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浙江省台州市2022-2023学年高二生物下学期4月期中试题（Word版附解析）
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这是一份浙江省台州市2022-2023学年高二生物下学期4月期中试题（Word版附解析），共25页。试卷主要包含了考试结束后，只需上交答题纸， 下列叙述正确的是等内容，欢迎下载使用。
2022学年第二学期台州山海协作体期中联考
高二年级生物学科试题
考生须知：
1.本卷共8页满分100分，考试时间90分钟。
2.答题前，在答题卷指定区域填写班级、姓名、考场号、座位号及准考证号并填涂相应数字。
3.所有答案必须写在答题纸上，写在试卷上无效。
4.考试结束后，只需上交答题纸。
选择题部分
一、选择题（本大题共25小题，每小题2分，共50分。每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的，不选、多选、错选均不得分）
1. 基因工程的核心步骤是（ ）
A. 获取目的基因 B. 构建重组DNA分子
C. 将重组DNA分子导入受体细胞 D. 检测目的基因及其表达产物
【答案】B
【解析】
【分析】获取了足够量的目的基因后，下一步就是要让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时，使目的基因能够表达和发挥作用，这就需要构建基因表达载体。这一步是培育转基因抗虫棉的核心工作。基因表达载体是载体的一种，除目的基因、标记基因外，它还必须有启动子、终止子等。启动子是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游，紧挨转录的起始位点，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终表达出人类需要的蛋白质。
【详解】构建基因表达载体也就是构建重组DNA分子，获取了足够量的目的基因后，就要让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时，使目的基因能够表达和发挥作用，这就需要构建基因表达载体，所以这一步是培育转基因抗虫棉的核心工作，B正确。
故选B。
2. 下列关于无菌操作的叙述，正确的是（ ）
A. 煮沸消毒不能杀死微生物的细胞
B. 应尽量选择脱脂棉塞住试管口，否则容易造成吸水污染
C. 配置培养基时应该先灭菌再调节pH
D. 对于接种间应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒
【答案】D
【解析】
【分析】微生物实验室的培养的关键是无菌操作，无菌操作主要包括：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。
【详解】A、煮沸消毒法100℃煮沸5-6分钟只能杀死部分生活状态的微生物细胞，不能杀死芽孢、孢子，A错误；
B、由于脱脂棉吸水后容易引起污染，所以制作棉塞应该使用普通棉花，而不能使用医用的脱脂棉，B错误；
C、为避免杂菌污染，应先调节pH再灭菌，C错误；
D、紫外线能破坏DNA结构，对于接种间应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒，以营造无菌环境，D正确。
故选D。
3. 在分离、纯化细菌实验中，划线接种（甲）、培养结果（乙）如下图，a、b、c、d是划线的四个区域。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 操作过程中，接种环蘸取菌液1次，至少需灼烧五次
B. 连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落
C. 蘸取菌液和划线要在酒精灯火焰旁进行
D. 甲图中的a区域为划线的起始区域
【答案】D
【解析】
【分析】分析题干可看出本实验接种微生物的方法为平板划线法，该方法中会通过多次划线来逐步稀释以便获得单个菌落，因此在最后的一个区域中可能获得单个菌落，该方法实施时为了严格的无菌操作，需要全程在酒精灯火焰附近操作。
【详解】A、平板划线法中每次划线前都要灼烧接种环，保证菌种来自于上一次划线的末端，划线结束后也要灼烧接种环，防止污染环境、感染接种者；操作过程中，划线了四次，因此接种环蘸取菌液1次，至少需灼烧五次，A正确；
B、连续划线可以将聚集的菌种逐步稀释，以便获得单个菌落，B正确；
C、为了防止空气中杂菌的污染，蘸取菌液和划线都要在酒精灯火焰旁进行，C正确。
D、分析图乙，a对应的区域出现了单个菌落，d区域菌落最多，因此a区域应该为划线的最终区域，d区域为划线的起始区域，D错误；
故选D。
4. 下列关于质粒的叙述，正确的是（ ）
A. 质粒是细菌细胞核中能自主复制的DNA分子
B. 基因工程中被用作载体的质粒都是天然质粒
C. 质粒完全水解后最多可产生6种化合物
D. 质粒是基因工程中的一种工具酶
【答案】C
【解析】
【分析】作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。
【详解】A、细菌为原核生物，没有被核膜包被的成形的细胞核，A错误；
B、天然的质粒需要经过改造后才可作为基因工程的运载体，B错误；
C、质粒的本质是DNA分子，完全水解后最多可产生6种化合物，即为磷酸、脱氧核糖、4种含氮碱基（A、T、C、G），C正确；
D、质粒是基因工程的运载体，不是工具酶，D错误。
故选C。
5. 水蛭素是一种蛋白质，可用于预防和治疗血栓。研究人员发现，用赖氨酸替换水蛭素第47位的天冬酰胺，可以提高它的抗凝血活性。在这项替换研究中，目前可行的直接操作对象是（ ）
A. 基因 B. 氨基酸 C. 多肽链 D. 蛋白质
【答案】A
【解析】
【分析】蛋白质工程指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要．蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程。
【详解】通过题干信息可知，可通过蛋白质工程技来完成，蛋白质工程直接改造的是相应的基因，A正确。
故选A。
阅读下列材料，回答以下题。
仙居杨梅除直接食用，还可用于酿酒。智慧的劳动人民利用发酵工程技术，利用发酵罐（如图），大规模生产杨梅酒，使仙居杨梅的价值翻了一番。发酵型杨梅酒的工艺流程依次包括挑选杨梅、清洗、打浆、糖酸调整、加入酵母菌、倒罐、发酵、除酸、过滤、澄清、杀菌、陈酿、成品等。
6. 发酵工程主要利用的是哪类生物的细胞（ ）
A. 细菌 B. 真菌 C. 病毒 D. 微生物
7. 下列叙述正确的是（ ）
A. 图中2为杨梅酒出口，通过检测流出发酵液糖的浓度，决定何时终止发酵
B. 图中3为叶轮，可以加快酵母菌的繁殖
C. 采用真空发酵技术不能提高酒精发酵速率
D. 夏季高温会促进发酵菌种的繁殖，大量获得发酵产物
8. 某同学采用塑料瓶等自制简易杨梅醋发酵装置，下列叙述错误的是（ ）
A. 可以采用果酒为原料
B. 保持通气，在发酵液表面会形成菌膜
C. 发酵过程中，醋酸菌的生长繁殖和代谢产物的形成都与pH有关
D. 吸取发酵液，在显微镜下观察可看到菌落
【答案】6. D 7. B 8. D
【解析】
【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵、产品的分离、提纯等方面。发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因而可以得到较为专一的产物。发酵工程在医药、食品、农业、冶金、环境保护等许多领域都得到广泛应用。
【6题详解】
发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身，故发酵工程主要利用的是微生物的细胞，D正确。
故选D。
【7题详解】
A、图中1为冷却水的进口，2为冷却水的出口，不能通过2检测流出发酵液糖的浓度，A错误；
B、图中3为叶轮，叶轮的搅拌不仅使气泡与发酵液混合，而且使微生物细胞与发酵液中的营养物质接触，可以加快酵母菌的繁殖，B正确；
C、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵，因此，采用真空发酵技术能提高酒精发酵速率，C错误；
D、酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃，夏季高温不能促进发酵菌种的繁殖，D错误。
故选B。
【8题详解】
A、当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，因此可以采用果酒为原料制作果醋，A正确；
B、果酒制作过程中，如果接触到空气，醋酸菌就会增殖并将乙醇转变为醋酸，进而在果酒表面形成一层菌膜，B正确；
C、环境条件的变化不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢途径，因此，发酵过程中，醋酸菌的生长繁殖和代谢产物的形成都与pH有关，C正确；
D、菌落是指由单个或少数微生物细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成以母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞集团，吸取发酵液，在显微镜下不能看到菌落，可直接看到微生物，D错误。
故选D。
9. 泡菜中亚硝酸盐的含量高低及含量峰值时间的早晚与食盐的浓度关系如图，下列叙述正确的是（ ）
A. 食盐浓度越高，亚硝酸盐含量上升越快
B. 制作泡菜时加入陈泡菜汁会导致最终亚硝酸盐含量上升
C. 综合考虑选用7%的食盐浓度腌制的泡菜最安全、最经济
D. 发酵后期亚硝酸盐含量下降的原因可能是酸性、缺氧环境抑制杂菌生长
【答案】D
【解析】
【分析】曲线中的自变量包括时间和食盐的浓度，因变量是亚硝酸盐的含量。通过曲线分析，亚硝酸盐的含量随着时间先增多后降低，变化最明显的食盐浓度为5%，7%的实验浓度产生的亚硝酸盐较少。
【详解】A、亚硝酸盐含量上升最快的是5%的实验浓度，A错误；
B、陈泡菜汁中含有乳酸菌，可缩短发酵时间，一般不影响最终的亚硝酸盐含量，B错误；
C、最终5%和7%产生的亚硝酸盐含量一样，用5%的最安全、最经济，C错误；
D、亚硝酸盐是微生物产生的，后期含量下降可能是酸性、缺氧等条件抑制了产生亚硝酸盐微生物的生长，且亚硝酸盐可以分解，D正确。
故选D。
10. 下列有关生物技术安全与伦理的叙述，合理的是（ ）
A. 我国政府坚持反对生殖性克隆，支持治疗性克隆
B. 生物武器的特点有具有传染性、携带和投放相对简单、研发门槛较高等特点
C. 利用农杆菌转化法培育得到的转基因植物，不会引起基因污染
D. 将不同生物的DNA进行转移和重组，可以创造出新物种
【答案】A
【解析】
【分析】生殖性克隆是指通过克隆技术产生独立生存的新个体。治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定的细胞、组织和器官，用它们来修复或替代受损的细胞、组织和器官，从而达到治疗疾病的目的。两者有着本质的区别。
【详解】A、我国政府反对任何的生殖性克隆，但支持治疗性克隆，可解决器官移植等问题，A正确；
B、生物武器相对容易获得，也便于携带和施放，研发门槛并不高，产生的危害将是极大，B错误；
C、农杆菌转化法利用农杆菌T-DNA具有可转移的特点，将目的基因转移到受体细胞的染色体上，可随花粉转移，可能引起基因污染，C错误；
D、将不同生物的DNA进行转移和重组，使生物出现新的表现型，但不可以创造出新物种，D错误。
故选A。
11. 下列关于愈伤组织的说法，错误的是（ ）
A. 愈伤组织是无组织结构、松散的薄壁细胞团
B. 形成愈伤组织的过程不需要给予光照
C. 利用愈伤组织分化出的胚状体可制成不受季节限制的人工种子
D. 愈伤组织是由外植体脱分化形成的，其分化程度通常比外植体要高
【答案】D
【解析】
【分析】植物组织培养的实验操作步骤：
