高中生物人教版 (2019)选择性必修3一 微生物的基本培养技术完美版课件ppt

这是一份高中生物人教版 (2019)选择性必修3一 微生物的基本培养技术完美版课件ppt，共39页。PPT课件主要包含了学习目标，微生物的数量测定，一统计菌体数目，显微镜直接计数法，稀释涂布平板计数法，间接计数法，直接计数法，1原理，样品稀释液，2计数原则等内容，欢迎下载使用。
通过对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数，理解并掌握微生物计数的方法。（科学探究）
通过实例，理解各类微生物都能适应其生活环境。（生命观念）
根据微生物的代谢类型，配制选择培养基，总结分离微生物的过程和测定微生物数量的常用方法。（科学思维）
系列梯度稀释操作和涂布平板操作
接种环在固体培养基表面连续划线
从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体
在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体
可以计数，但是操作复杂，需涂布多个平板
使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落
温故知新：稀释涂布平板法和平板划线法的比较
问题1:怎么通过稀释涂布平板法统计活菌的数目呢？还有哪些统计活菌的方法呢？
当样品的稀释度足够 时，培养基表面生长的一个 ，来源于 中的一个 。通过计数平板上的 数，就能推测出样品中大约含有多少 。
样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目
选择菌落数为30~300的平板计数。
同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值
统计的菌落往往比活菌的实际数目低
统计的结果一般用菌落数而不是活菌数。
恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。
C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数
V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)
每g样品中的菌落数＝
1.甲同学做此实验在稀释倍数105获得3个平板，菌落数分别是80、90、100，涂布平板时均使用0.1ml菌液，试计算每克土壤中可以分离尿素的细菌数目？
（80+90+100）/3
× 105 =9 ×107个
2.某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每g样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL) ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4
3.用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中得到以下几种统计结果，其中正确的是( ) A.涂布了1个平板，统计的菌落数是230 B.涂布了2个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C.涂布了3个平板，统计的菌落数分别是13、234和254，取平均值167 D.涂布了3个平板，统计的菌落数分别为210、240和250，取平均值233
利用细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。
常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。
对细菌等较小的细胞进行观察和计数。
A.不能区分死菌和活菌→偏大B.不适于对运动细菌的计数。C.个体小的细菌在显微镜下难以观察。
每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数
4.关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验的叙述,正确的(　　) A.培养基应以尿素为唯一氮源,该细菌与硝化细菌所利用的碳源是相同的 B.对微生物进行分离、纯化用平板划线法,而稀释涂布平板法只能用于计数 C.对10 mL土样稀释106倍后,取0.1 mL该溶液进行重复的涂布实验,测得的菌落数分别为18、234、276,则该10 mL土样中分解尿素的细菌数为2.55×108个 D.应该设置对照以排除非测试因素对实验结果的干扰,提高可信度
土壤中分解尿素的细菌的分离和计数
土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们？每克土壤样品究竟含有多少这样的细菌？
利用以“尿素作为唯一氮源”的选择培养基，可以分离。
绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。
合作探究一：请同学们自主学习教材P18-19页，观看土壤中分解尿素的细菌的分离和计数视频，小组合作思考讨论完成问题。
1.结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。2.你是否获得了某一稀释度下菌落数 为30～300的平板在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？3.你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？
①要求：富含有机质、酸碱度接近中性且潮湿的土壤
②取样土层：距地表3~8cm的土壤层
以尿素为唯一氮源（选择培养基）
在酒精灯火焰旁称取土壤10g，放入90mL无菌水的锥形瓶中，震荡使土壤与水充分混合，将细菌分散，制成101倍土壤稀释液。用1支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注入盛有9mL无菌水的试管中，吸取三次，充分混匀，制成102倍的土壤稀释液。以此类推，制成103、104、105、106、107倍的土壤稀释液。
图中的1、2、3平板是选择培养基，4平板为牛肉膏蛋白胨培养基，以判断选择培养基是否具有筛选作用；另外，还要有两个对照，即不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基以验证培养基中是否含有杂菌。
培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。 细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。防止因培养时间不足而导致菌落数目遗漏。结果：一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。
注意事项：本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。
