2025年高考生物一轮复习：人教版（2019）选择性必修3《生物技术与工程》必背考点清单

这是一份2025年高考生物一轮复习：人教版（2019）选择性必修3《生物技术与工程》必背考点清单，共20页。学案主要包含了传统发酵技术的应用，微生物的培养技术及应用，发酵工程及其应用，蛋白质工程的原理和应用等内容，欢迎下载使用。
一、传统发酵技术的应用
1、什么是发酵工程？(★)
发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品。它涉及菌种的选育和培养、产物的分离和提纯等方面。
2、什么是发酵？(★)
是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需要的产物的过程。
3、什么是传统发酵技术？(★)
直接利用原料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术。
4、发酵的类型有哪些？(★★)
有氧发酵：如醋酸发酵；
无氧发酵：如酒精发酵、乳酸发酵。
5、酵母菌的新陈代谢类型？生殖方式？(★★★)
酵母菌是异养兼性厌氧型微生物，属于真菌。生殖方式：出芽生殖(主要)， 孢子生殖
6、利用酵母菌制作果酒的原理是什么？(★★★★★)
在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。
酶

C6H12O6＋6O2 ＋6H2O → 6CO2＋12H2O+能量
在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
酶

C6H12O6 → 2C2H5OH＋2CO2+能量
7、酵母菌繁殖及发酵的适宜温度是多少？(★★★)
28℃左右最适宜酵母菌繁殖，酒精发酵时一般将温度控制在18℃-30℃ 。
8、在葡萄酒自然发酵的过程中，起主要作用的微生物——酵母菌来源于哪里？(★★★)
附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌。土壤是酵母菌的大本营
9、葡萄酒所呈现的深红色来源于哪里？(★★★★)
红葡萄皮的色素进入发酵液,使葡萄酒呈现深红色
10、在发酵过程中,其他微生物为什么没有大量繁殖而影响酒的质量？(★★★)
在缺氧、呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。
11、醋酸菌的新陈代谢类型？生殖方式？(★★★)
醋酸菌是异养需氧型细菌,生殖方式为二分裂。
12、利用醋酸菌制作果醋的原理是什么？(★★★★★)
当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
酶
C6H12O6＋2O2 → CH3COOH（醋酸）＋2H2O+2CO2+能量
酶
C2H5OH＋O2 → CH3COOH（醋酸）＋H2O+能量
（提示：在变酸的酒的表面观察到的菌膜是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的）
13、醋酸菌发酵的适宜温度范围是多少？(★★★)
醋酸菌最适生长温度为30～35℃。
14、请写出果酒果醋制作的实验流程？(★★)
挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→醋酸发酵
果酒 果醋
15、如何检验是否有酒精产生？(★★★★★)
在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。
16、如右图装置中各部分的作用是什么？(★★★★)
充气口作用是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接，其目的是防止空气中微生物的污染。使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应该充气口连接气泵，输入氧气。
17、果酒发酵装瓶时为何要留有约1/3的空间？发酵时为何要定期拧松瓶盖？(★★★★★)
让酵母菌在有氧条件下进行有氧呼吸，以利于大量繁殖，缩短发酵时间。
拧松瓶盖以放出二氧化碳，防止发酵瓶爆裂。
18、你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？(★★★★)
应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。冲洗时不能反复多次冲洗，防止菌种流失。
19、你认为应该从哪些方面防止发酵液被污染？(★★★)
要先冲洗葡萄，再除去枝梗；榨汁机、发酵装置要清洗干净，并进行酒精消毒；每次排气时只需拧松瓶盖，不要完全揭开瓶盖等。
20、腐乳发酵中起主要作用的是哪种微生物？(★★★)
毛霉
21、利用毛霉等微生物制作腐乳的原理是什么？(★★★★)
毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸
含水量为70%左右的豆腐适于作腐乳。用含水量高的豆腐制作腐乳，不易成形。
