2023届河南省TOP二十名校高三下学期猜题大联考（二）理综生物试题（含解析）

2023届河南省TOP二十名校高三下学期猜题大联考（二）理综生物试题

学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________

一、单选题

1．细胞衰老后形态结构会发生如图所示的一系列变化。下列相关叙述正确的是（    ）

A．衰老的细胞中线粒体数目并没有明显变化，因此能量供应量不会降低

B．衰老的细胞发生皱缩、体积减小可能与水分和蛋白质含量均减少有关

C．用龙胆紫溶液染色后，衰老细胞比正常细胞的染色质区域着色浅

D．细胞衰老后，细胞核的体积缩小，对细胞代谢的控制能力降低

二、综合题

2．相互对照也叫对比实验，即设置两个或两个以上的实验组，而不另设对照组，通过对实验结果的比较分析，来探究某种因素与实验对象的关系。下列不属于对比实验的是（    ）

A．在“探究酵母菌细胞呼吸的方式”时，设置有氧和无氧两种条件

B．鲁宾和卡门利用同位素标记法探究光合作用中O2中的氧是来自H2O还是CO2

C．在“探究植物细胞的吸水和失水”时，对实验材料先后进行滴加蔗糖溶液和清水处理

D．赫尔希和蔡斯利用同位素标记法探究噬菌体的遗传物质是DNA还是蛋白质

三、单选题

3．操纵子是原核细胞基因表达调控的一种结构形式，下图为大肠杆菌乳糖操纵子模型，P为RNA聚合酶结合位点，lacZ、lacY、lacA为三种结构基因，阻遏蛋白与调节基因操纵基因结构基因操纵基因（O）结合会抑制RNA聚合酶与P的结合。下列相关叙述错误的是（    ）

A．R基因表达后会影响lacZ、lacY、LacA的表达

B．①和②过程碱基互补配对方式不完全相同

C．R基因复制和转录时所需模板不完全相同

D．基因R、O的基本组成单位均为核糖核苷酸

4．在进化历程中，不同生物类群为了适应各直代谢途径和营养方式，形态结构等会发生相应的改变。结合现代生物进化理论，以下解释不正确的是（    ）

A．某些细胞为适应精氨酸不足的环境，变异出利用其他氨基酸转化为精氨酸的代谢途径

B．藻青菌中出现能利用较长波长光的叶绿素后，有利于其扩大生存范国

C．微生物具有高效吸收营养物质的各种途径，是自然选择定向选择的结果

D．当动物出现更适应摄食的复杂器官和系统后，并不能说明形成了新物种

5．近年来，植物生长调节剂已被广泛应用于农业领域，下列相关叙述错误的是（    ）

A．植物生长调节剂是由人工合成的，可作为化学信号调节高等植物的细胞代谢

B．喷洒一定浓度的生长素类调节剂可以缓解小麦因没有完成受粉而造成的减产

C．通过对百合植株喷洒赤霉素类调节剂，可促进细胞伸长形成“肌肉型百合”

D．能延长马铃薯、大蒜储藏期的青鲜素（抑制发芽），其残留可能对人体健康有影响

6．随着我国经济社会的发展，生态文明建设理念深入人心，保护生物多样性已经引起全国人民的高度关注。下列相关叙述正确的是（    ）

A．生物圈内所有的植物、动物和微生物及其所拥有的全部基因构成了生物多样性

B．将动植物分别迁至保育机构进行专门护理是对生物多样性最有效的保护

C．生物多样性在科学研究、艺术创作、药用食用中体现的价值小于其间接价值

D．引进外来物种可以增加本地生物多样性，提高生态系统的抵抗力稳定性

四、综合题

7．我国古代劳动人民在日常劳作中总结出很多生动有趣，富含生物学道理的农谚。比如“麦要浇芽，菜要浇花”、 “寸麦不怕尺水，尺麦但怕寸水”等。回答下列问题：

(1)两则农谚中都蕴含着要给农作物适时、适量浇水的道理。水在小麦细胞中的作用有_________（写出两点）；小麦在越冬期细胞内_________（填“自由水”或“结合水”）所占比例大。

