高中生物人教版 (新课标)选修1《生物技术实践》课题3 血红蛋白的提取和分离练习题
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1．SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是（ ）。
A．蛋白质分子所带的电荷
B．蛋白质分子的形状
C．蛋白质分子的相对分子质量
D．缓冲溶液的pH
2．有关缓冲溶液的说法不正确的是（ ）。
A．缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变
B．缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成
C．调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液
D．生物体内进行的各种生物化学反应都是在一定的pH下进行的
3．使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中，相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为图中（ ）。
4．将经处理破裂后的红细胞混合液以2 000 r/min的速度离心10 min后，离心管中的溶液分为4层，从上到下的顺序依次是（ ）。
A．血红蛋白、甲苯层、脂类物质层、沉淀层
B．甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂类物质层
C．脂类物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层
D．甲苯层、脂类物质层、血红蛋白、沉淀层
5．各种动物血清内乳酸脱氢酶同工酶的组成是不同的。可以比较各种动物乳酸脱氢酶同工酶差异的大小来判断动物之间亲缘关系的远近。下列各种实验方法中，不能采用的方法是（ ）。
A．测乳酸脱氢酶同工酶的氨基酸序列
B．测控制乳酸脱氢酶同工酶合成的基因碱基序列
C．用电泳法比较各种动物乳酸脱氢酶同工酶的电泳带
D．检测不同动物的乳酸脱氢酶同工酶的pH
6．在装填色谱柱时，不得有气泡存在的原因是（ ）。
A．气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果
B．气泡阻碍蛋白质的运动
C．气泡能与蛋白质发生化学反应
D．气泡会在装填凝胶的时候使凝胶不紧密
7．关于样品的加入和洗脱的叙述正确的是（ ）。
A．先加入1 mL透析后的样品
B．加样前要使缓冲液缓慢下降全部流出
C．如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功
D．洗脱时可以用缓冲液也可以用清水
8．下列试剂可用于血红蛋白释放的是（ ）。
①0.9%的生理盐水 ②甲苯 ③磷酸缓冲液 ④蒸馏水
⑤柠檬酸钠
A．②④ B．①④
C．④⑤ D．①③
9．我们通常选用牛、羊等动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题。
（1）实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。
①其中加入柠檬酸钠的目的是_______________________________________________。
②此过程即是样品处理，它应包括红细胞洗涤、________、分离血红蛋白溶液。
③洗涤红细胞的目的是______________________________________________________。
（2）收集的血红蛋白溶液在透析袋中透析，这就是样品的粗分离。
①透析的目的是____________________________________________________________。
②透析的原理是____________________________________________________________。
（3）通过凝胶色谱法将样品进一步纯化（如下图），在操作中加样的正确顺序是________________________________________________________________________，
最后经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。其中通过凝胶色谱法将样品纯化的目的是________________________________________________________________________。
参考答案
1. 答案：C
解析：在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成单条肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白质—SDS复合物，SDS所带负电荷的量大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异，从而达到仅根据蛋白质相对分子质量的不同来分离蛋白质的目的。
2. 答案：A
解析：缓冲溶液通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液pH的影响，维持pH基本不变，超过一定范围，缓冲溶液就起不到这样的作用了。
3. 答案：B
解析：本题考查对凝胶色谱法分离蛋白质原理的理解，相对分子质量较大的蛋白质留在颗粒外面，相对分子质量较小的蛋白质进入颗粒内部；蛋白质相对分子质量大的通过凝胶间隙先被洗脱，蛋白质相对分子质量小的进入凝胶内部而后被洗脱。
4. 答案：D
解析：混合液经离心后，按密度大小排列，在离心管中从上到下的顺序依次是：第1层为无色透明的甲苯层；第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质沉淀层；第3层为红色透明液体，这是血红蛋白的水溶液；第4层为暗红色沉淀物，主要是红细胞破碎物沉淀。
5. 答案：D
解析：生物是由共同的原始祖先进化而来的。各种生物之间具有或近或远的亲缘关系。亲缘关系越近，则其对应的基因的碱基序列相似程度也高。因此，可以用测定基因或蛋白质序列的方法进行判断。若蛋白质的相似程度高，则进行电泳时，电泳带的相似程度也高。不同动物的乳酸脱氢酶同工酶组成虽不相同，但不能说明其pH就一定不同。
6. 答案：A
解析：凝胶是一些微小的多孔球体，小球内部有许多贯穿的通道，如果凝胶装填得不够紧密、均匀，就会在色谱柱内形成一些空隙，使本该进入凝胶内部的样品分子从这些空隙中通过，搅乱了洗脱液的流动次序，从而影响分离效果。
7. 答案：C
8. 答案：A
解析：在蒸馏水中红细胞吸水涨破，甲苯作为有机溶剂能够溶解细胞膜，加速细胞的破裂。
9. 答案：（1）①防止血液凝固 ②血红蛋白的释放 ③去除杂蛋白 （2）①除去相对分子质量较小的杂质 ②透析袋能使小分子物质自由进出，而大分子物质则保留在袋内 （3）④①②③ 去除相对分子质量较大的杂质
解析：本题考查提取和分离血红蛋白的相关知识。透析袋是本实验收集样品的关键，是一种半透膜。实验的操作顺序应根据SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的需要进行。