22、吃腐乳时，你会发现腐乳外部有一层致密的“皮”。这层“皮”是怎样形成的呢？(了解)
“皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝（匍匐菌丝），对人体无害。
23、乳酸菌的新陈代谢类型？(★★)
异养厌氧型
24、利用乳酸菌制作泡菜的原理是什么？(★★★★)
在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解为乳酸。反应式为：
C6H12O62C3H6O3+能量
25、配制盐水时，清水与盐的质量比为多少？(★★★) 5%-20%的盐水
26、向坛中注入盐水前需要对盐水如何处理？(★★★★) 煮沸、冷却
27、泡菜制作过程中为什么要控制腌制的时间、温度和食盐的用量？(★★★★)
温度过高、食盐用量过低、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10d后，亚硝酸盐的含量开始下降。
28、亚硝酸盐与人体健康有什么关系？(★)
膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，但在适宜pH 、温度和一定微生物作用下形成亚硝胺，亚硝胺具有致癌、致畸、致突变作用。
二、微生物的培养技术及应用
1、培养基按照物理性质可分为哪些类型？分别有什么作用？(★★★★)
液体培养基、固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖）后，制成琼脂固体培养基。
作用：液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定。
2、培养基按照用途可分为哪些类型？分别有什么作用？(★★★★★)
选择培养基和鉴别培养基。
作用：选择培养基是指只允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
3、什么叫做菌落？(★★★★★)
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的子细胞群体，称为菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
4、培养基一般包括哪些化学成分？(★★★★★)
水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）、无机盐 ，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。如牛肉膏和蛋白胨就可为微生物提供碳源、氮源、无机盐和维生素等物质。
5、获得纯净培养物的关键是什么？(★★★★★)
防止杂菌污染
6、消毒与灭菌的常用方法分别有哪些？消毒与灭菌有哪些不同点？ (★★★★★)
（1）消毒方法：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒、紫外线消毒等。
（2）灭菌方法：
①接种环、接种针、涂布器、试管口等使用灼烧灭菌法；
②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；
③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；
利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽灭菌的方法为湿热灭菌。
7、什么是微生物的纯培养？微生物的纯培养步骤有哪些？ (★★★★)
由单一个体繁殖所获得的微生物群体，称为纯培养物，获得纯培养物的过程就是纯培养。
微生物的纯培养步骤有配置培养基、灭菌、接种、分离、培养等。
8、培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？(★★)
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
9、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？(★★★★★)
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
10、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？(★★★★★)
将平板倒置，既可以避免培养基表面的水分过快地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
11、在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？(★★★★)
空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
12、微生物常用的接种方法是哪两种？ (★★★★★)
平板划线法、稀释涂布平板法。
13、什么是平板划线法？(★★★★)
平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落。