(2)“尺麦但怕寸水”是指小麦在春季进入生长旺盛阶段，此时浇水太多反而影响生长，原因是：土壤中积水会造成小麦根部进行_________，其产物_________会对根部细胞造成毒害。

(3)“麦要浇芽，菜要浇花”指作物在不同的生长时期，对其进行水、肥管理的增产效果有很大差别。小麦、油菜对氮肥的需求都较高，缺氮会造成作物叶小色淡，这说明无机盐的作用之一是_________；施肥后要及时浇水，这是因为作物根系只能吸收_________形式的矿质元素。

(4)根系生长有趋肥性。深层施肥除可减少表层施肥造成的矿质元素氧化流失外，还可以使_________吸收更多的水分和无机盐，从而使植株健壮，增产显著。

8．甲状腺功能减退症（甲减）是由多种原因引起甲状腺激素的合成、分泌减少或组织利用障碍而导致的全身性低代谢综合征。甲减和抑郁症都会引发患者精神萎靡、情绪低落等精神症状，临床上需要加以区分、对症治疗。另外长期甲减也可以引起严重的抑郁症。回答下列问题：

(1)某患者有甲减症状，临床检查甲状腺功能正常，还需进一步完善_________、_________（填器官）功能的检查；若上述器官的功能均正常，医生却做出不能完全排除甲减可能的诊断，做出这一诊断的依据是_________。

(2)甲减患者会出现全身性低代谢，这是因为_________。

(3)甲状腺球蛋自抗体可造成甲状腺组织的损伤，引发甲减，从免疫学角度分析该病属于_________。

(4)长期甲减也可以引起严重的抑郁症，说明神经调节与体液调节的关系是_________。

9．“碳达峰” “碳中和”成为“十四五”乃至2035国家战略目标。湖泊的碳循环（如图）在全球碳循环中扮演着重要角色。湖泊中DOC可以氧化形成CODIC在不同碱度下的平衡决定了水体CO2分压（pCO2）。湖泊沉积物是重要的碳累积场所，也是湖泊生态系统重要的营养来源与活动场所。回答下列问题：

(1)“碳达峰”“ 碳中和”是全世界人民共同奋斗才能实现的目标，原因是碳循环具有________的特点。

(2)水体pCO2可以指示水体一大气间的CO2交换情况，40PapCO₂被视作大气一水体之间实现了碳平衡，据图分析此CO2分压下，水生植物和藻类的光合作用吸收的CO2________（填“大于”“等于”或“小于”）其呼吸作用释放的CO2，理由是________。

(3)湖泊生态系统中生存着浮游植物、水生植物等生产者原生动物、浮游动物等初级消费者，底栖动物、鱼虾等高级消费者。请写出碳在湖泊生物群落中的流动情况（用箭头加文字的形式，并在相应箭头上标注出碳元素的流动形式）________。

(4)据图分析，湖泊中CO2气体的饱和度除受UV、O2、温度等影响，还受________（答两点）环境因素的影响，因此往往表现出季节性等差异。

(5)CH4是一种温室效应数十倍于CO2的温室气体，也是潜在的替代能源，湖泊CH4气体主要源自在缺氧条件下产甲烷菌对底层水体、沉积物中有机质的分解，根据以上资料试提出一条既能降低温室效应又能减轻能源危机的研发方案：________。

10．在果蝇眼色遗传研究中，研究者发现除了红眼、白眼性状（由基因A/a控制）外，还有无眼（由基因B/b控制）的果蝇，请根据下列杂交实验，回答下列问题：

(1)根据杂交结果分析，无眼性状的遗传方式为________；控制果蝇上述性状遗传的这两对基因遵循________定律，判断依据为________。

(2)F1红眼雌果蝇的基因型有________种，其中杂合子所占比例为________。

(3)若要通过一次杂交实验即可鉴定出某无眼雄果蝇的基因型，可将其与表现型为________（填“红”“白”或“无”）眼的雄果蝴杂交，写出可能的实验结果及相应的结论：________。

