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黑龙江省哈尔滨市第九中学校2023-2024学年高二下学期期中考试生物学科试卷（原卷版+解析版）
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（考试时间：90分钟 满分：100分 共10页）
Ⅰ卷（选择题，45小题，共60分）
一、单项选择题（共40小题，1-30小题，每小题1分；31-40小题，每小题2分；共50分）
1. “五一”期间，蚌埠市旅游业火爆，众多美食赢得了消费者的高度赞扬，油炸臭豆腐是我市众多风味小吃的一种，制作时需要将豆腐浸入含有乳酸菌、芽孢杆菌等微生物的卤汁中发酵。下列相关说法，错误的是（ ）
A. 乳酸菌和芽孢杆菌均属于原核生物
B. 卤汁中的乳酸菌和芽孢杆菌存在竞争关系
C. 经煮沸灭菌的卤汁需冷却后才能浸入豆腐
D. 乳酸菌在无氧条件下发酵产生了乳酸
2. 《齐民要术》记载了古人在生产中运用发酵技术加工食品积累的许多宝贵经验。其中关于桃醋的做法有如下记载：“桃烂自零者，收取，内之于瓮中，以物盖口。七日之后，既烂，漉去皮核，密封闭之。三七日酢成，香美可食。”下列相关叙述错误的是（ ）
A. 与未成熟的桃子相比，成熟的桃子单糖含量更高，利于酵母菌发酵
B. “以物盖口”和“密封闭之”都是为了防止杂菌污染、创设无氧环境
C. “漉去皮核”可增加微生物与营养物质的接触面积，提高发酵效率
D. “七日之后”发酵液中的pH会降低，其表面可能形成一层菌膜
3. 在制果酒、泡菜、果醋、腐乳时，所用微生物的代谢类型分别是（ ）
A. 兼性厌氧型、厌氧型、需氧型、厌氧型
B. 兼性厌氧型、厌氧型、需氧型、需氧型
C. 兼性厌氧型、需氧型、厌氧型、需氧型
D. 兼性厌氧型、需氧型、需氧型、厌氧型
4. 金黄色葡萄球菌（SAU）是细菌性肺炎的病原体之一。细菌性肺炎一般需要注射或口服抗生素进行治疗，当细菌出现耐药性时疗效会下降。A、B、C、D四种抗生素均可治疗由SAU引起的肺炎，为选出最佳疗效的抗生素，研究者分别将含等剂量抗生素A、B、C、D的四张大小相同的滤纸片a、b、c、d置于均匀分布SAU的平板培养基上，在适宜条件下培养48h，结果如图。下列相关叙述正确的是（ ）
A. A、B、C、D四种抗生素，抑菌效果最佳的是抗生素D
B. 配制培养基时应将培养基的pH调至酸性①
C. 图示平板培养基是液态的
D. 滤纸片b周围透明圈中出现一菌落，可能是该菌落发生了基因突变
5. 将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌（菌株a和b）进行如下图所示实验。下列叙述正确的是（ ）
A. 实验中接种至培养基方法是平板划线法
B. 基本培养基出现的少量菌落一定是单菌落
C. 基本培养基中包含菌株a和b的生长因子
D. 菌株a和b需要生长因子有所不同
6. 牙齿再生术的难点在于牙髓再生和牙周组织再生。空军军医大学口腔医院金岩教授率领团队经历多年潜心努力，从患者脱落的乳牙中获取牙髓干细胞，经过体外培养，将形成的干细胞聚合体植入患者牙髓腔里，使得牙齿神经、血管再生，完全恢复牙齿原有功能。针对以上技术，下列叙述正确的是（ ）
A. 此技术的原理与植物组织培养的原理相同
B. 此技术需要适宜的温度（36.5℃）和pH（6.8—7.8）
C. 牙髓干细胞与胚胎干细胞一样都可以分化为成年动物体内任何一种类型的细胞，甚至产生个体
D. 对于牙髓干细胞的培养过程需要经历原代培养，用胰蛋白酶处理后再用离心法收集悬液中的细胞进行传代
7. CD47是一种细胞膜表面的糖蛋白，可与巨噬细胞结合，从而抑制巨噬细胞的功能。为验证抗CD47的单克隆抗体能减弱CD47对巨噬细胞的抑制作用，某科研小组进行了实验，实验过程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. CD47与巨噬细胞结合后会抑制后者的抗原处理、呈递功能
B. 通常向肿瘤细胞共培养体系加入血清，可提供某些营养物质
C. 融合、筛选得到的杂交瘤细胞都能产生抗CD47的单克隆抗体
D. 预期实验结果为实验组的巨噬细胞的吞噬能力高于对照组的
8. 胎牛血清（FBS）是天然的培养基，能够在多种动物卵母细胞的成熟过程中提供足够的营养物质，起到非常好的促进效果。如表所示是在后期胚胎培养液（CR2后液）中添加不同浓度的FBS后对牛核移植胚胎发育的影响情况，下列叙述错误的是（ ）
A. 囊胚外表的滋养层细胞将来发育成胎膜、胚盘等结构
B. 3组实验中促进核移植胚胎发育的适宜FBS浓度约为20%
C. 从卵巢采集的卵母细胞需在体外培育成熟才能参与受精
D. 添加不同浓度的FBS对核移植胚胎的发育均有促进作用
9. 下列关于细胞工程的有关叙述，不正确的是（ ）
A. 利用花药离体培养得到单倍体植株，从紫草的愈伤组织中提取紫草素，培育“番茄、马铃薯”杂种植株，都应用了植物细胞工程技术
B. 在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中，不会发生基因重组
C. 利用体细胞核移植技术培育的转基因克隆动物的细胞、组织或器官可以用于异种移植
D. 转基因羊和克隆羊多利的培育都克服了远缘杂交不亲和的障碍
10. 下图是利用猪唾液腺生产大量高纯度人神经生长因子（hNGF）的流程图，相关说法错误的是（ ）
A. 人NGF基因需与在唾液腺细胞中特异表达的基因的启动子等重组后再导入猪成纤维细胞A
B. 转基因猪D的遗传物质来自人、猪成纤维细胞A、猪卵细胞B和代孕猪C
C. 可通过电融合法促使猪成纤维细胞A和去核猪卵细胞B融合
D. 培育转基因猪D涉及基因工程，动物细胞培养、核移植、胚胎移植等操作
11. 如图为核移植实验过程示意图，根据图示分析下列叙述正确的是（ ）
A. 去核的时期应该在MⅠ期，原因是该时期第一极体和卵母细胞核较近
B. 桑葚胚细胞必须要提取出细胞核后，尽快注入去核的卵母细胞中
C. 重构胚形成后还需要其他方法激活
D. 克隆动物细胞质中的DNA完全由卵母细胞中提供
12. 某些哺乳动物胚胎干细胞经定向诱导可获得多种组织细胞，制备流程如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A. 为获得更多的囊胚，采用促性腺激素注射促进雄鼠产生更多的精子
B. 细胞a和细胞b内含有的核DNA不同，所以全能性高低不同
C. 用胰蛋白酶处理a，可获得分散的成体干细胞
D. 胚胎干细胞和诱导出的各种细胞都需在CO2培养箱中进行培养
13. CD47是一种在多种细胞中广泛表达的跨膜糖蛋白，能够与巨噬细胞膜上的受体结合，并抑制其吞噬作用。结肠癌等多种肿瘤细胞表面的CD47含量比正常细胞高1.6—5倍。科研人员尝试合成抗CD47的单克隆抗体，并进一步探究其对巨噬细胞吞噬作用的影响。过程如下图所示，下列有关叙述错误的是（ ）
注：吞噬指数越大，代表吞噬能力越强。
A. 图示①步骤中多次用CD47处理小鼠，目的是使小鼠产生更多的抗CD47抗体和记忆细胞
B. 获得所需的杂交瘤细胞至少需要进行两次筛选，但两次筛选原理不同
C. 图示②步骤中可以利用PEG融合法促进细胞融合，体现了细胞膜的结构特点
D. 肿瘤细胞中存在CD47的受体基因
14. 科学家采用体外受精技术或动物细胞核移植技术获得大熊猫胚胎，并进行胚胎移植，该工作有助于恢复濒危大熊猫的种群数量。下列叙述正确的是（ ）
①动物细胞核移植属于动物细胞工程技术
②体外受精前需要对大熊猫的精子进行获能处理
③体外受精前常需要对雌性大熊猫进行超数排卵处理
④胚胎早期发育时，桑葚胚内部开始出现含液体的腔
⑤胚胎移植过程中，需要经过两次处理，一次检查
A. ③④⑤B. ②④C. ①②③D. ③④