14、什么是稀释涂布平板法？(★★★★)
稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。
15、用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是什么？(★★★★)
使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。
16、为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？(★★★★★)
操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种；划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
17、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？(★★★★★)
以免接种环温度太高，杀死菌种。
18、在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？(★★★★★)
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
19、使用后的培养基丢弃前应该如何处理？(★★★★★)
进行灭菌处理，以免污染环境。
20、实验室中微生物的筛选应用的原理是什么？所用的是哪种类型的培养基？(★★★★★)
人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养基。
21、设置对照的主要目的是什么？(★★★)
排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
22、请简述从土壤中分离尿素分解菌的大体实验步骤？(★★)
（1）土壤取样 （2）样品的稀释 （3）微生物的培养与观察
23、应在什么样的环境中取样？(★★★)
在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长。
24、统计菌落数目的方法有哪些？(★★★★★)
测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法和显微镜直接计数。
25、利用稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理是什么？(★★★★)
当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值。
26、稀释涂布平板法统计的菌落数比活菌的实际数目高还是低？为什么？(★★★★★)
低，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。
27、样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目，适于计数的平板其菌落数应控制在什么范围？(★★★★★)
30-300之间
28、培养时间不足会导致什么结果？如何减少这样的误差？(★)
培养时间不足会导致遗漏菌落的数目。可以每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。
29、分解尿素的细菌的分离原理是什么？(★★★★)
在培养基中以尿素为氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长，缺乏脲酶的细菌因缺乏氮源而不能生长繁殖。
30、如何初步鉴定分解尿素的细菌？(★★★)
细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
三、发酵工程及其应用
31、发酵工程的基本环节有哪些？(★★)
发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵，产品的分离、提纯等方面。
32、发酵工程的中心环节应该注意哪些问题？(★★)
发酵罐内的发酵是发酵工程的中心环节，要随时检测培养液中的微生物数量、产物浓度等，以了解发酵进程。还要及时添加必需的营养组分，要严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件。环境条件不仅会影响微生物的生长繁殖，而且会影响微生物代谢产物的形成。
33、发酵工程的应用有哪些方面？(★★)
在食品工业的应用：生产传统的发酵产品，生产各种各样的食品添加剂，生产酶制剂等。
在医药工业的应用：如生产抗生素、氨基酸、激素、免疫调节剂等。
在农牧业上的应用：生产微生物肥料、微生物农药、微生物饲料等。
34、什么叫单细胞蛋白？(★★)
通过发酵获得的大量的微生物菌体，称为单细胞蛋白。
第2章 细胞工程
一、植物细胞工程
1、什么是细胞全能性？(★★)
细胞经分裂和分化后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能。