11．航天器组装、集成与测试厂房（AIT厂房）具有通风、干燥、营养物质匮乏等特性。为了保护航天器免受生物腐蚀和避免地球和其他天体之间出现交叉生物污染，研究者需将AIT厂房中的微生物进行分离鉴定，并进行抗生素抵抗力、抗紫外线、耐酸碱试验，以便找到更加有效的监测和消杀方法。回答下列问题：

(1)对AIT厂房表面环境用随有无菌水的棉签擦拭取样，将采集到的样本加入到1mL无菌磷酸缓冲液中，然后可采用________法对微生物进行分离培养，观察菌落的形态学特征，挑选形态不同的单菌落进一步分离培养，得到单一菌株，再置于________培养基（根据物理性质划分）中，在摇床上进行纯化培养，最后采用________法将得到的菌液进行长期保存，以便后期用于菌株性质的测定。

(2)抗生素耐药性试验：采用纸片扩散法对分离得到的菌株进行药敏试验。每个平板上放置5个药敏纸片，纸片的药物扩散范围内菌株的生长会被抑制，形成透明的抑菌圈，可以通过测量________来反映细菌对测定抗生素的耐药程度，耐药程度越强的菌株观察到的现象是________。

(3)抗紫外线试验：将每株细菌分别接种到2个平板中，其中一个平板在超净工作台________环境下照射10min，照射时需要将培养皿的盖子________（填“打开”或“闭合”）；照射完毕后，将两组平板置于32℃恒温培养箱倒置培养，观察菌落生长情况。

(4)耐酸、碱试验：为了评估每个菌株的pH生长范围，将每种细菌分别涂布在pH=7的平板上，并在32℃恒温培养箱中倒置培养，观察菌落生长情况；同时配置逐步________（填“降低”“升高”或“降低和升高”）pH的相同培养基，采用相同方法接种、培养、观察，________为该种细菌所能生存的终极pH。

12．细胞中NF-kB蛋白的活性水平与肿瘤的发生发展密切相关。为了高效地筛选出以NF-kB为靶点的抗肿瘤药物，利用基因工程构建NF-kB的报告基因载体。具体原理为把已确定的NF-kB基因的调控序列（响应元件）正确地剪切到报告基因GFP（其表达产物荧光蛋白可被实时检测）上，使报告基因能与NF-kB基因同步表达，其工作模式见下图。回答下列问题：

(1)构建pGL6-NF-kB-GFP报告基因质粒时，首先以pcDNA3.1-Flag-GFP质粒为模板，利用PCR技术扩增GFP基因，能否准确扩增出GFP基因的关键是________；升温至72℃时PCR反应体系中完成的变化主要是________。

(2)用BamHI和HindⅢ限制性核酸内切酶（二者切割后的黏性末端不同）对上述PCR产物及pGL6-NF-kB-Luc质粒进行双酶切，该方法的优点是________。然后还需要使用________，才能得到pGL6-NF-kB-GFP报告基因质粒。

(3)将pGL6-NF-kB-GFP报告基因质粒导入肿瘤细胞常用的方法是________；体外培养肿瘤细胞的培养基除细胞所需的营养物质外，还需加入________；再放入气体具体组成成分为________的培养箱中进行培养。

(4)将转染成功的肿瘤细胞置于含待检测抗肿瘤药物的培养基中培养一段时间，并通过特定方法检测细胞中GFP蛋白表达量的变化，以显示NF-kB的活性水平。若药物抗肿瘤效果显著，可观测到的现象为________。

