2023邵阳二中高二下学期期中考试生物试题含解析

2023年邵阳市第二中学高二生物期中考试试卷

命题人： 审核人：

考试范围：选择性必修三；考试时间：75分钟；总分：100分

注意事项：

1．答题前填写好自己的姓名、班级、考号等信息

2．请将答案正确填写在答题卡上

第I卷（选择题）

一、单选题（18*2=36分）

1．用于动物细胞核移植技术的受体细胞——卵母细胞应培育到

A．MⅠ中期 B．MⅠ后期 C．MⅡ中期 D．MⅡ后期

2．植物组织培养技术是指将离体的植物器官、组织或细胞等，在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。下列关于菊花组织培养的操作，叙述错误的是（    ）

A．组织培养选择植物幼嫩的部分作外植体，更易诱导脱分化

B．接种时用镊子夹取菊花的外植体，全部插入诱导愈伤组织的培养基中

C．将愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上培养，长出芽后再诱导生根

D．将幼苗先移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境中，待其长壮后再移栽入土

3．2023年春节过后，新冠病毒感染的第一波高峰期已过，但正确佩戴口罩仍是预防二次感染的有效手段。某研究小组对非灭菌的一次性口罩中的微生物进行检测，通过分析微生物的种类和数量来确定口罩的合格性。部分操作如下：从口罩上剪取总量9cm2样品（体积近似1ml），剪碎后加入已灭菌的生理盐水中，定容至10mL，充分混匀，得到样液。下列说法正确的是（    ）

A．取4个经灭菌处理的培养皿，将冷却到40℃的培养基倒入培养皿，待培养基凝固后，将平板倒置

B．向前3个平板中分别加入1mL样液，用涂布器将样液涂布均匀

C．第4个平板不接种样液并与前3个平板共同培养，可用于检测是否有杂菌污染

D．若一段时间后，4个平板上长出的菌落数依次为31、42、35和0个，可计算出1cm2口罩样品中菌体数量为36个

4．干细胞有着广泛的应用前景，下列相关叙述错误的是（    ）

A．人体的ES细胞同植物体的分生组织细胞一样具有全能性

B．同一个体的骨髓干细胞与胰岛B细胞的基因组成相同，基因表达情况不同

C．iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应

D．一般认为成体干细胞具有组织特异性，具有发育成完整个体的能力

5．γ-氨基丁酸（GABA）是一种重要的中枢神经系统抑制性神经递质，其拥有良好的水溶性与热稳定性。现已证实，作为小分子量非蛋白质氨基酸的GABA具备食用安全性，并可用于饮料等食品的生产。研究表明，摄入一定量的GABA具备改善机体睡眠质量、降血压等生理功效。微生物发酵过程中，可以催化合成GABA。如图是腐乳在前发酵和盐腌制过程中GABA含量的变化，下列叙述错误的是（　　）

A．腐乳制作过程中有多种微生物的参与，其中起主要作用的是曲霉

B．腐乳腌制过程中加盐的目的主要是抑菌和调味

C．毛坯中GABA含量可能因微生物发酵过程中产生的酶的作用而增加

D．盐坯中GABA含量减少，可能是由γ-氨基丁酸溶于水导致的

6．利用甲基化酶、去甲基化酶和基因编辑技术，改变了小鼠生殖细胞的“基因组印记”，使其“变性”。我国科研人员将一个极体注入修饰后的次级卵母细胞后（类似受精作用），最终创造出“孤雌生殖”的小鼠。实验过程如下图所示。下列叙述正确的是（    ）

A．体外培养卵母细胞时，为防止污染需将培养皿密闭培养在二氧化碳培养箱中

B．胚胎移植前，需对供体和受体进行免疫检查，避免发生免疫排斥反应

C．甲基化会关闭基因的活性，对某些基因进行去甲基化后该基因可正常表达

D．“孤雌小鼠”的诞生过程没有精子参与，其基因型与提供卵母细胞的雌鼠相同

7．采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，可以培育出转基因羊。但人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。下列叙述正确的是（    ）

A．如果人凝血因子基因的核苷酸序列已知，可用PCR的方法克隆该目的基因

B．该项技术生产的人凝血因子蛋白可用于治疗脑血栓造成的脑缺血

C．在该转基因羊体内，人凝血因子基因存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中

D．人凝血因子基因的转录需要DNA解旋酶打开DNA双链，为mRNA的合成提供模板

8．呼吸道合胞病毒（RSV）是引起婴幼儿肺炎和支气管炎的首要致病病毒。F蛋白是RSV囊膜蛋白之一，但其构象不稳定。科研人员通过蛋白质工程构建了构象更加稳定的F蛋白，利用改造后的F蛋白研发的疫苗能引起小鼠和猴体内产生高浓度抗体。下列说法正确的是（    ）

A．改造前需要对F蛋白的氨基酸序列进行分析

B．F蛋白的改造过程不需要限制酶和DNA连接酶

C．将改造的F蛋白基因直接转入适当的微生物可获取大量F蛋白

D．通过蛋白质工程可制造出任何一种人类所需要的蛋白质

9．转基因产品是指利用基因工程技术获得的生物制品，其安全性问题一直是大众关注和争论的热点。下列叙述错误的是（    ）

A．通过转基因育种可增加或消除原有生物品种的某些性状

B．转基因食品风险评估时还需考虑标记基因的安全性问题

C．严格选择种植区域可减少转基因作物发生外源基因扩散的可能性

D．转基因作物的长期、大规模种植不利于侵染力更强的害虫的出现

10．在基因工程操作中常用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测不同DNA片段。科研人员利用EcoRⅠ和SamⅠ两种限制酶处理某DNA分子，得到如下电泳图谱。其中1号泳道是标准DNA样品，2号、3号、4号分别是EcoRⅠ单独处理、SamⅠ单独处理、EcoRⅠ和SamⅠ共同处理后的电泳结果。下列说法正确的是（　　）