2、什么是植物组织培养？(★★★)
将离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工配制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其形成完整植株的技术。
3、什么是外植体？ 离体培养的植物器官、组织或细胞。
4、什么是脱分化？再分化？(★★★)
在一定的激素和营养等条件的诱导下，已经分化的细胞失去特有的结构和功能，转变成未分化的细胞，进而形成不定形的薄壁组织团块的过程。这些组织团块称为愈伤组织。愈伤组织重新分化成芽、根等器官的过程，称为再分化。
5、脱分化的实质是什么？恢复细胞的全能性。
6、启动植物细胞分裂、脱分化、再分化的关键激素是什么？(★★★)
生长素和细胞分裂素。
7、菊花组织培养实验中，为什么要强调所用器械的灭菌和实验人员的无菌操作？(★★★)
防止杂菌污染，因为杂菌生长快，会和培养物争夺营养。杂菌生长过程中会产生有害的物质，导致培养物迅速死亡。
接种时如何注意外植体插入培养基的方向？(★★)
形态学下端插入培养基，不能倒插
9、什么是植物体细胞杂交技术？(★★★★)
将不同来源的植物体细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。
10、去除植物细胞壁，获得原生质体的方法？(★★★)
酶解法（纤维素酶和果胶酶处理）。
11、诱导原生质体融合的方法？(★★★★)
物理法：融合法、离心法，化学法：聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+_ 高PH融合法。
12、融合的原生质体需要筛选吗？(★★)
两两融合的原生质体的三种类型：AA、BB、AB，符合要求的只有AB，因此需要进行筛选。
植物体细胞杂交的原理是什么？（★★★★★)
原生质体融合的过程利用了细胞膜的流动性，杂种细胞发育成杂种植株利用了植物细胞的全能性。
14、植物体细胞杂交的意义是什么？(★★★)
打破生殖隔离，克服了远缘杂交育种，培育植物新品种。
15、什么是脱毒苗？(★★)
切取一定大小的茎尖进行组织培养，再生出不带病毒的幼苗。
二、动物细胞工程
16、动物细胞工程常用的技术有哪些？其中哪种技术是动物细胞工程的基础？(★★★)
动物细胞培养、动物细胞融合、动物细胞核移植等，动物细胞培养是动物细胞工程的基础。
什么是动物细胞培养？(★★)
从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后再适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。
动物细胞培养需要的营养条件有哪些？(★★)
葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。
19、体外培养动物细胞时，如何营造无菌、无毒的环境？(★★★)
对培养液和所有培养用具进行无菌处理以及在无菌环境下进行操作。
对培养液定期更换，以便清除代谢废物。
20、动物细胞培养需要怎样的气体环境？(★★★)
通常采用培养皿或松盖培养瓶，并将它们置于含有95%空气和5% CO2的混合气体的 CO2培养箱中进行培养。
21、如何将新鲜取材的动物组织分散成单个细胞？（★★★★★)
用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。
22、什么是细胞贴壁？(★★★)
某些动物细胞需要贴附在培养瓶的瓶壁上进行生长增殖的现象。
23、什么是原代培养与传代培养？(★★★)
动物组织经胰蛋白酶处理后的初次培养称为原代培养。将分瓶后的细胞培养称为传代培养。
24、悬浮培养的细胞与贴壁生长的细胞如何收集进行传代培养？(★★★)
悬浮培养的细胞直接用离心法收集，贴壁细胞需要重新用胰蛋白酶处理成单个细胞后，再用离心法搜集
25、干细胞的种类？(★★) 胚胎干细胞、成体干细胞。
26、什么是胚胎干细胞？(★★★★)
简称ES细胞，存在于早期胚胎中，具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能。
27、什么是成体干细胞？(★★)
成体干细胞是成体组织或器官内的干细胞，具有组织特异性，只能分化成特定的细胞活组织，不具有发育成完整个体的能力。
28、成体干细胞的种类？(★★)
包括骨髓造血干细胞、神经干细胞、精原干细胞等。
29、什么是动物细胞融合技术？(★★) 使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
30、动物细胞融合技术的原理是什么？(★★)
细胞膜的流动性。
31、诱导动物细胞融合的方法有哪些？(★★★)
PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法等。
32、什么是灭活？(★★)
用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。
33、灭活病毒诱导细胞融合的原理是什么？(★★★)