当菌落数目稳定时，选取菌落数在30~300的平板进行计数，同一稀释度下至少计数3个平板，求出平均值，并根据所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。设计如下表格记录并计数。
问题1:结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。
如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。
问题2:你是否获得了某一稀释度下菌落数 为30～300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？
如果得到了两个或多个菌落数为30~300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。
问题3:你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大，可能是什么原因引起的？
如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。
问题4:得到的菌落一定是分解尿素的细菌吗？
不一定，还需要进一步的鉴定
本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌,对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。你可以查阅相关资料,进一步设计实验来鉴定自己分离的菌种。
脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→ 酚红变红→脲酶阳性
呈碱性，遇酚红指示剂呈 色。
在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。
可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。
可以直接看液体的变色情况。
在培养基中加入某种指示剂或化学药品(不影响微生物正常生长)，使微生物的某种代谢产物与培养基中的特定指示剂或化学药品发生反应。从而达到鉴定的作用。
伊红和美蓝培养基鉴别大肠杆菌
选择培养基和鉴别培养基的比较
将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到 伊红-美蓝 培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。
测定饮水中大肠杆菌数量的方法：
间接计数法 — 稀释涂布平板法
直接计数 —计数板计数法
土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
（3）稀释涂布平板法接种
（4）微生物的培养与观察
5.某兴趣小组在校园土壤中取样,进行“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验。小明从稀释倍数为106的培养基中筛选出约120个菌落,而其他同学只筛选出约40个菌落。下列有关叙述错误的是(　　) A.小明出现这种结果的可能原因是和其他同学取样的土壤不同  B.要证明培养基是否受到污染,可将小明配制的培养基不加土样进行培养 C.当稀释倍数太小时,可能由于菌落重叠而导致计数结果偏小 D.在牛肉膏蛋白胨培养基中加入酚红指示剂可初步鉴定尿素分解菌
6.某同学将1 mL土壤样液稀释100倍，在3个平板上用稀释涂布平板法分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为56、57和58。下列叙述错误的是(　　)A.可得出土壤样液中活菌大约为5.7×107个/LB.此方法统计的菌落数往往比实际的活菌数目低C.一般选择菌落数为30～300的平板进行计数D.显微镜直接计数法统计的是稀释液中的活菌数
7.下列关于土壤中分解尿素的细菌的分离与计数的叙述正确的是(　　)A.只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素B.统计样品中的活菌数目一般用平板划线法C.筛选分解尿素的细菌时，应以尿素作为培养基中唯一的营养物质 D.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则表明筛选到了分解尿素的细菌
8.下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验操作的叙述，错误的是(　　)A.利用稀释涂布平板法准确估计菌落数目的关键是有恰当的稀释度B.若要判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置未接种的牛肉膏蛋白胨培养基作为对照C.该实验应采用稀释涂布平板法D.用以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基来培养该细菌后不会使酚红指示剂变红
9.下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是(　　)A.用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B.取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C.将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48 hD.确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数
10.关于微生物培养和数目统计的说法，错误的是（ ） A.因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离。 B.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选择的稀释度范围相同。 C.不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。 D.每次统计菌落数目，应选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
11.在涂布有大肠杆菌的培养基上进行抑菌实验，在a、b、c处分别贴浸有不同抗生素(浓度相同)的无菌滤纸片，d处滤纸片浸有无菌水。培养后的结果如图。以下判断错误的是(　　) A. a处抑菌效果小于b处 B. b处的滤纸片没有沥干 C. c处抗生素无效 D. d为对照
12.如图为“土壤中分解尿素的细菌的分离和计数”实验中样品稀释示意图。请据图分析，下列说法错误的是(　　)
A.③号试管的稀释倍数为103 B.④号试管中稀释液进行平板培养得到的菌落平均数可能为⑤号试管的10倍 C.⑤号试管的结果表明每克土壤中的菌株数为1.7×109 D.将涂布器在酒精灯火焰上灼烧冷却后，再进行涂布