A．该DNA可能是含1000bp的环状DNA分子

B．电泳图谱中DNA片段越小，距离起点越近

C．EcoRⅠ和SamⅠ能够催化DNA的氢键断裂

D．EcoRⅠ和SamⅠ的切点最短相距约800bp

11．下图是对基因型为Aabb的玉米所作的处理，据图分析下列叙述错误的是（　　）

A．过程a所采取的技术手段是花药离体培养

B．过程b用秋水仙素处理后可以得到2种基因型的玉米

C．c和d分别是再分化和脱分化过程，需要一定的植物激素诱导

D．图中过程a或过程c、d能够说明植物细胞具有全能性

12．RT-PCR是以提取的RNA为模板，经反转录获得与之互补的DNA（cDNA）序列，再以cDNA序列为模板进行目的片段的扩增。具体过程如图所示。以下有关RT-PCR的叙述正确的是（    ）

A．过程1需要使用耐高温的DNA聚合酶

B．过程2中的引物B可与mRNA互补配对

C．游离的脱氧核苷酸只能加到引物的5'端

D．RT-PCR可用于对RNA病毒的检测与鉴定

13．科学家以SARS病毒的核衣壳蛋白为抗原，制备出了单克隆抗体。下列相关叙述，正确的是（    ）

A．利用该单克隆抗体可以诊断是否感染SARS病毒

B．体外培养单个B淋巴细胞可以获得针对SARS病毒的单克隆抗体

C．将等量B淋巴细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导后融合的细胞即为杂交瘤细胞

D．将纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，从小鼠血清中分离的抗体为单克隆抗体

14．根瘤菌能与豆科植物共生形成根瘤，将空气中的氮气还原成氨供给植物营养。科研人员进行了土壤中根瘤菌的分离和纯化培养，实验流程如图所示。下列说法正确的是（）

A．步骤①土壤样品的获取过程既要遵循无菌操作原则又要进行高压蒸汽灭菌

B．步骤④选择的纯化培养基的营养成分应该包括各种营养物质

C．根据步骤④培养基上的菌落特征可判断土壤中含有不同固氮能力的根瘤菌

D．若步骤④平板上统计根瘤菌菌落数平均为150个，则每克土壤含根瘤菌约1．5×108个

15．病毒感染蔬菜、花卉、果树后，会借助胞间连丝等结构扩散，导致其产量和品质退化。通过植物组织培养技术，利用茎尖可以快速生产出脱毒苗。下列叙述正确的是（ ）

A．植株茎尖细胞中不含病毒的原因可能是该组织胞间连丝不发达

B．脱分化和再分化的培养基成分是相同的，但两个阶段光照条件不同

C．培养过程中可以发生基因突变和基因重组

D．脱毒苗培育是否成功，最终还需要通过接种病毒进行个体水平的检测

16．土壤被称为“微生物的天然培养基”。科学工作者要从土壤中分离或鉴定需要的微生物，需要配制选择培养基，再通过接种、培养、纯化、筛选等技术获得微生物。下列关于培养基对微生物的分离或鉴定的叙述，错误的是（   ）

A．从土壤中分离出酵母菌和霉菌，需要配制含青霉素的培养基，在灭菌后将培养基调至酸性

B．从土壤中分离出纤维素的分解菌，需要配制含纤维素为唯一碳源的培养基且加刚果红

C．以尿素为唯一氮源的培养基，采用稀释涂布平板法可分离出分解尿素的分解菌

D．从土壤中分离固氮微生物需要配制不含氮源的培养基，且培养条件要适宜

17．2022年3.15晚会节目播出了土坑腌制“老坛酸菜事件，再次引起人们对食品卫生安全的高度关注。某同学尝试自己制作酸菜，制作时向酸菜坛中加入了一些“陈酸菜水”，用质量百分比为5%的食盐水进行腌制。并在不同的腌制时间测定了酸菜中亚硝酸盐的含量。下列说法错误的是（    ）

A．不同的腌制时间，酸菜中亚硝酸盐的含量可能相同

B．泡菜发酵过程中检测亚硝酸盐含量的目的是为了解乳酸菌的生长状况

C．灭菌的食盐水和低pH在腌制过程中可以起保藏作用

D．加入白酒的目的是抑制杂菌生长和增加醇香，不能加快发酵进行

18．漆酶属于木质素降解酶类，在环境修复、农业生产等领域有着广泛用途。下图是分离、纯化和保存漆酶菌株的过程，相关叙述不正确的是　（    ）

A．生活污水中含有大量微生物，是分离产漆酶菌株的首选样品

B．筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落

C．在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化

D．斜面培养基中含有大量营养物，可在低温下临时保存菌株

二、不定选（4*4=16分）

19．人体内的t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药，改造后的t-PA蛋白能显著降低出血副作用。下图表示构建含t-PA改良基因重组质粒的过程示意图。相关说法错误的是（　　）