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互聚集，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
34、B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合形成的杂交瘤细胞有什么特征？(★★★)
既能迅速大量增殖，又能产生抗体。
35、杂交瘤细胞如何处理才能获得能分泌所需抗体的迅速增殖的细胞？(★★★★)
克隆化培养和抗体检测。
36、如何抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞进行增殖？(★★★★)
体外条件下大规模培养或注射倒小鼠腹腔。
单克隆抗体的优点？(★★)
特异性强，灵敏度高，又可以大量制备。
38、什么是动物细胞核移植技术？分类？(★★★)
是将动物一个细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，使这个重新组合的细胞发育成新胚胎，继而发育成动物个体的技术。分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。
39、为什么动物体细胞核移植的难度更高？(★★★)
由于动物胚胎细胞分化程度低，表现全能性相对容易，而动物体细胞分化程度高，表现全能性十分困难。
40、去核的卵母细胞需要在体外培到什么时期？常用去核的方法？(★★★)
MⅡ期 显微操作法
41、什么是重构胚胎？(★★) 人工重新构建的胚胎，具有发育成完整个体的能力。
三、胚胎工程
42、什么是胚胎工程？(★★)
是指对生殖细胞、受精卵或早期胚胎细胞进行多种显微操作和处理，然后将获得的胚胎移植到雌性动物体内生产后代，以满足人类的各种需求。
胚胎工程技术分类？(★★★)
体外受精、胚胎移植、胚胎分割等。
44、什么是精子获能？(★★★★)
刚刚排出的精子不能立即与卵子受精，必须在雌性动物的生殖道发生相应的生理变化后，才能获得受精能力的生理现象。
45、防止多精入卵的屏障？(★★★★★) 透明带反应和卵黄膜的封闭作用。
46、多数哺乳动物受精的标志？(★★★★)
观察到两个极体或出现雌、雄原核。
早期胚胎发育可以分为几个阶段？(★★★★★)
桑葚胚、囊胚、原肠胚
囊胚中的内细胞图与滋养层细胞的发育方向？（★★★★★）
内细胞团将来发育成胎儿的各种组织，滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘。
哺乳动物的体外受精技术包括哪些步骤？(★★★)
卵母细胞的采集、精子的获取和受精
50什么是胚胎移植技术？(★★★)
将通过体外受精及其他方式得到的胚胎，移植到同种的、生理状态相同的雌性动物体内，使之继续发育为新个体的技术。
胚胎移植的操作步骤又哪些？(★★★)
供体、受体的选择和处理，配种或人工授精，胚胎的收集、检查、培养或保存，胚胎的移植，以及移植后的检查。
胚胎移植的优势？(★★★★)
充分发挥雌性优良个体的繁殖潜力。
什么是胚胎分割技术？(★★★)
采用机械方法将早期胚胎切割成2等份、4等份或8等份等，经移植获得同卵双胎或多胎的技术。
胚胎分割时应选用怎样的胚胎？(★★★)
发育良好、形态正常的桑葚胚或囊胚。
分割囊胚阶段的胚胎需要注意什么？(★★★)
将内细胞团均等分割。
胚胎分割的应用又哪些？(★★)
促进优良动物品种的繁殖，胚胎移植前的性别鉴定、遗传病筛查等。

第3章 基因工程
一、重组DNA技术的基本工具
1、什么是基因工程（重组DNA技术）？(★★★★)
基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术。
2、重组DNA技术的基本工具是什么？(★★★★★)
准确切割DNA分子的“分子手术刀”——限制性内切核酸酶；将DNA片段再连接起来的“分子缝合针”——DNA连接酶；将体外重组好的DNA分子导入受体细胞的“分子运输车”——基因进入受体细胞的载体。
3、限制性核酸内切酶主要是从哪种生物中分离纯化出来的？(★)
原核生物
4、限制性核酸内切酶的作用原理？(★★★★)
识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的磷酸二酯键断开。
5、限制性核酸内切酶切割产生的DNA片段通常有哪两种形式？(★★★)
粘性末端和平末端。
6、大多数限制性内切酶的识别序列由几个核苷酸组成？EcRl、SmaI的识别序列分别是什么？(★)
6个；G与A，G与C
7、DNA链接酶的作用机理是什么？(★★★)
恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。
8、基因工程操作过程中，DNA连接酶主要有哪两类？比较两种酶功能的异同。(★★★)
9、区分作用于DNA的几种酶？(★★★)
10、中使用的载体都有哪些？常用哪种？(★★★)
质粒、噬菌体、动植物病毒。常用的是质粒。
11、什么是质粒？有何特点？(★★★★★)
