A．通过观察胞质环流可检测原生质体是否具有活性
B．原生质体由细胞膜、液泡膜及两层膜之间的细胞质组成
C．原生质体仍有细胞全能性，且形态与正常的植物细胞一致
D．原生质体可在较高渗透压的聚乙二醇溶液中用纤维素酶和果胶酶制取
【答案】A
【知识点】质壁分离和复原；植物体细胞杂交的过程及应用
【解析】【解答】A、高等植物原生质体制备需要用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁，通过观察胞质环流可检测原生质体是否具有活性，如果可以看到胞质环流，说明原生质体具有活性，A正确；
B、原生质层是由细胞膜、液泡膜及两之间的细胞质组成，而原生质体是植物细胞去除细胞壁的剩余部分，包括细胞膜、细胞质和细胞核，B错误；
C、原生质体的制备主要是在高渗压溶液中加入细胞壁分解酶，将细胞壁剥离，结果剩下由原生质膜包住的类似球状的原生质体，形态和正常的植物细胞不同，原生质体有本物种全套遗传物质，所以具有全能性，可经组织培养得到植株，C错误；
D、原生质体的制备主要是在高渗压溶液中加入细胞壁分解酶，将细胞壁剥离，结果剩下由原生质膜包住的类似球状的原生质体，不用聚乙二醇溶液，D错误。
故答案为：A。

【分析】1、植物细胞有细胞壁，成熟的植物细胞有液泡，细胞膜和液泡膜以及之间的细胞质称作原生质层。
2、进行植物体细胞杂交时先用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去除植物细胞的细胞壁，进行植物原生质体的融合，形成杂种细胞，再通过植物的组织培养将杂种细胞培育成杂种植株。不同种的植物之间具有生殖隔离，该种方法打破了不同种植物间的生殖隔离，克服了远缘杂交不亲和的障碍。


10．（2022高二下·盐田月考）下图表示抗人体胃癌的单克隆抗体的制备过程。下列叙述错误的是(　　)

A．甲是能与抗人体胃癌抗体特异性结合的抗原
B．乙需通过人工诱导细胞融合才能获得
C．融合得到的细胞乙均能无限增殖
D．需对丙进行抗体检测，多次筛选后才可获得丁
【答案】C
【知识点】单克隆抗体的制备过程
【解析】【解答】A、由图示可知，甲是可以激发机体产生特异性抗体的抗原，A正确；
B、乙是融合后的杂交细胞，需要通过人工诱导过程，B正确；
C、融合后的杂合细胞有多种，只有含有杂交瘤细胞的杂合细胞才能无限增殖，C错误；
D、得到杂交细胞有多种，需要通过进一步的筛选得到特异性的杂交瘤细胞，D正确；
故答案为：C
【分析】制备单克隆抗体过程中的两次筛选：
第一次筛选：是获得杂交瘤细胞，即将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合，瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出B瘤融合的细胞。
第二次筛选：是将产生特定抗体的B瘤细胞用相应抗原检测的方法筛选出来。因为从体内取免疫过的B淋巴细胞时会取出很多种，形成的杂交瘤细胞也就很多种，所有筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。


11．（2022高二下·盐田月考）研究人员采用体细胞克隆技术培育克隆羊，其操作流程如图所示。下列叙述正确的是(　　)

A．X不能直接发育为个体的原因是细胞中的遗传物质不能表达
B．重组细胞要进行分裂和发育需经振荡或用灭活的病毒、PEG等激活
C．早期胚胎在丙体内能正常孕育是因为胚胎可与母体建立正常的生理和组织联系
D．经培育得到的丁羊，其细胞内的遗传物质与甲完全相同
【答案】C
【知识点】动物细胞核移植技术；动物体细胞克隆
【解析】【解答】A、X是细胞核，细胞核无法直接发育成个体的原因是没有完整的细胞结构做为基础，A错误；
B 、振荡或用灭活的病毒、PEG等是激活重组胚，B错误；
C、对供、受体进行同期发情处理，使受体的生殖器官的生理变化是相同的，为供体的胚胎移入受体提供了相同的生理环境，C正确；
D、 经培育得到的丁羊 ，重组细胞的细胞核来做甲，细胞质来自乙，D错误；
故答案为：C
【分析】（1）动物细胞核移植的原理是动物细胞核的全能性。
克隆动物不是对供体动物的100%的复制，原因是克隆动物的亲本有三个，即细胞核供体、卵母细胞细胞质供体和代孕母体。
①克隆动物细胞核基因来自体细胞核供体，因此，克隆动物的性状与体细胞核供体基本相同。
②克隆动物细胞质基因来自卵母细胞，因此，克隆动物的性状与卵母细胞供体部分相同。
③代孕母体没有为克隆动物提供遗传物质，因此，克隆动物的性状与代孕母体没有直接关系。
（2）胚胎移植
①移植对象：通过体外受精以及其他方式得到的胚胎。
②移植条件：同种的、生理状态相同的雌性动物体内。
③供体：在胚胎移植中提供胚胎的个体。
④受体：在胚胎移植中接受胚胎的个体。
⑤地位：通过任何一项技术（如转基因、核移植和体外受精等）获得的胚胎，都必须移植给受体才能获得后代。