A．构建重组质粒时，选用的限制酶是XmaⅠ和BglⅡ

B．需要DNA聚合酶将t-PA改良基因与质粒连接

C．新霉素抗性基因的作用是便于将导入质粒的大肠杆菌筛选出来

D．在加入新霉素的培养基中选择呈白色的菌落选育工程菌株

20．近年来，全人源化单克隆抗体技术发展迅速，利用转基因鼠技术进行全人源化单克隆抗体的制备流程如图所示，下列说法正确的是（    ）

A．该技术能降低单克隆抗体药物的免疫排斥反应

B．过程①②采用核移植技术，体现了动物细胞核的全能性

C．过程⑧要经过选择培养基筛选、克隆化培养和抗体检测等过程

D．体外培养B细胞也可以大量获得针对该抗原的单克隆抗体

21．ch1L基因是蓝细菌拟核DNA上控制叶绿素合成的基因。为了研究该基因对叶绿素合成的控制，需要构建缺失ch1L基因的蓝细菌细胞。技术路线如图所示，下列描述正确的是（　　）

注：受体细胞ch1L基因被替换后降解

A．②过程共形成4个磷酸二酯键

B．①②过程都需要使用限制性内切核酸酶和DNA连接酶

C．该项技术操作成功的标志是目的基因的表达

D．红霉素抗性基因是标记基因，用于筛选含有chlL基因的受体细胞

22．利用基因编辑技术将病毒外壳蛋白基因导入猪细胞中，然后通过核移植技术培育基因编辑猪，可用于生产基因工程疫苗。如图为基因编辑猪培育流程，下列叙述不正确的是（    ）

A．对1号猪使用促性腺激素处理，可使其超数排卵

B．采集到的卵母细胞需在体外培养到MⅡ期才能用于核移植

C．产出的基因编辑猪的性染色体来自2号与3号猪

D．为检测病毒外壳蛋白基因是否被导入4号猪并正常表达，可采用DNA测序的方法

第II卷（非选择题）

三、填空题（10分+10分+10分+18分）

23．中医治疗疾病多用复方，三白草和鱼腥草是同科不同属的两种常见药用植物，二者因疗效相近且具有叠加效应常被用作“药对”，在我国全年可采收两次。研究者欲利用原生质体融合技术将复方的配伍（两种或两种以上药物配合使用）提前到个体生长或生产过程，并实现有效成分的工厂化生产，具体操作如下图。

(1)植物细胞产物的工厂化生产，建立在植物细胞培养的基础上。植物细胞培养是指在________________条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其增殖的技术。为了防止杂菌污染，获得纯净的培养物，需用70%乙醇和5%的次氯酸钠对两种植物的嫩叶片进行   _____ （填“消毒”或“灭菌”）处理，每次处理后用无菌水冲洗叶片5次，去除残留于叶片上的药剂。

(2)过程①是利用酶解法去除细胞壁获取原生质体，过程②除了可利用化学诱导剂PEG透导融合外，还可以采用的化学法有________________等。细胞融合完成后，融合体系中有 _____ 种融合细胞。

(3)过程③诱导愈伤组织期间一般 _____（填“需要”或“不需要”）光照。请写出诱导愈伤组织的培养基中需按一定比例添加哪两种关键植物激素？________________。

24．为保障公共健康，需要定期对公共饮用水进行卫生检测。居于大肠中的各种细菌统称为大肠菌群。一般用大肠菌群作为水体受粪便污染的指示菌，饮用水的卫生标准是100mL不得检出大肠菌群（或者1000mL饮用水中不超过3个大肠杆菌）。若要确定饮用水是否合格，可采用膜过滤法检测饮用水中的大肠菌群，过程如下图所示：

(1)大肠杆菌在人体肠道内生存时，可发酵多种糖类产酸、产气，随粪便排出后在水体中存活时间比其他病原微生物略长，摇床振荡培养更利于其快速繁殖。据此推断，大肠杆菌代谢类型为________。

A．自养需氧型 B．异养厌氧型 C．异养兼性厌氧型 D．自养厌氧型

(2)检测前需要进行灭菌处理的材料用具有________（选择字母代号填写）；它们均可以采用________法灭菌。

a．水样收集瓶b．滤膜c．培养基d．镊子e．水样

(3)完成过滤后需将滤膜的________（A面/B面）接触配置好的培养基，此过程在微生物实验操作中称为________。

(4)不用稀释涂布平板法检测饮用水中的大肠菌群的原因是________；用上图方法观察样本菌落时是否需要设置对照组？______。为什么？__________。

(5)KONFIRM培养基可以检测大肠杆菌的存在。KONFIRM中含有ONPG和MUG可作碳源，色氨酸可作为氮源。在检测大肠菌群时，检测指标如下表所示。

（注：出现上述颜色变化为阳性，未现上述颜色变化为阴性）

结合表中内容分析，若上述检测结果为________（选择字母代号填写），则可以确定待测菌为大肠杆菌。

a．ONPG检测和吲哚检测为阳性，MUG检测为阴性    

b．吲哚检测为阳性，ONPG检测和MUG检测为阴性

c．ONPG检测、MUG检测、吲哚检测均为阴性        

d．ONPG检测、MUG检测、吲哚检测均为阳性

25．2018年1月25日报道，两只克隆猕猴“中中”和“华华”在中国诞生，突破了现有技术无法克隆灵长类动物的世界难题，将为阿尔茨海默症、自闭症等脑疾病带来前所未有的光明前景，图为过程流程图，请回答下列有关问题：

(1)欲获得单个雌猕猴体细胞，可用_____________酶处理动物组织块。动物细胞培养一般分为_________和传代培养两个阶段过程。在前一阶段，贴壁的细胞会出现_________现象，所以要进行传代培养。

(2)①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至减数第二次分裂时期再进行，目前使用的去核方法是_______________。②表示_____________。