（1）培养基的制作：①配制各种母液：配制母液时，无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存。激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般按1mg/mL的质量浓度单独配制母液；②配制培养基，称取琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素等组分，依次加入，加蒸馏水定容；③灭菌，将分装好的培养基连同其他器械一起高压蒸气灭菌。
（2）外植体消毒：选取合适的外植体，用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70%的酒精中摇动2-3次，持续6-7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中1-2min。取出后，在无菌水水中至少清洗3次，漂净消毒液。
（3）接种：用体积分数为70%的酒精对工作台进行消毒，再点燃酒精灯所有实验操作必须在酒精灯旁进行，且器械每次使用后都需要灼烧灭菌。将外植体切成小段接种到锥形瓶中，注意整个过程的无菌操作。
（4）培养：接种后的放在无菌培养箱中培养，定期消毒，温度设置在18-22℃，并且每日用日光灯光照12h。
（5）移栽：移栽之前，应打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。然后用清水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长状后再移栽到土壤中。
（6）栽培：将幼苗移栽后，每天观察记录幼苗生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。
【详解】A、愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞，A正确；
B、愈伤组织的形成一般不需要光照，后续再分化过程需要给予适当光照，有利于促进叶绿素的产生，B正确；
C、利用愈伤组织分化出的胚状体，可以制成不受季节限制的人工种子，C正确；
D、由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，其分化程度通常比外植体要低，D错误；
故选D。
12. 花药离体培养是重要的育种手段。下图是某二倍体植物花药育种过程的示意图，下列叙述正确的是（ ）
A. 为防止微生物污染，花药需用70%酒精消毒
B. 获得的植株与图示秋水仙素之后的愈伤组织的染色体组数不同
C. 为获得健壮植株，在炼苗初期应给予预计栽培条件相同的外界环境
D. 该过程属于无性生殖，且所获植株一般没有使用价值
【答案】A
【解析】
【分析】图中②表示脱分化形成愈伤组织的过程，③表示再分化的过程。秋水仙素可抑制纺锤体的形成，进而导致细胞染色体数目加倍。移栽前先打开封口膜或瓶盖，让试管苗在培养箱内生长几日。用流水清洗掉根部的培养基后，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中，待其长壮后再移栽入土。每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。
【详解】A、70%的酒精有消毒的作用，花药需要经过消毒处理，可防止微生物污染，A正确；
B、秋水仙素可抑制纺锤体形成，导致染色体数目加倍，再经过再分化后，染色体数目和处理后的愈伤组织相同，B错误；
C、让试管苗在培养箱内生长几日。用流水清洗掉根部的培养基后，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中，待其长壮后再移栽入土，C错误；
D、该过程属于无性生殖，获得的植株都是纯合子，具有使用价值，D错误。
故选A。
13. 紫杉醇是红豆杉属植物产生的一种复杂的次生代谢产物，是目前最好的天然抗癌药物之一。最初的紫杉醇都是从红豆杉树皮中提取的，无法满足人们的需求。利用如图所示来生产紫杉醇是扩大紫杉醇来源的一条重要途径。下列叙述错误的是（ ）
A. 过程①细胞的结构和形态发生改变
B. ③过程一般采用液体培养基
C. 紫杉醇是细胞代谢产物，可以从愈伤组织中分离出来
D. 该过程只涉及植物细胞培养，未体现植物的组织培养技术
【答案】D
【解析】
【分析】1、植物细胞培养即在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其增殖的技术。利用植物细胞培养来获得目标产物（次生代谢产物），这个过程就是细胞产物的工厂化生产。
2、植物组织培养技术是指将离体的植物器官、组织或细胞等，在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。其具体流程为：接种外植体→诱导愈伤组织→诱导生芽→诱导生根→移栽成活。
【详解】A、过程①为脱分化，该过程中细胞的结构和形态发生改变，A正确；
B、过程②需将愈伤组织分散成单个细胞，常采用液体培养基，B正确；
C、紫杉醇是细胞次生代谢产物，可通过培养愈伤组织获得，C正确；
D、此过程中包含脱分化，涉及到了植物的组织培养技术，D错误。
故选D。
14. 下列关于受精作用，正确的是（ ）
A. 生殖细胞、受精卵和早期的胚胎细胞是胚胎工程操作的主要对象
B. 雌原核在减数第二次分裂之前形成以便受精
C. 受精卵的遗传物质一半来自父方，一半来自母方
D. 受精卵形成后进行减数分裂进入卵裂期
【答案】A
【解析】
【分析】胚胎工程是指对生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。胚胎工程技术包括体外受精、胚胎移植和胚胎分割等。
【详解】A、胚胎工程是指对生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求，A正确；
B、精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂II，排出第二极体，形成雌原核，B错误；
C、受精卵细胞核中的遗传物质一半来自父方，一半来自母方，C错误；
D、受精卵形成后进行有丝分裂进入卵裂期，D错误。
故选A。
15. 下列关于胚胎工程的叙述，错误的是（ ）
A. 体外受精技术可以获得不同物种的杂交后代，增加物种多样性
B. 胚胎的体外培养可以在适宜阶段对胚胎进行冷冻保存
C. 胚胎移植技术可以在短期内获得大量目标个体
D. 胚胎分割可以用来培养遗传特性相同的生物群，为生物学、医学提供实验动物
【答案】A
【解析】
【分析】1、胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等分、4等分或8等分等，经移植获得同卵双胚或多胚的技术。
2、胚胎分割的特点：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一。
3、进行胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚。对囊胚阶段的胚胎进行分割时要注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
【详解】A、体外受精技术可以获得相同物种的杂交后代，不能增加物种多样性，A错误；
B、胚胎体外培养，为保持胚胎活性，可以在适宜阶段对胚胎进行冷冻保存，B正确；
C、胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等分、4等分或8等分等，经移植获得同卵双胚或多胚的技术，胚胎移植技术可以在短期内获得大量目标个体，C正确；
D、胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一，胚胎分割可以用来培养遗传特性相同的生物群，为生物学、医学提供实验动物，D正确。
故选A。
16. 如图所示为早期胚胎发育过程。下列叙述错误的是（ ）
A. 图中a到c的过程发育潜能基本不变
B. 图中c、d、e阶段可用于人的胚胎移植
C. 图中e分为3个胚层，其中3将来可发育成胎盘
D. 当受精卵进入子宫时，胚胎已经发育成e
【答案】C
【解析】
【分析】胚胎发育的过程：受精卵→卵裂期→桑椹胚→囊胚→原肠胚→幼体。
【详解】A、图中a到c的过程属于受精卵的卵裂过程，这些细胞全能性均最高，发育潜能基本不变，A正确；
B、用于人的胚胎移植的阶段包括c四细胞胚阶段、d桑椹胚阶段、e囊胚阶段，B正确；
C、e为囊胚阶段，此阶段的胚胎没有胚层的分化，C错误；
D、当受精卵进入子宫时，胚胎已经发育成e囊胚，D正确。
故选C。
17. 如下图所示，核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选杂交瘤细胞。下列叙述正确的是（ ）
A. 浆细胞及其自身融合细胞含有转化酶，能在HAT培养基上大量增殖
B. 骨髓瘤细胞及其自身其融合细胞有全合成途径，能在HAT培养基上大量增殖
C. 在筛选杂交瘤细胞之前，可用电脉冲诱导细胞融合
D. 在HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞，分泌的抗体性质单一、纯度高
【答案】C
【解析】
【分析】据题意：“核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶”可知，已免疫的B淋巴细胞及其自身融合的细胞含有转化酶，但其高度分化不能增殖，而由“制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶”可知骨髓瘤细胞及其转身融合的细胞中缺乏转化酶，在HAT培养基上无法进行上述两个途径而不能增殖，因此只有杂交瘤细胞能在该培养基上增殖。
【详解】A、浆细胞及其自身融合细胞含有转化酶，但因其高度分化而不能在HAT培养基上大量增殖，A错误；
B、骨髓瘤细胞及其自身其融合细胞缺乏转化酶，又因HAT培养基中物质A阻断了全合成途径，故不能在HAT培养基上大量增殖，B错误；
C、在筛选杂交瘤细胞之前，可用电脉冲、聚乙二醇、灭活病毒等诱导细胞融合，C正确；
D、在HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞，能大量增殖也能产生抗体，但不一定产生目标抗体，分泌的抗体纯度不高，D错误。
故选C。
18. 下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是（ ）
A. 细胞系泛指可无限传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系
B. 单克隆抗体可以作为特异性探针，研究相应抗原蛋白的结构和功能
C. 人一鼠杂交瘤细胞通常会丢失人的染色体，因此可以进行鼠类的基因定位
D. 需使用免疫抑制剂处理代孕母，以避免其对植入胚胎产生免疫排斥反应
【答案】B
【解析】
【分析】动物细胞工程：应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的原理方法与技术，按照人们的需要，在细胞水平上进行遗传操作，包括细胞融合、核质移植等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。
【详解】A、细胞系指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体， 也指可长期连续传代的培养细胞，可分为有限细胞系和无限细胞系，A错误；
B、单克隆抗体可以作为特异性探针，研究相应抗原蛋白的结构和功能，可以与抗原特异性结合，B正确；
C、人一鼠杂交瘤细胞通常会丢失人的染色体，因此可以进行人类的基因定位，C错误；
D、胚胎移植时基本没有排斥反应，不需使用免疫抑制剂处理代孕母，D错误。
故选B。
19. 动物细胞培养是动物克隆的基础，如下图所示，a、b、c表示现代生物工程技术，①、②、③分别表示其结果，请据图回答，下列说法正确的是（ ）
A. a如果是核移植技术，①的产生属于有性生殖，①个体的表型与提供核的个体不完全一致
B. b如果是体外受精技术，②的产生属于有性生殖，该技术为良种家畜快速大量繁殖提供了可能
C. c如果是胚胎分割技术，③中个体的基因型和表型一定相同
D. ①②③中的受体（代孕母体）均需经过一定的激素处理，以达到超数排卵和同期发情的目的
【答案】B
【解析】