12．（2022高二下·盐田月考）关于植物组织培养的再分化过程，说法错误的是(　　)
A．再分化过程中，不同细胞内合成了功能不同的特异性蛋白质
B．脱分化与再分化过程所使用的培养基主要是激素浓度及用量比例的不同
C．再分化过程在实验室或植物组织培养车间进行，需要避光处理
D．再分化过程中，核遗传物质没有发生改变，但mRNA有变化
【答案】C
【知识点】植物组织培养的过程
【解析】【解答】A、再分化的过程，是形成不同组织和器官的过程，不同细胞合成了不同的特异性蛋白质，A正确；
B、脱分化和再分化是两个完全不同的阶段，在这两个阶段中培养基中的激素浓度和用量比例是不同的，B正确；
C、再分化是形成不同组织和器官的过程，不需要避光出来，C错误；
D、植物组织培养是通过外植体通过脱分化和再分化进行有丝分裂而来的，属于无性生殖，核遗传物质不变，但是再分化过程中，不同细胞表达出的蛋白质的种类是不同的，对于的mRNA也有所不同，D正确；
故答案为：C
【分析】植物组织培养
（1）植物组织培养的原理：植物细胞的全能性。
（2）植物组织培养的过程：离体的植物组织、器官或细胞→脱分化愈伤组织→再分化试管苗→移植植物体。
组织培养过程中，在愈伤组织的诱导阶段往往要避光培养，有利于细胞脱分化产生愈伤组织(如果是在光照条件下，容易分化产生维管等组织，不利于产生大量的愈伤组织)。当愈伤组织分化出芽和叶时，一定要有光照，有利于叶片内叶绿素的合成
13．（2022高二下·盐田月考）玉米是一种主要的农作物，为了提高玉米的产量，科学家在玉米育种和栽培中作了大量的研究。如图是关于玉米培养的过程，据图判断下列说法中错误的是(　　)

A．从繁殖原理上分析，A→D属于无性生殖
B．植株D和G中的染色体组数不同
C．E→G不能体现细胞的全能性
D．E→F过程中获得的植株一般不用于大田生产
【答案】C
【知识点】植物组织培养的过程
【解析】【解答】A、图中的 A→D 玉米培养过程是植物组织培养的过程，是由植物根尖脱分化和在分化形成的，属于无性生殖，A正确；
B、植株D是由根尖细胞，即植物的体细胞发育而来的；G是由花药离体培养得到的，花药属于配子，染色体是体细胞的一半，B正确；
C、由花药直接通过花药离体培养得到的植物，体现了植物细胞的全能性，C错误；
D、 E→F过程中获得的植株属于单倍体，单倍体高度不育，因此不用于大田生产，D错误；
故答案为：C
【分析】植物组织培养技术与花药培养技术的比较：
项目
相同点
不同点
植物组织培养技术
离体的植物组织经分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移植
外植体是体细胞，染色体无需加倍
花药培养技术
取材是花药，培养的为单倍体，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种
14．（2022高二下·盐田月考）如图是通过植物细胞工程技术获得紫杉醇的途径，下列叙述正确的是(　　)