质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外，并具有自我复制能力的环状双链DNA分子。
特点：①裸露的、环状、双链、具有自我复制能力；②有一至多个限制酶切割位点；③人工改造过的作为载体的质粒常有特殊的标记基因。
12、基因工程中人工改造的质粒为何要有特殊的标记基因？(★★★★★)
便于重组DNA分子的筛选。
13、携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后的复制方式是怎样的？(★★★)
在细胞中进行自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制。
14、DNA的粗提取的原理是什么？(★★★★)
利用DNA和其他物质（RNA、蛋白质、脂质等）在理化性质方面的差异，提取DNA。
15、DNA鉴定的原理是什么? (★★★★★)
DNA遇二苯胺在沸水浴条件下显蓝色。
16、在洋葱研磨液的上清液中加入渔猎的95%的酒精的目的是什么？(★★★)
DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离DNA和蛋白质。
17、为什么要用2ml/L的NaCl溶解提取的DNA? (★★★)
DNA在不同浓度的NaCl中溶解度不同，它能溶于2ml/L的NaCl溶液。
二、基因工程的基本操作程序
18、培育转基因生物的主要步骤是什么？(★★★★★)
目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导人受体细胞、目的基因的检测与鉴定。
19、什么是目的基因？(★★★)
在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因就是自的基因。
20、培育转基因抗虫棉用到的目的基因是什么？是从哪种生物中获取的？能表达哪种蛋白？(★★★★)
Bt抗虫蛋白基因，简称Bt基因；苏云金杆菌；苏云金杆菌伴孢晶体蛋白（Bt抗虫蛋白）。
21、Bt抗虫蛋白杀虫的原理是什么？(★)
破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。
22、筛选目的基因较为有效的方法是什么？(★★★)
从相关的已知结构和功能清晰的基因中筛选。
23、获取和扩增目的基因的常用方法是什么？(★★★★★)
PCR
24、什么是PCR？(★★★★★)
PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。
25、PCR的条件是什么？(★★★★)
PCR反应需要在一定的缓冲溶液中才能进行，需提供DNA模板，分别与两条模板链结合的2种引物，4种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶;同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。
26、引物的化学的本质是什么？(★★)
引物是一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。（通常为20~30个核苷酸）
27、PCR的过程是什么? (★★★★)
目的基因DNA受热变性后解为单链，引物与单链相应互补序列结合；然后以单链DNA为模板，在DNA聚合酶作用下进行延伸，即将4种脱氧核苷酸加到引物的3'端，如此重复循环多次。由于延伸后得到的产物又可以作为下一个循环的模板，因而每一次循环后目的基因的量可以增加一倍，即成指数形式扩增(约为2n，其中n为扩增循环的次数)。每次循环一般可以分为变性、复性和延伸三步。
28、基因表达载体构建的目的是什么？(★★★)
让基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时，使转入的基因能够表达和发挥作用。
29、一个完整的表达载体需要有哪些结构？(★★★★)
复制原点、目的基因、标记基因、启动子和终止子等。
30、什么是启动子？作用是什么？(★★★)
启动子是一段有特殊序列结构的DNA片段，位于基因的上游，紧挨转录的起始位点，它是RNA聚合酶识别和结合的部位。
驱动基因转录出mRNA，最终表达出蛋白质。
31、诱导型启动子的作用是什么？(★)
当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达。
32、什么是终止子？作用是什么？(★★★)
位于基因的下游，一段具有特殊序列结构的DNA片段。
它可以使转录在所需要的地方停下来。
33、构建基因表达载体的过程是怎么样的？(★★★)
首先用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口;然后用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段;再利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处，这样就形成了一个重组DNA分子。