15. 通过动物细胞工程技术，可以利用患者自身的细胞在体外诱导发育成特定的组织器官，然后再移植回患者体内。图1和图2 表示利用自身细胞进行器官移植的两种方法，其中诱导多能干细胞（iPS 细胞）类似于人类的胚胎干细胞。下列叙述正确的是（ ）
A. 两种方法都需要运用动物细胞培养技术，需要将细胞置于含有95%O2和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中
B. 利用两种方法所获得的组织器官的遗传物质均与患者的完全相同，因此移植后不会发生免疫排斥反应
C. 可利用农杆菌转化法或显微注射法将Oct3/4 基因、Sx基因、c-Myc 基因和Klf基因导入成纤维细胞
D. 图2中卵母细胞去核实际去除的是纺锤体—染色体复合物，核移植时供体细胞不用去核，可整个注入去核的卵母细胞中
16. 在重组DNA技术中，将外源基因导入受体细胞，通常是利用质粒作为载体。下列关于质粒的叙述，正确的是（ ）
A. 质粒是一种结构简单的环状RNA分子
B. 质粒的复制和表达过程都遵循中心法则和碱基互补配对原则
C. 目的基因只有通过质粒整合到受体细胞的DNA中才能表达
D. 大多数天然质粒都不需要人工改造，可以直接作为载体使用
17. 同尾酶是指切割不同的DNA片段后能产生相同黏性末端的一类限制酶，下列四种限制酶中属于同尾酶的是（ ）
A. ①③B. ②④C. ①③和②④D. ①④
18. 人体内一些正常或异常细胞脱落破碎后，其DNA会以游离的形式存在于血液中，称为cfDNA．近几年，结合PCR及电泳鉴定、DNA测序等技术，cfDNA在临床上得到了广泛应用。下列相关说法错误的是（ ）
A. 对cfDNA进行检测，可以用于肿瘤的早期筛查
B. 在琼脂糖凝胶中，cfDNA的迁移速率与cfDNA分子的大小、构象等有关
C. 在进行电泳时，要预留一个加样孔，加入指示分子大小的标准参照物
D. PCR反应中设置不同的温度是为了使酶催化不同的反应
19. 以下关于基因表达载体的构建的说法正确的是（ ）
A. 基因表达载体的构建是在生物体的细胞内完成的
B. 基因表达载体中只有启动子才能驱动目的基因转录出mRNA
C. 基因表达载体的组成应包括启动子、终止密码子、目的基因、标记基因等
D. 基因表达载体通常采用抗生素合成基因作为标记基因
20. 人血清白蛋白（HSA）是血浆蛋白的主要成分，具有维持血浆渗透压和进行物质运输的功能。科学家利用转基因技术获得转HSA基因的大肠杆菌，通过发酵工程，实现HSA的大量生产，下图表示HSA基因。下列叙述错误的（ ）
A. PCR过程每次循环分为3步，其中温度最低的一步是第二步
B. 扩增出HSA基因并用于表达载体的构建，应选择引物Ⅱ和引物Ⅲ
C. 在PCR反应缓冲液中加入Mg2+的作用是激活耐高温的DNA聚合酶
D. 用PCR方法获得HSA基因，可通过两轮PCR循环获得HSA基因
21. t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。但t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高，给心梗患者注射大量t-PA会诱发颅内出血。若将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，获得改良药物t-PA，能显著降低出血副作用。下列叙述错误的是（ ）
A. 通过蛋白质工程可制备大量的改良药物t-PA蛋白
B. 依据改良t-PA蛋白的氨基酸序列可推导出改良t-PA基因脱氧核苷酸序列
C. 获得改良药物t-PA，最终必须通过改造或合成基因来实现
D. 将改良的t-PA基因直接注入大肠杆菌，是生产改良t-PA蛋白的核心步骤
22. 病毒没有细胞结构，在生物学中应用广泛。下列有关病毒在生物学中的应用的叙述，错误的是（ ）
A. 病毒经灭活处理后，常用于介导植物细胞的融合
B. 某些病毒的DNA经改造后，可用作基因工程的载体
C. 病毒经灭活处理后，其表面的抗原蛋白可以制成疫苗
D. PCR技术可用于检测机体是否感染该种病毒
23. 生物技术与工程学相结合，可研究、设计和加工生产各种生物工程产品。下列有关叙述正确的是（ ）
①由于外植体在植物组织培养过程中不感染病毒，用任何外植体都可制备脱毒苗
②由iPS细胞产生的特定细胞，可以在新药的测试中发挥重要作用
③胚胎移植作为胚胎工程的前端技术环节，推动了胚胎工程其他技术的研究和应用
④PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成，而后常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物
⑤蛋白质工程仅以蛋白质结构为基础逆中心法则进行，就可以改造或制造新的蛋白质
A. ①③B. ②④C. ②③④⑤D. ①③④⑤
24. 下列关于我国对转基因技术的方针的说法，不正确的是（ ）
A. 我国对转基因技术的方针是随着国家的政治、经济、科学发展水平的提升不断变化
B. 研究上要大胆，坚持自主创新
C. 推广上要慎重，做到确保安全
D. 管理上要严格，坚持依法监管
25. 下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是（ ）
A. 得到③需要用Mg2+处理农杆菌
B. ⑤表现出抗虫性状可表明植株发生了可遗传变异
C. ④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状
D. ③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上
26. 下列关于克隆和试管婴儿的叙述，错误的是（ ）
A. 治疗性克隆属于无性生殖，生殖性克隆属于有性生殖
B. 取病人自己细胞，利用克隆技术培养产生胰岛细胞以治疗糖尿病，属于治疗性克隆
C. “设计试管婴儿”与“试管婴儿”的主要区别是前者在植入前需对胚胎进行遗传学诊断
D. 生殖性克隆和治疗性克隆均需要应用动物细胞培养和体细胞核移植技术
27. 科研人员利用农杆菌转化法将抗病毒蛋白基因C导入番木瓜，培育出转基因抗病番木瓜，所用的Ti质粒如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A. 该技术的原理是基因突变
B. 构建基因表达载体需要限制酶和耐高温的DNA聚合酶
C. 可利用抗原-抗体杂交技术检测受体细胞中的抗病毒蛋白
D. 可利用卡那霉素抗性基因检测是否成功构建抗病毒番木瓜
28. 科学家利用蛋白质工程技术将水蛭素（一种可用于预防和治疗血栓的蛋白质）第47位的天冬酰胺替换为赖氨酸，显著提高了它的抗凝血活性，流程图如下。已知天冬酰胺对应的密码子为AAU、AAC，赖氨酸对应的密码子为AAA、GUA等。下列叙述错误的是（ ）
A. 蛋白质工程是延伸出来的第二代基因工程
B. 在这项替换研究中目前可行的直接操作对象是基因
C. 上图中大分子物质a和b的单体序列均是唯一的
D. 用蛋白质工程可生产基因工程所不能生产的蛋白质
29. 下列关于生物武器及其使用的叙述，正确的是（ ）
A. 生物武器种类多样，包括病毒类、毒品类、致病菌类等
B. 人体对利用转基因技术制造的新型致病菌不会产生免疫反应
C. 现在的年轻人都已接种天花疫苗，对其有特异性免疫能力，所以不感染该病毒
D. 《禁止生物武器公约》中强调在任何情况下不发展、不生产、不储存生物武器
30. W是一种具有特定功能的人体蛋白质。某学习小组利用膀胱生物反应器制备W的过程如下图，下列有关说法不正确的是（ ）
A. 步骤①构建的重组表达载体上应有供重组DNA的鉴定和选择的标记基因
B. 步骤②可以使用显微注射技术
C. 膀胱生物反应器与乳腺生物反应器相比具有不受年龄和性别限制等优点
D. W基因只在转基因动物膀胱细胞中存在并表达
31. 动物细胞培养是动物细胞工程的基础。如图所示，a、b、c表示现代工程技术，①②③表示通过相应技术经胚胎移植得到的个体，下列说法正确的是（ ）