(3)A细胞的获得过程属于______（有性/无性）生殖，在培养早期胚胎时，培养液中通常要添加______等一些天然成分。

(4)根据下图回答相关问题：

若上图表示动物细胞融合的过程，过程①区别于植物细胞常用的诱导剂是_____________。

若上图表示制备单克隆抗体的部分过程，甲细胞为小鼠的骨髓瘤细胞，则乙细胞为_____________，特点_________________________________。

26．PCR定点突变技术是最常用的基因突变技术，通过定点诱变可以在体外改造DNA分子。重叠延伸PCR是发展最早的PCR定点突变技术，操作过程如图1，可通过测序检验定点突变是否成功。现欲将改造后的基因构建重组质粒导入大肠杆菌，质粒结构如图2。回答下列问题：

(1)图1所示重叠延伸PCR中，第1对引物是____________________________；在第1对引物组成的反应系统和第2对引物组成的反应系统中各进行一次复制，共产生____种DNA分子；此过程不能将两对引物共置于同一反应系统中，原因是 _______________________________________。

(2)图1所示DNA分子不能延伸，原因是____________________________。

(3)分析图1和图2，要将突变的基因定向插入质粒并构建表达载体，应如何设计通用引物FP1和通用引物RP2？_____________________________________________。

(4)为筛选出含有目的基因的大肠杆菌，通常采用影印法（使用无菌的线毡市压在培养基A的菌落上，带出少许菌种，平移并压在培养基B上、结果如图3）。培养基A中应添加______，培养基B中应添加______，含有重组质粒的菌落是______（填写数字），原因是__________________________________。

参考答案：

1．C

【详解】核移植技术模拟受精作用，卵母细胞发育到减数第二次分裂中期可以和精子发生结合，用于动物细胞核移植技术的卵母细胞应培育到减数第二次分裂中期，C正确，

故选C。

2．B

【解析】植物组织培养依据的原理为植物体细胞的全能性，即已经分化的细胞仍然具有发育成完整植株的潜能；培养过程的顺序是离体植物器官、组织或细胞（外植体）脱分化形成愈伤组织，再分化形成根、芽等器官进而形成新的植物体。

【详解】A、植物幼嫩部分全能性高，细胞分裂能力强，更容易经过脱分化形成愈伤组织，A正确；

B、接种时用镊子夹取菊花的外植体，将其部分插入诱导愈伤组织的培养基中，而不是全部插入，B错误；

C、植株组织培养时，将愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上培养，长出芽后再转移至生根培养基中诱导生根，C正确；

D、移栽的过程：将幼苗先移植到消过毒的蛭石或者珍珠岩等环境中，待其长壮后再移栽入土，D正确。

故选B。

【点睛】

3．C

【分析】培养基要冷却到50 ℃左右时开始倒平板。温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。

培养未接种的固体培养基是为了作为对照组，排除培养基被杂菌污染的可能。

【详解】A、40℃时琼脂已经凝固，应在培养基冷却至50℃左右时倒平板，A错误；

B、用稀释涂布平板法统计细菌数量时，为避免培养基表面的菌液出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果，滴加到培养基表面的菌悬液的量一般不超过0．1 mL，B错误；

C、不接种样液的空白平板可用于检验试验前的灭菌是否彻底，也可检测是否有杂菌污染，C正确；

D、第4个平板没有菌落形成，说明没有杂菌污染，且前三个平板长出的菌落数均在30~300之间，说明操作中的稀释倍数（10倍）是合适的。若接种的样液是0．1 ml，则9 cm2口罩样品中菌体数量为（31+42+35）÷3÷0．1×10=3600个，则l cm2口罩样品中菌体数量为400个，D错误。

故选C。

4．D

【分析】1、iPS细胞的优点：(1)诱导过程无需破坏胚胎；(2)iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应。

2、干细胞的应用前景：存在导致肿瘤发生的风险，随着理论和技术的不断完善，干细胞将在再生医学、药物安全性与有效性监测等领域发挥大作用。

【详解】A、如植物的分生组织细胞具有分化能力一样，人体的ES细胞具有分裂和分化能力，其在体外培养条件下容易实现全能性，A正确；

B、同一个体的骨髓干细胞与胰岛B细胞是由受精卵发育而形成的，因此基因组成相同，但它们两者的形态功能各不相同，这是它们基因表达情况不同导致的，B正确；

C、iPS细胞可以来源于病人自身的体细胞，将它移植回病人体内后，理论上可以避免免疫排斥反应，C正确；

D、一般认为，成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力，D错误。

故选D。

5．A

【分析】腐乳发酵过程中起主要作用的微生物是毛霉。

【详解】A、腐乳制作过程中有多种微生物的参与，其中起主要作用的是毛霉，A错误；

B、腐乳腌制过程中加盐的目的主要是抑制杂菌的生长和调节风味，B正确；

C、GABA的化学本质是氨基酸，由豆腐中蛋白质水解得到，毛坯中GABA含量因微生物产生的蛋白酶作用而增加，C正确；

D、GABA含量下降，一方面与食盐抑制毛霉生长， 酶活性降低有关；另一方面， 豆腐中的水分渗出，部分GABA因溶于水会随水流失而导致测定值减小，D正确。

故选A。

6．C

【分析】分析图示，从卵泡中取出卵母细胞，再将经过甲基化处理的卵母细胞进行早期胚胎培养、胚胎移植等获得孤雌小鼠。

【详解】A、动物细胞培养过程中，为防止杂菌污染，需要加入抗生素，A错误；

B、胚胎移植不会发生免疫排斥，B错误；

C、DNA分子甲基化会影响基因的表达，从而关闭基因的活性，而对某些基因进行去甲基化后该基因可正常表达，C正确；

D、孤雌小鼠是由次级卵母细胞发育而来，如果提供卵细胞的基因型是AaBb，经过减数分裂形成的次级卵母细胞基因型可以是AABB，所以二者基因型可能不同，D错误。

故选C。

7．A

【分析】基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】A、如果人凝血因子基因的核苷酸序列已知，可用PCR的方法克隆该目的基因，A正确；