【分析】动物细胞核移植技术表面动物细胞核具有全能性；体外受精包括精子的采集和获能、卵母细胞的采集和培养、体外受精，该技术产生的动物称为试管动物；胚胎分割的特点：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一。
【详解】A、a如果是核移植技术，①的产生属于无性生殖；生物的性状受到核和质遗传物质的共同调控，故①个体的表型与提供核的个体不完全一致，A错误；
B、b如果是体外受精技术，②的产生属于有性生殖，该过程可获得大量的胚胎，因而可为良种家畜快速大量繁殖提供了可能，B正确；
C、胚胎分割技术所得个体的基因型完全相同，但表现型不一定完全相同，因为表现型还受环境的影响，即c如果是胚胎分割技术，③中个体的基因型相同，但表型不一定相同，C错误；
D、①②③过程中均需要胚胎移植技术，其中的受体均需注射性激素，以达到同期发情的目的，为移入的胚胎提供几乎相同的环境，D错误。
故选B。
20. 红细胞计数区25×16=400个小方格组成，容纳液体总体积为0.1mm3，现将10ml酵母菌样品加入990ml无菌水稀释。已知中方格的酵母菌平均数量为a，显微镜下观察血细胞计数板某区域如图所示，下列叙述正确的是（ ）
A. 1ml酵母菌样品中约有菌体2.5a×107个
B. 在血细胞计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片。若边缘有多余培养液，用吸水纸吸去
C. 该计数室中有16个中方格
D. 因酵母菌是需氧型细菌，因培养液氧气不足而导致其死亡会令计数结果偏大
【答案】A
【解析】
【分析】对一支试管中的培养液（可定为10 mL）中的酵母菌逐个计数是非常困难的，可以采用抽样检测的方法：先将盖玻片放在血细胞计数板的计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。多余的培养液用滤纸吸去。稍待片刻，待酵母菌全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。盖玻片下的培养液厚度为0.1 mm，请推导出将一个小方格范围内的酵母菌数目，换算成10 mL培养液中酵母菌总数的公式。
【详解】A、中方格的酵母菌平均数量为a，大方格中含有25a个菌体，10ml酵母菌样品加入990ml无菌水稀释即稀释了100倍，一个大方格的体积是0.1mm3，1ml酵母菌样品中约有菌体为25a×100×1000（体积间的换算）÷0.1=2.5a×107个，A正确；
B、先将盖玻片放在血细胞计数板的计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入，多余的培养液用滤纸吸去，B错误；
C、计数区25×16=400，说明计数室有25个中方格，C错误；
D、酵母菌是兼性厌氧型生物，氧气不足不会死亡，D错误。
故选A。
21. 下列关于限制酶与DNA连接酶的有关说法，正确的是（ ）
A. 限制酶的切点一定位于识别序列的内部
B. 限制酶能对HIV的遗传物质进行切割
C. DNA连接酶能连接两个任意的平末端
D. DNA连接酶只能连接同种限制酶切割后的黏性末端
【答案】C
【解析】
【分析】1、限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
2、DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。根据酶的来源不同分为两类：E．coliDNA连接酶、T4DNA连接酶。这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低。
【详解】A、限制酶的切点不一定位于识别序列的内部，如有些切割后形成平末端的限制酶，A错误；
B、限制酶只能对DNA进行切割，HIV的遗传物质是RNA，B错误；
C、DNA连接酶分为E．coliDNA连接酶、T4DNA连接酶，这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低，C正确；
D、不是同种限制酶切割的黏性末端，只要其黏性末端互补，均可用DNA连接酶进行连接，同时还能连接平末端，D错误。
故选C。
22. 下列关于PCR技术及凝胶电泳鉴定的说法，正确的是（ ）
A. DNA分子在凝胶中迁移速率与DNA分子大小、形状、所带电荷等有关，与凝胶无关
B. 若以某DNA片段作为模版，5次循环后理论上反应物中应有32个这样的DNA片段
C. PCR所用的解旋酶和DNA聚合酶都具有耐高温的特性
D. 凝胶中的DNA分子可以直接在光下被检测
【答案】B
【解析】
【分析】DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来。
【详解】A、DNA分子在凝胶中的迁移速率与DNA分子大小、形状、所带电荷等有关，与凝胶浓度有关，A错误；
B、若以某DNA片段作为模版，DNA为指数扩增，5次循环后理论上反应物中应有25=32个这样的DNA片段，B正确；
C、PCR计数不需要解旋酶，C错误；
D、凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来，D错误。
故选B。
23. 下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
A. 真核生物不编码蛋白质的序列一定位于非编码区
B. 表达载体中的胰岛素基因可通过人肝脏细胞的mRNA反转录获得
C. cDNA文库中只包含本物种的部分基因，而基因组文库则包含了本物种的全部基因
D. 利用农杆菌转化法可将重组的基因表达载体导入大肠杆菌
【答案】C
【解析】
【分析】农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。根据农杆菌的这种特点，如果将目的基因插入Ti质粒的T-DNA中，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞。
【详解】A、真核生物的编码区含有内含子和外显子，内含子不编码蛋白质，故真核生物不编码蛋白质的序列在非编码区和编码区都有，A错误；
B、基因表达具有选择性，人肝脏细胞中不含有胰岛素基因的mRNA，不能反转录获得胰岛素基因，B错误；
C、cDNA文库是部分基因文库，是包含部分基因，基因组文库包含全部基因，C正确；
D、农杆菌转化法可将重组的基因表达载体导入植物细胞，D错误。
故选C。
24. 将人细胞与小鼠细胞融合得到的人-鼠杂种细胞进行长期培养，杂种细胞随机丢失一部分人的染色体后，染色体数目会保持稳定。选取三种杂种细胞，对编码人的芳烃羟化酶（AHH）和磷酸甘油酸激酶（PGK）的基因进行染色体定位研究，结果如表（“+”表示有，“－”表示无）。下列叙述正确的是（ ）
杂种细胞
人的染色体
AHH
PGK
2号
11号
17号
X
甲
－
+
－
+
－
+
乙
+
+
－
－
+
－
丙
－
+
+
+
－
+
A. 细胞融合可选取与人亲缘关系非常远的生物
B. 为避免对人细胞的毒害不可加入抗生素
C. 编码AHH的基因在2号染色体上，编码PGK的基因在17号或X染色体上
D. 进行长期培养的人鼠融合细胞含有人和鼠的全套遗传信息
【答案】A
【解析】
【分析】1、动物细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。动物细胞融合的方法：物理法（离心、振动、电刺激等）、化学法（聚乙二醇（PEG））以及生物法（灭活病毒等）。动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性。
2、动物细胞培养最好采用幼龄动物的组织或器官，因为幼龄动物生命力旺盛，细胞分裂能力强，易于培养。剪碎动物组织块后，还要用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬液，再进行细胞培养（原代培养和传代培养）。
【详解】A、细胞融合可选取与人亲缘关系非常远的生物，利用现代技术手段促进细胞融合，A正确；
B、培养杂种细胞时，通常需在培养液中添加一定量的抗生素以防止杂菌污染，B错误；
C、由表中信息可知，编码AHH的基因在2号染色体上，编码PGK的基因在X染色体上，C错误；
D、因为杂种细胞随机丢失一部分人的染色体后，染色体数目会保持稳定，所以不含有人和鼠的全套遗传信息，D错误。
故选A。
25. 下表列出了几种限制酶的识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，下列叙述正确的是（ ）
限制酶
BamHⅠ
HindⅢ
EcoRⅠ
SmaⅠ
识别序列及切割位点
A. 若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越高
B. 一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有0个和4个游离的磷酸基团
C. EcoRⅠ限制酶切割后的黏性末端序列为5′AATTC3′
D. 使用EcoRⅠ限制酶同时处理质粒、外源DNA可防止质粒和外源DNA发生自身环化
【答案】A
【解析】
【分析】分析图1：外源DNA上含有BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四种限制酶的识别序列和切割位点，其中SmaⅠ的切割序列位于目的基因上。
分析图2：质粒上BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四种限制酶的识别序列和切割位点，其中SmaⅠ的切割位点位于抗生素抗性基因上。
【详解】A、由于SmaⅠ识别的DNA序列只有G和C，而G和C之间可以形成三个氢键，A和T之间可以形成二个氢键，所以SmaⅠ酶切位点越多，热稳定性就越高，A正确；
B、图示质粒上只有一个SmaⅠ的酶切位点，因此该质粒分子经SmaⅠ切割后得到一个链状DNA分子，含有2个游离的磷酸基团，B错误；
C、EcoRⅠ限制酶切割后的黏性末端序列为 ，C错误；
D、使用单酶切，会产生相同的黏性末端，可造成质粒和外源DNA发生自身环化，D错误。
故选A。
非选择题部分
二、非选择题（本大题共5小题，共50分）
26. 请回答下列与微生物培养相关问题：
（1）如表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。
成分
蛋白胨
乳糖
蔗糖
K2HPO4
显色剂
琼脂
含量
10.0g
5.0g
5.0g
2.0g
0.2g
12.0g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL
该培养基属于______（填“固体”或“液体”）培养基，该培养基中的碳源是______，而且配制培养基时要注意调节培养基的PH，因为大肠杆菌通常要求在______的环境中才能生长。
（2）用______法将0.1mL稀释液接种于培养基上，其中104倍稀释度的菌悬液培养后平均长出了88个菌落，则每毫升大肠杆菌的数量为______个，此法与显微镜计数法相比，计数结果______（偏小/偏大）。
（3）若将此培养基用于能分解尿素的微生物的分离实验，应更改培养基中______成分，说明理由：______。
（4）新型冠状病毒肺炎大流行，若科学家需要分离和培养病毒。如图是其流程示意图：
将采集到的病毒样本进行稀释，如图所示，操作后，④号试管中病毒浓度是样本的______倍。根据病毒的特征，培养体系A中必须含有______，病毒才能繁殖。
【答案】（1） ①. 固体 ②. 蛋白胨、乳糖、蔗糖 ③. （中性）偏碱
（2） ①. 稀释涂布平板 ②. 8.8×106 ③. 偏小
（3） ①. 蛋白胨、琼脂 ②. 蛋白胨和琼脂都含有氮元素，本实验是以尿素为唯一氮源
（4） ①. 10-4 ②. 宿主细胞（活细胞）
【解析】
【分析】根据培养基的物理状态可以将培养基分为固体培养基和液体培养基，实验室常使用琼脂作为凝固剂。
【小问1详解】
从培养基的成分含有琼脂可知，该培养基属于固体培养基；碳源是指能为生物提供碳元素的物质，乳糖、蔗糖和蛋白胨均含有碳元素，且均能被微生物利用，因此该培养基中的碳源是乳糖、蔗糖和蛋白胨。细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，大肠杆菌是细菌，故大肠杆菌通常要求在（中性）偏碱的环境中才能生长。