参考答案：

1．B

【分析】衰老细胞的特征：

（1）细胞内水分减少，细胞萎缩，体积变小，但细胞核体积增大，染色质固缩，染色加深；

（2）细胞膜通透性功能改变，物质运输功能降低；

（3）细胞色素随着细胞衰老逐渐累积；

（4）有些酶的活性降低；

（5）呼吸速度减慢，新陈代谢减慢。

【详解】A、从图中信息可知衰老的细胞中线粒体数目并没有明显变化，但是由于酶的活性降低，细胞代谢速率减慢，因此能量供应量降低，A错误；

B、由于水分减少，衰老的细胞体积减小，由于染色质螺旋化后转录受阻，因此蛋白质合成减少，骨架蛋白对细胞的支撑作用下降，细胞发生皱缩，B正确；

C、衰老细胞的特征之一是染色质收缩，染色加深，因此用龙胆紫溶液染色后，衰老细胞比正常细胞的染色质区域着色深，C错误；

D、衰老细胞的细胞核体积增大，D错误。

故选B。

2．C

【分析】设置两个或两个以上的实验组，通过对结果的比较分析，来探究某种因素与实验对象的关系，这样的实验叫做对比实验。为了探究酵母菌细胞在有氧和无氧条件下呼吸方式的区别，这两组实验都作了一定的人为因素处理。

【详解】A、根据题干信息可知，在“探究酵母菌细胞呼吸的方式”时，设置有氧和无氧两种条件，即有氧呼吸组和无氧呼吸组，属于对比实验，A错误；

B、鲁宾和卡门利用同位素标记法探究光合作用中O2中氧的来源时，设置了给小球藻分别供应H218O、CO2和H2O、C18O2两组，属于对比实验，B错误；

C、在“探究植物细胞的吸水和失水”时，对实验材料先后进行滴加蔗糖溶液和清水处理，构成了自身前后对照，不属于对比实验，C正确；

D、赫尔希和蔡斯利用同位素标记法探究噬菌体的遗传物质是DNA还是蛋白质，设置了35S或32P标记的噬菌体分别侵染未被标记的大肠杆菌，构成对比实验，D错误。

故选C。

3．D

【分析】转录过程中，需要以DNA的一条链为模板合成mRNA；翻译过程中，需要以mRNA为模板，tRNA运送氨基酸，从而合成多肽链，多肽链经盘曲折叠变成具有一定空间结构的蛋白质。

【详解】A、由题干可知，调节基因的表达产物阻遏蛋白与操纵基因结合，会抑制RNA聚合酶与P的结合，无法起始转录，结构基因不能表达，A正确；

B、①和②分别表示转录和翻译过程，二者碱基互补配对分别发生在DNA与mRNA、mRNA与tRNA之间，配对方式不完全相同，B正确；

C、基因R复制的模板为DNA分子的两条链，基因R转录的模板为DNA分子的一条链，二者所需模板不完全相同，C正确；

D、基因R、O的基本组成单位均为脱氧核糖核苷酸，D错误。

故选D。

4．A

【分析】现代进化理论的基本内容是:①进化是以种群为基本单位，进化的实质是种群的基因频率的改变。②突变和基因重组产生进化的原材料。③自然选择决定生物进化的方向。④隔离导致物种形成。

【详解】A、变异是不定向的，有的细胞通过变异产生了利用其他氨基酸转化为精氨酸的代谢途径，精氨酸不足的环境只是把这类细胞选择出来，A错误；

B、藻青菌中出现能利用较长波长光的叶绿素后，吸收光的范围更广，有利于其扩大生存范围，B正确；

C、自然选择定向选择出具有对营养物质高效吸收途径的微生物，C正确；

D、形成新物种的标志是产生生殖隔离，因此当动物出现更适应摄食的复杂器官和系统后，并不能说明形成了新物种，D正确。

故选A。

5．B

【分析】植物生长调节剂：人工合成的对植物的生长发育有着调节作用的化学物质。特点是：容易合成、原料广泛和效果稳定。

【详解】A、植物生长调节剂是由人工合成的，对植物的生长、发育有调节作用的化学物质，可作为化学信号来影响高等植物的细胞代谢，A正确；

B、喷洒生长素类调节剂可以促进果实的发育，但不能促进种子的形成，小麦没有完成受粉，不能形成种子，因此会造成减产，B错误；

C、赤霉素类调节剂可以促进细胞伸长，C正确；

D、可以延长马铃薯、大蒜贮藏期的青鲜素（抑制发芽）可能有致癌作用，D正确。

故选B。

6．C

【分析】1、生物的多样性:生物圈内所有的植物、动物和微生物，它们所拥有的全部基因以及各种各样的生态系统，共同构成了生物多样性。生物多样性包括基因多样性、物种多样性和生态系统多样性。