A. 若a是体细胞核移植技术，则①反映了动物细胞也具有全能性
B. 若b是体外受精技术，则②为良种家畜快速大量繁殖提供了可能
C. 若c是胚胎分割技术，则③中个体的基因型和表现型一定相同
D. ①②③生产过程中的受体需用促性腺激素进行同期发情处理
32. HA蛋白是禽流感病毒的重要抗原。鸡卵清蛋白是由输卵管上皮细胞中卵清蛋白基因特异性表达后分泌至输卵管内，参与构成鸡蛋清的蛋白质。下图是利用基因工程技术制备HA蛋白鸡输卵管生物反应器的过程。几种可供选择的限制酶识别序列如下，下列说法错误的是（ ）
A. ①为逆转录过程，该过程需要逆转录酶、4种游离的脱氧核苷酸等组分
B. 目的基因与鸡卵清蛋白基因启动子拼接前应先在目的基因两端分别引入HindⅢ和EcRⅠ的识别序列
C. 利用PCR技术扩增目的基因时，复性温度偏低、引物特异性差均可导致产物中出现部分非目标序列
D. 基因表达载体导入受精鸡胚的胚盘可以使用显微注射法
33. 光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源创制中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 为构建正确连接的表达载体，应选用BamHI和HindⅢ这两种限制酶
B. PCR扩增目的基因过程中每次循环都要经历一次升温和两次降温
C. 表达载体导入受体细胞后，可用含四环素的选择培养基进行初步筛选
D. 由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因棉花均培育成功
34. 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，以便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓CATCC—；限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。据图判断，下列操作正确的是（ ）
A. 质粒用限制酶I切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
B. 质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶I切割
C. 目的基因和质粒均用限制酶I切割
D. 目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
35. 某病毒的检测可以采用实时荧光RTPCR（逆转录聚合酶链式反应）的方法，RTPCR的具体过程如图。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 过程①以mRNA为模板合成单链DNA
B. 过程②③拟对单链cDNA进行第n次循环的扩增，理论上需要n个引物B
C. 该技术用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度
D. 游离的脱氧核苷酸只能从引物的3′端开始连接
36. 科学家将海鱼的抗冻蛋白基因用PCR技术扩增，如图1是扩增的目的基因的示意图。为寻找合适的载体，科学家对某载体用EcRⅠ和SmaⅠ两种限制酶进行酶切后，再利用琼脂糖凝胶电泳得到图2所示图谱（其中1号泳道是标准DNA样品的电泳结果，2号、3号、4号泳道分别是用EcRⅠ单独处理SmaⅠ单独处理、两种酶共同处理后的电泳结果）。下列说法错误的是（ ）
A. 应选用引物2和引物3对目的基因进行扩增
B. 由图2可知该载体DNA分子中两种限制酶的酶切位点各有一个
C. 限制酶EcRⅠ和SmaⅠ的酶切位点最短相距约200bp
D. 扩增5次后可得到16个等长的目的基因片段
37. 解偶联蛋白1（UCP1）具有消除线粒体内膜两侧的H+浓度差，减少ATP合成、增加产热的功能。我国科学家应用CRISPR/Cas9技术将猪的UCP1基因置换成小鼠的UCP1基因，并使鼠UCP1基因在猪的白色脂肪组织中特异性表达，获得脂肪沉积少的“瘦肉猪”。下图是“瘦肉猪”的主要培育过程，相关叙述错误的是（ ）
A. 应用CRISPR/Cas9技术育种的主要原理是基因重组
B. 过程b进行有限稀释培养的目的是获得阳性单克隆细胞系
C. 过程d的受体细胞最好是去核的猪卵母细胞
D. 过程e要对代孕猪进行同期发情处理，并选择发育正常的原肠胚植入代孕猪输卵管
38. 为探究结核杆菌耐药性，研究人员提取患者体内病原菌进行培养，如图1，过程Ⅰ接种纯化结果如图2，下列说法不正确的是（ ）
A. 图2中划线的顺序依次是①③②
B. 过程Ⅲ最理想效果是结核杆菌均具有耐药性
C. 两个固体平板培养基中均需加入抗生素
D. 固体平板培养使用的培养基属于鉴别培养基
39. 如图为利用生物技术获得生物新品种的过程，有关说法不正确的是（ ）
A. a→b过程中一般用4种脱氧核苷酸为原料，并加入两种引物
B. b→c为转基因绵羊的培育过程，常选用的受体细胞是受精卵
C. a→b过程利用了DNA半保留复制的原理，需要使用RNA聚合酶
D. b→d为转基因植物的培育过程，其中④过程常用的方法是农杆菌转化法
40. 骨髓间充质干细胞（BMSC）在某些诱导剂作用下可分化成心肌细胞，在心脏类疾病的治疗中拥有广阔的应用前景。在细胞培养的过程中，通过检测细胞中基因的表达产物可以判断细胞的分化方向。科研人员研究丹酚酸B（丹参提取物）对BMSC分化的影响，从大鼠体内分离BMSC并进行多代培养，用一定浓度的丹酚酸B处理一段时间后，与对照组相比，实验组中与分化为心肌细胞相关的关键基因的mRNA含量明显增加。下列叙述错误的是（ ）
A. 在使用丹酚酸B和生理盐水处理细胞前，需对两种试剂进行灭菌处理
B. 原代培养的BMSC出现接触抑制时，需要用胃蛋白酶处理并进行分瓶培养
C. BMSC与诱导多能干细胞都是具有分裂能力的细胞，且具有一定的分化潜能
D. 推测丹酚酸B是通过促进相关基因的转录来促进BMSC分化为心肌细胞
二、不定项选择题（共5小题，每题至少有一个选项正确，每题2分，共10分）
41. 普洱茶分为生普和熟普，其中熟普是以云南大叶种晒青茶为原料，经后发酵（人为加水提温，加速茶叶熟化去除生茶苦涩以达到入口纯和汤色红浓之独特品性）加工形成的。熟普的汤色红浓明亮，香气独特陈香，滋味醇厚回甘，叶底红褐均匀。熟普的香味会随着陈化的时间而变得越来越柔顺、浓郁。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 人为加水提温可以促进微生物繁殖，进而缩短原料发酵的时间
B. 熟普发酵过程中环境条件变化会影响微生物的生长繁殖和代谢
C. 熟普发酵一段时间后要进行灭菌并密封，有利于茶的长期保存
D. 饮用熟普后回甘，可能是因为发酵后茶叶中单糖、二糖含量增加
42. 在体细胞克隆猴培育过程中，为调节相关基因的表达，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂（TSA）处理，使胚胎的发育率和妊娠率提高，具体培育流程如图所示。下列说法正确的是（ ）
A. 去核时使用的梯度离心、紫外光照射和化学物质处理等方法可以在没有穿透卵母细胞透明带的情况下进行
B. 灭活的仙台病毒表面含有糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚而发生融合
C. 组蛋白低甲基化和高乙酰化水平均有利于重构胚的发育
D. 胚胎移植前需要对供、受体进行免疫检测
43. 已知一双链DNA分子，用限制性核酸内切酶Ⅰ切割得到长度为120kb（kb：千碱基对）片段；用限制性核酸内切酶Ⅱ切割得到40kb和80kb两个片段；同时用限制性核酸内切酶Ⅰ和限制性核酸内切酶Ⅱ切割时，得到10kb、80kb和30kb3个片段。据此分析该双链DNA分子结构及酶切位点情况为（ ）
