浙科版高中生物选择性必修第三册·第一章- 第二节 课时1 纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（课件PPT）

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第二节纯净的目标微生物可通过分离和纯化获得（第1课时）高中生物 选择性必修3第一章1.接种方法一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化接种：微生物进入培养基质的过程。自然接种：牛奶暴露在空气中，会由于微生物落入、生长、繁殖而变质。人为接种：挑取目标微生物的纯种将其转移到液体培养基中培养，或在培养基斜面连续划线用于保存菌种（接种环）。单菌落：在固体培养基上通过接种、培养获得的由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团。2.单菌落分离单菌落分离或接种的方法：通过平板划线法和稀释涂布平板法等方法获得单菌落意义：单菌落的分离是消除杂菌污染的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一.例题1. C蓝色选择培养基 3．平板划线法：(1)原理 ：接种环划线的过程中，菌液被逐渐稀释，最终出现单个细菌，培养后形成单菌落。(2)方法：通常用___________蘸取液体培养物或挑取固体表面的微生物后，在固体培养基表面进行连续平行划线、______________或其他形式的划线，以实现接种的目的。 (3)划线方式的比较扇形划线接种环（4）过程： ①一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；②二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。用接种环蘸菌液____次，在固体培养基表面划线，下一次划线应从上一次划线的______开始。每次划线前接种环要 ，聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以在划线的末端出现不连续的 。若共划线4次，接种环要烧灼____次。另外：每次划线都不能与之前的线条_____；不能将最后一次划线与第一次划线相连；不能_____培养基。培养基需 后，放入培养箱培养。划破重叠5末端1灭菌单菌落倒置 4．稀释涂布平板法接种时，通常需要先将菌液进行_____________，并在培养皿侧面或底面做好标记后，将稀释度不同的菌液各取0.1 mL，（移液管或枪）加在固体培养基表面，然后用___________将菌液均匀地涂布。在培养基表面上进行培养。这样在稀释度适当的固体培养基表面也能得到单个细胞生长繁殖成的单菌落。根据菌落的形状，大小、颜色、边缘或表面光滑与否等特征可以选取目标微生物继续培养。梯度稀释涂布器①原理 ：用无菌水将菌液进行一系列的梯度稀释，在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的单菌落。②操作过程：梯度稀释②操作过程：梯度稀释→涂布②操作过程：梯度稀释→涂布→倒置培养③作用：对菌落进行分离、计数无法计数 159 17 2 0无法计数 141 13 1 0无法计数 150 11 3 1 注意：1.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。2.计算微生物数量一般以培养皿中有30~300个菌落为宜。例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？(159+141+150)÷3 ×10×103×102=1.5×108个/g恒温摇床，振荡培养讨论1.判断液体培养基成功接种酵母菌的依据是什么？2.如何判断是否分离出酵母菌的单菌落？判断依据是什么？与未接种的培养基相比，接种的培养基由于酵母菌的增殖而变浑浊。与用酵母菌纯种在固体培养基表面接种的结果相比，用样品稀释液接种的固体培养基表面出现特征相同的、最小菌落即认为可能是分离出了酵母菌单菌落。3.在固体培养基表面涂布的菌种是否出现形态、颜色不同的单菌落？你认为出现该现象的原因是什么？4.仅从菌落特征是否能够认定你分离出了酵母菌？怎样进行进一步的鉴定？若出现，可能是在接种过程中有杂菌污染否。①挑取单菌落接入糖水中,培养一段时间检查是否能产生酒味②接入面团中观察能否发面;③挑取菌落样品，制作临时装片，在显微镜下观察、识别自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下列是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。（1）实验步骤∶①制备稀释倍数为102、103、104、105、106的系列稀释液。②为了得到更加准确的结果，应选用 法接种样品。③适宜温度下培养。（2）结果分析∶①测定大肠杆菌数目时，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，其中正确的是（ )A.一个平板，统计的菌落数是230 B.两个平板，统计的菌落数是 220 和260，取平均值 240C.三个平板，统计的菌落数分别是 21、5和52，取平均值 26D.四个平板，统计的菌落数分别是 210、300、240和250，取平均值 250稀释涂布平板C②某同学在稀释倍数为105的培养基中测得平板上菌落数的平均值为 26.5，那么每毫升样品中的细菌数是 （涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）。③用这种方法测定的大肠杆菌密度，实际活菌数量要比测得的数量 ，为什么？ 2.65×107多因为两个或多个细菌粘连在一起在平板上只能繁殖成一个菌落，计数为1个细菌。计数微生物——显微镜计数法血细胞计数板专用盖玻片1. 每个血细胞计数板的正中央有2个计数区。各9个大方格（中央为红细胞计数区，4个角为白细胞计数区）2. 红细胞计数区共400个小方格。①大方格：_____个。长、宽各1 mm。1个大方格液体体积＝1 mm2×0.1 mm＝0.1 mm3(0.1×10-3mL)。计数区正中间的大方格为___________计数区。四角的四个大方格是_________计数区。②中方格：红细胞计数区又用双线分成______(或16)个中方格。③小方格：每个中方格再用单线划分为______(或25)个小方格。所以一个计数区共有 个小方格。(4)计数时的几个注意点①滴加菌液要避免菌液滴到盖玻片上并防止 ，以免影响计数结果。先盖盖玻片再滴加菌液，让菌液自行渗入，②对有25个中方格的红细胞计数区可采用_________法对酵母细胞进行计数。9红细胞白细胞2516产生气泡“五点取样”400母细胞进行计数。③在计数每一小方格中的细胞数时，为了避免重复计数压在小方格边缘线上细胞的数目，应_____________________________。④为了保证结果的可信度，消除误差，应对同一红细胞计数区中的细胞数进行_____ 次计数后取平均值，再按比例进行换算。小思考：显微镜直接计数法有什么缺点吗？【答案】不能区分死菌和活菌；计数结果较实际活菌偏大⑤用血细胞计数板对酵母菌计数时，吸取培养液前要轻轻振荡几次试管的目的是 。“数上不数下”“数左不数右”3使酵母菌分布均匀，计数准确谢 谢！