B、脑血栓是由于血液凝固造成，人凝血因子蛋白不能用于治疗脑血栓造成的脑缺血，B错误；

C、在转基因羊中，人凝血因子基因存在于所有的体细胞中，只是人凝血因子基因在该羊的乳腺细胞中表达，在其他体细胞中未表达，C错误；

D、人凝血因子基因的转录需要RNA聚合酶打开DNA双链，为mRNA的合成提供模板，D错误。

故选A。

8．A

【分析】蛋白质工程的过程为：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）。

【详解】A、蛋白质工程的实质是改造基因，因此改造前需要对F蛋白的氨基酸序列进行分析，以便找到对应的脱氧核苷酸序列（基因），A正确；

B、要对蛋白质进行改造，最终需要通过基因工程来实现，而基因工程需要的工具酶包括限制酶和DNA连接酶，因此F蛋白的改造过程需要限制酶和DNA连接酶，B错误；

C、将改造的F蛋白基因无法直接转入适当的微生物细胞内，需要通过载体运输，C错误；

D、基因工程原则上只能生产自然界已存在的蛋白质，而蛋白质工程可以对现有蛋白质进行改造，从而制造一种新的蛋白质，但由于蛋白质的高级结构相当复杂，因此目前并不能制造出任何一种人类所需要的蛋白质，D错误。

故选A。

9．D

【分析】基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和产品。从技术操作层面来看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做重组DNA技术；转基因产品是指利用基因工程技术而获得的生物制品。

【详解】A、基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和产品；转基因产品是指利用基因工程技术而获得的生物制品，故通过转基因育种，按照人们的需要，可增加或消除原有生物品种的某些性状，A正确；

B、在基因表达载体上，除了有目的基因、启动子、终止子等外，还需要标记基因，故转基因食品风险评估时还需考虑标记基因的安全性问题，B正确；

C、转基因作物所携带的外源基因在使得作物高产的同时，也可能会向自然界扩散，从而打破自然界原有的物种平衡，严格选择种植区域可减少转基因作物发生外源基因扩散的可能性，C正确；

D、转基因作物的长期、大规模种植，可能使目标害虫或非目标害虫对转基因作物的适应在群体水平上产生抗性，有可能产生侵染力更强的“超级害虫”，造成更大的危害，D错误。

故选D。

10．A

【分析】分析题图：用EcoRⅠ单独处理或用SamⅠ单独处理都只得到一种大小为1000bp的DNA片段，而用EcoRⅠ和SamⅠ共同处理甲后得到长度为200bp和800bp的两种DNA片段，说明甲最可能是含1000bp的环状DNA分子。

【详解】A、据图可知，用EcoRⅠ单独处理（2号）或用SamⅠ单独处理（3号）都只得到一种大小为1000bp的DNA片段，说明该DNA最可能是含1000bp的环状DNA分子，A正确；

B、由题意可知，电泳图谱中DNA片 段越小，距离起点越远，说明图上侧端为起始端，B错误；

C、EcoRⅠ和SamⅠ都是限制酶，限制酶切割DNA分子，破坏的是作用位点上两脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键，C错误；

D、由题知，两种限制酶同时切割时则产生800bp和200bp两种长度的DNA片段，所以两种限制酶的酶切位点至少相距200bp，D错误。

故选A。

11．C

【分析】花药离体培养是指将发育到一定阶段的花药接种到培养基上，来改变花药内花粉粒的发育程序，形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化成植株。

【详解】A、a过程由花粉粒变为单倍体植株，要经过花药离体培养，A正确；

B、基因型为Aabb的玉米能产生2种基因型的花粉：Ab和ab，经花药离体培养后可得到2种单倍体幼苗，幼苗再经秋水仙素处理后得到AAbb和aabb，2种基因型的可育玉米，B正确；

C、c是叶肉细胞培养成为愈伤组织的过程，是脱分化过程，d是愈伤组织形成胚状体的过程，表示再分化，两者均需要一定的植物激素诱导，C错误；

D、过程a或过程c、d是植物细胞培育成了植物个体，故能够说明植物细胞具有全能性， D正确。

故选C。

12．D

【分析】PCR原理：在解旋酶作用下，打开DNA双链，每条DNA单链作为母链，以4种游离脱氧核苷酸为原料，合成子链，在引物作用下，DNA聚合酶从引物3'端开始延伸DNA链，即DNA的合成方向是从子链的5'端自3'端延伸的。实际上就是在体外模拟细胞内DNA的复制过程。DNA的复制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链。

【详解】A、过程①是由mRNA形成单链DNA的过程，为逆转录，该过程需要逆转录酶，A错误；

B、引物可以在DNA分子过程中起作用，过程2中的引物B可与DNA互补配对，进行DNA分子的复制，B错误；

C、游离的脱氧核苷酸只能从引物的3'端开始连接，C错误；

D、利用实时荧光RT-PCR技术对某些微量RNA病毒进行检测，并可提高检测的灵敏度（因为增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量，便于检测），D正确。

故选D。

13．A

【分析】1、效应B细胞能够分泌抗体，但是不具有增殖能力，而骨髓瘤细胞具有无限增殖的能力，因此利用动物细胞融合技术将效应B细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞，利用该细胞制备单克隆抗体。

2、该杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生特异性抗体，并且单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高、可大量制备等特点。