【小问2详解】
经梯度稀释后，用稀释涂布平板法取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中104倍稀释的菌悬液培养后平均长出了88个菌落，则每毫升大肠杆菌的数量为88÷0.1×104=8.8×106个。用稀释涂布平板法统计时，由于两个或多个细胞连在一起可以形成一个菌落，显微镜直接计数的不足是不能区别活细胞与死细胞，故此法与显微镜计数法相比，计数结果偏小。
【小问3详解】
因为蛋白胨和琼脂都含有氮元素，本实验是以尿素为唯一氮源，故若将此培养基用于能分解尿素的微生物的分离实验，应更改培养基中蛋白胨、琼脂成分。
【小问4详解】
图示是对病毒样本进行系列稀释操作，操作过程中利用移液管吸取100uL的病毒样本转移到900uL的稀释液中，使样本与稀释液充分混匀，每次操作后样本稀释10倍，依次操作后，④号试管中病毒被稀释了104，因此病毒的浓度是样本的10-4倍。病毒是非细胞生物，必须寄生在宿主活细胞中才能生活，故培养体系A中必须含有宿主细胞（活细胞），病毒才能繁殖。
27. 黄岩“本地早”种植已有100多年历史，耐寒耐旱，个小而甜，可由本地广桔（2n=18）和椪柑（2n=18）自然杂交获得。某小组欲用细胞融合技术培育“本地早”，部分流程如图。请回答：
（1）过程①常用的酶是______，酶解后，经多次离心获得______（填名称）。
（2）在鉴定c时可用显微镜观察，根据细胞膜表面荧光的不同可反映细胞两两融合的情况，当观察到______时可判断c是由广桔细胞和椪柑细胞融合而成的。融合的原生质体在培养过程中，只有重新形成______后，才可进行有丝分裂，该结构的产生与细胞内______（细胞器）有密切的关系。愈伤组织可通过______或器官发生途径再生植株，该过程需要在光照下培养，因为光照有利于______的形成。
（3）培养出的“广桔—椪柑”细胞在有丝分裂后期含______条染色体。植物体细胞杂交技术在育种上的优点是______。
【答案】（1） ①. 纤维素酶和果胶酶 ②. 原生质体
（2） ①. 融合的细胞表面既有红色荧光又有绿色光 ②. 细胞壁 ③. 高尔基体 ④. 体细胞胚发生途径 ⑤. 叶绿体（或叶绿素）
（3） ①. 72 ②. 克服远缘杂交不亲和性
【解析】
【分析】图中过程①是去除细胞壁获得原生质体的过程，常用的酶是纤维素酶和果胶酶，a和b是原生质体，利用抗原抗体结合技术进行荧光标记后可筛选出融合的原生质体c；②过程代表再生细胞壁的过程，③是脱分化过程，④是再分化过程。
【小问1详解】
植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，图中过程①是去除细胞壁获得原生质体的过程，常用的酶是纤维素酶和果胶酶；用酶处理后，多次离心可获得原生质体，即a和b。
【小问2详解】
c是发生了融合的原生质体，融合的细胞表面既有红色荧光又有绿色荧光；融合的原生质体形成后，重新形成细胞壁才能行使正常的细胞功能，可进行有丝分裂，细胞壁的形成与高尔基体有关；脱分化形成愈伤组织后，愈伤组织可被诱导再分化，再分化包括体细胞胚发生途径或器官发生途径两种途径；因为叶绿素的形成需要光，故光照有利于叶绿素（叶绿体）的形成。
【小问3详解】
培养出的“广桔—椪柑”细胞是融合细胞发育而来，正常细胞中含有36条染色体，有丝分裂后期由于着丝粒的分裂染色体数目加倍，故含有72条染色体；植物体细胞杂交技术可让不同种生物发生杂交过程产生可育后代，克服了远缘杂交不亲和性。
28. 2019年7月21日代孕猫在胚胎移植66天后顺利分娩，我国首例完全自主培育的克隆猫“大蒜”诞生。这次成功培育克隆猫是世界为数不多的成功案例之一，标志着我国在克隆领域又迈进了一大步。下图为克隆猫“大蒜”培育过程示意图，回答下列问题：
（1）克隆猫的成功培育用到的胚胎工程技术有______、______。
（2）对卵母细胞供体猫使用______激素处理，使其______，用超声监视器定位取卵，并吸出卵母细胞的细胞核，完成去核过程；采集死亡猫“大蒜”的组织块，用______处理获得分散的体细胞，放置于37℃的CO2培养箱中培养。
（3）为提高重组卵发育的成功率，实验过程中可采取的措施有：在核移植前对核供体进行______培养处理，采用胚激活技术刺激重组细胞开始卵裂；为获得更多的克隆猫“大蒜”，提高重组胚胎的利用率，可在胚胎移植前对囊胚的______进行均等分割，并移植到______的代孕猫子宫内。
（4）克隆猫“大蒜”与死亡的猫性状并非完全相同的可能原因是______。
【答案】（1） ①. 早期胚胎培养##体外胚胎培养 ②. 胚胎移植
（2） ①. 促性腺 ②. 超数排卵 ③. 胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）
（3） ①. 营养限制性（培养） ②. 内细胞团 ③. 同期发情##生理状态相同
（4）①克隆猫“大蒜”的核遗传物质来自于死亡的猫，而质遗传物质来自于卵母细胞供体猫；②在个体发育过程中发生了变异性状是由基因和环境共同决定的
【解析】
【分析】①是动物细胞培养，②是细胞核移植，③是体外胚胎培养，④是胚胎移植。
【小问1详解】
胚胎工程技术有体外受精、胚胎移植和胚胎分割等，克隆猫的成功培育用到的胚胎工程技术有早期胚胎培养（体外胚胎培养）、胚胎移植。
【小问2详解】
对卵母细胞供体猫使用促性腺激素处理，使其超数排卵，得到更多的卵细胞；用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，从而得到单细胞悬液，进行动物细胞培养；
【小问3详解】
为提高重组卵发育的成功率，实验过程中可采取的措施有：在核移植前对核供体进行营养限制性培养处理，采用胚激活技术刺激重组细胞开始卵裂；内细胞团具有全能性，将来可以发育成胎儿的各种组织。为获得更多的克隆猫“大蒜”，提高重组胚胎的利用率，可在胚胎移植前对囊胚的内细胞团进行均等分割，并移植到生理状态相同或同期发情处理的代孕猫子宫内；
【小问4详解】
克隆猫“大蒜”的遗传物质来自核供体、卵母细胞的细胞质。细胞质基因也会对性状产生影响，此外环境也会对性状产生影响，所以克隆猫“大蒜”与死亡的猫性状并非完全相同的可能原因是①克隆猫“大蒜”的核遗传物质来自于死亡的猫，而质遗传物质来自于卵母细胞供体猫；②在个体发育过程中发生了变异性状是由基因和环境共同决定的。
29. 某课题组实现了酵母细胞工厂全合成甘草酸（中药甘草中的主要活性成分），为解决甘草及其他稀缺天然产物获取过程中存在的资源短缺等问题提供新思路。为了快速检测到甘草酸，科研人员利用细胞工程技术制备了抗甘草酸的单克隆抗体，其基本操作过程如图所示。回答下列问题：
（1）动物细胞培养的CO2培养箱气体环境是混合气体，其中CO2的主要作用是______。
（2）图中给小鼠注射甘草酸—牛血清白蛋白结合抗原的目的是______，细胞甲从小鼠______中分离得到。
（3）图中过程②是诱导细胞甲和骨髓瘤细胞融合的过程，该过程可使用______化学试剂来诱导细胞相互融合，若只考虑细胞的两两融合，理论上融合的细胞有______种类型，进行过程③的筛选后，能在HAT培养基上生长的丙细胞是______，该细胞的特点是______。
（4）将细胞丁注射到小鼠腹腔中培养或______培养可获得大量抗甘草酸的单克隆抗体。与多克隆抗体相比，单克隆抗体的最大优点是______；单克隆抗体常作为特异性探针，利用______原理，检测目的基因是否在受体细胞内稳定表达。
【答案】（1）维持培养液的pH
（2） ①. 对小鼠进行免疫处理，得到能产生特定抗体的B淋巴细胞 ②. 脾脏
（3） ①. PEG（或聚乙二醇） ②. 3 ③. 杂交（瘤）细胞 ④. 既能产生特异性抗体，又能无限增殖
（4） ①. 体外（或克隆） ②. 特异性强，灵敏度高，可大量制备 ③. 抗原抗体杂交
【解析】
【分析】题图分析：图示为利用细胞工程技术制备了抗甘草酸的单克隆抗体过程，其中①为对小鼠进行免疫处理，②是诱导细胞甲与骨髓瘤细胞融合，③是筛选得到细胞丙，④对的杂交瘤细胞进行克隆化培育和抗体检测，⑤对细胞丁进行体内或体外培养。
小问1详解】
动物细胞培养除了需要满足其所需的营养条件，如培养基中需要含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素、血清等外，还需要气体环境，即95%的空气和5%CO2的混合气体，其中CO2的主要作用是维持培养液的pH值。
小问2详解】
图中给小鼠注射甘草酸一牛血清白蛋白结合抗原的目的是对小鼠进行免疫处理，得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。细胞甲从小鼠脾脏中分离得到。
【小问3详解】
图中过程②是诱导细胞甲和骨髓瘤细胞融合的过程，该过程可使用PEG（或聚乙二醇）化学试剂来诱导细胞相互融合，若只考虑细胞的两两融合，理论上融合的细胞有可能是B细胞的自身融合细胞，也可能是瘤细胞的自身融合细胞，还可能是杂交瘤细胞，三种类型。进行过程③的筛选后，能在HAT培养基上生长的丙细胞是杂交（瘤）细胞。该细胞的特点是既能产生特异性抗体，又能无限增殖
【小问4详解】
将细胞丁注射到小鼠腹腔中培养或体外（或克隆）培养可获得大量抗甘草酸的单克隆抗体。与多克隆抗体相比，单克隆抗体的最大优点特异性强，灵敏度高，可大量制备；单克隆抗体常作为特异性探针，利用抗原抗体杂交原理，检测目的基因是否在受体细胞内稳定表达。
30. B基因存在于水稻基因组中，仅在体细胞（2n）和精子中正常表达，在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计了如下图所示的实验来获取能够在卵细胞中表达B基因的转基因植株。Luc基因是荧光素酶基因，能催化荧光素产生荧光。请据图回答下列问题：
（1）从水稻体细胞中提取总RNA，在______酶的催化下构建______文库，进而获得B基因编码蛋白的序列。要想快速、大量获得该B-Luc融合基因可以采用PCR技术，该技术的原理是______，该过程中需加入模板、引物、dNTP和酶等，其中，被不断消耗的物质有______，dNTP的作用是______。
（2）融合基因必须插入Ti质粒的______中，并连接到启动子和终止子之间，其中启动子是______的结合位点。图中卡那霉素抗性基因作为标记基因，用于检测______。
（3）过程①常对农杆菌进行______物质处理。若借助Luc基因的表达产物来完成图中第二次鉴定筛选，则具体方法是______。
（4）从转基因水稻植株未成熟种子中分离出胚，观察到细胞内仅含一个染色体组，判定该胚是由未受精的卵细胞发育形成的，而一般情况下水稻卵细胞在未受精时不进行发育，由此表明B基因的表达能使卵细胞______，该转基因水稻产生的所有卵细胞中不一定都含有B基因的原因有______。
【答案】（1） ①. 逆转录 ②. cDNA ③. DNA的复制 ④. 引物和dNTP（缺一不可） ⑤. 提供原料和能量
（2） ①. T-DNA ②. RNA聚合酶 ③. B-Luc融合基因是否成功导入农杆菌细胞
（3） ①. CaCl2 ②. 检测加入荧光素的细胞中是否发出荧光
（4） ①. 不经受精直接发育成胚 ②. 若B基因只整合到水稻的一条染色体上，减数分裂后只有部分的卵细胞含有B基因/转基因水稻形成卵细胞的过程中B基因发生了突变（丢失）
【解析】
【分析】基因工程是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞内，定向地改造生物的遗传性状。基本操作程序是：目的基因的获取→基因表达载体的构建（核心）→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。基本工具有限制性核酸内切酶（“分子手术刀”）、DNA连接酶（“分子缝合针”）、基因进入受体细胞的载体（“分子运输车”）等
【小问1详解】
从水稻体细胞中提取总RNA，通过逆转录产生DNA，从而构建cDNA文库，进而获得B基因编码蛋白的序列。PCR技术的原理是DNA的复制，该过程中需加入模板、引物、dNTP和酶等，其中，被不断消耗的物质有引物和dNTP。dNTP的作用是提供原料和能量。
【小问2详解】
融合基因必须插入Ti质粒的T-DNA，并连接到启动子和终止子之间；启动子是RNA聚合酶的结合位点。图中卡那霉素抗性基因作为标记基因，用于检测B-Luc融合基因是否成功导入农杆菌细胞
