高中生物沪科版 (2019)选修3第一章 发酵工程利用微生物进行规模化生产第三节 测定微生物的数量一、间接计数法习题

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【优选】一、间接计数法-2同步练习一．单项选择1．下图中甲和乙是两种微生物接种方法的部分操作过程或结果，下列有关叙述错误的是（    ）A．甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液B．乙中接种环需要灼烧6次C．乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端D．甲．乙操作中只有甲可以用于微生物的计数，结果往往比活菌的实际数目大2．.研究小组利用微生物实验操作技术来探究某池塘中大肠杆菌数量，下列叙述正确的是(　　)组别部分操作过程．结论I进行涂布平板操作时，将10 ml菌液滴加到培养基的表面后，再用灭菌后的涂布器推匀II涂布完成后，在培养皿上盖上做标记，并将培养皿倒置III重复实验获得了四个平板，其中的菌落数分别为212．381．157．183，则平均值应为184VI实验组平板上有38个菌落，空白对照组有5个．则"38- 5"作为池塘中大肠杆菌数量计算的依据 A. Ⅰ B. Ⅱ C. Ⅲ D. Ⅳ3．苯甲酰肼是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯甲酰肼的微生物。为了降解苯甲酰肼，研究人员筛选获得了能降解利用苯甲酰肼的菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品。下列相关叙述错误的是（    ）A．使用平板划线法可以在⑥上获得纯化的目的菌B．如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C．图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯甲酰肼作为碳源D．微生物培养前，需对培养基和培养器皿进行消毒处理4．硝化细菌广泛存在子通气性较好的土壤中，其部分代谢反应如图所示，下列关于硝化细菌的培养条件的描述正确的是（　　）A．碳源为葡萄糖 B．培养时需隔绝空气C．氮源是氨气 D．培养时需冷藏5．下图是平板划线法接种微生物的示意图，下列叙述正确的是（    ）A．该接种过程一般需灼烧接种环5次B．在第5区域中才可以得到单个菌体形成的菌落C．划线时，在火焰附近将皿盖打开一条缝隙D．该接种方法也能计数培养液中微生物数量6．下列关于微生物实验操作的叙述，正确的是（    ）①培养微生物的试剂和器具都要进行灭菌②接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧③倒平板时，倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖④平板划线操作中，随着划线次数的不断增加其接种环上的菌种会越来越少⑤高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖⑥为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落．接种后的培养皿要倒置⑦使用过的培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃⑧配培养基．倒平板．接种需要在酒精灯火焰旁进行A．①②④⑦ B．①③⑤⑧ C．②④⑥⑧ D．③④⑥⑦7．选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理．化学抗性而设计的培养基，用于分离所需要的微生物。为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为（    ）A．含青霉素的培养基．含氨的无机培养基B．伊红美蓝培养基．含青霉素的培养基C．含青霉素的培养基．伊红美蓝培养基D．含氨的无机培养基．含青霉素的培养基8．某同学运用划线法分离纯化大肠杆菌。下列叙述正确的是（    ）A. 培养基灭菌时，高压蒸汽灭菌锅压力达到1kg/cm2后，需持续15minB. 制作平板时，需将培养基均匀地倒在培养皿的整个底部C. 接种时，每次划线前，接种环均需蘸一次菌液D. 培养时，需将培养皿倒置于4℃的冰箱中9．如图是微生物平板划线示意图，下列叙述正确的是（    ）A．用酒精对接种环进行消毒即可B．只有在5区才可能得到单菌落C．每次划线前后都要对接种环灭菌D．划线力度要大，保证划线清晰10．自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是(    )A．碳源 B．氮源 C．无机盐 D．特殊营养物质11．日前微博传言手机屏幕比马桶按钮单位面积上的细菌多，为辨别真伪，两电视台利用微生物培养技术进行实验，过程及结果如下。下列叙述错误的是（    ）A．培养细菌时，需将培养基的pH调至酸性B．为排除实验操作过程中产生的污染，需要设置对照组C．本实验采用稀释涂布平板法接种D．两个报道结果不同，可能是因为取样环境不同   