【详解】A、单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的特点，因此利用该单克隆抗体与SARS病毒核衣壳蛋白特异性结合的方法可诊断出病毒感染者，A正确；

B、单个效应B细胞有产生抗体的能力，但没有无限增殖的本领，因此在体外培养单个效应B细胞不可能获得大量针对SARS病毒的单克隆抗体，B错误；

C、将等量B细胞和骨髓瘤细胞混合，经诱导融合后的细胞不都是杂交瘤细胞，还有B细胞自身融合的细胞、骨髓瘤细胞自身融合的细胞等，C错误；

D、用纯化的核衣壳蛋白反复注射到小鼠体内，使其产生免疫反应，以获得相应的B细胞，从小鼠血清中分离的抗体数量少，不是单克隆抗体，D错误。

故选A。

14．C

【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；根据物理性质分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐。

【详解】A、步骤①土壤样品的获取过程要遵循无菌操作原则，但不能进行高压蒸汽灭菌，不然会杀死土壤中的根瘤菌，A错误；

B、步骤④选择的纯化培养基的营养成分应该包括碳源、水和无机盐等，不需要氮源，因为根瘤菌可以利用空气中的氮气，B错误；

C、步骤④培养基上的菌落大小不同，说明不同菌落的根瘤菌固氮能力不同，固氮能力强的根瘤菌繁殖速度较快，形成的细菌群体大，菌落体积较大，C正确；

D、将10g土壤先稀释100倍，再进行梯度稀释1000倍，然后取0.1mL进行涂布平板，若步骤④平板上统计的菌落数平均为150个，则每克土壤含固氮菌约150÷0.1×100×1000÷10=1.5×107个，D错误。

故选C。

15．A

【分析】植物组织培养技术：1、过程：离体的植物组织，器官或细胞（外植体）→愈伤组织→胚状体→植株（新植体）。2、原理：植物细胞的全能性。3、条件：①细胞离体和适宜的外界条件（如适宜温度、适时的光照、pH和无菌环境等）；②一定的营养（无机、有机成分）和植物激素（生长素和细胞分裂素）。

【详解】A、病毒感染果蔬后，会借助胞间连丝等结构扩散，植株茎尖细胞中不含病毒的原因可能是该组织胞间连丝不发达，A正确；

B、脱分化和再分化的培养基成分是不相同的，且两个阶段光照条件也不同；脱分化需避光，光照会影响愈伤组织的形成；再分化需要光照，光照能够促进组织分化，分化出芽和叶片，B错误；

C、植物组织培养过程中细胞不能进行减数分裂，因此不能发生基因重组，但培养过程中可能发生基因突变，C错误；

D、通过植物组织培养技术培育脱毒苗，是用茎尖等没有被病毒感染的组织培养植株，可以提高产量，没有抗病毒的性状，脱毒苗培育是否成功，不需要接种病毒进行个体水平的检测，D错误。

故选A。

16．A

【分析】选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设计的培养基，具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。

【详解】A、青霉素能杀死细菌，对真菌无影响，因此，从土壤中分离出酵母菌和霉菌，需要配制含青霉素的培养基，且调试pH需要在灭菌前，A错误；

B、纤维素分解菌能分泌纤维素酶，能利用纤维素，而其他微生物不能利用纤维素，刚果红和纤维素形成红色复合物，纤维素被分解后出现透明圈，所以能分离和筛选纤维素的分解菌，B正确；

C、分解尿素的分解菌能合成脲酶，把尿素分解成NH3，NH3再转化NO3- 、NH4+被植物利用，其他微生物细胞中不能合成脲酶，不能利用尿素，在以尿素为唯一氮源的培养基上不能生长，C正确；

D、固氮菌能利用空气中N2，其他微生物不能利用，因此需要配制不含氮源的培养基进行筛选，且培养条件要适宜，D正确。

故选A。

17．B

【分析】制作传统泡菜是利用植物体表面天然的乳酸菌来进行发酵的。制作泡菜①用清水和食盐配制质量分数为5%~20%的盐水，并将盐水煮沸。（灭菌；除去水中氧气）②将新鲜蔬菜（放置时间长，蔬菜中的硝酸盐容易被还原成亚硝酸盐）、香辛料等装至八成满。③坛盖边沿的水槽中注满水（无氧环境）。

【详解】A、泡菜腌制过程中，亚硝酸盐含量先增加后减少，所以不同的腌制时间，酸菜中亚硝酸盐的含量可能相同，A正确；

B、泡菜发酵过程中检测亚硝酸盐含量的目的是为了解取食泡菜的最佳时间，B错误；

C、灭菌的食盐水和低pH可以抑制杂菌的生长，在腌制过程中可以起保藏作用，C正确；

D、加入白酒的目的是抑制杂菌生长和增加醇香，不能促进菌种的生长，也不能加快发酵进行，D正确。

故选B。

18．A

【分析】1、分析题图：分离、纯化和保存菌株的一般过程为：取样→制成样品悬液→涂布→划线→接种。

2、分离和纯化细菌需多次进行选择培养。

3、利用平板划线法纯化目的菌时，在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环，在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环。

【详解】A、根据题意可知，漆酶属于木质降解酶类，因此森林的土壤是分离产漆酶菌株的首选样品，生活污水中含有大量微生物，但不一定含有产漆酶的微生物，A错误；

B、产漆酶能分解木质素，筛选培养基中需要加入漆酶的底物，通过菌落特征挑出产漆酶的菌落，从而获得漆酶菌株，B正确；

C、平板划线法可以用来分离和纯化微生物，在涂布平板上长出的菌落，再通过划线进一步纯化，C正确；

D、保存菌种一般在低温下保存，将菌株接种于固体斜面培养基，菌落长成后可在4℃的冰箱中临时保藏，D正确。

故选A。

19．B

【分析】基因工程技术的基本步骤：（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子、复制原点和标记基因等。载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存，②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入，③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。（3）将目的基因导入受体细胞：将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