【小问3详解】
过程①常对农杆菌进行CaCl2处理，称为感受态细胞，便于转化。因为Luc基因是能催化荧光素产生荧光，若借助Luc基因的表达产物来完成图中第二次鉴定筛选，则具体方法是检测加入荧光素的细胞中是否发出荧光
【小问4详解】
2022学年第二学期台州山海协作体期中联考
高二年级生物学科试题
考生须知：
1.本卷共8页满分100分，考试时间90分钟。
2.答题前，在答题卷指定区域填写班级、姓名、考场号、座位号及准考证号并填涂相应数字。
3.所有答案必须写在答题纸上，写在试卷上无效。
4.考试结束后，只需上交答题纸。
选择题部分
一、选择题（本大题共25小题，每小题2分，共50分。每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的，不选、多选、错选均不得分）
1. 基因工程的核心步骤是（ ）
A. 获取目的基因 B. 构建重组DNA分子
C. 将重组DNA分子导入受体细胞 D. 检测目的基因及其表达产物
【答案】B
【解析】
【分析】获取了足够量的目的基因后，下一步就是要让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时，使目的基因能够表达和发挥作用，这就需要构建基因表达载体。这一步是培育转基因抗虫棉的核心工作。基因表达载体是载体的一种，除目的基因、标记基因外，它还必须有启动子、终止子等。启动子是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游，紧挨转录的起始位点，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终表达出人类需要的蛋白质。
【详解】构建基因表达载体也就是构建重组DNA分子，获取了足够量的目的基因后，就要让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时，使目的基因能够表达和发挥作用，这就需要构建基因表达载体，所以这一步是培育转基因抗虫棉的核心工作，B正确。
故选B。
2. 下列关于无菌操作的叙述，正确的是（ ）
A. 煮沸消毒不能杀死微生物的细胞
B. 应尽量选择脱脂棉塞住试管口，否则容易造成吸水污染
C. 配置培养基时应该先灭菌再调节pH
D. 对于接种间应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒
【答案】D
【解析】
【分析】微生物实验室的培养的关键是无菌操作，无菌操作主要包括：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌；③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行；④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品接触。
【详解】A、煮沸消毒法100℃煮沸5-6分钟只能杀死部分生活状态的微生物细胞，不能杀死芽孢、孢子，A错误；
B、由于脱脂棉吸水后容易引起污染，所以制作棉塞应该使用普通棉花，而不能使用医用的脱脂棉，B错误；
C、为避免杂菌污染，应先调节pH再灭菌，C错误；
D、紫外线能破坏DNA结构，对于接种间应采用紫外线或药物熏蒸的方法进行杀菌或消毒，以营造无菌环境，D正确。
故选D。
3. 在分离、纯化细菌实验中，划线接种（甲）、培养结果（乙）如下图，a、b、c、d是划线的四个区域。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 操作过程中，接种环蘸取菌液1次，至少需灼烧五次
B. 连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落
C. 蘸取菌液和划线要在酒精灯火焰旁进行
D. 甲图中的a区域为划线的起始区域
【答案】D
【解析】
【分析】分析题干可看出本实验接种微生物的方法为平板划线法，该方法中会通过多次划线来逐步稀释以便获得单个菌落，因此在最后的一个区域中可能获得单个菌落，该方法实施时为了严格的无菌操作，需要全程在酒精灯火焰附近操作。
【详解】A、平板划线法中每次划线前都要灼烧接种环，保证菌种来自于上一次划线的末端，划线结束后也要灼烧接种环，防止污染环境、感染接种者；操作过程中，划线了四次，因此接种环蘸取菌液1次，至少需灼烧五次，A正确；
B、连续划线可以将聚集的菌种逐步稀释，以便获得单个菌落，B正确；
C、为了防止空气中杂菌的污染，蘸取菌液和划线都要在酒精灯火焰旁进行，C正确。
D、分析图乙，a对应的区域出现了单个菌落，d区域菌落最多，因此a区域应该为划线的最终区域，d区域为划线的起始区域，D错误；
故选D。
4. 下列关于质粒的叙述，正确的是（ ）
A. 质粒是细菌细胞核中能自主复制的DNA分子
B. 基因工程中被用作载体的质粒都是天然质粒
C. 质粒完全水解后最多可产生6种化合物
D. 质粒是基因工程中的一种工具酶
【答案】C
【解析】
【分析】作为运载体必须具备的条件：①要具有限制酶的切割位点； ②要有标记基因（如抗性基因），以便于重组后重组子的筛选③能在宿主细胞中稳定存在并复制；④是安全的，对受体细胞无害，而且要易从供体细胞分离出来。
【详解】A、细菌为原核生物，没有被核膜包被的成形的细胞核，A错误；
B、天然的质粒需要经过改造后才可作为基因工程的运载体，B错误；
C、质粒的本质是DNA分子，完全水解后最多可产生6种化合物，即为磷酸、脱氧核糖、4种含氮碱基（A、T、C、G），C正确；
D、质粒是基因工程的运载体，不是工具酶，D错误。
故选C。
5. 水蛭素是一种蛋白质，可用于预防和治疗血栓。研究人员发现，用赖氨酸替换水蛭素第47位的天冬酰胺，可以提高它的抗凝血活性。在这项替换研究中，目前可行的直接操作对象是（ ）
A. 基因 B. 氨基酸 C. 多肽链 D. 蛋白质
【答案】A
【解析】
【分析】蛋白质工程指以蛋白质的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行基因改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需要．蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程。
【详解】通过题干信息可知，可通过蛋白质工程技来完成，蛋白质工程直接改造的是相应的基因，A正确。
故选A。
阅读下列材料，回答以下题。
仙居杨梅除直接食用，还可用于酿酒。智慧的劳动人民利用发酵工程技术，利用发酵罐（如图），大规模生产杨梅酒，使仙居杨梅的价值翻了一番。发酵型杨梅酒的工艺流程依次包括挑选杨梅、清洗、打浆、糖酸调整、加入酵母菌、倒罐、发酵、除酸、过滤、澄清、杀菌、陈酿、成品等。
6. 发酵工程主要利用的是哪类生物的细胞（ ）
A. 细菌 B. 真菌 C. 病毒 D. 微生物
7. 下列叙述正确的是（ ）
A. 图中2为杨梅酒出口，通过检测流出发酵液糖的浓度，决定何时终止发酵
B. 图中3为叶轮，可以加快酵母菌的繁殖
C. 采用真空发酵技术不能提高酒精发酵速率
D. 夏季高温会促进发酵菌种的繁殖，大量获得发酵产物
8. 某同学采用塑料瓶等自制简易杨梅醋发酵装置，下列叙述错误的是（ ）
A. 可以采用果酒为原料
B. 保持通气，在发酵液表面会形成菌膜
C. 发酵过程中，醋酸菌的生长繁殖和代谢产物的形成都与pH有关
D. 吸取发酵液，在显微镜下观察可看到菌落
【答案】6. D 7. B 8. D
【解析】
【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵、产品的分离、提纯等方面。发酵过程一般来说都是在常温常压下进行，条件温和、反应安全，原料简单、污染小，反应专一性强，因而可以得到较为专一的产物。发酵工程在医药、食品、农业、冶金、环境保护等许多领域都得到广泛应用。
【6题详解】
发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身，故发酵工程主要利用的是微生物的细胞，D正确。
故选D。
【7题详解】
A、图中1为冷却水的进口，2为冷却水的出口，不能通过2检测流出发酵液糖的浓度，A错误；
B、图中3为叶轮，叶轮的搅拌不仅使气泡与发酵液混合，而且使微生物细胞与发酵液中的营养物质接触，可以加快酵母菌的繁殖，B正确；
C、在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵，因此，采用真空发酵技术能提高酒精发酵速率，C错误；
D、酵母菌最适宜生长繁殖的温度范围是18～30℃，夏季高温不能促进发酵菌种的繁殖，D错误。
故选B。
【8题详解】
A、当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，因此可以采用果酒为原料制作果醋，A正确；
B、果酒制作过程中，如果接触到空气，醋酸菌就会增殖并将乙醇转变为醋酸，进而在果酒表面形成一层菌膜，B正确；
C、环境条件的变化不仅会影响微生物的生长繁殖，也会影响微生物的代谢途径，因此，发酵过程中，醋酸菌的生长繁殖和代谢产物的形成都与pH有关，C正确；
D、菌落是指由单个或少数微生物细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成以母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞集团，吸取发酵液，在显微镜下不能看到菌落，可直接看到微生物，D错误。
故选D。
9. 泡菜中亚硝酸盐的含量高低及含量峰值时间的早晚与食盐的浓度关系如图，下列叙述正确的是（ ）
A. 食盐浓度越高，亚硝酸盐含量上升越快
B. 制作泡菜时加入陈泡菜汁会导致最终亚硝酸盐含量上升
C. 综合考虑选用7%的食盐浓度腌制的泡菜最安全、最经济
D. 发酵后期亚硝酸盐含量下降的原因可能是酸性、缺氧环境抑制杂菌生长
【答案】D
【解析】
【分析】曲线中的自变量包括时间和食盐的浓度，因变量是亚硝酸盐的含量。通过曲线分析，亚硝酸盐的含量随着时间先增多后降低，变化最明显的食盐浓度为5%，7%的实验浓度产生的亚硝酸盐较少。
【详解】A、亚硝酸盐含量上升最快的是5%的实验浓度，A错误；
B、陈泡菜汁中含有乳酸菌，可缩短发酵时间，一般不影响最终的亚硝酸盐含量，B错误；
C、最终5%和7%产生的亚硝酸盐含量一样，用5%的最安全、最经济，C错误；
D、亚硝酸盐是微生物产生的，后期含量下降可能是酸性、缺氧等条件抑制了产生亚硝酸盐微生物的生长，且亚硝酸盐可以分解，D正确。
故选D。
10. 下列有关生物技术安全与伦理的叙述，合理的是（ ）
A. 我国政府坚持反对生殖性克隆，支持治疗性克隆
B. 生物武器的特点有具有传染性、携带和投放相对简单、研发门槛较高等特点
C. 利用农杆菌转化法培育得到的转基因植物，不会引起基因污染
D. 将不同生物的DNA进行转移和重组，可以创造出新物种
【答案】A
【解析】
【分析】生殖性克隆是指通过克隆技术产生独立生存的新个体。治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定的细胞、组织和器官，用它们来修复或替代受损的细胞、组织和器官，从而达到治疗疾病的目的。两者有着本质的区别。
【详解】A、我国政府反对任何的生殖性克隆，但支持治疗性克隆，可解决器官移植等问题，A正确；
B、生物武器相对容易获得，也便于携带和施放，研发门槛并不高，产生的危害将是极大，B错误；
C、农杆菌转化法利用农杆菌T-DNA具有可转移的特点，将目的基因转移到受体细胞的染色体上，可随花粉转移，可能引起基因污染，C错误；
D、将不同生物的DNA进行转移和重组，使生物出现新的表现型，但不可以创造出新物种，D错误。
故选A。
11. 下列关于愈伤组织的说法，错误的是（ ）
A. 愈伤组织是无组织结构、松散的薄壁细胞团
B. 形成愈伤组织的过程不需要给予光照
C. 利用愈伤组织分化出的胚状体可制成不受季节限制的人工种子
D. 愈伤组织是由外植体脱分化形成的，其分化程度通常比外植体要高
【答案】D
【解析】
【分析】植物组织培养的实验操作步骤：