A．该途径依据的原理是植物细胞具有全能性
B．过程①需控制好培养基中植物激素的比例
C．经过程①细胞的形态和结构未发生变化
D．过程③需使用固体培养基，有利于细胞增殖
【答案】B
【知识点】植物组织培养的过程；植物细胞工程的应用；植物组织培养的影响因素
【解析】【解答】 ① 是脱分化、 ②是再分化、 ③ 是细胞的增殖过程。
A、 细胞全能性以细胞发育成个体为标志，而图中并没有形成完整植物体 ，A错误；
B、植物细胞工程中需要用到生长素和细胞分裂素，两者的比例适中有利形成愈伤组织，B正确；
C、 ①是脱分化，细胞的形态和结构发生了改变，C错误；
D、③是细胞增殖的过程，为了方便提取细胞分泌物，需要使用液体培养基，D错误；
故答案为：B
【分析】（1）植物细胞工程技术的主要过程如下：
①外植体：用于植物组织培养的离体的植物器官、组织或细胞。
②脱分化：已经分化的细胞，在一定激素和营养等条件的诱导下，失去其特有的结构和功能，转变成未分化的细胞。
③愈伤组织：脱分化而形成的不定形的薄壁组织团块。
④再分化：愈伤组织重新分化成芽、根等器官的过程。
（2）生长素和细胞分裂素的用量以及对应的效果：
生长素/细胞分裂素的比值
作用效果
比值高时
促进根的分化、抑制芽的形成
比值低时
促进芽的分化、抑制根的形成
比值适中时
促进愈伤组织的形成
15．（2022高二下·盐田月考）如图为动物细胞融合技术过程图，相关叙述错误的是(　　)

A．图中C为灭活的病毒，此外还可用物理或化学方法诱导动物细胞融合
B．图中①过程发生了细胞膜的融合，体现了细胞膜的选择透过性
C．图中②过程表示细胞核融合形成杂种细胞
D．动物细胞融合技术可用于制备单克隆抗体
【答案】B
【知识点】动物细胞工程的常用技术与应用
【解析】【解答】A、灭活的病毒诱导动物细胞进入融合，属于生物方法，除此之外利用物理和化学方法也可以诱导细胞融合，A正确；
B、细胞融合的过程，体现了细胞膜的结构特点：细胞膜的流动性，B错误；
C、两个细胞融合后形成的是新的杂种细胞，C正确；
D、动物细胞融合技术是单克隆抗体技术的基础，D正确；
故答案为：B
【分析】动物细胞融合
（1）动物细胞融合的定义
动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。
（2）动物细胞融合的原理
动物细胞融合的原理与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒、电刺激等。
（3）动物细胞融合的意义
克服了远缘杂交的不亲和性，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物生物新品种培育的重要手段。

16．下列有关植物细胞工程应用的叙述，不正确的是（　　）
A．利用组织培养技术培育脱毒苗，获得具有抗病毒的新品种
B．组织培养技术获得的子代可保持亲本的优良性状
C．利用细胞培养技术获得紫草素，实现了细胞产物的工厂化生产
D．利用植物体细胞杂交技术获得“白菜一甘蓝”，能克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍
【答案】A
【知识点】植物细胞工程的应用
【解析】【解答】A、因为分生组织的病毒极少，甚至没有病毒，所以将分生组织（如根尖、茎尖）进行离体培养能获得脱毒植株，但不能获得抗病毒的新品种，A错误；
B、组织培养技术获得的子代，由于该技术属于无性生殖，因此能保持亲本的优良性状，B正确；
C、组织培养技术除了在农业生产上的应用外，还可广泛应用于另一个重要的领域，即细胞产物的工厂化生产，如利用细胞培养技术可大量获得紫草素，C正确；
D、白菜和甘蓝不属于同一物种，它们之间存在生殖隔离，因此利用植物体细胞杂交技术培育的“白菜一甘蓝”，能够克服不同生物远缘杂交不亲和的障碍，D正确。
故答案为：A。