【详解】A、根据图中目的基因两端的黏性未端以及各种限制酶的的切制位点可知，在构建重组质粒时，选用限制酶Xmal和BglⅡ切割质粒，才能与目的基因t-PA改良基因高效连接，A正确；

B、将t-PA改良基因与质粒连接的酶是DNA连接酶，不是DNA聚合酶，B错误；

C、在构建重组质粒时，其中的新霉素抗性基因没有被破坏，因此可以根据对新霉素的抗性将成功导入质粒的大肠杆菌筛选出来，即该基因的作用是便于将成功导入质粒的大肠杆菌筛选出来，C正确；

D、重组质粒已经破坏了mlacZ基因，其不会表达产物，即细胞呈白色。所以，在加入新霉素的培养基中选择呈白色的菌落选育工程菌株，D正确。

故选B。

20．AC

【分析】单克隆抗体的制备过程是：对小动物注射抗原，从该动物的脾脏中获取B淋巴细胞，将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细胞，克隆化培养杂交瘤细胞，最后获取单克隆抗体。

【详解】A、利用转基因鼠技术进行全人源化单克隆抗体，能降低单克隆抗体药物的免疫排斥反应，A正确；

B、过程①②利用的是转基因技术，B错误；

C、融合后的细胞需要用选择培养基筛选获得杂交瘤细胞，还要经过克隆化培养、（专一性）抗体检测等，C正确；

D、B细胞在体外培养条件下不能无限增殖，体外培养B细胞不能获得大量的单克隆抗体，D错误。

故选AC。

21．AB

【分析】据图分析可知，①是chIL基因与质粒重组形成重组质粒1的过程；②是红霉素抗性基因和质粒1重组形成重组质粒2的过程；①过程和②过程都需要同一种限制酶切割露出相同的末端，再用DNA连接酶连接形成重组质粒；③是将重组质粒2导入有chIL基因的蓝细菌细胞，并同源替换chIL基因，最终获得无chIL基因的蓝细菌细胞。

【详解】A、②过程是将红霉素抗性基因连接到重组质粒1中去，共形成4个磷酸二酯键，A正确；

B、目的基因的获取和与质粒的连接连接都需要限制性核酸内切酶和DNA连接酶，B正确；

C、该项技术操作成功的标志是没有ch1L基因的表达，C错误；

D、此处的抗性基因是为了筛选不含chlL基因的细胞，D错误；

故选AB。

22．CD

【分析】据图分析，图示基因编辑猪培育过程涉及的技术手段有转基因技术、核移植技术、早期胚胎培养技术和胚胎移植技术等，利用转基因技术将病毒外壳蛋白基因（目的基因）导入2号猪的体细胞核中，然后将2号猪的体细胞核移植到1号猪的去核卵母细胞中，再将重组细胞培养到囊胚并移植到3号猪的子宫中去，最后分娩产生了4号转基因克隆猪。

【详解】A、对供体母猪使用促性腺激素处理，使其超数排卵，A正确；

B、获得的卵母细胞去核后，需要培养到减数第二次分裂中期才能进行核移植，B正确；

C、染色体位于细胞核，则产出的基因编辑猪的性染色体来自于2号猪，C错误；

D、为检测病毒外壳蛋白基因是否正常表达，可采用的方法是抗原-抗体杂交，D错误。

故选CD。

23．(1)     离体     消毒

(2)     高Ca2+—高pH融合法     3

(3)     不需要     生长素和细胞分裂素

【分析】据图分析，图为三白草和鱼腥草体细胞杂交过程，其中①为去除细胞壁，②为原生质体融合，③脱分化形成愈伤组织，④提取代谢产物。

【详解】（1）植物细胞培养是指在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其增殖的技术，如细胞不离开母体，细胞只能分化；为了防止杂菌污染，获得纯净的培养物，需用70%乙醇和5%的次氯酸纳对两种植物的嫩叶片进行消毒处理，每次处理后用无菌水冲洗叶片5次，去除残留于叶片上的药剂。

（2）过程②为原生质体融合，常用的化学诱导剂有PEG融合法、高Ca2+-高pH融合法等；细胞融合完成后，融合体系中有3种融合细胞，三白草自身融合细胞、鱼腥草自身融合细胞和杂种细胞。

（3）过程③形成愈伤组织，称为脱分化，脱分化过程需要在避光条件下培养，因为避光有利于形成愈伤组织，如果给予光照，会促进组织分化而不能形成愈伤组织；用于植物组织培养的固体培养基常添加的植物激素是生长素和细胞分裂素。

24．(1)C

(2)     abcd     高压蒸汽灭菌

(3)     A面     接种

(4)     饮用水中大肠杆菌数量太少，如果梯度稀释，最后培养出来的菌落数可能不在30-300范围内     需要     需判断培养基是否被污染

(5)d

【分析】培养基根据物理性质可分为固体培养基和液体培养基，培养基的基本营养成分有碳源、氮源、无机盐、水等成分；灭菌和消毒的主要区别是：消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子），灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。

(1)

结合题干信息分析可知，大肠杆菌在人体肠道内生存时处于无氧环境或低氧环境，而在摇床振荡培养更利于其快速繁殖，这说明酵母菌在无氧和有氧条件下都能生存。据此推断，大肠杆菌代谢类型为异养兼性厌氧型，C正确，ABD错误。