（1）培养基的制作：①配制各种母液：配制母液时，无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存。激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般按1mg/mL的质量浓度单独配制母液；②配制培养基，称取琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素等组分，依次加入，加蒸馏水定容；③灭菌，将分装好的培养基连同其他器械一起高压蒸气灭菌。
（2）外植体消毒：选取合适的外植体，用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70%的酒精中摇动2-3次，持续6-7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。取出后仍用无菌吸水纸吸干外植体表面水分，放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中1-2min。取出后，在无菌水水中至少清洗3次，漂净消毒液。
（3）接种：用体积分数为70%的酒精对工作台进行消毒，再点燃酒精灯所有实验操作必须在酒精灯旁进行，且器械每次使用后都需要灼烧灭菌。将外植体切成小段接种到锥形瓶中，注意整个过程的无菌操作。
（4）培养：接种后的放在无菌培养箱中培养，定期消毒，温度设置在18-22℃，并且每日用日光灯光照12h。
（5）移栽：移栽之前，应打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。然后用清水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长状后再移栽到土壤中。
（6）栽培：将幼苗移栽后，每天观察记录幼苗生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。
【详解】A、愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞，A正确；
B、愈伤组织的形成一般不需要光照，后续再分化过程需要给予适当光照，有利于促进叶绿素的产生，B正确；
C、利用愈伤组织分化出的胚状体，可以制成不受季节限制的人工种子，C正确；
D、由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，其分化程度通常比外植体要低，D错误；
故选D。
12. 花药离体培养是重要的育种手段。下图是某二倍体植物花药育种过程的示意图，下列叙述正确的是（ ）
A. 为防止微生物污染，花药需用70%酒精消毒
B. 获得的植株与图示秋水仙素之后的愈伤组织的染色体组数不同
C. 为获得健壮植株，在炼苗初期应给予预计栽培条件相同的外界环境
D. 该过程属于无性生殖，且所获植株一般没有使用价值
【答案】A
【解析】
【分析】图中②表示脱分化形成愈伤组织的过程，③表示再分化的过程。秋水仙素可抑制纺锤体的形成，进而导致细胞染色体数目加倍。移栽前先打开封口膜或瓶盖，让试管苗在培养箱内生长几日。用流水清洗掉根部的培养基后，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中，待其长壮后再移栽入土。每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。
【详解】A、70%的酒精有消毒的作用，花药需要经过消毒处理，可防止微生物污染，A正确；
B、秋水仙素可抑制纺锤体形成，导致染色体数目加倍，再经过再分化后，染色体数目和处理后的愈伤组织相同，B错误；
C、让试管苗在培养箱内生长几日。用流水清洗掉根部的培养基后，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中，待其长壮后再移栽入土，C错误；
D、该过程属于无性生殖，获得的植株都是纯合子，具有使用价值，D错误。
故选A。
13. 紫杉醇是红豆杉属植物产生的一种复杂的次生代谢产物，是目前最好的天然抗癌药物之一。最初的紫杉醇都是从红豆杉树皮中提取的，无法满足人们的需求。利用如图所示来生产紫杉醇是扩大紫杉醇来源的一条重要途径。下列叙述错误的是（ ）
A. 过程①细胞的结构和形态发生改变
B. ③过程一般采用液体培养基
C. 紫杉醇是细胞代谢产物，可以从愈伤组织中分离出来
D. 该过程只涉及植物细胞培养，未体现植物的组织培养技术
【答案】D
【解析】
【分析】1、植物细胞培养即在离体条件下对单个植物细胞或细胞团进行培养使其增殖的技术。利用植物细胞培养来获得目标产物（次生代谢产物），这个过程就是细胞产物的工厂化生产。
2、植物组织培养技术是指将离体的植物器官、组织或细胞等，在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。其具体流程为：接种外植体→诱导愈伤组织→诱导生芽→诱导生根→移栽成活。
【详解】A、过程①为脱分化，该过程中细胞的结构和形态发生改变，A正确；
B、过程②需将愈伤组织分散成单个细胞，常采用液体培养基，B正确；
C、紫杉醇是细胞次生代谢产物，可通过培养愈伤组织获得，C正确；
D、此过程中包含脱分化，涉及到了植物的组织培养技术，D错误。
故选D。
14. 下列关于受精作用，正确的是（ ）
A. 生殖细胞、受精卵和早期的胚胎细胞是胚胎工程操作的主要对象
B. 雌原核在减数第二次分裂之前形成以便受精
C. 受精卵的遗传物质一半来自父方，一半来自母方
D. 受精卵形成后进行减数分裂进入卵裂期
【答案】A
【解析】
【分析】胚胎工程是指对生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。胚胎工程技术包括体外受精、胚胎移植和胚胎分割等。
【详解】A、胚胎工程是指对生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求，A正确；
B、精子入卵后被激活的卵子完成减数分裂II，排出第二极体，形成雌原核，B错误；
C、受精卵细胞核中的遗传物质一半来自父方，一半来自母方，C错误；
D、受精卵形成后进行有丝分裂进入卵裂期，D错误。
故选A。
15. 下列关于胚胎工程的叙述，错误的是（ ）
A. 体外受精技术可以获得不同物种的杂交后代，增加物种多样性
B. 胚胎的体外培养可以在适宜阶段对胚胎进行冷冻保存
C. 胚胎移植技术可以在短期内获得大量目标个体
D. 胚胎分割可以用来培养遗传特性相同的生物群，为生物学、医学提供实验动物
【答案】A
【解析】
【分析】1、胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等分、4等分或8等分等，经移植获得同卵双胚或多胚的技术。
2、胚胎分割的特点：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一。
3、进行胚胎分割时，应选择发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚。对囊胚阶段的胚胎进行分割时要注意将内细胞团均等分割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。
【详解】A、体外受精技术可以获得相同物种的杂交后代，不能增加物种多样性，A错误；
B、胚胎体外培养，为保持胚胎活性，可以在适宜阶段对胚胎进行冷冻保存，B正确；
C、胚胎分割是指采用机械方法将早期胚胎切割成2等分、4等分或8等分等，经移植获得同卵双胚或多胚的技术，胚胎移植技术可以在短期内获得大量目标个体，C正确；
D、胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一，胚胎分割可以用来培养遗传特性相同的生物群，为生物学、医学提供实验动物，D正确。
故选A。
16. 如图所示为早期胚胎发育过程。下列叙述错误的是（ ）
A. 图中a到c的过程发育潜能基本不变
B. 图中c、d、e阶段可用于人的胚胎移植
C. 图中e分为3个胚层，其中3将来可发育成胎盘
D. 当受精卵进入子宫时，胚胎已经发育成e
【答案】C
【解析】
【分析】胚胎发育的过程：受精卵→卵裂期→桑椹胚→囊胚→原肠胚→幼体。
【详解】A、图中a到c的过程属于受精卵的卵裂过程，这些细胞全能性均最高，发育潜能基本不变，A正确；
B、用于人的胚胎移植的阶段包括c四细胞胚阶段、d桑椹胚阶段、e囊胚阶段，B正确；
C、e为囊胚阶段，此阶段的胚胎没有胚层的分化，C错误；
D、当受精卵进入子宫时，胚胎已经发育成e囊胚，D正确。
故选C。
17. 如下图所示，核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶，制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶。现用加入H、A、T三种物质的“HAT培养基”来筛选杂交瘤细胞。下列叙述正确的是（ ）
A. 浆细胞及其自身融合细胞含有转化酶，能在HAT培养基上大量增殖
B. 骨髓瘤细胞及其自身其融合细胞有全合成途径，能在HAT培养基上大量增殖
C. 在筛选杂交瘤细胞之前，可用电脉冲诱导细胞融合
D. 在HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞，分泌的抗体性质单一、纯度高
【答案】C
【解析】
【分析】据题意：“核苷酸合成有两个途径，物质A可以阻断其中的全合成途径。正常细胞内含有补救合成途径所必需的转化酶和激酶”可知，已免疫的B淋巴细胞及其自身融合的细胞含有转化酶，但其高度分化不能增殖，而由“制备单克隆抗体时选用的骨髓瘤细胞中缺乏转化酶”可知骨髓瘤细胞及其转身融合的细胞中缺乏转化酶，在HAT培养基上无法进行上述两个途径而不能增殖，因此只有杂交瘤细胞能在该培养基上增殖。
【详解】A、浆细胞及其自身融合细胞含有转化酶，但因其高度分化而不能在HAT培养基上大量增殖，A错误；
B、骨髓瘤细胞及其自身其融合细胞缺乏转化酶，又因HAT培养基中物质A阻断了全合成途径，故不能在HAT培养基上大量增殖，B错误；
C、在筛选杂交瘤细胞之前，可用电脉冲、聚乙二醇、灭活病毒等诱导细胞融合，C正确；
D、在HAT培养基上筛选出的所有杂交瘤细胞，能大量增殖也能产生抗体，但不一定产生目标抗体，分泌的抗体纯度不高，D错误。
故选C。
18. 下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是（ ）
A. 细胞系泛指可无限传代的细胞，细胞株是具有特殊性质的细胞系
B. 单克隆抗体可以作为特异性探针，研究相应抗原蛋白的结构和功能
C. 人一鼠杂交瘤细胞通常会丢失人的染色体，因此可以进行鼠类的基因定位
D. 需使用免疫抑制剂处理代孕母，以避免其对植入胚胎产生免疫排斥反应
【答案】B
【解析】
【分析】动物细胞工程：应用现代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学的原理方法与技术，按照人们的需要，在细胞水平上进行遗传操作，包括细胞融合、核质移植等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。
【详解】A、细胞系指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体， 也指可长期连续传代的培养细胞，可分为有限细胞系和无限细胞系，A错误；
B、单克隆抗体可以作为特异性探针，研究相应抗原蛋白的结构和功能，可以与抗原特异性结合，B正确；
C、人一鼠杂交瘤细胞通常会丢失人的染色体，因此可以进行人类的基因定位，C错误；
D、胚胎移植时基本没有排斥反应，不需使用免疫抑制剂处理代孕母，D错误。
故选B。
19. 动物细胞培养是动物克隆的基础，如下图所示，a、b、c表示现代生物工程技术，①、②、③分别表示其结果，请据图回答，下列说法正确的是（ ）
A. a如果是核移植技术，①的产生属于有性生殖，①个体的表型与提供核的个体不完全一致
B. b如果是体外受精技术，②的产生属于有性生殖，该技术为良种家畜快速大量繁殖提供了可能
C. c如果是胚胎分割技术，③中个体的基因型和表型一定相同
D. ①②③中的受体（代孕母体）均需经过一定的激素处理，以达到超数排卵和同期发情的目的
【答案】B
【解析】