【分析】植物组织培养技术已经得到广泛应用，包括：植物繁殖的新途径（如微型繁殖、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（如单倍体育种、突变体的应用）、细胞产物的工厂化生产（如从培养的红豆杉细胞中提取抗肿瘤药物紫杉醇）。
17．束顶病毒是香蕉的严重病害之一，常用感病植株的茎尖作外植体以获得脱毒苗。科研人员进行相关实验的结果如下表所示，叙述错误的是（　　）
茎尖预处理
茎尖数量
成活茎尖数
成活率（%
脱毒茎尖数
脱毒率（%）
未低温保存
32
30
93.75
8
26.67
超低温保存
60
33
55.00
20
60.61
A．获得脱毒苗利用植物细胞具有全能性的原理
B．培养基中常添加生长素、细胞分裂素等激素
C．结果显示超低温保存茎尖可以提高脱毒率
D．用光学显微镜观察病毒颗粒检测茎尖脱毒率
【答案】D
【知识点】植物组织培养的过程
【解析】【解答】A、植物组织培养技术的原理是植物细胞具有全能性，A正确；
B、培养过程中生长素和细胞分裂素的比例促进植物细胞的脱分化和再分化，B正确；
C、由表可知，超低温保存后脱毒率远高于未超低温保存，C正确；
D、光学显微镜无法观察到病毒，D错误。
故答案为：D。

【分析】1、植物组织培养
（1）原理是植物细胞的全能性。嫩枝或分化程度较低的部位的细胞分裂能力强、分化程度低，全能性容易表达，故外植体一般选用嫩枝或分化程度较低的部位成功率更高。
（2）植物组织培养过程是：离体的植物器言、组织或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，然后再分化生成根、芽，最终形成植物体。植物组织培养的流程为：制备MS培养基→外植体消毒→接种→培养→移裁→栽培。
（3）植物组织培养的注意事项：①接种时应注意的事项：a、接种室要消毒；b、无菌操作；接种时要防止交叉污染；c、接种完立刻盖好瓶口。②外植体接种前，需要将接种室、接种箱灭菌和对外植体消毒的操作：a、接种前一天，将接种室的四个角落用甲醛溶液和高锰酸钾重蒸。b、接种前1小时，在接种室内用喷雾器喷洒来苏水；桌椅也用来苏水擦拭；接种箱内用甲醛溶液和高锰酸钾重蒸。c、将灭菌室和接种箱内用紫外灯灭菌。d、接种前，操作者用肥皂清洗双手，擦干，再用酒精棉球擦拭双手。e、用次氯酸钠溶液将外植体消毒。
（4）在离体的植物器言、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，需要的条件：①消毒灭菌；②一定浓度的植物激素；③适宜的温度； ④充足的养料。
（5）影响植物组织培养的因素：①培养基配制；②外植体选取；③激素的运用；④消毒；⑤温度、pH、光照。
（6）植物组织培养中植物激素使用：物组织培养中关键性激素是生长素和细胞分裂素；同时使用生长素和细胞分裂素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。
2、植物组织培养技术已经得到广泛应用，包括：植物繁殖的新途径（如微型繁殖、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（如单倍体育种、突变体的应用）、细胞产物的工厂化生产（如从培养的红豆杉细胞中提取抗肿瘤药物紫杉醇）。
18．在细胞工程的操作过程中，选择合适的生物材料是成功的关键。下列选择不合理的是（　　）
A．外植体一般取自成熟组织或器官，容易诱导形成愈伤组织
B．选择幼龄动物的组织进行动物细胞培养，有利于获得大量细胞
C．选择胚胎细胞作为核供体进行核移植，可提高克隆动物的成功率
D．选择茎尖、根尖等组织培养得到的脱毒苗可提高产量和品质
【答案】A
【知识点】植物组织培养的过程；动物细胞培养技术；动物细胞核移植技术；植物细胞工程的应用
【解析】【解答】A、外植体一般取自分裂能力强的分生组织，容易诱导形成愈伤组织，A错误；
B、幼龄动物细胞分化程度低，分裂旺盛，利于培养以获得大量细胞，B正确；
C、胚胎细胞分化程度低，全能性高，用它做核供体进行核移植，可提高克隆动物的成功率，C正确；
D、植物的根尖、茎尖、芽尖部位几乎不含病毒，因此采用茎尖、根尖等组织培养得到的脱毒植物可提高产量和品质，D正确。
故答案为：A。