2、多样性的价值:

(1)直接价值:对人类有食用、药用和工业原料等使用意义，以及有旅游观赏、科学研究和文学艺术创作等非实用意义的;

(2)间接价值:对生态系统起重要调节作用的价值（生态功能）；

(3)潜在价值:目前人类不清楚的价值。

3、多样性的保护:

(1)就地保护（自然保护区）︰就地保护是保护物种多样性最为有效的措施。

(2)易地保护动物园、植物园。

(3)利用生物技术对生物进行濒危物种的基因进行保护。如建立精子库、种子库等。

(4)利用生物技术对生物进行濒危物种进行保护。如人工授精、组织培养和胚胎移植等。

【详解】A、生物圈内所有的植物、动物和微生物，它们所拥有的全部基因以及各种各样的生态系统，共同构成了生物多样性，A错误；

B、就地保护是对生物多样性最有效的保护，B错误；

C、生物多样性在科学研究、艺术创作、药用食用中体现的是其直接价值，生物多样性的间接价值主要体现在调节生态系统的功能等方面，间接价值大于直接价值，C正确；

D、外来物种若能适应环境并且短时间内无天敌，可能会导致本地生物多样性降低，这会降低生态系统的抵抗力稳定性，D错误。

故选C。

7．(1)     是细胞内的良好溶剂、参与细胞内的生物化学反应、构成液体环境、运输营养物质和代谢废物、组成细胞结构     自由水

(2)     无氧呼吸     酒精

(3)     细胞中复杂化合物的重要组成成分     离子

(4)根系深扎（根向下生长）

【分析】细胞内的水以自由水和结合水的形式存在，结合水是细胞结构的主要组成成分，自由水是细胞内良好的溶剂，是许多化学反应的介质，水还是许多化学反应的反应物或生成物，水能自由移动，对于运输营养物质和代谢废物具有重要作用;自由水与结合水的比值越高，细胞新陈代谢越旺盛，抗逆性越差，反之亦然。

【详解】（1）水在细胞中的存在形式有两种：自由水和结合水，其中自由水的作用有：是细胞内的良好溶剂、参与细胞内的生物化学反应、构成液体环境、运输营养物质和代谢废物；结合水是细胞结构的重要组成部分。细胞中的自由水的含量远高于结合水，在小麦越冬期结合水含量相对较高，但细胞内水的主要存在形式还是自由水。

（2）土壤中积水会造成小麦根部进行无氧呼吸，其产物酒精会对根系细胞造成毒害。

（3）缺氮会造成作物叶小色淡是因为氮是叶绿素的重要组成成分，这说明无机盐是细胞中复杂化合物的重要组成成分；矿质元素必须溶解在水中形成离子才能被植物根系吸收，因此，施肥后要及时浇水。

（4）由题干可知“根系生长有趋肥性”，因此深层施肥可以使根系深扎，吸收更多的水分和无机盐，且抗倒伏能力增强，所以植株健壮，增产显著。

8．(1)     下丘脑     垂体     甲状腺激素合成和分泌正常，但组织利用障碍（不能与受体正常结合）也会导致甲减

(2)甲状腺激素的功能之一是提高细胞代谢，几乎全身细胞都是甲状腺激素的靶细胞（甲状腺激素几乎作用于全身各处的细胞）

(3)自身免疫病

(4)内分泌腺所分泌的激素可以影响神经系统的发育和功能

【分析】神经调节和体液调节的关系是肾上腺等内分泌腺的分泌受神经系统的控制（体液调节是神经调节的一个环节)，内分泌腺分泌的激素(如前列腺素)也会影响神经系统的功能。

【详解】（1）甲状腺激素的合成、分泌受下丘脑、垂体的分级调节，由下丘脑和垂体病变引起的促甲状腺激素释放激素（TRH）或者促甲状腺激素（TSH）合成和分泌减少，也可导致甲减，因此需要对这两种器官的功能进行检查。由题干信息可知，甲状腺激素合成和分泌正常，但组织利用障碍（不能与受体正常结合）也会导致甲减，因此相关内分泌器官功能正常，但不能完全排除甲减可能。