【分析】动物细胞核移植技术表面动物细胞核具有全能性；体外受精包括精子的采集和获能、卵母细胞的采集和培养、体外受精，该技术产生的动物称为试管动物；胚胎分割的特点：来自同一胚胎的后代具有相同的遗传物质，胚胎分割可以看做动物无性繁殖或克隆的方法之一。
【详解】A、a如果是核移植技术，①的产生属于无性生殖；生物的性状受到核和质遗传物质的共同调控，故①个体的表型与提供核的个体不完全一致，A错误；
B、b如果是体外受精技术，②的产生属于有性生殖，该过程可获得大量的胚胎，因而可为良种家畜快速大量繁殖提供了可能，B正确；
C、胚胎分割技术所得个体的基因型完全相同，但表现型不一定完全相同，因为表现型还受环境的影响，即c如果是胚胎分割技术，③中个体的基因型相同，但表型不一定相同，C错误；
D、①②③过程中均需要胚胎移植技术，其中的受体均需注射性激素，以达到同期发情的目的，为移入的胚胎提供几乎相同的环境，D错误。
故选B。
20. 红细胞计数区25×16=400个小方格组成，容纳液体总体积为0.1mm3，现将10ml酵母菌样品加入990ml无菌水稀释。已知中方格的酵母菌平均数量为a，显微镜下观察血细胞计数板某区域如图所示，下列叙述正确的是（ ）
A. 1ml酵母菌样品中约有菌体2.5a×107个
B. 在血细胞计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片。若边缘有多余培养液，用吸水纸吸去
C. 该计数室中有16个中方格
D. 因酵母菌是需氧型细菌，因培养液氧气不足而导致其死亡会令计数结果偏大
【答案】A
【解析】
【分析】对一支试管中的培养液（可定为10 mL）中的酵母菌逐个计数是非常困难的，可以采用抽样检测的方法：先将盖玻片放在血细胞计数板的计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。多余的培养液用滤纸吸去。稍待片刻，待酵母菌全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。盖玻片下的培养液厚度为0.1 mm，请推导出将一个小方格范围内的酵母菌数目，换算成10 mL培养液中酵母菌总数的公式。
【详解】A、中方格的酵母菌平均数量为a，大方格中含有25a个菌体，10ml酵母菌样品加入990ml无菌水稀释即稀释了100倍，一个大方格的体积是0.1mm3，1ml酵母菌样品中约有菌体为25a×100×1000（体积间的换算）÷0.1=2.5a×107个，A正确；
B、先将盖玻片放在血细胞计数板的计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入，多余的培养液用滤纸吸去，B错误；
C、计数区25×16=400，说明计数室有25个中方格，C错误；
D、酵母菌是兼性厌氧型生物，氧气不足不会死亡，D错误。
故选A。
21. 下列关于限制酶与DNA连接酶的有关说法，正确的是（ ）
A. 限制酶的切点一定位于识别序列的内部
B. 限制酶能对HIV的遗传物质进行切割
C. DNA连接酶能连接两个任意的平末端
D. DNA连接酶只能连接同种限制酶切割后的黏性末端
【答案】C
【解析】
【分析】1、限制酶：能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。
2、DNA连接酶：连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键。根据酶的来源不同分为两类：E．coliDNA连接酶、T4DNA连接酶。这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低。
【详解】A、限制酶的切点不一定位于识别序列的内部，如有些切割后形成平末端的限制酶，A错误；
B、限制酶只能对DNA进行切割，HIV的遗传物质是RNA，B错误；
C、DNA连接酶分为E．coliDNA连接酶、T4DNA连接酶，这二者都能连接黏性末端，此外T4DNA连接酶还可以连接平末端，但连接平末端时的效率比较低，C正确；
D、不是同种限制酶切割的黏性末端，只要其黏性末端互补，均可用DNA连接酶进行连接，同时还能连接平末端，D错误。
故选C。
22. 下列关于PCR技术及凝胶电泳鉴定的说法，正确的是（ ）
A. DNA分子在凝胶中迁移速率与DNA分子大小、形状、所带电荷等有关，与凝胶无关
B. 若以某DNA片段作为模版，5次循环后理论上反应物中应有32个这样的DNA片段
C. PCR所用的解旋酶和DNA聚合酶都具有耐高温的特性
D. 凝胶中的DNA分子可以直接在光下被检测
【答案】B
【解析】
【分析】DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。PCR的产物一般通过琼脂糖凝胶电泳来鉴定。在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来。
【详解】A、DNA分子在凝胶中的迁移速率与DNA分子大小、形状、所带电荷等有关，与凝胶浓度有关，A错误；
B、若以某DNA片段作为模版，DNA为指数扩增，5次循环后理论上反应物中应有25=32个这样的DNA片段，B正确；
C、PCR计数不需要解旋酶，C错误；
D、凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300 nm的紫外灯下被检测出来，D错误。
故选B。
23. 下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
A. 真核生物不编码蛋白质的序列一定位于非编码区
B. 表达载体中的胰岛素基因可通过人肝脏细胞的mRNA反转录获得
C. cDNA文库中只包含本物种的部分基因，而基因组文库则包含了本物种的全部基因
D. 利用农杆菌转化法可将重组的基因表达载体导入大肠杆菌
【答案】C
【解析】
【分析】农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA（可转移的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。根据农杆菌的这种特点，如果将目的基因插入Ti质粒的T-DNA中，通过农杆菌的转化作用，就可以使目的基因进入植物细胞。
【详解】A、真核生物的编码区含有内含子和外显子，内含子不编码蛋白质，故真核生物不编码蛋白质的序列在非编码区和编码区都有，A错误；
B、基因表达具有选择性，人肝脏细胞中不含有胰岛素基因的mRNA，不能反转录获得胰岛素基因，B错误；
C、cDNA文库是部分基因文库，是包含部分基因，基因组文库包含全部基因，C正确；
D、农杆菌转化法可将重组的基因表达载体导入植物细胞，D错误。
故选C。
24. 将人细胞与小鼠细胞融合得到的人-鼠杂种细胞进行长期培养，杂种细胞随机丢失一部分人的染色体后，染色体数目会保持稳定。选取三种杂种细胞，对编码人的芳烃羟化酶（AHH）和磷酸甘油酸激酶（PGK）的基因进行染色体定位研究，结果如表（“+”表示有，“－”表示无）。下列叙述正确的是（ ）
杂种细胞
人的染色体
AHH
PGK
2号
11号
17号
X
甲
－
+
－
+
－
+
乙
+
+
－
－
+
－
丙
－
+
+
+
－
+
A. 细胞融合可选取与人亲缘关系非常远的生物
B. 为避免对人细胞的毒害不可加入抗生素
C. 编码AHH的基因在2号染色体上，编码PGK的基因在17号或X染色体上
D. 进行长期培养的人鼠融合细胞含有人和鼠的全套遗传信息
【答案】A
【解析】
【分析】1、动物细胞融合是指两个或两个以上的细胞合并成为一个细胞的过程。动物细胞融合的方法：物理法（离心、振动、电刺激等）、化学法（聚乙二醇（PEG））以及生物法（灭活病毒等）。动物细胞融合的原理是细胞膜的流动性。
2、动物细胞培养最好采用幼龄动物的组织或器官，因为幼龄动物生命力旺盛，细胞分裂能力强，易于培养。剪碎动物组织块后，还要用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，制成细胞悬液，再进行细胞培养（原代培养和传代培养）。
【详解】A、细胞融合可选取与人亲缘关系非常远的生物，利用现代技术手段促进细胞融合，A正确；
B、培养杂种细胞时，通常需在培养液中添加一定量的抗生素以防止杂菌污染，B错误；
C、由表中信息可知，编码AHH的基因在2号染色体上，编码PGK的基因在X染色体上，C错误；
D、因为杂种细胞随机丢失一部分人的染色体后，染色体数目会保持稳定，所以不含有人和鼠的全套遗传信息，D错误。
故选A。
25. 下表列出了几种限制酶的识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点，下列叙述正确的是（ ）
限制酶
BamHⅠ
HindⅢ
EcoRⅠ
SmaⅠ
识别序列及切割位点
A. 若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越高
B. 一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有0个和4个游离的磷酸基团
C. EcoRⅠ限制酶切割后的黏性末端序列为5′AATTC3′
D. 使用EcoRⅠ限制酶同时处理质粒、外源DNA可防止质粒和外源DNA发生自身环化
【答案】A
【解析】
【分析】分析图1：外源DNA上含有BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四种限制酶的识别序列和切割位点，其中SmaⅠ的切割序列位于目的基因上。
分析图2：质粒上BamHⅠ、SmaⅠ、EcoR I和HindⅢ四种限制酶的识别序列和切割位点，其中SmaⅠ的切割位点位于抗生素抗性基因上。
【详解】A、由于SmaⅠ识别的DNA序列只有G和C，而G和C之间可以形成三个氢键，A和T之间可以形成二个氢键，所以SmaⅠ酶切位点越多，热稳定性就越高，A正确；
B、图示质粒上只有一个SmaⅠ的酶切位点，因此该质粒分子经SmaⅠ切割后得到一个链状DNA分子，含有2个游离的磷酸基团，B错误；
C、EcoRⅠ限制酶切割后的黏性末端序列为 ，C错误；
D、使用单酶切，会产生相同的黏性末端，可造成质粒和外源DNA发生自身环化，D错误。
故选A。
非选择题部分
二、非选择题（本大题共5小题，共50分）
26. 请回答下列与微生物培养相关问题：
（1）如表是某公司研发的一种培养大肠杆菌菌群的培养基配方。
成分
蛋白胨
乳糖
蔗糖
K2HPO4
显色剂
琼脂
含量
10.0g
5.0g
5.0g
2.0g
0.2g
12.0g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL
该培养基属于______（填“固体”或“液体”）培养基，该培养基中的碳源是______，而且配制培养基时要注意调节培养基的PH，因为大肠杆菌通常要求在______的环境中才能生长。
（2）用______法将0.1mL稀释液接种于培养基上，其中104倍稀释度的菌悬液培养后平均长出了88个菌落，则每毫升大肠杆菌的数量为______个，此法与显微镜计数法相比，计数结果______（偏小/偏大）。
（3）若将此培养基用于能分解尿素的微生物的分离实验，应更改培养基中______成分，说明理由：______。
（4）新型冠状病毒肺炎大流行，若科学家需要分离和培养病毒。如图是其流程示意图：
将采集到的病毒样本进行稀释，如图所示，操作后，④号试管中病毒浓度是样本的______倍。根据病毒的特征，培养体系A中必须含有______，病毒才能繁殖。
【答案】（1） ①. 固体 ②. 蛋白胨、乳糖、蔗糖 ③. （中性）偏碱
（2） ①. 稀释涂布平板 ②. 8.8×106 ③. 偏小
（3） ①. 蛋白胨、琼脂 ②. 蛋白胨和琼脂都含有氮元素，本实验是以尿素为唯一氮源
（4） ①. 10-4 ②. 宿主细胞（活细胞）
【解析】
【分析】根据培养基的物理状态可以将培养基分为固体培养基和液体培养基，实验室常使用琼脂作为凝固剂。
【小问1详解】
从培养基的成分含有琼脂可知，该培养基属于固体培养基；碳源是指能为生物提供碳元素的物质，乳糖、蔗糖和蛋白胨均含有碳元素，且均能被微生物利用，因此该培养基中的碳源是乳糖、蔗糖和蛋白胨。细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，大肠杆菌是细菌，故大肠杆菌通常要求在（中性）偏碱的环境中才能生长。
【小问2详解】