【分析】1、动物细胞核移植是指将动物的一个细胞的细胞核移入一个去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为克隆个体。
2、选用去核卵（母）细胞的原因：卵（母）细胞大，容易操作；卵（母）细胞质多，营养丰富；含有促使细胞全能性表达的物质。
3、植物组织培养技术的应用：植物繁殖的新途径（微型繁殖、作物脱毒、人工种子）、作物新品种的培育（单倍体育种、突变体的利用）、细胞产物的工厂化生产。
二、综合题
19．（2022·浙江）回答下列（1）、（2）小题：
（1）回答与产淀粉酶的枯草杆菌育种有关的问题：
Ⅰ.为快速分离产淀粉酶的枯草杆菌，可将土样用　 　制成悬液，再将含有悬液的三角瓶置于80℃的　 　中保温一段时间，其目的是　 　。
Ⅱ.为提高筛选效率，可将菌种的　 　过程与菌种的产酶性能测定一起进行：将上述悬液稀释后涂布于淀粉为唯一碳源的固体培养基上培养，采用　 　显色方法，根据透明圈与菌落直径比值的大小，可粗略估计出菌株是否产酶及产酶性能。
Ⅲ.为了获得高产淀粉酶的枯草杆菌，可利用现有菌种，通过　 　后再筛选获得，或利用转基因、　 　等技术获得。
（2）回答与植物转基因和植物克隆有关的问题：
Ⅳ.在用农杆菌侵染的方法进行植物转基因过程中，通常要使用抗生素，其目的一是抑制　 　生长，二是筛选转化细胞。当选择培养基中抗生素浓度　 　时，通常会出现较多假阳性植株，因此在转基因前需要对受体进行抗生素的　 　检测。
Ⅴ.为提高培育转基因植株的成功率，植物转基因受体需具有较强的　 　能力和遗传稳定性。对培养的受体细胞遗传稳定性的早期检测，可通过观察细胞内　 　形态是否改变进行判断，也可通过观察分裂期染色体的　 　，分析染色体组型是否改变进行判断。
Ⅵ.植物转基因受体全能性表达程度的高低主要与受体的基因型、培养环境、继代次数和　 　长短等有关。同时也与受体的取材有关，其中受体为　 　时全能性表达能力最高。
【答案】（1）无菌水；水浴；杀死不耐热微生物；分离；KI-I2；人工诱变；原生质体融合
（2）农杆菌；过低；敏感性；再生；细胞核；形态特征和数量；培养时间；受精卵
【知识点】微生物的分离和培养；培养基对微生物的选择作用；植物体细胞杂交的过程及应用；基因工程的操作程序（详细）
【解析】【解答】（1）Ⅰ.枯草杆菌分泌淀粉酶的最适温度为50-75℃，为快速分离产淀粉酶的枯草杆菌，可将土样用无菌水制成悬液，再将含有悬液的三角瓶置于80℃的水浴中保温一段时间，来杀死不耐热的微生物。
Ⅱ.为提高筛选效率，可将菌种筛选程与菌种的产酶性能测定一起进行：利用淀粉遇碘液变蓝的原理，用稀释涂布平板法可以分离枯草杆菌，将上述悬液稀释后涂布于淀粉为唯一碳源的固体培养基上培养，并且在培养基中添加KI-12，枯草杆菌合成的淀粉酶能利用淀粉，由于淀粉被分解在菌落周围会出现透明圈，比较透明圈与菌落直径比值的大小，比值大的说明该菌株产酶性能较高。
Ⅲ.为了获得高产淀粉酶的枯草杆菌，可利用现有菌种，通过诱变育种、基因工程育种或者细胞工程的方法进行菌种选育。
故答案为：无菌水；水浴；杀死不耐热微生物；分离；KI-I2；人工诱变；原生质体融合。
（2）Ⅳ.基因工程中，利用农杆菌转化法将目的基因导入到受体细胞中，植物组织培养时通常使用抗生素，抗生素可以抑制其他杂菌的生长，并且农杆菌Ti质粒上含有抗生素的抗性基因，可以对受体细胞进行筛选。但是农杆菌使用过程中需要注意当培养基中抗生素浓度过低时，没有抗性的细胞也可能存活下来，而出现假阳性，所以在进行转化之前要对抗生素的敏感性检测。
Ⅴ.转基因植物需要经过组织培养之后形成植株，组织培养过程需要经过脱分化和再分化过程，所以受体细胞需要具有较强的再生能力和和遗传稳定性。对培养的受体细胞遗传稳定性的早期检测，可通过观察细胞核形态是否改变进行判断，也可以直接在光学显微镜下观察分裂期染色体的形态特征和数量，分析染色体组型是否改变。
Ⅵ.基因工程中受体细胞的全能性越高，越易成功。植物转基因受体全能性表达程度的高低主要与受体的基因型、培养环境、继代次数和培养时间长短等有关。全能性越高，越易成功，在植物细胞中受精卵的全能性最高。
故答案为：农杆菌；过低；敏感性；再生；细胞核；形态特征和数量；培养时间；受精卵。
【分析】1、培养基为微生物提供生长、繁殖和积累代谢产物的营养物质。营养物质归纳为碳源、氨源、生长因子、无机盐和水。培养基按物理性质可分为固体培养基和液体培养基，液体培养基中加入凝固剂可以制成固体培养基；固体培养基一般用于微生物的鉴别、分离和计数，液态培养基常用于扩大化生产，观察细菌运动。根据化学成分分为合成培养基、天然培养基等；根据用途分为选择培养基、鉴别培养基。