（2）甲状腺激素的功能之一是提高细胞代谢，几乎全身细胞都是甲状腺激素的靶细胞（甲状腺激素几乎作用于全身各处的细胞），因此甲减患者会出现全身性低代谢。

（3）甲状腺球蛋白抗体是患者自身产生的，可造成甲状腺组织的损伤，因此属于自身免疫病。

（4）抑郁症与神经系统的功能障碍有关，长期甲减可以引起严重的抑郁症说明内分泌腺所分泌的激素（甲状腺激素）可以影响神经系统的发育和功能。

9．(1)全球性（循环性）

(2)     大于     CO2除来自水生植物和藻类的呼吸作用，还有消费者和分解者的呼吸作用，以及溶解性有机碳（DOC）、溶解性无机碳（DIC）的分解等

(3)

(4)光照、碱度、风力

(5)采集湖泊底层产生的CH4，作为能源加以利用（收集湖泊底层沉积物，利用产甲烷菌在缺氧条件下发酵，收集产生的CH4作为能源加以利用）

【分析】生态系统的物质循环具有全球性和循环性，在碳循环过程中，碳元素通过光合作用与化能合成作用以二氧化碳的形式进入生物群落，通过生物群落的呼吸作用和微生物的分解作用，以二氧化碳的形式返回非生物环境。

【详解】（1）由于碳循环具有全球性和循环性，因此整个生物圈内的碳循环为统一整体，需要全世界人民共同奋斗才能实现“碳达峰”“碳中和”。

（2）40PapCO₂被视作大气—水体之间实现了平衡，即水体中CO2的来源和去路也处于动态平衡状态，水体中CO2的消耗主要是水生植物和藻类的光合作用吸收CO2；水体中CO2的来源除水生植物和藻类的呼吸作用，还有消费者和分解者的呼吸作用，以及溶解性有机碳（DOC）、溶解性无机碳（DIC）的分解等，因此水生植物和藻类的光合作用吸收的CO2大于其呼吸作用释放的CO2。

（3）碳元素在生物群落内部以有机碳（物）的形式进行传递，故碳在湖泊生物群落中的流动情况为：  。

（4）据题干信息可知，溶解性无机碳（DIC）在不同碱度下的平衡决定了水体CO2分压（pCO2），因此碱度影响湖泊中CO2气体的饱和度；光照影响水生植物光合作用吸收CO2的强度，也会影响湖泊中CO2气体的饱和度；风力会影响水体一大气间的CO2交换情况。

（5）由于CH4是一种温室效应数十倍于CO2的温室气体，且是潜在的替代能源，因此发展采集湖泊底层产生的CH4作为能源加以利用既能降低温室效应又能减轻能源危机。

10．(1)     常染色体隐性遗传     （基因）自由组合     F1中红眼：白眼：无眼=9：3：4，是9：3：3：1的变式，说明A/a和B/b基因独立遗传（根据杂交结果分析，控制有眼和无眼性状的基因位于常染色体，控制红眼和白眼性状的基因位于X染色体，控制两对相对性状的基因分别位于两对同源染色体上）

(2)     4     5/6

(3)     白     若子代中有红眼果蝇出现，则无眼雄果蝇的基因型为bbXAY；若子代有眼果蝇全为白眼，则无眼雄果蝇的基因型为bbXaY

【分析】组合定律的实质是：位于非同源染色体上的非等位基因的分离或自由组合是互不干扰的；在减数分裂过程中，同源染色体上的等位基因彼此分离的同时，非同源染色体上的非等位基因自由组合。

【详解】（1）亲本都是红眼，子代出现白眼和无眼性状，说明白眼和无眼全部为隐性性状。由于白眼只出现在雄性个体中，因此控制白眼的基因位于X染色体上，其遗传方式为伴X染色体隐性遗传。由于无眼性状在雌雄个体中的比例为1：1，因此控制无眼的基因位于常染色体上，其遗传方式为常染色体隐性遗传。F1中红眼：白眼：无眼=9：3：4，是9：3：3：1的变式，说明A/a和B/b基因独立遗传，遵循基因自由组合定律。