A. B.
C.
D.
44. 单倍体胚胎干细胞是指只含一套染色体，但拥有类似于正常干细胞分裂分化能力的细胞群。利用小鼠建立单倍体胚胎干细胞的操作如图所示。下列叙述不正确的是（ ）
A. 体外受精前应将卵母细胞培养至M Ⅰ中期
B. 建立的单倍体胚胎干细胞中只含一条性染色体X或Y
C. 上述过程涉及动物细胞培养、体外受精和核移植等操作
D. 理论上可用物质激活卵母细胞完成M Ⅱ实现由①直接转变为④
45. 孤独症谱系障碍与基因S的变异有关，科研人员对猕猴的基因S进行编辑，首次获得孤独症模型猴，然后再通过动物细胞工程和胚胎工程技术获得更多克隆猴，下列叙述正确的是（ ）
A. 克隆出的模型猴性别由核供体决定
B. 培养早期胚胎时无需提供气体环境
C. 胚胎移植的过程中，需要选择具有优良遗传性状的雌性个体作为受体
D. 为获得更多克隆猴，可以采用胰蛋白酶或胶原蛋白酶对早期胚胎进行分割，经移植获得同卵双胎或多胎
Ⅱ卷（非选择题，4小题，共40分）
46. 产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
（1）常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是______（填编号）。
（2）称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经______后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中再经10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌______个。
（3）为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行诱变处理，将辐照处理后的酵母菌涂布在以______为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径______的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
（4）在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株______进行后续相关研究，理由是______（答出两点）。
（5）生产生活中，酿酒酵母可以用来制作果酒，在果酒制作基础上还可以利用醋酸菌继续制作果醋，氧气条件充足时，利用果酒制作果醋的反应式为：______。
47. 穗花杉是我国保护植物，现存数量较少。穗花杉双黄酮具有抗炎、抗肿瘤、清除自由基、保护神经、舒张血管等功能，如图是某科研小组利用植物细胞工程来生产穗花杉双黄酮的主要过程，回答下列问题：
（1）图示过程______（填“能”或“不能”）体现细胞的全能性。
（2）过程①表示______，该过程需要在______等条件的诱导下才能实现；③过程中应用到______技术手段实现了细胞数量的增多，从而获得大量的穗花杉双黄酮。
（3）图示过程中，之所以选择穗花杉的幼嫩茎作为外植体，主要是因为______。
（4）与从穗花杉植株中提取穗花杉双黄酮这一传统方式相比，通过植物细胞工程生产穗花杉双黄酮的优势有______（至少答出两点）
48. 非洲猪瘟是由ASFV（一种双链DNA病毒）感染猪引起的烈性传染病。某研究小组将ASFV外壳蛋白基因导入猪体细胞中，利用核移植技术培育转基因克隆猪，从而得到自动产生ASFV抗体的个体，其过程如图所示。回答下列问题：
（1）获得D猪的基础技术是______，取B猪体细胞进行①过程相对于胚胎细胞难度大，原因在于______，步骤③采用的技术手段是______。
（2）B猪体细胞在培养瓶中培养时，除必须保证环境是无菌、无毒外，还必须定期更换培养液以防止细胞代谢物积累对细胞自身造成的伤害。培养到一定程度后，需要分瓶再继续培养，分瓶后的培养过程称为______。
（3）由于目的基因不能直接导入受体细胞，因此需要构建______，该过程采用双酶切法处理含目的基因的DNA片段和质粒，其优点是______（答出一点即可）。
（4）利用抗原一抗体杂交技术判断D猪是否产生ASFV抗体，使用的抗原物质最好是______。该抗体也可以使用杂交瘤技术来制备，通常情况下，杂交瘤细胞是由骨髓瘤细胞和______细胞融合获得的。
49. 血管为肿瘤的增殖和转移提供了有利条件。M蛋白是人体内抑制血管生长的因子，可作为肿瘤治疗的潜在药物。将控制M蛋白合成的基因m导入酵母细胞中进行表达，可获得大量M蛋白。如图为酵母表达载体（质粒K）的示意图（SacⅠ、EcRⅠ、NtⅠ、Sa1Ⅰ为限制酶切割位点，切割产生的黏性末端均不相同）。
回答下列问题。
（1）已知基因m中无上述任一限制酶切割位点。为提高连接效率并保证基因m和载体的定向连接，对基因m进行PCR扩增时，需在基因m的上游引物和下游引物中分别引入______限制酶切割位点。
（2）将PCR扩增获得的基因m与酶切后的质粒K进行连接，构建基因m的表达载体。随后，将酶切后的质粒K（a组）与构建的表达载体（b组）分别转入大肠杆菌，并在含有氨苄青霉素的培养基上培养。已知未环化的质粒会被大肠杆菌核酸酶水解，若a组与b组培养基中均有菌落产生，a组出现菌落的原因可能是杂菌污染或______（答出1点即可）。由此推测，b组培养基上的菌落______（填“一定”或“不一定”）含有基因m。
（3）将构建成功的基因m表达载体导入组氨酸合成缺失的酵母突变体中，在______的培养基上培养，以筛选出含有表达载体的酵母细胞。
（4）若观察到M蛋白对血管内皮细胞增殖有抑制作用，说明获得的M蛋白______。组别
培养液
卵裂率/%
囊胚率/%
对照组
CR2前液+CR2后液
59.17±1.34
13.53±2.04
实验组1
CR2前液+10%FBS CR2后液
6214±1.78
13.78±2.77
实验组2
CR2前液+20%FBS CR2后液
68.95±4.15
26.09±2.20
实验组3
CR2前液+30%FBS CR2后液
62.02±8.64
8.78±3.20
编号
①
②
③
④
物品
培养基
接种环
培养皿
涂布器
灭菌方法
干热
火焰灼烧
干热
火焰灼烧
（考试时间：90分钟 满分：100分 共10页）
Ⅰ卷（选择题，45小题，共60分）
一、单项选择题（共40小题，1-30小题，每小题1分；31-40小题，每小题2分；共50分）
1. “五一”期间，蚌埠市旅游业火爆，众多美食赢得了消费者的高度赞扬，油炸臭豆腐是我市众多风味小吃的一种，制作时需要将豆腐浸入含有乳酸菌、芽孢杆菌等微生物的卤汁中发酵。下列相关说法，错误的是（ ）
A. 乳酸菌和芽孢杆菌均属于原核生物
B. 卤汁中的乳酸菌和芽孢杆菌存在竞争关系
C. 经煮沸灭菌的卤汁需冷却后才能浸入豆腐
D. 乳酸菌在无氧条件下发酵产生了乳酸
2. 《齐民要术》记载了古人在生产中运用发酵技术加工食品积累的许多宝贵经验。其中关于桃醋的做法有如下记载：“桃烂自零者，收取，内之于瓮中，以物盖口。七日之后，既烂，漉去皮核，密封闭之。三七日酢成，香美可食。”下列相关叙述错误的是（ ）
A. 与未成熟的桃子相比，成熟的桃子单糖含量更高，利于酵母菌发酵
