人教版 (新课标)选修3《现代生物科技专题》2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体授课ppt课件

这是一份人教版 (新课标)选修3《现代生物科技专题》2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体授课ppt课件，共44页。PPT课件主要包含了处理方法，诱导手段，抗原细菌，吞噬细胞，记忆细胞，T细胞，B细胞，浆细胞，抗原抗体结合，直接刺激等内容，欢迎下载使用。

2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
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运用植物体细胞杂交技术，可以跨越植物种属间生殖隔离的屏障，培育出新的作物类型。那么，能不能采用类似的方法，让不同种动物的体细胞进行杂交呢？
动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为 杂交细胞。
细胞融合的成功案例(部分)
采用什么方法诱导融合？
物理方法：振动、离心、电激
化学方法：聚乙二醇(PEG)
1970年 人-鼠细胞融合融合实验
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。
疫苗：失去感染性，但仍有吸附性。
方法：①物理方法：振动、离心、电激②化学方法：聚乙二醇(PEG)诱导③生物方法：灭活的病毒诱导 (动物细胞融合特有)
形成单核细胞，具有原来两个或多个细胞的遗传信息，可表现出两个或多个亲本的特点。
诱导融合后的细胞，有几种类型？
正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞
正在融合的鸡血细胞
意义：①突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。②成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。③利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。
细胞膜的流动性细胞的全能性
去除细胞壁后诱导原生质体融合
使细胞分散后诱导细胞融合
物理、化学方法灭活的病毒
02 单克隆抗体
1.图中是哪种免疫类型是？２.抗体由何种细胞产生？３.抗体主要分布在哪里？
效应B淋巴细胞（浆细胞）
强调：效应B淋巴细胞（浆细胞）是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞
抗体：能够与抗原发生特异性结合
抗体与相应抗原特异性结合
问题：抗体是一种物质，是一类物质？
（一）抗体的传统生产方法：
2、该法制备抗体的特点：
　1、血清抗体（多克隆抗体） 由血清中提取的抗体是由不同浆细胞产生的多种抗体的混合物，可达百万种以上，称为多克隆抗体。
产量低、纯度低,特异性差,反应不够灵敏
材料：效应B淋巴细胞（浆细胞）在体内只能由B淋巴细胞受到抗原刺激后增殖分化而来,不再进行分裂,在体外培养的条件下很难分裂。
1 .什么细胞可以产生抗体？2 .什么细胞可以无限增殖？ 3 .从诱变育种、基因工程、细胞工程等角度有哪些可能的设计思路？
思考：用什么方法才能让B淋巴细胞在体外培养时既能产生抗体又能无限增殖?
B淋巴细胞与癌细胞融合
如何大量生产单克隆抗体？
1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖
既能无限增殖，又能产生所需抗体的杂交瘤细胞
从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞的培养
（三）单克隆抗体制备过程
骨髓瘤细胞及同型融合细胞死亡
B淋巴细胞及同型融合细胞死亡
置于选择培养基上培养（第一次筛选）
拓展：第一次筛选获得杂交瘤细胞
①B淋巴细胞（浆细胞）合成DNA有2条途径S和D途径， 而氨基嘌呤能阻断D途径 。②骨髓瘤细胞合成DNA有只D途径。
想一想筛选出杂交瘤细胞方法？
能增殖，但不能无限增殖,死亡
方法：特定的选择性培养基(HAT选择培养基)
阳性细胞筛选和 克隆化培养
既能产生特异性抗体又能大量繁殖的杂交瘤细胞（1种）
第二次筛选：出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 二选方法：克隆化培养和专一抗体检测
①将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个，②再由这些单细胞克隆生长，③然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。最终选出分泌预定特异抗体的杂交瘤细胞进行扩大培养。
第二次筛选出：能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 二选方法：克隆化培养和专一抗体检测
有限稀释法进行单克隆：
通过适当的稀释达到分离单个细胞进行培养的目的。
（1）取出阳性孔的细胞进行计数；
（2）用培养液将其稀释到每毫升10个细胞；
（3）如果在96孔板上每孔加0.1ml，其几率为每个孔，落入一个细胞；
（4）根据检测的阳性结果再次进行克隆化；
在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的目的和方法是不相同的。
检测各孔上清液中细胞分泌的抗体
可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。
将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个细胞进行培养 （克隆化培养）
一段时间后，检测每个孔内的抗体
分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞即为所需杂交瘤细胞
B1-瘤,B2-瘤……Bn-瘤；
筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞;
克隆化培养和专一抗体检测；
1、获得浆细胞、骨髓瘤细胞；
动物细胞融合技术动物细胞培养技术
能分泌所需抗体的杂交瘤细胞
特异性强 、灵敏度高、可大量制备
（五）单克隆抗体的应用
作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点
用抗人绒毛膜促性腺激素单克隆抗体做成的“早早孕诊断试剂盒”，灵敏度很高，在妊娠的第８天就可以做出诊断，比原来的诊断方法提前了10天左右。
（四）单克隆抗体的特点
用于治疗疾病和运载药物
单克隆抗体主要用于癌症治疗，也有少量用干其他疾病的治疗。单抗药物剂型种类繁多，有单独使用的，也有与同位素、毒素、药物结合使用的。
原理：抗原与抗体的特异性结合
抗肿瘤药物载体：阿霉素脂质体和顺铂脂质体已在国外上市。
动物细胞融合和动物细胞培养技术
一种诱导细胞融合的新方法－－灭活病毒
一种新细胞－－杂交瘤细胞
一个优点－－单克隆抗体特异性强、灵敏度高、可大量制备
B淋巴细胞和骨髓瘤细胞
体外培养和体内培养（小鼠腹腔）
先用选择培养基筛选，再进行克隆化培养和抗体检测