34、将目的基因导入受体细胞的常用方法有哪些？(★★★★)
花粉管通道法、农杆菌转化法、显微注射、感受态细胞法。
35、Bt基因导入棉花细胞用的方法是什么？操作方式有哪些？(★★★)
花粉管通道法。可以用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注人子房中;可以在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进人胚囊。
36、什么是转化？(★★)
是指目的基因进入受体细胞内、并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
37、Ti质粒来自于哪种生物？其特点是什么？(★)
农杆菌细胞内含有Ti质粒。
农杆菌侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA(可转移的DNA)转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。
38、农杆菌转化法的原理是什么？(★)
将目的基因插入Ti质粒的T-DNA中，通过农杆菌转化作用，使目的基因进入植物细胞。
39、目的基因检测和鉴定的目的是什么? (★★★)
检查目的基因进入受体细胞后是否稳定维持和表达其遗传性。
40、以抗虫棉为例，如何进行目的基因的检测和鉴定？(★★★)
首先是分子水平的检测，包括通过PCR等技术检测棉花的染色体DNA上是否插入了Bt基因或检测Bt基因是否转录出了mRNA;从转基因棉花中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原——抗体杂交，检测Bt基因是否翻译成Bt抗虫蛋白等。
其次，还需要进行个体生物学水平的鉴定。例如，通过采摘抗虫棉的叶片饲喂棉铃虫来确定Bt基因是否赋予了棉花抗虫特性以及抗性的程度。
41、基因工程的基本操作程序是怎样的？(★★★★★)
获取质粒、噬菌体等载体
将含有目的基因的表达载体导入受体细胞
检测和鉴定目的基因是否稳定维持和表达其遗传特性
用限制酶切割载体和含有目的基因的DNA片段，然后用DNA连接酶连接，构建基因表达载体。
筛选和获取目的基因
42、获取目的基因的方法有哪些？(★)
人工合成、PCR扩增和构建基因文库
43、将目的基因导入受精卵常用的方法是什么？(★)
显微注射
44、基因工程的受体细胞常用生物是什么?应用最广的是哪种？(★)
原核生物；大肠杆菌。
45、如何处理大肠杆菌以便重组基因导入其中？（如何获得感受态细胞？）(★★)
用Ca2+处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
46、PCR的原理是什么？ (★★)
DNA热变性原理和DNA复制的原理
47、PCR过程中如何控制DNA双链的解聚与结合？(★)
利用DNA的热变性原理，通过调节温度来控制DNA双链的解聚与结合。
48、PCR反应体系应该提供哪些条件？(★★)
缓冲液、DNA模板、四种脱氧核苷酸为原料、耐热的DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）、两种引物、能量
49、PCR一般要经历多少次循环？ (★★) 30多次
50、PCR反应过程的每次循环可分为哪三个阶段？分别指代怎样的过程？(★★★)
变性：升温到90℃以上，DNA解旋为单链；
复性：降温到50℃左右，两种引物与两条单链配对结合；
延伸：升温到72℃左右，四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，合成新的DNA链。
51、DNA的合成方向是怎样的？ (★★★★)
总是从子链的5′端向3′端延伸
52、PCR与体内DNA复制的主要不同点有哪些？(★)
体内复制需要解旋酶，PCR通过高温解旋；
体内复制是普通的DNA聚合酶，PCR需要耐高温的DNA聚合酶。
53、为避免外源DNA等因素的污染，应该如何操作？(★)
微量离心管、枪头、缓冲液、蒸馏水等在使用前必须进行高压蒸汽灭菌。
54、DNA电泳的原理是什么？(★★★)
DNA分子具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团可以带上正电荷或负电荷。在电场的作用下，这些带电分子会向着与它所带电荷相反的电极移动，这个过程就是电泳。
55、PCR产物一般通过哪种电泳来鉴定？(★)
琼脂糖凝胶电泳。
56、在凝胶中DNA分子的迁移速率与什么有关？(★★★)
与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。
57、电泳结束后如何观察电泳结果？(★)
凝胶中的DNA分子通过染色，可以在波长为300nm的紫外灯下被检测出来。
58、琼脂糖凝胶的一般配制质量体积比是多少？(★)
0.8~1.2%
59、制备琼脂糖凝胶时，添加染料的是在什么时候？(★)
琼脂糖加热融化后稍冷却。
60、PCR实验前要将缓冲液、酶等做如何存放？(★)
分装成小份，放在-20℃存放。
三、基因工程的应用