B. “以物盖口”和“密封闭之”都是为了防止杂菌污染、创设无氧环境
C. “漉去皮核”可增加微生物与营养物质的接触面积，提高发酵效率
D. “七日之后”发酵液中的pH会降低，其表面可能形成一层菌膜
3. 在制果酒、泡菜、果醋、腐乳时，所用微生物的代谢类型分别是（ ）
A. 兼性厌氧型、厌氧型、需氧型、厌氧型
B. 兼性厌氧型、厌氧型、需氧型、需氧型
C. 兼性厌氧型、需氧型、厌氧型、需氧型
D. 兼性厌氧型、需氧型、需氧型、厌氧型
4. 金黄色葡萄球菌（SAU）是细菌性肺炎的病原体之一。细菌性肺炎一般需要注射或口服抗生素进行治疗，当细菌出现耐药性时疗效会下降。A、B、C、D四种抗生素均可治疗由SAU引起的肺炎，为选出最佳疗效的抗生素，研究者分别将含等剂量抗生素A、B、C、D的四张大小相同的滤纸片a、b、c、d置于均匀分布SAU的平板培养基上，在适宜条件下培养48h，结果如图。下列相关叙述正确的是（ ）
A. A、B、C、D四种抗生素，抑菌效果最佳的是抗生素D
B. 配制培养基时应将培养基的pH调至酸性①
C. 图示平板培养基是液态的
D. 滤纸片b周围透明圈中出现一菌落，可能是该菌落发生了基因突变
5. 将两种氨基酸营养缺陷型大肠杆菌（菌株a和b）进行如下图所示实验。下列叙述正确的是（ ）
A. 实验中接种至培养基方法是平板划线法
B. 基本培养基出现的少量菌落一定是单菌落
C. 基本培养基中包含菌株a和b的生长因子
D. 菌株a和b需要生长因子有所不同
6. 牙齿再生术的难点在于牙髓再生和牙周组织再生。空军军医大学口腔医院金岩教授率领团队经历多年潜心努力，从患者脱落的乳牙中获取牙髓干细胞，经过体外培养，将形成的干细胞聚合体植入患者牙髓腔里，使得牙齿神经、血管再生，完全恢复牙齿原有功能。针对以上技术，下列叙述正确的是（ ）
A. 此技术的原理与植物组织培养的原理相同
B. 此技术需要适宜的温度（36.5℃）和pH（6.8—7.8）
C. 牙髓干细胞与胚胎干细胞一样都可以分化为成年动物体内任何一种类型的细胞，甚至产生个体
D. 对于牙髓干细胞的培养过程需要经历原代培养，用胰蛋白酶处理后再用离心法收集悬液中的细胞进行传代
7. CD47是一种细胞膜表面的糖蛋白，可与巨噬细胞结合，从而抑制巨噬细胞的功能。为验证抗CD47的单克隆抗体能减弱CD47对巨噬细胞的抑制作用，某科研小组进行了实验，实验过程如图所示。下列叙述错误的是（ ）
A. CD47与巨噬细胞结合后会抑制后者的抗原处理、呈递功能
B. 通常向肿瘤细胞共培养体系加入血清，可提供某些营养物质
C. 融合、筛选得到的杂交瘤细胞都能产生抗CD47的单克隆抗体
D. 预期实验结果为实验组的巨噬细胞的吞噬能力高于对照组的
8. 胎牛血清（FBS）是天然的培养基，能够在多种动物卵母细胞的成熟过程中提供足够的营养物质，起到非常好的促进效果。如表所示是在后期胚胎培养液（CR2后液）中添加不同浓度的FBS后对牛核移植胚胎发育的影响情况，下列叙述错误的是（ ）
A. 囊胚外表的滋养层细胞将来发育成胎膜、胚盘等结构
B. 3组实验中促进核移植胚胎发育的适宜FBS浓度约为20%
C. 从卵巢采集的卵母细胞需在体外培育成熟才能参与受精
D. 添加不同浓度的FBS对核移植胚胎的发育均有促进作用
9. 下列关于细胞工程的有关叙述，不正确的是（ ）
A. 利用花药离体培养得到单倍体植株，从紫草的愈伤组织中提取紫草素，培育“番茄、马铃薯”杂种植株，都应用了植物细胞工程技术
B. 在进行组织培养时，由根尖细胞形成愈伤组织的过程中，不会发生基因重组
C. 利用体细胞核移植技术培育的转基因克隆动物的细胞、组织或器官可以用于异种移植
D. 转基因羊和克隆羊多利的培育都克服了远缘杂交不亲和的障碍
10. 下图是利用猪唾液腺生产大量高纯度人神经生长因子（hNGF）的流程图，相关说法错误的是（ ）
A. 人NGF基因需与在唾液腺细胞中特异表达的基因的启动子等重组后再导入猪成纤维细胞A
B. 转基因猪D的遗传物质来自人、猪成纤维细胞A、猪卵细胞B和代孕猪C
C. 可通过电融合法促使猪成纤维细胞A和去核猪卵细胞B融合
D. 培育转基因猪D涉及基因工程，动物细胞培养、核移植、胚胎移植等操作
11. 如图为核移植实验过程示意图，根据图示分析下列叙述正确的是（ ）
A. 去核的时期应该在MⅠ期，原因是该时期第一极体和卵母细胞核较近
B. 桑葚胚细胞必须要提取出细胞核后，尽快注入去核的卵母细胞中
C. 重构胚形成后还需要其他方法激活
D. 克隆动物细胞质中的DNA完全由卵母细胞中提供
12. 某些哺乳动物胚胎干细胞经定向诱导可获得多种组织细胞，制备流程如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A. 为获得更多的囊胚，采用促性腺激素注射促进雄鼠产生更多的精子
B. 细胞a和细胞b内含有的核DNA不同，所以全能性高低不同
C. 用胰蛋白酶处理a，可获得分散的成体干细胞
D. 胚胎干细胞和诱导出的各种细胞都需在CO2培养箱中进行培养
13. CD47是一种在多种细胞中广泛表达的跨膜糖蛋白，能够与巨噬细胞膜上的受体结合，并抑制其吞噬作用。结肠癌等多种肿瘤细胞表面的CD47含量比正常细胞高1.6—5倍。科研人员尝试合成抗CD47的单克隆抗体，并进一步探究其对巨噬细胞吞噬作用的影响。过程如下图所示，下列有关叙述错误的是（ ）
注：吞噬指数越大，代表吞噬能力越强。
A. 图示①步骤中多次用CD47处理小鼠，目的是使小鼠产生更多的抗CD47抗体和记忆细胞
B. 获得所需的杂交瘤细胞至少需要进行两次筛选，但两次筛选原理不同
C. 图示②步骤中可以利用PEG融合法促进细胞融合，体现了细胞膜的结构特点
D. 肿瘤细胞中存在CD47的受体基因
14. 科学家采用体外受精技术或动物细胞核移植技术获得大熊猫胚胎，并进行胚胎移植，该工作有助于恢复濒危大熊猫的种群数量。下列叙述正确的是（ ）
①动物细胞核移植属于动物细胞工程技术
②体外受精前需要对大熊猫的精子进行获能处理
③体外受精前常需要对雌性大熊猫进行超数排卵处理
④胚胎早期发育时，桑葚胚内部开始出现含液体的腔
⑤胚胎移植过程中，需要经过两次处理，一次检查
A. ③④⑤B. ②④C. ①②③D. ③④
15. 通过动物细胞工程技术，可以利用患者自身的细胞在体外诱导发育成特定的组织器官，然后再移植回患者体内。图1和图2 表示利用自身细胞进行器官移植的两种方法，其中诱导多能干细胞（iPS 细胞）类似于人类的胚胎干细胞。下列叙述正确的是（ ）
A. 两种方法都需要运用动物细胞培养技术，需要将细胞置于含有95%O2和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中
B. 利用两种方法所获得的组织器官的遗传物质均与患者的完全相同，因此移植后不会发生免疫排斥反应
C. 可利用农杆菌转化法或显微注射法将Oct3/4 基因、Sx基因、c-Myc 基因和Klf基因导入成纤维细胞
D. 图2中卵母细胞去核实际去除的是纺锤体—染色体复合物，核移植时供体细胞不用去核，可整个注入去核的卵母细胞中
16. 在重组DNA技术中，将外源基因导入受体细胞，通常是利用质粒作为载体。下列关于质粒的叙述，正确的是（ ）
A. 质粒是一种结构简单的环状RNA分子
