第3章　基因工程 章末核心素养整合课件PPT

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章末核心素养整合专题 限制酶的选择方法 选择限制酶时要考虑目的基因两端的限制酶切割位点、质粒上的限制酶切割位点及是否破坏目的基因和标记基因,从而确定限制酶的种类。限制酶切割载体的切割位点并不是任意的,切点所处位置必须在载体需要的基因片段之外,避免载体因目的基因的插入而失活或影响鉴定和筛选。必须保证载体上至少有一个完整的标记基因,以便于检测。1.根据目的基因两端的限制酶切割位点确定限制酶的种类(1)应选择切割位点位于目的基因两端的限制酶,如上图可选择PstⅠ。(2)不能选择切割位点位于目的基因内部的限制酶,如上图不能选择SmaⅠ。(3)为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接,也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒,如上图也可选择用PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶,但要确保质粒上也有这两种酶的切割位点,且标记基因内部没有这两种酶的切割位点。2.根据质粒的特点确定限制酶的种类(1)所选限制酶要与切割目的基因的限制酶一致,以确保具有相同的末端。(2)质粒作为载体必须具备标记基因等,因此所选择的限制酶应不能切割质粒上的所有标记基因,即至少要保留一个标记基因,用于重组DNA的鉴定和筛选,如上图中限制酶SmaⅠ会破坏标记基因。【典型例题】下表中列出了几种限制酶的识别序列及其切割位点,图1、图2中箭头表示相关限制酶的切割位点。下列相关说法错误的是(　　)A.一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割后,含有4个游离的磷酸基团B.用图1所示的质粒和图2所示的目的基因构建重组质粒,不能使用SmaⅠ切割C.图2中为防止酶切后含目的基因的DNA片段自身环化,不能使用EcoR ⅠD.为了获取重组质粒,最好用BamH Ⅰ 和Hind Ⅲ同时切割质粒和外源DNA答案:A解析:图1所示质粒分子经SmaⅠ切割后形成2个平末端,根据DNA分子的两条链反向平行的特点可知,切割后应含有2个游离的磷酸基团,A项错误。用SmaⅠ切割会破坏目的基因和质粒中的标记基因,B项正确。如果用EcoRⅠ处理目的基因,由于两端含有相同的黏性末端,则可能发生自身环化,用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时切割质粒和外源DNA即可解决这一问题,C、D两项正确。