12．下列有关常见无菌操作的叙述，错误的是（    ）A．用酒精擦拭实验者双手 B．玻璃器皿(吸管．培养皿)用酒精擦拭C．实验操作应在酒精灯火焰附近进行 D．用氯气对水源进行消毒13．进行“微生物的分离与培养”实验时，叙述正确的是(　　)A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上14．图是高压蒸汽灭菌锅及其局部剖面示意图，其中甲．乙．丙依次指（    ）A．安全阀．排气阀．温度表 B．排气阀．安全阀．压力表C．安全阀．排气阀．压力表 D．排气阀．安全阀．温度表15．下列有关用平板划线法和稀释涂布平板法纯化培养大肠杆菌的叙述，正确的是（    ）①都需要用固体培养基②都需要使用接种针进行接种③都需要在火焰旁进行接种④都可以用菌落数来计数活菌A．①② B．①③ C．②④ D．③④16．对下列实验用具或实验材料进行灭菌时，可以依次采用灼烧灭菌．干热灭菌．紫外线照射．高压蒸汽灭菌的是（    ）A．培养皿．吸管．接种箱．培养基B．吸管．接种环．培养基．接种箱C．接种环．培养基．吸管．接种箱D．接种环．培养皿．接种箱．培养基17．有关纯化大肠杆菌实验操作的叙述，错误的是A．在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液B．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物C．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种D．划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者18．研究小组利用稀释涂布平板法来探究某河流中大肠杆菌的数量。每一个浓度涂布四个平板，并且设置空白对照组。下列关于操作步骤的叙述正确的是（    ）A．涂布前，将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，燃尽后还要冷却8～10sB．涂布完成后，在培养皿的皿盖上做标记，以避免混淆，并将培养皿倒置培养C．计算平板上的菌落数时，四个培养皿上的菌落数无论多少，都要全部平均D．若空白对照组上有5个菌落，则实验组数据基础上减去5，以获得最准确数据
参考答案与试题解析1．【答案】D【解析】试题分析：2．【答案】C【解析】A．进行涂布平板操作时，取少量菌液（不超过0.1ml）滴加到培养基表面，再用灭菌后的涂布器推匀，A错误；B．涂布完成后，在培养皿底做好标记，并将培养皿倒置，B错误；C．计数时一般选择菌落数在30-300的平板进行计数，选项中各菌落数符合要求，求平均值即可，C正确；D．设置空白对照组的目的是判断有无杂菌污染，题目中空白对照组有5个菌落，说明在培养过程中有杂菌污染，应重新开展实验，D错误。故选C。3．【答案】D【解析】试题分析：从土壤中筛选获得了只能降解利用苯甲酰肼的细菌菌株，则培养微生物的培养液中只能提供苯甲酰肼作为唯一的碳源。依据图示可知，③是筛选，④⑤是纯化培养，⑥是获得单个菌落。解答：A．分析图示，可知经过纯化培养后，使用平板划线法可以在培养基上获得单个菌落，A正确；B．如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法，B正确；C．本次培养的目的就是筛选讲解利用苯甲酰肼的细菌菌株，图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯甲酰肼作为唯一碳源，C正确；D．微生物培养前，需对培养基和培养器皿进行灭菌处理，D错误；故选D。4．【答案】C【解析】试题分析：培养基中需要具备碳源．氮源．无机盐．水等，另外在考虑温度．PH等条件。土壤中的硝化细菌能进行化能合成作用，硝化细菌能利用氨气氧化释放的能量把二氧化碳和水合成有机物，属于自养生物，因此选择提供无机碳源．无机氮源。解答：A．土壤中的硝化细菌能进行化能合成作用，培养基中不需要有机碳源，其碳源为二氧化碳，A错误；B．硝化细菌能利用NH3氧化释放的能量把二氧化碳和水合成有机物，所以培养时不能隔绝空气，B错误；C．硝化细菌的培养过程中氮源是氨气，C正确；D．硝化细菌能利用NH3氧化释放的能量把二氧化碳和水合成有机物，需要酶的催化作用，所以培养时需要适宜的温度，D错误。故选C。5．【答案】C【解析】试题分析：平板划线法是分离细菌常用的方式，通过不断的划线使得原本聚集的细菌分散开，形成独立的菌株。解答：A．由图可知：该平板划了5次线，故需要灼烧接种环6次，A错误；