2、选择培养原理：（1）利用营养缺陷选择培养基进行的选择培养：不加含碳有机物的无碳培养基分离自养型微生物，无氮培养基分离自生固氮微生物；（2）利用微生物(目的菌）对某种营养物质的特殊需求，使该营养物质成为某类微生物的唯一供给者：石油作为唯一碳源的培养基分离出能消除石油污染的微生物，尿素为唯一氮源的培养基分离分解尿素的微生物；（3）在完全培养基中加入某些化学物质，利用加入的化学物质抑制部分微生物生长或利于部分微生物生长：加入青霉素等抗生素分离出酵母菌和霉菌等真菌，同时抑制细菌的生长，加入高浓度的食盐分离耐高温的微生物；（4）利用培养条件进行的选择培养：在高温环境中培养分离耐高温的微生物，将培养基pH调至较低水平分离耐酸的微生物，在无氧环境中培养分离厌氧微生物和兼性厌氧微生物。
3、植物体细胞杂交时先用酶解法去除植物细胞的细胞壁，进行植物原生质体的融合，形成杂种细胞，再通过植物的组织培养将杂种细胞培育成杂种植株。植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，去壁所用的是纤维素酶和果胶酶；原生质体融合所用的方法有物理法和化学法。物理法包括离心、振动、电激等，化学法一般是用聚乙二醇；再生细胞壁形成杂种细胞；脱分化形成愈伤组织，再分化形成植株，用选择培养基选择目的植株。不同种的植物之间具有生殖隔离，该种方法打破了不同种植物间的生殖隔离，克服了远缘杂交不亲和的障碍。在离体的植物器言、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，需要的条件：①消毒灭菌；②一定浓度的植物激素；③适宜的温度； ④充足的养料。
4、基因工程技术的基本步骤︰
（1）目的基因的获取︰方法有从基因文库中获取（基因组文库包含某种生物所有的基因，部分基因文库包含某种生物的部分基因，如：CDNA文库）、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建︰基因表达载体的构建：①过程：用同一种限制酶切割目的基因和运载体，再用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子。②目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用。③基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。a、启动子在基因的首段，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始；b、终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束；c、标记基因便于目的基因的鉴定和筛选。
( 3 )将目的基因导入受体细胞∶根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。①将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；②将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；③将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法（Ca2+处理法）。
（4）目的基因的检测与鉴定∶分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定︰抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
5、农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的DNA上。根据农杆菌的这一特点，如果将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上，通过农杆菌的转化作用，就可以把目的基因整合到植物细胞中染色体的DNA上。转化过程：目的基因插入Ti质粒的T-DNA上农杆菌一导入植物细胞一目的基因整合到植物细胞染色体上一目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。
20．（2022高二下·浙江月考）新型冠状病毒可通过表面的刺突蛋白（S蛋白）与人呼吸道黏膜上皮细胞的ACE2受体结合，侵入人体，引起肺炎。单克隆抗体可阻断病毒的黏附或入侵，抗体药物的研发已成为治疗新冠肺炎的研究热点。如图是抗新冠病毒S蛋白单克隆抗体制备流程示意图，回答下列问题：