B. 质粒的复制和表达过程都遵循中心法则和碱基互补配对原则
C. 目的基因只有通过质粒整合到受体细胞的DNA中才能表达
D. 大多数天然质粒都不需要人工改造，可以直接作为载体使用
17. 同尾酶是指切割不同的DNA片段后能产生相同黏性末端的一类限制酶，下列四种限制酶中属于同尾酶的是（ ）
A. ①③B. ②④C. ①③和②④D. ①④
18. 人体内一些正常或异常细胞脱落破碎后，其DNA会以游离的形式存在于血液中，称为cfDNA．近几年，结合PCR及电泳鉴定、DNA测序等技术，cfDNA在临床上得到了广泛应用。下列相关说法错误的是（ ）
A. 对cfDNA进行检测，可以用于肿瘤的早期筛查
B. 在琼脂糖凝胶中，cfDNA的迁移速率与cfDNA分子的大小、构象等有关
C. 在进行电泳时，要预留一个加样孔，加入指示分子大小的标准参照物
D. PCR反应中设置不同的温度是为了使酶催化不同的反应
19. 以下关于基因表达载体的构建的说法正确的是（ ）
A. 基因表达载体的构建是在生物体的细胞内完成的
B. 基因表达载体中只有启动子才能驱动目的基因转录出mRNA
C. 基因表达载体的组成应包括启动子、终止密码子、目的基因、标记基因等
D. 基因表达载体通常采用抗生素合成基因作为标记基因
20. 人血清白蛋白（HSA）是血浆蛋白的主要成分，具有维持血浆渗透压和进行物质运输的功能。科学家利用转基因技术获得转HSA基因的大肠杆菌，通过发酵工程，实现HSA的大量生产，下图表示HSA基因。下列叙述错误的（ ）
A. PCR过程每次循环分为3步，其中温度最低的一步是第二步
B. 扩增出HSA基因并用于表达载体的构建，应选择引物Ⅱ和引物Ⅲ
C. 在PCR反应缓冲液中加入Mg2+的作用是激活耐高温的DNA聚合酶
D. 用PCR方法获得HSA基因，可通过两轮PCR循环获得HSA基因
21. t-PA蛋白能高效降解由纤维蛋白凝聚而成的血栓，是心梗和脑血栓的急救药。但t-PA与纤维蛋白结合的特异性不高，给心梗患者注射大量t-PA会诱发颅内出血。若将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，获得改良药物t-PA，能显著降低出血副作用。下列叙述错误的是（ ）
A. 通过蛋白质工程可制备大量的改良药物t-PA蛋白
B. 依据改良t-PA蛋白的氨基酸序列可推导出改良t-PA基因脱氧核苷酸序列
C. 获得改良药物t-PA，最终必须通过改造或合成基因来实现
D. 将改良的t-PA基因直接注入大肠杆菌，是生产改良t-PA蛋白的核心步骤
22. 病毒没有细胞结构，在生物学中应用广泛。下列有关病毒在生物学中的应用的叙述，错误的是（ ）
A. 病毒经灭活处理后，常用于介导植物细胞的融合
B. 某些病毒的DNA经改造后，可用作基因工程的载体
C. 病毒经灭活处理后，其表面的抗原蛋白可以制成疫苗
D. PCR技术可用于检测机体是否感染该种病毒
23. 生物技术与工程学相结合，可研究、设计和加工生产各种生物工程产品。下列有关叙述正确的是（ ）
①由于外植体在植物组织培养过程中不感染病毒，用任何外植体都可制备脱毒苗
②由iPS细胞产生的特定细胞，可以在新药的测试中发挥重要作用
③胚胎移植作为胚胎工程的前端技术环节，推动了胚胎工程其他技术的研究和应用
④PCR反应过程可以在PCR扩增仪中自动完成，而后常用琼脂糖凝胶电泳来鉴定PCR的产物
⑤蛋白质工程仅以蛋白质结构为基础逆中心法则进行，就可以改造或制造新的蛋白质
A. ①③B. ②④C. ②③④⑤D. ①③④⑤
24. 下列关于我国对转基因技术的方针的说法，不正确的是（ ）
A. 我国对转基因技术的方针是随着国家的政治、经济、科学发展水平的提升不断变化
B. 研究上要大胆，坚持自主创新
C. 推广上要慎重，做到确保安全
D. 管理上要严格，坚持依法监管
25. 下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。以下相关叙述，正确的是（ ）
A. 得到③需要用Mg2+处理农杆菌
B. ⑤表现出抗虫性状可表明植株发生了可遗传变异
C. ④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状
D. ③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上
26. 下列关于克隆和试管婴儿的叙述，错误的是（ ）
A. 治疗性克隆属于无性生殖，生殖性克隆属于有性生殖
B. 取病人自己细胞，利用克隆技术培养产生胰岛细胞以治疗糖尿病，属于治疗性克隆
C. “设计试管婴儿”与“试管婴儿”的主要区别是前者在植入前需对胚胎进行遗传学诊断
D. 生殖性克隆和治疗性克隆均需要应用动物细胞培养和体细胞核移植技术
27. 科研人员利用农杆菌转化法将抗病毒蛋白基因C导入番木瓜，培育出转基因抗病番木瓜，所用的Ti质粒如图所示。下列叙述正确的是（ ）
A. 该技术的原理是基因突变
B. 构建基因表达载体需要限制酶和耐高温的DNA聚合酶
C. 可利用抗原-抗体杂交技术检测受体细胞中的抗病毒蛋白
D. 可利用卡那霉素抗性基因检测是否成功构建抗病毒番木瓜
28. 科学家利用蛋白质工程技术将水蛭素（一种可用于预防和治疗血栓的蛋白质）第47位的天冬酰胺替换为赖氨酸，显著提高了它的抗凝血活性，流程图如下。已知天冬酰胺对应的密码子为AAU、AAC，赖氨酸对应的密码子为AAA、GUA等。下列叙述错误的是（ ）
A. 蛋白质工程是延伸出来的第二代基因工程
B. 在这项替换研究中目前可行的直接操作对象是基因
C. 上图中大分子物质a和b的单体序列均是唯一的
D. 用蛋白质工程可生产基因工程所不能生产的蛋白质
29. 下列关于生物武器及其使用的叙述，正确的是（ ）
A. 生物武器种类多样，包括病毒类、毒品类、致病菌类等
B. 人体对利用转基因技术制造的新型致病菌不会产生免疫反应
C. 现在的年轻人都已接种天花疫苗，对其有特异性免疫能力，所以不感染该病毒
D. 《禁止生物武器公约》中强调在任何情况下不发展、不生产、不储存生物武器
30. W是一种具有特定功能的人体蛋白质。某学习小组利用膀胱生物反应器制备W的过程如下图，下列有关说法不正确的是（ ）
A. 步骤①构建的重组表达载体上应有供重组DNA的鉴定和选择的标记基因
B. 步骤②可以使用显微注射技术
C. 膀胱生物反应器与乳腺生物反应器相比具有不受年龄和性别限制等优点
D. W基因只在转基因动物膀胱细胞中存在并表达
31. 动物细胞培养是动物细胞工程的基础。如图所示，a、b、c表示现代工程技术，①②③表示通过相应技术经胚胎移植得到的个体，下列说法正确的是（ ）
A. 若a是体细胞核移植技术，则①反映了动物细胞也具有全能性
B. 若b是体外受精技术，则②为良种家畜快速大量繁殖提供了可能
C. 若c是胚胎分割技术，则③中个体的基因型和表现型一定相同
D. ①②③生产过程中的受体需用促性腺激素进行同期发情处理
32. HA蛋白是禽流感病毒的重要抗原。鸡卵清蛋白是由输卵管上皮细胞中卵清蛋白基因特异性表达后分泌至输卵管内，参与构成鸡蛋清的蛋白质。下图是利用基因工程技术制备HA蛋白鸡输卵管生物反应器的过程。几种可供选择的限制酶识别序列如下，下列说法错误的是（ ）