B．由题图可知，5区域是最后一个区域，有可能在5区域获得所需要的菌落，在4区域也有可能得到所需要的菌落，B错误；
C．划线时，为防止空气中微生物的污染，在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，划线后再通过酒精灯火焰，C正确；
D．该接种方法属于平板划线法，不能计数培养液中微生物数量，D错误。
故选C。6．【答案】A【解析】试题分析：获得纯净微生物的关键是防止外来杂菌的污染。无菌操作主要包括：①对实验操作的空间．操作者的衣着和手，惊喜清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿．接种用具和培养基进行灭菌。③为避免周围环境中的微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。解答：①培养微生物的试剂和器具都要进行灭菌，①正确；②接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧，②正确；③倒入培养基后立即盖上培养皿，冷却后将平板倒过来放置，③错误；④平板划线操作中，随着划线次数的不断增加其接种环上的菌种会越来越少，④正确；⑤高压灭菌加热结束时，应等压力表的压力降到零时，再打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，⑤错误；⑥接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后再挑取菌落，⑥错误；⑦使用过的培养基应进行高压蒸汽灭菌处理后再丢弃，⑦正确；⑧配培养基不需要在酒精灯的火焰旁进行，⑧错误。综上所述，①②④⑦正确，其他错误。故选A。7．【答案】A【解析】试题分析：选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理．化学抗性而设计的培养基．利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来．酵母菌属于异养兼性厌氧型真核生物，硝化细菌属于自养需氧型原核生物。解答：A．细菌对含青霉素培养基敏感，酵母菌则不敏感，可以筛选酵母菌，硝化细菌可以将环境中的氨氧化为硝酸根而利用其释放的能量合成有机物，故含氨的无机培养基可以筛选硝化细菌，A正确；B．伊红美蓝培养基是专一鉴别大肠杆菌的培养基，硝化细菌对青霉素敏感，含青霉素培养基不能筛选硝化细菌，B错误；C．细菌对含青霉素培养基敏感，酵母菌则不敏感，可以筛选酵母菌，伊红美蓝培养基是专一鉴别大肠杆菌的培养基，C错误；C．酵母菌是异养生物，不能用含氨的无机培养基筛选，硝化细菌对青霉素敏感，含青霉素培养基不能筛选硝化细菌，D错误。故选A。8．【答案】A【解析】A．培养基灭菌时，高压蒸汽灭菌锅压力达到1kg/cm2后，持续15-20min，可达到灭菌目的，A正确；B．制作平板时，将熔化的培养基倒进培养皿里，让其自然冷却，就会凝固形成固体培养平板，不需将培养基均匀地倒在培养皿的整个底部，B错误；C．接种环在第一次划线时需蘸一次菌液，其余则从上次划线末端开始划线，C错误；D．大肠杆菌的培养在37℃最适合，不能将其倒置于4℃的冰箱中，D错误。故选A。9．【答案】C【解析】试题分析：平板划线的操作的基本步骤是：（一）．右手持接种环，经火焰灭菌，待凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口过火焰，将以冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，将试管口过火焰丙塞上棉塞；（二）．左手斜持琼脂平板，皿盖打开一条缝，右手于火焰近处將接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面；（三）．烧灼接种环，杀灭环上残留菌液，待冷却（是否冷却，可先在培养基边缘处试触，若琼脂溶化，表示未凉，稍等再试），从第一区域划线的末端开始往第二区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区相连；（四）．将平板倒置，放入培养箱中培养。解答：A．接种环采用灼烧灭菌的方法进行灭菌，A错误；B．由题图可知，5区域是最后一个区域，有可能在5区域获得所需要的菌落，在4区域也有可能得到所需要的菌落；B错误；C．