（1）为了获得大量的淋巴细胞，需要以小鼠的脾脏小组织块为材料制备单细胞悬液，并进行传代培养，该过程中用到的酶通常是　 　酶，培养过程中细胞往往具有　 　的特点。
（2）图中的促融剂常用的有　 　。
（3）单克隆抗体制备经过了两次筛选，经HAT培养基筛选得到的细胞为　 　细胞。因为同一种病原体可能激活　 　细胞，还需经过阳性检测才能获得产生特定抗体的杂交瘤细胞，阳性检测所依据的基本原理是　 　。
（4）阳性细胞扩大培养时，可将杂交瘤细胞注射到小鼠　 　内增殖，也可将杂交瘤细胞在体外培养液中培养，体外培养细胞时首先应保证其处于　 　的环境，其次还要有适宜的温度、pH、营养和气体环境等。
（5）抗S蛋白的单克隆抗体能准确诊断出某人是否感染新冠病毒，原因是　 　。诊断是否为新冠肺炎感染者，还可采用咽拭子取样检测，该技术检测的物质是　 　。
【答案】（1）胰蛋白酶（胶原蛋白酶）；贴附生长、接触抑制（写对一个即可）
（2）灭活的仙台病毒、聚乙二醇（PEG）（写对一个即可）
（3）杂交瘤细胞；多种B；抗原-抗体杂交（抗原抗体反应）
（4）腹腔；无菌、无毒（写出无菌即可）
（5）抗S蛋白单克隆抗体纯度高、特异性强，能准确识别抗原的细微差异并和抗原发生特异性结合；新冠病毒的核酸（RNA）
【知识点】动物细胞培养技术；单克隆抗体的制备过程；单克隆抗体的优点及应用
【解析】【解答】（1）将小鼠的脾脏小组织块为材料制备单细胞悬液，利用的是胰蛋白酶；动物细胞培养的过程往往具有贴附生长、接触抑制的特点。
故填：胰蛋白酶；贴附生长、接触抑制。
（2）动物细胞融合常用的方法有物理，化学和生物的方法，例如：灭活的仙台病毒、聚乙二醇。
故填：灭活的仙台病毒、聚乙二醇（PEG） 。
（3） 单克隆抗体制备经过了两次筛选，经HAT培养基筛选得到的细胞杂交骨髓瘤细胞，剔除了融合后是瘤-瘤、B-B的细胞，只利用抗原来来激活B细胞的时，可能同种病原体可能激活多种B细胞，要最终得动目的抗体的杂交瘤细胞，还需要利用抗原-抗体特异性结合的原理俩检测杂交瘤细胞。
故填：杂交瘤细胞；多种B；抗原-抗体杂交。
（4）阳性细胞扩大培养时，可将杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔内增殖，还可以通过动物细胞培养，体外培养的过程中要保证环境的无菌和无毒的环境，并保证其培养条件的适宜。
故填：腹腔 ； 无菌、无毒 。
（5） 抗S蛋白的单克隆抗体能准确诊断出某人是否感染新冠病毒 ，其原理是抗S蛋白单克隆抗体纯度高、特异性强，能准确识别抗原的细微差异并和抗原发生特异性结合；新冠病毒是RNA病毒，诊断是否为新冠肺炎感染者，采用咽拭子取样检测新冠病毒的遗传物质即可。
故填：抗S蛋白单克隆抗体纯度高、特异性强，能准确识别抗原的细微差异并和抗原发生特异性结合 ； 新冠病毒的核酸（RNA） 。
【分析】（1）动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：
比较项目
细胞融合的方法
植物体细胞杂交
物理：离心、电刺激、振动；化学：聚乙二醇
动物细胞工程
物理：离心、电刺激、振动；化学：聚乙二醇；生物：灭活的病毒
（2）单克隆抗体
①抗体与单克隆抗体
一个 B 淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。
由一个杂交瘤细胞克隆所产生的，针对单一抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体。
②单克隆抗体的制备过程

注意：一步筛选是选择杂交瘤细胞，二步筛选是选择特异性的杂交瘤细胞。
筛选得到的特异性的杂交瘤细胞可以通过体外细胞培养或注射到小鼠腹腔内进行增殖。
③杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。
④单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。
（3）动物细胞培养需要满足以下条件：
①无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
②营养：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。
③温度：适宜温度：哺乳动物多是 36.5℃+0.5℃；pH：7.2～7.4。
④气体环境：95%空气+5%CO2。O2 是细胞代谢所必需的，CO2 的主要作用是维持培养液的 pH。