备考2024届高考生物一轮复习讲义第十一章生物技术与工程课时6基因工程的基本工具与操作程序考点3DNA的粗提取与鉴定及DNA片段的扩增与鉴定

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1.DNA的粗提取与鉴定
2.DNA片段的扩增及电泳鉴定
（1）原理
（2）方法步骤
基础自测
1.进行“DNA的粗提取”实验时，为获得较好的提取效果，应离心2次，第一次离心后应保留上清液，第二次离心后应弃去上清液，且两次离心的转速也不相同。（ √ ）
2.TaqDNA聚合酶是用PCR仪对DNA分子扩增过程中常用的一种耐高温的DNA聚合酶。（ √ ）
3.PCR中离心的目的是让反应组分在离心管中分层分布。（× ）
4.电泳鉴定PCR产物时，应在每个加样孔中加入等量的PCR产物与凝胶载样缓冲液的混合液。（× ）
5.粗提取的DNA溶于2ml/LNaCl溶液中，加入二苯胺试剂后显蓝色[2023江苏，T9D]。（× ）
6.过滤液沉淀过程在4 ℃冰箱中进行是为了防止DNA降解[2022山东，T13A]。（ √ ）
深度思考
1.能否选择哺乳动物的成熟红细胞作为DNA粗提取的实验材料，为什么？
提示 不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核和线粒体等，不含DNA。
2.DNA的电泳鉴定实验中，影响DNA分子迁移速率的因素有哪些？
提示 影响DNA分子迁移速率的因素有凝胶浓度、DNA分子的大小和构象等。
研透高考 明确方向
命题点1 DNA的粗提取与鉴定
1.[2023广东改编]“DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程是：裂解→分离→沉淀→鉴定。下列叙述错误的是（D ）
A.裂解：使细胞破裂释放出DNA等物质
B.分离：可去除混合物中的部分多糖、蛋白质等
C.沉淀：可反复多次以提高DNA的纯度
D.鉴定：加入二苯胺试剂后即呈现蓝色
解析 “DNA粗提取与鉴定”实验的基本过程是：裂解、分离、沉淀、鉴定。裂解的目的是使细胞破裂，释放出DNA等物质，A正确。DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA与蛋白质等，分离过程中混合物中的部分多糖、蛋白质等可被去除，B正确。DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，通过控制NaCl溶液的浓度可去除杂质，反复多次以提高DNA的纯度，C正确。进行DNA鉴定时可以使用二苯胺试剂，但要进行沸水浴加热后才能观察到颜色变化，D错误。
命题点2 DNA片段的扩增与电泳鉴定
2.[2023浙江6月]某研究小组利用转基因技术，将绿色荧光蛋白基因（GFP）整合到野生型小鼠Gata3基因一端，如图甲所示。实验得到能正常表达两种蛋白质的杂合子雌雄小鼠各1只，交配以期获得Gata3-GFP基因纯合子小鼠。为了鉴定交配获得的4只新生小鼠的基因型，设计了引物1和引物2用于PCR扩增，PCR产物电泳结果如图乙所示。
图甲
图乙
下列叙述正确的是（B ）
A.Gata3基因的启动子无法控制GFP基因表达
B.翻译时先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白
C.2号条带的小鼠是野生型，4号条带的小鼠是Gata3-GFP基因纯合子
D.若用引物1和引物3进行PCR，能更好地区分杂合子和纯合子
解析 由图甲可知，Gata3基因与GFP基因共用一个启动子，且由题干可知两基因能正常表达出相关蛋白质，A错误；由于启动子在左侧，基因在右侧，转录基因时，先转录Gata3基因，再转录GFP基因，且翻译的方向是沿mRNA从5'→3'，因此翻译时先合成Gata3蛋白，再合成GFP蛋白，B正确；由图乙可知，大片段包含GFP基因编码区片段，小片段不包含GFP基因编码区片段，则2号小鼠是Gata3-GFP基因纯合子，4号小鼠是野生型，C错误；若用引物1和引物3进行PCR，杂合子和Gata3-GFP基因纯合子均能扩增出条带，仅有Gata3基因时无法扩增出条带，不利于区分杂合子和纯合子，D错误。