每次划线前后都要对接种环灭菌，C正确；D．划线力度不能过大，避免将培养基划破，D错误。故选C。10．【答案】A【解析】试题分析：解答：自养型微生物与异养型微生物的主要差别在于自养型微生物可以利用无机碳合成自身的有机物，用于各项生命活动；而异养型微生物只能以有机碳作为碳源，所以两种培养基的主要差别在于碳源，A正确。故选A。11．【答案】A【解析】试题分析：稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基表面形成单个菌落。设计对照组实验，既可排除无关变量对实验结果的影响，又可增加实验结果的可信度和说服力。解答：A．培养细菌时需将pH调至中性或微碱性，A错误；B．需要设立对照组，因为不能排除实验操作．培养过程中．灭菌中等环节是否产生污染，而设置对照组则可以体现是否存在污染和污染程度，以确保实验过程的可靠，B正确；C．由图可知，该实验的接种方法为稀释涂布平板法，C正确；D．取样环境不同．取样时间不同．取样量的差异都可能影响最终的实验结果，D正确。故选A。 12．【答案】B【解析】试题分析：13．【答案】D【解析】：选D　在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力表的指针指到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子；倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边；接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落；在微生物的培养中，一般将培养皿倒置，在皿底上用记号笔做标记。14．【答案】C【解析】试题分析：据图分析，图示为高压蒸汽灭菌锅，其中甲是安全阀，乙是排气阀，丙是压力表。解答：微生物培养基灭菌常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌；根据以上分析已知，图中甲是安全阀，乙是排气阀，丙是压力表，故选C。15．【答案】B【解析】试题分析：解答：①平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个菌落，所以都需要用固体培养基，①正确；②稀释涂布平板法不需要使用接种针进行接种，②错误；③为防止杂菌污染，操作时都需要在火焰旁进行接种，③正确；④平板划线法不能用于计数活菌，只能用于分离菌种；稀释涂布平板法可以用来计数活菌，④错误．故选B。16．【答案】D【解析】试题分析：高压蒸汽灭菌适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。干热灭菌适用于需要保持干燥的空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌。微生物接种时的金属接种工具和试管口可以用灼烧灭菌。解答：接种环属于接种用的金属用具，需要用灼烧灭菌；培养皿是玻璃用具，且要保持干燥，故可以采用干热灭菌；接种室．接种箱需要用紫外线照射灭菌；培养基在灭菌时要保持水分，故采用高压蒸汽灭菌，综上所述，D正确，ABC错误。故选D。17．【答案】A【解析】在第二区域内划线时,接种环上的菌种直接来源于第一区域的划线末端，A错误；为避免杂菌的污染,第一步操作时需要灼烧接种环，B正确；每次划线前,灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，C正确；为避免细菌污染环境和感染操作者,划线结束后,灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，D正确。18．【答案】A【解析】试题分析：常用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法，目的是让聚集在一起的微生物分散成单个细胞，然后得到由这个细胞繁殖而来的肉眼可见的单个群落。稀释涂布法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，在适宜条件下培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。解答：A．使用涂布器在酒精灯下涂布时，要先将涂布器沾有少量酒精进行灼烧灭菌，燃尽后还要冷却8~10s再进行涂布，A正确；B．涂布完成后，在培养皿的皿底上做标记，B错误；C．计算平板上的菌落数时，应选择菌落数在30~300的平板进行计数，C错误；D．若空白对照组上有5个菌落，说明培养基灭菌不彻底，需要重新进行实验，D错误。故选A。