A. ①为逆转录过程，该过程需要逆转录酶、4种游离的脱氧核苷酸等组分
B. 目的基因与鸡卵清蛋白基因启动子拼接前应先在目的基因两端分别引入HindⅢ和EcRⅠ的识别序列
C. 利用PCR技术扩增目的基因时，复性温度偏低、引物特异性差均可导致产物中出现部分非目标序列
D. 基因表达载体导入受精鸡胚的胚盘可以使用显微注射法
33. 光敏色素基因在调节作物生长发育中具有重要作用。为探讨玉米中光敏色素基因A（含大约256个碱基对）在棉花种质资源创制中的利用价值，研究人员将A基因转入到棉花中，对棉花受体细胞进行检测，并通过电泳技术分析结果。该过程所用质粒与含光敏色素基因的DNA上相关限制酶的酶切位点分别如图甲、乙所示，电泳检测结果如图丙。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 为构建正确连接的表达载体，应选用BamHI和HindⅢ这两种限制酶
B. PCR扩增目的基因过程中每次循环都要经历一次升温和两次降温
C. 表达载体导入受体细胞后，可用含四环素的选择培养基进行初步筛选
D. 由图丙电泳结果可知，1、2、3、4号转基因棉花均培育成功
34. 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，以便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是—G↓CATCC—；限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。据图判断，下列操作正确的是（ ）
A. 质粒用限制酶I切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割
B. 质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶I切割
C. 目的基因和质粒均用限制酶I切割
D. 目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割
35. 某病毒的检测可以采用实时荧光RTPCR（逆转录聚合酶链式反应）的方法，RTPCR的具体过程如图。下列有关叙述错误的是（ ）
A. 过程①以mRNA为模板合成单链DNA
B. 过程②③拟对单链cDNA进行第n次循环的扩增，理论上需要n个引物B
C. 该技术用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度
D. 游离的脱氧核苷酸只能从引物的3′端开始连接
36. 科学家将海鱼的抗冻蛋白基因用PCR技术扩增，如图1是扩增的目的基因的示意图。为寻找合适的载体，科学家对某载体用EcRⅠ和SmaⅠ两种限制酶进行酶切后，再利用琼脂糖凝胶电泳得到图2所示图谱（其中1号泳道是标准DNA样品的电泳结果，2号、3号、4号泳道分别是用EcRⅠ单独处理SmaⅠ单独处理、两种酶共同处理后的电泳结果）。下列说法错误的是（ ）
A. 应选用引物2和引物3对目的基因进行扩增
B. 由图2可知该载体DNA分子中两种限制酶的酶切位点各有一个
C. 限制酶EcRⅠ和SmaⅠ的酶切位点最短相距约200bp
D. 扩增5次后可得到16个等长的目的基因片段
37. 解偶联蛋白1（UCP1）具有消除线粒体内膜两侧的H+浓度差，减少ATP合成、增加产热的功能。我国科学家应用CRISPR/Cas9技术将猪的UCP1基因置换成小鼠的UCP1基因，并使鼠UCP1基因在猪的白色脂肪组织中特异性表达，获得脂肪沉积少的“瘦肉猪”。下图是“瘦肉猪”的主要培育过程，相关叙述错误的是（ ）
A. 应用CRISPR/Cas9技术育种的主要原理是基因重组
B. 过程b进行有限稀释培养的目的是获得阳性单克隆细胞系
C. 过程d的受体细胞最好是去核的猪卵母细胞
D. 过程e要对代孕猪进行同期发情处理，并选择发育正常的原肠胚植入代孕猪输卵管
38. 为探究结核杆菌耐药性，研究人员提取患者体内病原菌进行培养，如图1，过程Ⅰ接种纯化结果如图2，下列说法不正确的是（ ）
A. 图2中划线的顺序依次是①③②
B. 过程Ⅲ最理想效果是结核杆菌均具有耐药性
C. 两个固体平板培养基中均需加入抗生素
D. 固体平板培养使用的培养基属于鉴别培养基
39. 如图为利用生物技术获得生物新品种的过程，有关说法不正确的是（ ）
A. a→b过程中一般用4种脱氧核苷酸为原料，并加入两种引物
B. b→c为转基因绵羊的培育过程，常选用的受体细胞是受精卵
C. a→b过程利用了DNA半保留复制的原理，需要使用RNA聚合酶
D. b→d为转基因植物的培育过程，其中④过程常用的方法是农杆菌转化法
40. 骨髓间充质干细胞（BMSC）在某些诱导剂作用下可分化成心肌细胞，在心脏类疾病的治疗中拥有广阔的应用前景。在细胞培养的过程中，通过检测细胞中基因的表达产物可以判断细胞的分化方向。科研人员研究丹酚酸B（丹参提取物）对BMSC分化的影响，从大鼠体内分离BMSC并进行多代培养，用一定浓度的丹酚酸B处理一段时间后，与对照组相比，实验组中与分化为心肌细胞相关的关键基因的mRNA含量明显增加。下列叙述错误的是（ ）
A. 在使用丹酚酸B和生理盐水处理细胞前，需对两种试剂进行灭菌处理
B. 原代培养的BMSC出现接触抑制时，需要用胃蛋白酶处理并进行分瓶培养
C. BMSC与诱导多能干细胞都是具有分裂能力的细胞，且具有一定的分化潜能
D. 推测丹酚酸B是通过促进相关基因的转录来促进BMSC分化为心肌细胞
二、不定项选择题（共5小题，每题至少有一个选项正确，每题2分，共10分）
41. 普洱茶分为生普和熟普，其中熟普是以云南大叶种晒青茶为原料，经后发酵（人为加水提温，加速茶叶熟化去除生茶苦涩以达到入口纯和汤色红浓之独特品性）加工形成的。熟普的汤色红浓明亮，香气独特陈香，滋味醇厚回甘，叶底红褐均匀。熟普的香味会随着陈化的时间而变得越来越柔顺、浓郁。下列相关叙述正确的是（ ）
A. 人为加水提温可以促进微生物繁殖，进而缩短原料发酵的时间
B. 熟普发酵过程中环境条件变化会影响微生物的生长繁殖和代谢
C. 熟普发酵一段时间后要进行灭菌并密封，有利于茶的长期保存
D. 饮用熟普后回甘，可能是因为发酵后茶叶中单糖、二糖含量增加
42. 在体细胞克隆猴培育过程中，为调节相关基因的表达，研究人员将组蛋白去甲基化酶Kdm4d的mRNA注入了重构胚，同时用组蛋白脱乙酰酶抑制剂（TSA）处理，使胚胎的发育率和妊娠率提高，具体培育流程如图所示。下列说法正确的是（ ）
A. 去核时使用的梯度离心、紫外光照射和化学物质处理等方法可以在没有穿透卵母细胞透明带的情况下进行
B. 灭活的仙台病毒表面含有糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝聚而发生融合
C. 组蛋白低甲基化和高乙酰化水平均有利于重构胚的发育
D. 胚胎移植前需要对供、受体进行免疫检测
43. 已知一双链DNA分子，用限制性核酸内切酶Ⅰ切割得到长度为120kb（kb：千碱基对）片段；用限制性核酸内切酶Ⅱ切割得到40kb和80kb两个片段；同时用限制性核酸内切酶Ⅰ和限制性核酸内切酶Ⅱ切割时，得到10kb、80kb和30kb3个片段。据此分析该双链DNA分子结构及酶切位点情况为（ ）