(2)

结合题干信息可知，检测前需要进行灭菌处理的材料用具有a、b、c、d，对实验器具和接种工具的灭菌能够防止杂菌污染，它们均可以采用高压蒸汽灭菌法灭菌，水样中含有需要检测的微生物，灭菌或将其杀死，导致实验失败，故选abcd。

(3)

据图分析可知，滤膜的A面与水样接触，会带有大肠菌群，所以实验中需要将A面与培养基接触以达到接种的目的，此过程在微生物实验操作中称为接种。

(4)

一般不用稀释涂布平板法检测饮用水中的大肠菌群，是因为用稀释涂布平板法每平板最多只能检测0.1mL饮用水，而饮用水中大肠杆菌数量太少，难以用稀释涂布平板法进行检测，所以不能用涂布平板法进行检测。严格意义来说，应设置两组对照组。一组为阴性对照组，不进行涂布或者用无菌水接种；另一组为阳性对照组，接种大肠杆菌。前者可以说明培养基是否被污染，后者可以说明该培养基能否培养出大肠杆菌。

(5)

由于大肠杆菌MUG检测为阳性，同时大肠杆菌是肠杆菌的一种，所以吲哚检测为阳性，又属于大肠菌群，所以ONPG检测为阳性，故进行的三种检测均应该呈阳性，故选d。

25．(1)     胰蛋白酶或胶原蛋白酶     原代培养     接触抑制

(2)           显微操作去核法    胚胎移植

(3)     无性     动物血清

(4)     灭活的病毒     已免疫的B淋巴细胞  既能大量增殖，又能产生特异性抗体

【分析】1、克隆动物的概念：动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。

2、分析题图：①表示去除细胞核；A为重组细胞，②代表胚胎移植。

【详解】（1）欲获得单个雌猕猴体细胞，可用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织块；动物细胞培养的过程分为原代培养和传代培养两个阶段。原代培养是指从供体获取组织或细胞后的初次培养，将原代培养的细胞分离稀释后转入新的培养瓶中继续培养，称为传代培养，原代培养贴壁的细胞会出现接触抑制的现象，所以要进行传代培养。

（2）过程①表示去除细胞核，该过程一般要在卵母细胞培养至 MⅡ（减数第二次分裂中）时期再进行。目前核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作去核法，还有人采用其他方法，如梯度离心，紫外光短时间照射，化学物质处理等；②表示胚胎移植。

（3）A细胞的获得的技术手段为核移植，是将动物的一个细胞的细胞核移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，属于无性生殖；为确保细胞的正常生命活动进行，在培养早期胚胎时，培养液中通常要添加动物血清等一些天然成分。

（4）若图表示动物细胞融合的过程，过程①区别于植物细胞融合常用的诱导剂是灭活的病毒。

若图表示制备单克隆抗体的部分过程，甲细胞为小鼠的骨髓瘤细胞，则乙细胞为已免疫的B淋巴细胞。

26．(1) 突变引物FP2和通用引物RP2     3    

突变引物FP2和突变引物RP1存在碱基互补配对片段，置于同一反应系统时它们会发生结合而失去作用

(2)DNA聚合酶只能催化DNA单链从5’到3’的延伸

(3)在通用引物FP1的5’添加XmaⅠ（或NheⅠ）的限制酶酶切位点，在通用引物RP2的5’添加NheⅠ（或XmaⅠ）的限制酶酶切位点

(4)     氨苄青霉素     四环素     4、6     4、6两个菌落在氨苄青霉素培养基中能生长，但在含四环素的培养基中不能生长，说明其含有因插入目的基因而四环素抗性基因被破坏的重组质粒

【分析】PCR是利用DNA复制原理一项在体外合成DNA的技术，PCR反应体系中一般需要两种引物，这两种引物不能碱基互补配对。限制性核酸内切酶能识别特定序列的核苷酸，具有专一性。

【详解】（1）PCR扩增DNA的过程中，新合成的两条单链延伸方向相反，第1对引物是突变引物FP2和通用引物RP2。两个反应系统中各自形成2种DNA分子，但由于通用引物RP2和通用引物FP1形成两个与原DNA相同的DNA分子，所以含有通用引物RP2和通用引物FP1的DNA属于同一种DNA，故共形成3种DNA分子。由题干可知突变引物FP2和突变引物RP1具有互补配对片段，如果将突变引物FP2和突变引物RP1放在一个反应体系中，则会引起突变引物FP2和突变引物RP1的结合而失去作用。

（2）图1所示DNA分子不能延伸，原因是DNA聚合酶只能催化DNA单链从5’到3’的延伸。

（3）XmaⅠ切出的是黏性末端，由酶切位点分析，除使用XmaⅠ外，还需使用Nhel切除相应黏性末端与改良基因CTAG一侧进行配对。分析图1和图2，要将突变的基因定向插入质粒并构建表达载体，应在通用引物FP1的5’添加XmaⅠ（或NheⅠ）的限制酶酶切位点，在通用引物RP2的5’添加NheⅠ（或XmaⅠ）的限制酶酶切位点。

（4）用两种限制酶对质粒进行切割时，会破坏四环素抗性基因但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的菌株能在含有氨苄青霉素的培养基上生存，但不能在含有四环素的培养基上生存，因此制备培养基A时，应添加氨苄青霉素，培养基B添加四环素。采用影印法将培养基A菌落平移并印压在含有四环素抗性基因培养基B上，图中1、2、3、5共四个菌落能生长，说明四个菌落含有四环素抗性基因，表明四环素抗性基因没有被破坏，不含有目的基因，因此含有重组质粒的菌落是4、6。