经梯度稀释后，用稀释涂布平板法取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中104倍稀释的菌悬液培养后平均长出了88个菌落，则每毫升大肠杆菌的数量为88÷0.1×104=8.8×106个。用稀释涂布平板法统计时，由于两个或多个细胞连在一起可以形成一个菌落，显微镜直接计数的不足是不能区别活细胞与死细胞，故此法与显微镜计数法相比，计数结果偏小。
【小问3详解】
因为蛋白胨和琼脂都含有氮元素，本实验是以尿素为唯一氮源，故若将此培养基用于能分解尿素的微生物的分离实验，应更改培养基中蛋白胨、琼脂成分。
【小问4详解】
图示是对病毒样本进行系列稀释操作，操作过程中利用移液管吸取100uL的病毒样本转移到900uL的稀释液中，使样本与稀释液充分混匀，每次操作后样本稀释10倍，依次操作后，④号试管中病毒被稀释了104，因此病毒的浓度是样本的10-4倍。病毒是非细胞生物，必须寄生在宿主活细胞中才能生活，故培养体系A中必须含有宿主细胞（活细胞），病毒才能繁殖。
27. 黄岩“本地早”种植已有100多年历史，耐寒耐旱，个小而甜，可由本地广桔（2n=18）和椪柑（2n=18）自然杂交获得。某小组欲用细胞融合技术培育“本地早”，部分流程如图。请回答：
（1）过程①常用的酶是______，酶解后，经多次离心获得______（填名称）。
（2）在鉴定c时可用显微镜观察，根据细胞膜表面荧光的不同可反映细胞两两融合的情况，当观察到______时可判断c是由广桔细胞和椪柑细胞融合而成的。融合的原生质体在培养过程中，只有重新形成______后，才可进行有丝分裂，该结构的产生与细胞内______（细胞器）有密切的关系。愈伤组织可通过______或器官发生途径再生植株，该过程需要在光照下培养，因为光照有利于______的形成。
（3）培养出的“广桔—椪柑”细胞在有丝分裂后期含______条染色体。植物体细胞杂交技术在育种上的优点是______。
【答案】（1） ①. 纤维素酶和果胶酶 ②. 原生质体
（2） ①. 融合的细胞表面既有红色荧光又有绿色光 ②. 细胞壁 ③. 高尔基体 ④. 体细胞胚发生途径 ⑤. 叶绿体（或叶绿素）
（3） ①. 72 ②. 克服远缘杂交不亲和性
【解析】
【分析】图中过程①是去除细胞壁获得原生质体的过程，常用的酶是纤维素酶和果胶酶，a和b是原生质体，利用抗原抗体结合技术进行荧光标记后可筛选出融合的原生质体c；②过程代表再生细胞壁的过程，③是脱分化过程，④是再分化过程。
【小问1详解】
植物细胞壁的成分主要是纤维素和果胶，图中过程①是去除细胞壁获得原生质体的过程，常用的酶是纤维素酶和果胶酶；用酶处理后，多次离心可获得原生质体，即a和b。
【小问2详解】
c是发生了融合的原生质体，融合的细胞表面既有红色荧光又有绿色荧光；融合的原生质体形成后，重新形成细胞壁才能行使正常的细胞功能，可进行有丝分裂，细胞壁的形成与高尔基体有关；脱分化形成愈伤组织后，愈伤组织可被诱导再分化，再分化包括体细胞胚发生途径或器官发生途径两种途径；因为叶绿素的形成需要光，故光照有利于叶绿素（叶绿体）的形成。
【小问3详解】
培养出的“广桔—椪柑”细胞是融合细胞发育而来，正常细胞中含有36条染色体，有丝分裂后期由于着丝粒的分裂染色体数目加倍，故含有72条染色体；植物体细胞杂交技术可让不同种生物发生杂交过程产生可育后代，克服了远缘杂交不亲和性。
28. 2019年7月21日代孕猫在胚胎移植66天后顺利分娩，我国首例完全自主培育的克隆猫“大蒜”诞生。这次成功培育克隆猫是世界为数不多的成功案例之一，标志着我国在克隆领域又迈进了一大步。下图为克隆猫“大蒜”培育过程示意图，回答下列问题：
（1）克隆猫的成功培育用到的胚胎工程技术有______、______。
（2）对卵母细胞供体猫使用______激素处理，使其______，用超声监视器定位取卵，并吸出卵母细胞的细胞核，完成去核过程；采集死亡猫“大蒜”的组织块，用______处理获得分散的体细胞，放置于37℃的CO2培养箱中培养。
（3）为提高重组卵发育的成功率，实验过程中可采取的措施有：在核移植前对核供体进行______培养处理，采用胚激活技术刺激重组细胞开始卵裂；为获得更多的克隆猫“大蒜”，提高重组胚胎的利用率，可在胚胎移植前对囊胚的______进行均等分割，并移植到______的代孕猫子宫内。
（4）克隆猫“大蒜”与死亡的猫性状并非完全相同的可能原因是______。
【答案】（1） ①. 早期胚胎培养##体外胚胎培养 ②. 胚胎移植
（2） ①. 促性腺 ②. 超数排卵 ③. 胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）
（3） ①. 营养限制性（培养） ②. 内细胞团 ③. 同期发情##生理状态相同
（4）①克隆猫“大蒜”的核遗传物质来自于死亡的猫，而质遗传物质来自于卵母细胞供体猫；②在个体发育过程中发生了变异性状是由基因和环境共同决定的
【解析】
【分析】①是动物细胞培养，②是细胞核移植，③是体外胚胎培养，④是胚胎移植。
【小问1详解】
胚胎工程技术有体外受精、胚胎移植和胚胎分割等，克隆猫的成功培育用到的胚胎工程技术有早期胚胎培养（体外胚胎培养）、胚胎移植。
【小问2详解】
对卵母细胞供体猫使用促性腺激素处理，使其超数排卵，得到更多的卵细胞；用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，从而得到单细胞悬液，进行动物细胞培养；
【小问3详解】
为提高重组卵发育的成功率，实验过程中可采取的措施有：在核移植前对核供体进行营养限制性培养处理，采用胚激活技术刺激重组细胞开始卵裂；内细胞团具有全能性，将来可以发育成胎儿的各种组织。为获得更多的克隆猫“大蒜”，提高重组胚胎的利用率，可在胚胎移植前对囊胚的内细胞团进行均等分割，并移植到生理状态相同或同期发情处理的代孕猫子宫内；
【小问4详解】
克隆猫“大蒜”的遗传物质来自核供体、卵母细胞的细胞质。细胞质基因也会对性状产生影响，此外环境也会对性状产生影响，所以克隆猫“大蒜”与死亡的猫性状并非完全相同的可能原因是①克隆猫“大蒜”的核遗传物质来自于死亡的猫，而质遗传物质来自于卵母细胞供体猫；②在个体发育过程中发生了变异性状是由基因和环境共同决定的。
29. 某课题组实现了酵母细胞工厂全合成甘草酸（中药甘草中的主要活性成分），为解决甘草及其他稀缺天然产物获取过程中存在的资源短缺等问题提供新思路。为了快速检测到甘草酸，科研人员利用细胞工程技术制备了抗甘草酸的单克隆抗体，其基本操作过程如图所示。回答下列问题：
（1）动物细胞培养的CO2培养箱气体环境是混合气体，其中CO2的主要作用是______。
（2）图中给小鼠注射甘草酸—牛血清白蛋白结合抗原的目的是______，细胞甲从小鼠______中分离得到。
（3）图中过程②是诱导细胞甲和骨髓瘤细胞融合的过程，该过程可使用______化学试剂来诱导细胞相互融合，若只考虑细胞的两两融合，理论上融合的细胞有______种类型，进行过程③的筛选后，能在HAT培养基上生长的丙细胞是______，该细胞的特点是______。
（4）将细胞丁注射到小鼠腹腔中培养或______培养可获得大量抗甘草酸的单克隆抗体。与多克隆抗体相比，单克隆抗体的最大优点是______；单克隆抗体常作为特异性探针，利用______原理，检测目的基因是否在受体细胞内稳定表达。
【答案】（1）维持培养液的pH
（2） ①. 对小鼠进行免疫处理，得到能产生特定抗体的B淋巴细胞 ②. 脾脏
（3） ①. PEG（或聚乙二醇） ②. 3 ③. 杂交（瘤）细胞 ④. 既能产生特异性抗体，又能无限增殖
（4） ①. 体外（或克隆） ②. 特异性强，灵敏度高，可大量制备 ③. 抗原抗体杂交
【解析】
【分析】题图分析：图示为利用细胞工程技术制备了抗甘草酸的单克隆抗体过程，其中①为对小鼠进行免疫处理，②是诱导细胞甲与骨髓瘤细胞融合，③是筛选得到细胞丙，④对的杂交瘤细胞进行克隆化培育和抗体检测，⑤对细胞丁进行体内或体外培养。
小问1详解】
动物细胞培养除了需要满足其所需的营养条件，如培养基中需要含有糖类、氨基酸、无机盐、维生素、血清等外，还需要气体环境，即95%的空气和5%CO2的混合气体，其中CO2的主要作用是维持培养液的pH值。
小问2详解】
图中给小鼠注射甘草酸一牛血清白蛋白结合抗原的目的是对小鼠进行免疫处理，得到能产生特定抗体的B淋巴细胞。细胞甲从小鼠脾脏中分离得到。
【小问3详解】
图中过程②是诱导细胞甲和骨髓瘤细胞融合的过程，该过程可使用PEG（或聚乙二醇）化学试剂来诱导细胞相互融合，若只考虑细胞的两两融合，理论上融合的细胞有可能是B细胞的自身融合细胞，也可能是瘤细胞的自身融合细胞，还可能是杂交瘤细胞，三种类型。进行过程③的筛选后，能在HAT培养基上生长的丙细胞是杂交（瘤）细胞。该细胞的特点是既能产生特异性抗体，又能无限增殖
【小问4详解】
将细胞丁注射到小鼠腹腔中培养或体外（或克隆）培养可获得大量抗甘草酸的单克隆抗体。与多克隆抗体相比，单克隆抗体的最大优点特异性强，灵敏度高，可大量制备；单克隆抗体常作为特异性探针，利用抗原抗体杂交原理，检测目的基因是否在受体细胞内稳定表达。
30. B基因存在于水稻基因组中，仅在体细胞（2n）和精子中正常表达，在卵细胞中不转录。为研究B基因表达对卵细胞的影响，设计了如下图所示的实验来获取能够在卵细胞中表达B基因的转基因植株。Luc基因是荧光素酶基因，能催化荧光素产生荧光。请据图回答下列问题：
（1）从水稻体细胞中提取总RNA，在______酶的催化下构建______文库，进而获得B基因编码蛋白的序列。要想快速、大量获得该B-Luc融合基因可以采用PCR技术，该技术的原理是______，该过程中需加入模板、引物、dNTP和酶等，其中，被不断消耗的物质有______，dNTP的作用是______。
（2）融合基因必须插入Ti质粒的______中，并连接到启动子和终止子之间，其中启动子是______的结合位点。图中卡那霉素抗性基因作为标记基因，用于检测______。
（3）过程①常对农杆菌进行______物质处理。若借助Luc基因的表达产物来完成图中第二次鉴定筛选，则具体方法是______。
（4）从转基因水稻植株未成熟种子中分离出胚，观察到细胞内仅含一个染色体组，判定该胚是由未受精的卵细胞发育形成的，而一般情况下水稻卵细胞在未受精时不进行发育，由此表明B基因的表达能使卵细胞______，该转基因水稻产生的所有卵细胞中不一定都含有B基因的原因有______。
【答案】（1） ①. 逆转录 ②. cDNA ③. DNA的复制 ④. 引物和dNTP（缺一不可） ⑤. 提供原料和能量
（2） ①. T-DNA ②. RNA聚合酶 ③. B-Luc融合基因是否成功导入农杆菌细胞
（3） ①. CaCl2 ②. 检测加入荧光素的细胞中是否发出荧光
（4） ①. 不经受精直接发育成胚 ②. 若B基因只整合到水稻的一条染色体上，减数分裂后只有部分的卵细胞含有B基因/转基因水稻形成卵细胞的过程中B基因发生了突变（丢失）
【解析】
【分析】基因工程是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞内，定向地改造生物的遗传性状。基本操作程序是：目的基因的获取→基因表达载体的构建（核心）→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。基本工具有限制性核酸内切酶（“分子手术刀”）、DNA连接酶（“分子缝合针”）、基因进入受体细胞的载体（“分子运输车”）等
【小问1详解】
从水稻体细胞中提取总RNA，通过逆转录产生DNA，从而构建cDNA文库，进而获得B基因编码蛋白的序列。PCR技术的原理是DNA的复制，该过程中需加入模板、引物、dNTP和酶等，其中，被不断消耗的物质有引物和dNTP。dNTP的作用是提供原料和能量。
【小问2详解】
融合基因必须插入Ti质粒的T-DNA，并连接到启动子和终止子之间；启动子是RNA聚合酶的结合位点。图中卡那霉素抗性基因作为标记基因，用于检测B-Luc融合基因是否成功导入农杆菌细胞
【小问3详解】
过程①常对农杆菌进行CaCl2处理，称为感受态细胞，便于转化。因为Luc基因是能催化荧光素产生荧光，若借助Luc基因的表达产物来完成图中第二次鉴定筛选，则具体方法是检测加入荧光素的细胞中是否发出荧光
【小问4详解】
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