A. B.
C.
D.
44. 单倍体胚胎干细胞是指只含一套染色体，但拥有类似于正常干细胞分裂分化能力的细胞群。利用小鼠建立单倍体胚胎干细胞的操作如图所示。下列叙述不正确的是（ ）
A. 体外受精前应将卵母细胞培养至M Ⅰ中期
B. 建立的单倍体胚胎干细胞中只含一条性染色体X或Y
C. 上述过程涉及动物细胞培养、体外受精和核移植等操作
D. 理论上可用物质激活卵母细胞完成M Ⅱ实现由①直接转变为④
45. 孤独症谱系障碍与基因S的变异有关，科研人员对猕猴的基因S进行编辑，首次获得孤独症模型猴，然后再通过动物细胞工程和胚胎工程技术获得更多克隆猴，下列叙述正确的是（ ）
A. 克隆出的模型猴性别由核供体决定
B. 培养早期胚胎时无需提供气体环境
C. 胚胎移植的过程中，需要选择具有优良遗传性状的雌性个体作为受体
D. 为获得更多克隆猴，可以采用胰蛋白酶或胶原蛋白酶对早期胚胎进行分割，经移植获得同卵双胎或多胎
Ⅱ卷（非选择题，4小题，共40分）
46. 产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：
（1）常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是______（填编号）。
（2）称取1.0g某土壤样品，转入99mL无菌水中，制备成菌悬液，经______后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中再经10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌______个。
（3）为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行诱变处理，将辐照处理后的酵母菌涂布在以______为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径______的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。
（4）在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株______进行后续相关研究，理由是______（答出两点）。
（5）生产生活中，酿酒酵母可以用来制作果酒，在果酒制作基础上还可以利用醋酸菌继续制作果醋，氧气条件充足时，利用果酒制作果醋的反应式为：______。
47. 穗花杉是我国保护植物，现存数量较少。穗花杉双黄酮具有抗炎、抗肿瘤、清除自由基、保护神经、舒张血管等功能，如图是某科研小组利用植物细胞工程来生产穗花杉双黄酮的主要过程，回答下列问题：
（1）图示过程______（填“能”或“不能”）体现细胞的全能性。
（2）过程①表示______，该过程需要在______等条件的诱导下才能实现；③过程中应用到______技术手段实现了细胞数量的增多，从而获得大量的穗花杉双黄酮。
（3）图示过程中，之所以选择穗花杉的幼嫩茎作为外植体，主要是因为______。
（4）与从穗花杉植株中提取穗花杉双黄酮这一传统方式相比，通过植物细胞工程生产穗花杉双黄酮的优势有______（至少答出两点）
48. 非洲猪瘟是由ASFV（一种双链DNA病毒）感染猪引起的烈性传染病。某研究小组将ASFV外壳蛋白基因导入猪体细胞中，利用核移植技术培育转基因克隆猪，从而得到自动产生ASFV抗体的个体，其过程如图所示。回答下列问题：
（1）获得D猪的基础技术是______，取B猪体细胞进行①过程相对于胚胎细胞难度大，原因在于______，步骤③采用的技术手段是______。
（2）B猪体细胞在培养瓶中培养时，除必须保证环境是无菌、无毒外，还必须定期更换培养液以防止细胞代谢物积累对细胞自身造成的伤害。培养到一定程度后，需要分瓶再继续培养，分瓶后的培养过程称为______。
（3）由于目的基因不能直接导入受体细胞，因此需要构建______，该过程采用双酶切法处理含目的基因的DNA片段和质粒，其优点是______（答出一点即可）。
（4）利用抗原一抗体杂交技术判断D猪是否产生ASFV抗体，使用的抗原物质最好是______。该抗体也可以使用杂交瘤技术来制备，通常情况下，杂交瘤细胞是由骨髓瘤细胞和______细胞融合获得的。
49. 血管为肿瘤的增殖和转移提供了有利条件。M蛋白是人体内抑制血管生长的因子，可作为肿瘤治疗的潜在药物。将控制M蛋白合成的基因m导入酵母细胞中进行表达，可获得大量M蛋白。如图为酵母表达载体（质粒K）的示意图（SacⅠ、EcRⅠ、NtⅠ、Sa1Ⅰ为限制酶切割位点，切割产生的黏性末端均不相同）。
回答下列问题。
（1）已知基因m中无上述任一限制酶切割位点。为提高连接效率并保证基因m和载体的定向连接，对基因m进行PCR扩增时，需在基因m的上游引物和下游引物中分别引入______限制酶切割位点。
（2）将PCR扩增获得的基因m与酶切后的质粒K进行连接，构建基因m的表达载体。随后，将酶切后的质粒K（a组）与构建的表达载体（b组）分别转入大肠杆菌，并在含有氨苄青霉素的培养基上培养。已知未环化的质粒会被大肠杆菌核酸酶水解，若a组与b组培养基中均有菌落产生，a组出现菌落的原因可能是杂菌污染或______（答出1点即可）。由此推测，b组培养基上的菌落______（填“一定”或“不一定”）含有基因m。
（3）将构建成功的基因m表达载体导入组氨酸合成缺失的酵母突变体中，在______的培养基上培养，以筛选出含有表达载体的酵母细胞。
（4）若观察到M蛋白对血管内皮细胞增殖有抑制作用，说明获得的M蛋白______。组别
培养液
卵裂率/%
囊胚率/%
对照组
CR2前液+CR2后液
59.17±1.34
13.53±2.04
实验组1
CR2前液+10%FBS CR2后液
6214±1.78
13.78±2.77
实验组2
CR2前液+20%FBS CR2后液
68.95±4.15
26.09±2.20
实验组3
CR2前液+30%FBS CR2后液
62.02±8.64
8.78±3.20
编号
①
②
③
④
物品
培养基
接种环
培养皿
涂布器
灭菌方法
干热
火焰灼烧
干热
火焰灼烧
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