61、基因工程在农牧业方面主要有哪些应用？(★)
用于改良植物品质、提高动物生长速率、改善畜产品的品质。
62、转基因抗除草剂植物培育的原理是什么？(★)
将降解或抵抗某种除草剂的基因导入作物。
63、为解决乳糖不耐受、降低牛奶中的乳糖含量，科学家在奶牛体内转入什么基因？(★)
肠乳糖酶基因
64、基因工程在医药卫生领域有何应用？(★)
对微生物或动植物的细胞进行基因改造，使它们能够生产药物；让哺乳动物批量生产药物（如乳腺生物反应器）；有望解决移植器官短缺问题。
65、什么是乳房生物反应器？(★★)
科学家将药用蛋白基因与乳腺中特异表达的基因的启动子等调控元件重组在一起，通过显微注射的方法导人哺乳动物的受精卵中，由这个受精卵发育成的转基因动物在进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁来生产所需要的药物，这称为乳腺生物反应器或乳房生物反应器。
66、基因工程在食品工业方面有何应用？(★)
生产食品工业用酶（凝乳酶、淀粉酶）、氨基酸（天冬氨酸、苯丙氨酸）和维生素等。
蛋白质工程的原理和应用
67、什么是蛋白质工程？(★★★★★)
蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过改造或合成基因，来改造现有蛋白质，或制造一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。
68、基因工程的实质是什么？(★★★★★)
将一种生物的基因转移到另一种生物体内，后者可以产生它本不能产生的蛋白质，进而表现出新的性状，这就是基因工程的实质。
69、基因工程的产品是什么？(★)
基因工程原则上只能生产自然界中已存在的蛋白质。
四、蛋白质工程的原理和应用
70、蛋白质工程的目标是什么？(★★★★)
根据人们对蛋白质功能的特定需求，对蛋白质的结构进行设计改造。
71、蛋白质工程的基本原理是什么？(★★★★)
通过改造或合成基因来完成对蛋白质的结构的设计改造。
72、天然蛋白质形成的过程是什么？(★)
天然蛋白质合成的过程是按照中心法则进行的:基因→表达(转录和翻译)→形成具有特定氨基酸序列的多肽链→形成具有高级结构的蛋白质→行使生物功能。
73、蛋白质工程的基本思路是什么？(★★★★)
从预期的蛋白质功能出发→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到并改变相对应的脱氧核苷酸序列(基因)或合成新的基因→获得所需要的蛋白质
74、蛋白质工程的什么应用？请举例说明(★★)
研发速效胰岛素类似物产品、干扰素改造、小鼠单克隆抗体改造；改进酶的性能或开发新的工业用酶；尝试改造光合作用的酶以提高光合作用效率；设计优良微生物农药等。
75、为什么蛋白质工程难度较大？(★)
主要因为蛋白质发挥功能必须依靠正确的高级结构，而这种高级结构往往十分复杂。
第4章 生物技术的安全性与伦理问题
一、转基因产品的安全性
1、我国对转基因技术的方针是什么？(★)
研究上要大胆，坚持自主创新；推广上要慎重，做到确保安全；管理上要严格，坚持依法监管。
二、关注生殖性克隆人
2、什么是生殖性克隆？(★★)
生殖性克隆是指通过克隆技术产生独立生存的新个体。
3、什么是治疗性克隆？(★★)
治疗性克隆是指利用克隆技术产生特定的细胞、组织和器官，用它们来修复或替代受损的细胞、组织和器官，从而达到治疗疾病的目的。
4、我国禁止生殖性克隆人原则？(★)
坚持四不原则:不赞成、不允许、不支持、不接受任何生殖性克隆人的实验。
5、克隆技术不成熟的表现有哪些？(★★)
构建重构胚成功率低，胚胎移植到母体子宫后着床率低、流产率高、胎儿畸形率高和出生后死亡率高，正常的个体极少。
三、禁止生物武器
6、生物武器种类包括哪些？传播途径？(★★)
包括致病菌类、病毒类、和生化毒剂类等。途径：直接或食物、生活必需品、带菌昆虫等
7、生物武器的特点主要有哪些？(★)
①致命性②传染性强③生物专一性④面积效应大⑤危害时间长⑥难以发现等。
8、什么是生物安全？(★★)
生物安全是指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康以及生态环境所产生的危害或潜在风险。消除生物武器威胁、防止生物武器扩散是生物安全防控的重要方面。 比较项
理化因素的作用强度
消灭微生物的数量
芽孢和孢子能否被消灭
消毒
较为温和
部分生活状态的微生物
不能
灭菌
强烈
全部微生物
能
常用类型
E·cli DNA连接酶
T4 DNA连接酶
来源
大肠杆菌
T4噬菌体
功能
只缝合黏性末端
缝合黏性末端和平末端
（连接平末端的效率相对较低）
名称
作用部位
作用结果
限制酶
磷酸二酯键
将DNA切成两个片段
DNA连接酶
磷酸二酯键
将两个DNA片段连接为一个DNA分子
DNA聚合酶
磷酸二酯键
将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端
DNA (水解)酶
磷酸二酯键
将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