（2）由于F1中白眼雄性的基因型为XaY，有眼（B_）：无眼（bb）=3：1，并且基因在常染色体上，再根据亲本的表现型可以推出亲本的基因型为BbXAXa和BbXAY，F1有眼果蝇的基因型共2种，分别是BB占1/3，Bb占2/3；只考虑A/a基因，红眼雌果蝇基因型共2种，分别是XAXA占1/2、XAXa占1/2，二者组合在一起F1红眼雌果蝇的基因型有2×2=4种，其中杂合子所占比例=1-1/3×2/3=5/6。

（3）若要通过一次杂交实验即可鉴定出某无眼雄果蝇（bbXAY、bbXaY）的基因型，可将其与表现型为白眼的雌果蝇（B_XaXa）杂交，若子代中有红眼果蝇出现，则无眼雄果蝇的基因型为bbXAY；若子代中有眼果蝇全为白眼，则无眼雄果蝇的基因型为bbXaY。

11．(1)     稀释涂布平板     液体     甘油管藏

(2)     抑菌圈的直径（大小）     抑菌圈越小

(3)     紫外光（线）     打开

(4)     降低和升高     观察不到菌落生长的培养基所对应的最高和最低pH

【分析】微生物常见的接种的方法:

①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

【详解】（1）对样品稀释后可以先采用稀释涂布平板法对微生物进行分离培养，观察菌落的形态特征，然后挑选形态不同的单菌落进一步分离培养，得到单一菌株。在摇床上应该采用液体培养基对其进行纯化培养；若要对菌液进行长期保存可采用甘油管藏法。

（2）可以通过测量抑菌圈的直径来反映细菌对抗生素的耐药程度，抑菌圈越小说明耐药程度越强。

（3）抗紫外线试验时需将平板放在紫外灯下照射，并且需要将培养皿的盖子打开。

（4）为了评估每个菌株的pH生长范围，需要将每种细菌先分别涂布在pH=7的平板上，并在32℃恒温培养箱中倒置培养，观察菌落生长情况；同时配置逐步降低和升高pH的相同培养基，采用相同方法接种、培养、观察，观察不到菌落生长的最高和最低pH为该种细菌所能生存的终极pH。

12．(1)     引物的正确设计     合成GFP基因的子链（合成DNA子链）

(2)     避免质粒和GFP基因自身环化，避免GFP基因反向连接     DNA连接酶

(3)     显微注射法     血清     95%空气+5%CO2

(4)添加该药物的培养基中，肿瘤细胞GFP蛋白表达量显著下降

【分析】利用PCR技术扩增目的基因（适用于目的基因的核首酸序列已知的情况）：

①概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。

②原理:DNA复制。

③条件:模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。

【详解】（1）利用PCR技术能准确扩增出基因的关键是引物的正确设计；升温至72℃时反应体系中完成的变化主要是子链的延伸，即合成GFP基因的子链。

（2）用两种切割后形成不同黏性末端的限制酶切割质粒和GFP基因，可以避免质粒和GFP基因自身环化，也可以避免GFP基因反向连接；该反应系中还需要加入DNA连接酶才能将切割完的pGL6-NF-kB-Luc质粒（去除了Luc），与GFP基因连接成pGL6-NF-kB-GFP报告基因质粒。

（3）将外源基因导入动物细胞常用显微注射法；体外培养肿瘤细胞的培养基除细胞所需的营养物质外，还需加入血清等天然成分；将含肿瘤细胞的培养基置于37℃恒温培养箱中培养，培养箱中的气体具体组成成分为95%空气+5%CO2，其中O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。

（4）本研究的目的是高效地筛选出以NF-kB为靶点的抗肿瘤药物，由于GFP基因是NF-kB基因的报告基因，因此抗肿瘤效果显著的药物使用后会使NF-kB表达量显著下降，与NF-kB基因具有相同响应元件的GFP基因表达量也显著下降，因此会观测到肿瘤细胞GFP蛋白表达量显著下降的现象。